海绵共附生放线菌的分离鉴定与抑菌活性分析

为了探究海南海绵共附生放线菌资源的多样性及潜在的药用价值，采用 4 种分离培养基分离海南文昌海域海绵的共附生放线菌，利用 16S rRNA序列分析对分离的放线菌进行鉴定，采用滤纸片扩散法对分离放线菌的发酵产物进行抗菌活性分析。结果表明，从4种海绵中共获得50株放线菌，所分离菌株归属于5 个亚目、6个科和 7 个属，包括链霉菌属、小单孢菌属、红球菌属、糖多孢菌、栖白蚁菌属、分枝杆菌属和Krasilnikoviella属，其中Krasilnikoviella为首次从海绵中分离得到，4株海洋放线菌为潜在的新物种。抗菌活性测试显示48%的分离菌株呈现抗细菌活性，24%的分离菌株呈现抗植物丝状病原真菌活性。本研究结果初步揭示了海南文昌海域海绵共附生放线菌的可培养物种多样性及其发酵产物的抑菌活性。     

土壤放线菌分离与16S rDNA系统发育分析

为探讨燕山山脉土壤中可培养放线菌的物种多样性,建立该区域放线菌资源信息库,采用稀释涂布平板法对燕山山脉的26份土壤样品进行了放线菌的分离纯化,根据菌落表型共分离到1 055株分离物,并随机挑选其中200株进行初步鉴定。首先采用链霉菌属(Streptomyces)的特异引物对分离物DNA进行PCR扩增,从而快速鉴定分离物是否属于链霉菌属,然后对其余的分离物进行16SrDNA序列分析。结果表明,随机挑选的200株放线菌分属于19个属,其中哈马达菌属(Hamadaea)为我国首次报道。16SrDNA系统发育分析结果表明,菌株Y0450-41与哈马达菌属模式种的16SrDNA序列相似性为97.3%,是哈马达菌属的一个潜在新种;菌株Y0371-4与其系统发育关系最近已知种特殊链霉菌(Streptomyces specialis)的16SrDNA序列相似性为95.5%,可能代表着一个潜在的新属。     

井冈山植物根际土壤微生物的初步研究

利用选择性培养基,对井冈山自然保护区8种不同植物根际土壤的细菌、真菌和放线菌进行了分离和测数,根据菌体形态、培养特征以及生理生化指标,对部分优势菌株进行了初步鉴定。结果表明,8种植物根际土壤微生物以细菌数量最大,真菌数量和放线菌数量相差不大;根际土壤微生物的组成较复杂,细菌共分离到9个属,其中以芽孢杆菌属、土壤杆菌属为主;真菌共分离到11个属,其中以青霉属、毛霉属、曲霉属和木霉属占主要优势;放线菌中链霉菌属占主要优势。     

西藏亚高山草原土放线菌研究

采用常规方法了分布于西藏海拔４０００－４６８０ｍ之间６个亚高山草原土的放线菌数量与组成,并从分离纯化所得３５５株放线菌中选出９８株代表菌株进行详细研究。结果表明：（１）供试放线菌分为９个属和２个未定属,链霉菌属和小单孢菌分别占土壤放线菌总数的５２．７％和２７．３％,钦氏菌属,孢囊放线菌属及孢链囊菌属共占１４．１％;链霉菌属共分为１２个类群,白孢类群,粉红孢类群及黄色类群分别占土壤链霉菌总数的４９．     

藏北高寒草原耐碱放线菌的多样性及其生物活性

【目的】研究藏北高寒草原耐碱放线菌的多样性、产酶潜力及拮抗活性,为开发利用相关资源提供参考。【方法】从藏北高寒草原盐碱地采集22份土样,用平板稀释法从中分离放线菌,进行初步的形态鉴定后得到有代表性的36株耐碱放线菌,对这些代表性菌株的16SrRNA基因序列进行系统发育分析,将这些菌株鉴定到属;采用生长速率法测定分离菌株发酵液对1种细菌和4种农作物真菌的抑菌活性,并对分离株菌进行纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶酶活初筛,分析其拮抗活性。【结果】从22份土样中分离到有代表性的36株耐碱放线菌;16SrRNA基因序列分析表明,这36株菌分布于放线菌门放线菌纲5个亚目5个科的5个属,即链霉菌属(Streptomyces)、糖丝菌属(Saccharothrix)、小单孢菌属(Micromonospora)、原小单孢菌属(Promicromonospora)和韩国生工菌属(Kribbella);分离菌株中25.0%具有纤维素酶活性,8.3%具有淀粉酶活性,16.6%具有蛋白酶活性。所得耐碱放线菌中33.3%的菌株有抑菌活性,其中有5株具有高拮抗活性(抑菌圈直径≥20mm),分别是J10、J14、J21、J48和J65。【结论】藏北高寒草原盐碱地生境蕴藏着丰富的耐碱放线菌资源,这些耐碱放线菌具有高酶和拮抗菌活性。     

西藏青稞根际土壤可培养放线菌的遗传多样性及其促生功能分析

【目的】认识藏区青稞根际土壤中可培养放线菌的遗传多样性及应用价值。【方法】采集藏区青稞根际土壤,对根际样品中的放线菌进行分离,测定分离菌株的溶磷能力、抗病促生(IAA产量)能力,并运用反转录重复因子扩增(BOXA1RPCR)技术、16S r RNA基因测序和系统发育分析系统分析可培养放线菌的系统发育地位。【结果】通过7种培养基共分离得129株放线菌菌株,其中有51株菌株(占总分离菌株的39.5%)产IAA,8株产量较高(>57 mg/L),77株(占总分离菌株的60.0%)表现出溶磷活性。基于BOXA1R-PCR图谱,采用平均连锁聚类法(UPGMA)进行聚类分析,129株菌被分成19种不同的遗传图谱类型。基于分离菌株的菌落特征和遗传聚类图谱选取32株代表菌株进行16S rRNA基因序列测定。通过Mothur软件对分离菌株进行OTUs(operational taxonomic units)聚类分析,共得到5个OTU分类单元,其中以OTU1为主。系统发育显示代表菌株分属于链霉菌属(Streptomyces),拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis),类诺卡氏菌属(Nocardioides),小单孢菌属(Micromonospora),放线菌属(Actinomyces)等5个属,其中链霉菌属(Streptomyces)为优势种属。【结论】西藏青稞根际土中放线菌多样性明显,这些放线菌中蕴藏着大量的有开发应用前景的菌株。     

河北及云南部分地区土壤放线菌物种多样性分析

从河北及云南的不同地区及植被下采集土样.用4种培养基分离放线菌,并对放线菌的数量、组成、形态、细胞壁化学组分等进行了研究,将其归属.对两地土壤放线菌物种多样性、不同植被土壤中的放线菌分布进行了比较.其结果表明两省放线菌分布具有相似的的规律,分别分离到7-8个属的放线菌,但各属比例具有一定的差异;放线菌多样性与植被类型具有密切的相关性,在所调查的9种植被类型土壤中,季雨林土壤中具有最高的放线菌物种多样性.这些结果为放线菌物种多样性的保育和放线菌生物资源的开发提供了科学依据.     

鲁西南地区土壤放线菌的生态分布

采用稀释平板分离法研究了鲁西南地区5种不同利用方式的土壤中放线菌的数量和组成,及与生态因子的关系,借以研究鲁西南地区土壤放线菌的生态分布。结果表明:①鲁西南地区土壤放线菌数量受多种因素影响:随土壤质地的不同而变化,其顺序为壤土>砂土>粘土。因作物或植被种类的变化而变化,在供试的5种植被中,土壤放线菌数量按菜地>小麦地>花生地>裸土>林地的顺序排列。随土层深度的加深而减少;②土壤放线菌的组成较复杂,共分离到5个属的放线菌,以链霉菌为主,其次为小单孢菌属和马杜拉放线菌属。土壤放线菌组成的复杂程度随作物变化而变化;③链霉菌的组成较复杂,共分离到13个类群,以白孢类群为主,其次为浅紫灰类群和黄色类群;④鲁西南地区土壤放线菌数量与土壤有机质、pH密切相关:土壤有机质越丰富,pH越高,放线菌数量越多;⑤鲁西南地区土壤放线菌的数量较大,是放线菌的良好栖息地。     

慈巴沟自然保护区土壤放线菌区系分析及其生物活性测定

【目的】分析西藏察隅慈巴沟自然保护区土壤放线菌的组成及其抑菌活性和酶活性,为放线菌新药物先导化合物和高活性酶的筛选提供资源。【方法】从慈巴沟自然保护区采集不同植被和不同海拔高度的45份土样,用5种培养基分别分离高温、中温和低温放线菌,根据形态和化学分类特征对分离到的放线菌进行鉴定。采用植物相似性系数计算公式,将慈巴沟土壤放线菌区系与临近地区云南、青海以及地理位置及气候条件具有显著差异的河北承德和武陵山放线菌区系进行比较分析,并采用琼脂移块法,检测了617株中温放线菌对2株细菌和3株农作物病原真菌的抑菌活性及酶活性。【结果】慈巴沟自然保护区土壤放线菌区系复杂,从45份土样中共分离到11个属的放线菌。该地土壤中广泛分布着高温放线菌,其分布的上限海拔为4000m,主要属于链霉菌属、小单孢菌属和高温放线菌属;中温放线菌较复杂,共分离到10个属的中温放线菌;低温放线菌组成简单,仅分离到3个属。在区系亲缘关系上,慈巴沟放线菌与云南区系较为接近,与武陵山、河北承德及青海区系较远。617株中温放线菌中的大部分菌株能利用明胶、还原硝酸盐和产生凝乳酶等,对农作物病原真菌拮抗比率小,但活性较强。【结论】慈巴沟自然保护区原始森林土壤蕴涵着种类和活性丰富的放线菌,从该地区酸性土壤中能筛选到对植物病原真菌有较强活性的拮抗放线菌。     

贵州矿区放线菌多样性及对汞的抗性

为探明贵州喀斯特重金属污染区域土壤放线菌多样性特征以及为其污染修复应用奠定基础,从贵州铜仁地区的25份土壤样品中,采用梯度稀释涂布法,利用3种处理方式、7种培养基分离放线菌;通过形态特征、16SrDNA基因序列分析结合生理生化特征鉴定放线菌;同时筛选重金属汞抗性菌株。结果从土样中共分离出56株典型放线菌菌株,经初步鉴定,分属于链霉菌属、孢囊链霉菌属、高温单孢菌属、线杆菌属、间孢囊菌属、诺卡氏菌属、小单孢菌属;其中链霉菌属放线菌占68%。筛选出了1株对汞有较高抗性(75mg·L~(-1))的放线菌菌株,优良耐受菌株的最大抗性约85 mg·L~(-1),菌株经鉴定为枝链霉菌Streptomyces rameus。共分离出56株,分属于7个属的放线菌菌株;筛选出1株重金属汞高抗菌株,经鉴定为枝链霉菌。     

新疆13种荒漠植物根内生放线菌多样性及其抗菌活性筛选

以荒漠植物骆驼刺、铃铛刺、碱蓬、盐穗木、柽柳等13种植物的根为材料,利用SCA培养基分离其内生放线菌,通过菌株16S rRNA基因测序,分析荒漠植物内生放线菌物种多样性。以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌、细极链格孢菌、大丽轮枝菌和尖孢镰刀菌为靶标,通过琼脂扩散法和平板对峙法开展抗菌活性筛选。从13种荒漠植物分离出533株内生放线菌,鉴定的361株,分布于6个目,7个科,9个属,77个种,另有3个潜在新种,其中链霉菌属为优势类群,冢村氏菌属与伦茨菌属首次从植物中分离得到。研究表明13种荒漠植物内生放线菌多样性有明显差异,骆驼刺内生放线菌最丰富,分离到6个属27个种,链霉菌属有20个种;老鹳草分离到的菌株数量最多,有3个属;铃铛刺分离到2个属,其中的链霉菌属有28个种;猪毛菜、盐穗木等植物只分离到链霉菌属。抗菌活性筛选显示80株放线菌有抗菌活性,其中链霉菌74株,拟无枝酸菌3株,拟诺卡氏菌、糖霉菌和链孢囊菌各1株。本研究为寻找新型抗菌活性化合物,为生物医药和生物肥料提供菌株来源。     

天府花生内生细菌种群多样性研究

通过对四川省重点推广的4个花生品种——天府11号、12号、13号和岳易各生育期、各部位内生细菌种群动态的系统研究,分离出内生细菌170株,其中放线菌15株;鉴定结果表明,天府系列花生内生细菌共16个属,其中芽孢杆菌属11个种,为花生内生细菌的优势种群。对链霉菌属放线菌进行了抗菌性检测,其中13株对枯草芽孢杆菌有拮抗作用,淡紫灰类群菌株11-02和13-10的抑菌效果最为显著。     

福建省的黑煤菌

本文根据Hansford(1946,1961)的分类系统和鉴定方法,采集鉴定和整理了福建省黑煤菌共4属43种;附丝壳属(Appendiculella)4种、小光壳炱属(Asteridiella)9种、隔孢炱属(Balladynastrum)1种以及小煤炱属(Meliola)29种,其中包括1个新种和13个在中国分布的新记录,新种是(?)木生小煤炱Meliola loropetalicola Y.X.Hu et Y.S.Ouyang,新种有中文、拉丁文描述和显微结构图。模式标本藏于广东省微生物研究所。     

墨脱自然保护区嗜热放线菌多样性及生物活性初步研究简

研究墨脱自然保护区嗜热放线菌的多样性、产酶潜力及其拮抗活性.从墨脱自然保护区采集的35份土样制成土壤悬液,微波分别处理40s,用平板稀释法分离放线菌,形态去重后得到有代表性的嗜热放线菌,测定其16S rRNA基因序列,进行系统发育分析,将分离菌株鉴定到属;采用生长速率法测定各菌株发酵液对2种细菌和5种农作物真菌的抑菌活性,对分离菌株进行纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶等酶活初筛.结果表明,从墨脱自然保护区分离到有代表性的24株嗜热放线菌;16S rRNA基因序列分析表明它们分布于放线菌门放线菌纲下4个亚目4个科,4个属,即链霉菌属、马杜拉放线菌属、拟无枝酸菌属和列舍瓦列氏菌属;功能酶筛选结果显示:22.3%具有纤维素酶活性,11.6%具有淀粉酶活性,24.6%具有蛋白酶活性.抑菌活性实验结果表明:嗜热放线菌19.6%有抑菌活性.研究发现墨脱自然保护区生境蕴藏丰富嗜热放线菌资源,酶活性及抗菌活性初步筛选显示出了良好的降解和抗菌活性,为下一步的深入研究提供良好的菌源.     

珠穆朗玛峰自然保护区土壤放线菌的生态分布及拮抗性研究

[目的]探究珠穆朗玛峰自然保护区土壤放线菌的生态分布及抑菌活性,为放线菌新药物先导化合物筛选提供资源。[方法]采用稀释平板法及琼脂块法对珠穆朗玛峰自然保护区土壤放线菌进行分离及拮抗性测定。[结果]珠穆朗玛峰自然保护区植被类型不同,放线菌的数量分布均有明显差异。农田土放线菌数量最多,人工林与原始森林土壤放线菌数量最少。在同一剖面内表层放线菌数量最高,随着土层加深,有机质含量减少,放线菌数量亦相应降低。该区放线菌种类较复杂,共分离到10个属,其中链霉菌属占绝对优势。链霉菌属分离到11个类群,以白孢类群、灰褐类群和粉红孢类群为主。供试菌株抗病原真菌强于细菌,抗革兰氏阳性细菌强于抗革兰氏阴性细菌。[结论]珠穆朗玛峰自然保护区土壤蕴含着种类和拮抗活性丰富的放线菌,可进一步用于生物农药的开发利用。     

稀有放线菌的选择性分离、鉴定及生物活性研究

聚乳酸(PLA)和丝蛋白粉分别作为选择性碳、氮源可以有效提高稀有放线菌的分离效率,同时海洋环境中蕴藏着丰富的活性稀有放线菌,是发现新药的有效途径。为了筛选并鉴定海洋环境中产生活性物质的稀有放线菌,以聚乳酸和丝蛋白粉分别作为选择性碳、氮源,配制6种分离培养基,用平板稀释法分离放线菌;并用滤纸片法和MTT法对供测菌株发酵产物进行活性筛选。结果表明:共分离出96株稀有放线菌,分属于11个属;其中,80株菌对7种靶标菌显示出一定的抗菌活性;78株菌对肿瘤细胞具有不同程度的细胞毒活性。另外,比较了6种培养基对稀有放线菌的分离效果。从分离结果来看,最理想的是聚乳酸培养基。     

宁夏干旱荒漠区苦豆子内生放线菌的分离鉴定

采用3种消毒时间对健康苦豆子种子内及植株体内的内生放线菌进行分离.结果表明:消毒3 min来消除非内生菌的影响效果较好;同一植株分离出内生放线菌的数量,种子最多,其次是茎部和根部,叶部较少.合并形态相同的分离物,从苦豆子种子、根、茎和叶分离出的内生放线菌,经初步鉴定分属5个属,86株为链霉菌属,占分离总数的68.8%;19株为诺卡氏菌属,占15.2%;14株为放线菌属,占11.2%,其余分属于小单孢菌属和游动放线菌属.     

新疆天然胡杨林土壤微生物多样性的研究

为了探明新疆天然胡杨林土壤微生物类群的生态分布情况，该文研究了幼龄林、中壮林、过熟林、衰亡林4个不同发育阶段胡杨林内的土壤细菌、真菌及放线菌的数量和类群组成.结果表明:4种林地内土壤微生物的数量和种类组成有明显差异，不同土壤层的微生物数量随着土层深度的增加逐渐减少，其中以31～40 cm范围内为最少.细菌在不同胡杨林的各个土层中均有分布，数量明显高于放线菌和真菌，而在部分林地内的土层中，没有分离到放线菌和真菌.在林地内共分离出土壤真菌11属，其中，曲霉属为4个不同发育阶段胡杨林土壤中的优势菌属.      

墨脱自然保护区嗜热放线菌多样性及生物活性初步研究

研究墨脱自然保护区嗜热放线菌的多样性、产酶潜力及其拮抗活性.从墨脱自然保护区采集的35份土样制成土壤悬液,微波分别处理40s,用平板稀释法分离放线菌,形态去重后得到有代表性的嗜热放线菌,测定其16S rRNA基因序列,进行系统发育分析,将分离菌株鉴定到属;采用生长速率法测定各菌株发酵液对2种细菌和5种农作物真菌的抑菌活性,对分离菌株进行纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶等酶活初筛.结果表明,从墨脱自然保护区分离到有代表性的24株嗜热放线菌;16S rRNA基因序列分析表明它们分布于放线菌门放线菌纲下4个亚目4个科,4个属,即链霉菌属、马杜拉放线菌属、拟无枝酸菌属和列舍瓦列氏菌属;功能酶筛选结果显示:22.3%具有纤维素酶活性,11.6%具有淀粉酶活性,24.6%具有蛋白酶活性.抑菌活性实验结果表明:嗜热放线菌19.6%有抑菌活性.研究发现墨脱自然保护区生境蕴藏丰富嗜热放线菌资源,酶活性及抗菌活性初步筛选显示出了良好的降解和抗菌活性,为下一步的深入研究提供良好的菌源.     

红树林植物共附生放线菌的分离鉴定及其抗菌活性分析

笔者采用4种分离培养基对10份采集自海南岛西线海岸的红树林植物进行了茎的共附生放线菌分离，并利用16S rRNA序列分析法对分离得到的放线菌进行鉴定，采用滤纸片扩散法对分离得到的放线菌的发酵产物进行抗菌活性分析。结果共分离获得63株放线菌，初步确定16株代表性放线菌的分类地位。16株代表性放线菌中，有13株放线菌属于链霉菌属，有2株放线菌属于小单孢菌属，其中5株链霉菌为潜在的新物种。抗菌活性测试结果显示，16株代表性放线菌的发酵产物对至少1种指示菌具有抗菌活性。从菌株HNM0645的发酵粗提物中分离获得了1个化合物A，经过结构鉴定为已知化合物K-252a。通过测试不同浓度化合物A对山药炭疽病原菌的抑菌率，利用Excel求出毒力回归方程，计算出EC₅₀值为286.61 μg·mL?1，化合物A对供试细菌没有明显的抑菌活性。