伞滑刃线虫属 4个种rDNA的PCR扩增

 从161份病松树样本中分离、鉴定出拟松材线虫（Bursaphelenchus mucronatus）、霍夫曼伞滑刃线虫（B.hofmanni）和赫列尼库斯伞滑刃线虫（B.hellenicus）3个种,其中后二者是中国新记录种,华山松和云南松分别是这两个种的世界新寄主记录。本试验以松材线虫(B.xylophilus)为对照,用伞滑刃属线虫rDNA相关引物对这4种伞滑刃线虫进行PCR扩增,进一步印证形态鉴定的可靠性。试验结果表明,霍夫曼伞滑刃线虫、赫列尼库斯伞滑刃线虫与松材线虫、拟松材线虫,均扩增到约800 bp的分子片段,为霍夫曼伞滑刃线虫和赫列尼库斯伞滑刃线虫的鉴定从分子生物学角度提供了一定依据。     

四川松材线虫与拟松材线虫的PCR-RFLP鉴别

应用PCR-RFLP技术对来自四川省8个地方的枯死松树样品中的伞滑刃属线虫(Bursaphelenchus)群体进行了分子鉴定。结果显示来自邻水、雅安的枯死松树样本中含有松材线虫(B.xylophilus),而来自大竹和遂宁的枯死松树样本中含有拟松材线虫(B.mucronatus)。其他伞滑刃属线虫包括莱鲁尔夫伞滑刃线虫(B.rainulf)、霍夫曼伞滑刃线虫(B.hofumanni)、泰国伞滑刃线虫(B.thailandae)、变异伞滑刃线虫(B.aberrans)。本研究中选用的4种限制性内切酶(DraⅠ、SalⅠ、HhaⅠ、AluⅠ)除SalⅠ外均可对所鉴定的这6种伞滑刃属线虫产生特异性的酶切位点,从而可均有效地鉴别出松材线虫、拟松材线虫和其他4种伞滑刃属线虫,其结果可为今后这几种伞滑刃属线虫的分子鉴定提供一定的参照。     

马来西亚贝壳杉中一种伞滑刃线虫的鉴定

    宁波出入境检验检疫局植检实验室在对1批出境的船舶铺垫材料检测时,截获一种伞滑刃属线虫,进行了形态学观察、测量,以及分子鉴定.该线虫属松材线虫组,交合刺较大,长约35～43 μm,明显大于松材线虫B. xylophilus、拟松材线虫B. mucronatus、锥尾伞滑刃线虫B. conicaudatus、伪伞滑刃线虫B. fraudulentus和B. luxuriosae等近似种的交合刺, 与豆伞滑刃线虫B. doui交合刺34～43 μm接近,但该线虫雌虫腹面末端有缺刻,而豆伞滑刃线虫的雌虫靠腹面末端有2～4 μm的尾尖突.该线虫ITS-RFLP图谱与新加坡伞滑刃线虫一致,但交合刺比新加坡伞滑刃线虫交合刺41～48 μm略小,且其雌虫和雄虫的尾均略长,雌虫尾末端多数有缺刻,而新加坡伞滑刃线虫尾末端钝圆,有短尾尖突.该批铺垫材料来自马来西亚,这是马来西亚除莱奴尔夫伞滑刃线虫外发现的第二种伞滑刃线虫.     

余姚市松木中伞滑刃属线虫种类调查

对宁波余姚市针叶林中的伞滑刃属线虫种类进行了调查,从采集的218份样本中,根据形态学特征共分离和鉴定出伞滑刃属线虫8种,松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus）、莱奴尔夫伞滑刃线虫（B．rainulfi）、拟松材线虫（B．mucronatus）、林伞滑刃线虫（B．1ini）、湖南伞滑刃线虫（B．hunanensis）、泰国伞滑刃线虫（B．thailandae）、中华伞滑刃线虫（B．sinensis）和程氏伞滑刃线虫（B．chengi）。其中,程氏伞滑刃仅在台湾的木质包装中报道：     

中国马铃薯根际滑刃属4种线虫记述

记述了从中国马铃薯根际采集分离和鉴定的4种滑刃属线虫Aphelenchoides spp.:印度滑刃线虫(A.indicus Chawla,Bhamburkar,Khan Prasad,1968)、单性滑刃线虫(A.unisexus Jain Singh,1984)、狭尾滑刃线虫(A.angusticaudatus Eroshenko,1968)和坡尾滑刃线虫(A.tumulicaudatus Truskova,1973)。这4种线虫均为在中国马铃薯上的首次发现,其中单性滑刃线虫和狭尾滑刃线虫为中国新记录种。     

中国十二齿小蠹伞滑刃线虫新记录

2018年8月从来自我国吉林省辽源市的2批枯死红松中发现一种伞滑刃线虫属群体,经形态特征观察、形态测计值比较以及核糖体DNA序列分析,将该群体鉴定为十二齿小蠹伞滑刃线虫(Bursaphelenchus sexdentati).该线虫为我国新记录种.     

数量分类学方法在松材线虫组线虫形态分类上的应用

用数量分类学的方法对14种松材线虫组线虫形态进行了聚类分析。结果表明,拟松材线虫、大尖尾伞滑刃线虫、伪伞滑刃线虫、锥尾伞滑刃线虫、豆伞滑刃线虫和吉拉尼伞滑刃线虫在所选取的形态特征上表现出一致性;新加坡伞滑刃线虫、韩国伞滑刃线虫、杨伞滑刃线虫也表现出较高的一致性;拟灰黄锦天牛伞滑刃线虫、日本冷杉伞滑刃线虫、鲍嘉伞滑刃线虫和灰黄锦天牛伞滑刃线虫在形态上较为相近;松材线虫相对独立为一支。     

滑刃线虫属（Aphelenchoides Fischer,1894）的2个国内新记录种

描述了滑刃线虫属（Aphelenchoides Fischer,1894)的2个国内新记录种：游泳滑刃线虫(Aphelenchoides hechaleos)和内卷滑刃线虫(A.involutus)。游泳滑刃线虫采自辽宁省盖州市熊岳镇莴苣(Lactuca sativa)的根际土壤中，它与近似种拟游泳滑刃线虫(A.paranechaleos)的主要区别是雌虫尾较长，尾的形状是腹面凸（而拟游泳滑刃线虫的尾较短，尾的形状是背面凸，腹面凹），雄虫交合刺背杆的弯曲程度较小。内卷滑刃线虫采自辽宁省凌海市苍耳(Xanthium sibiricum)及山东济南大花金鸡菊(Coreopsis grandiflora)的根际土壤中，它与近似种A.jacobi的主要区别是雌虫尾向腹面弯曲程度较大，尾后部呈钩状，尾较长。     

双孢蘑菇基质中的线虫在菌丝上的数量扩增及对菌丝生长的影响

研究双孢蘑菇生产基质中的线虫优势类群在木耳和双孢蘑菇菌丝上的数量扩增及对菌丝生长的影响.结果表明:1)从浙江苍南县双孢蘑菇基质中分离出的线虫隶属于19个属,其中拟丽突属(Acrobeloides sp.)、中杆属(Mesorhabditis sp.)和滑刃属(堆肥滑刃线虫Aphelenchoides composticola Franklin)线虫为优势线虫.2)分别在长满木耳和双孢蘑菇菌丝的试管中接种3种线虫150条,1周内,菌丝未见明显变化,线虫数量增加幅度在4.5倍以下(双孢蘑菇菌丝上的中杆属线虫除外,其增幅近接种量的27倍);2周以后,菌丝有不同程度的过早变褐、萎缩.3)在木耳菌丝上,接种3种线虫2～3周后,数量增幅一般为10倍左右.在双孢蘑菇菌丝上,接种2周后,拟丽突属、中杆属和滑刃属线虫的数量增幅分别为19.4,42.3和11.1倍;接种后3周,拟丽突属和中杆属线虫的增幅近60倍,滑刃属线虫的数量增幅近10倍.由此初步认为:基质中拟丽突、中杆和堆肥滑刃线虫的密度在10条·cm-2以下时,1周内,生长的木耳和双孢蘑菇菌丝无感官异常,2周后,对2种食用菌菌丝生长有危害.     

北京油松上东京伞滑刃线虫的鉴定

对北京地区重点林区开展松材线虫普查时从油松中分离到一个伞滑刃线虫属群体.通过形态特征观察发现其与东京伞滑刃线虫(Bursaphelenchus tokyoensis)基本相似;通过扩增核糖体DNA(rDNA)18S、28S、ITS基因片段及测序分析,发现该群体与东京伞滑刃线虫的rDNA 18S和28S基因序列的相似度高达99%,ITS基因序列的相似度高达98%,因此将该群体鉴定为东京伞滑刃线虫.     

松材线虫携带细菌在疫区和寄主中的分布及致病性研究

作者在江苏、上海、广东、安徽、湖北、浙江等疫区 ,采集了呈现松材线虫病典型症状的黑松、马尾松的病样 ,采用病木组织分离法 ,分离获得松材线虫所携带的细菌菌株 2 4株 ,经鉴定 ,2 4株细菌中 ,假单胞菌属有 11株 ,泛菌属有 6株 ,其余有不解糖消化链球菌、河生肠杆菌、乡间步丘菌和粘质沙雷菌 .由此可知 ,假单胞菌和泛菌分布较广 ,在所有采样疫区感染松材线虫病的马尾松和黑松病死木中都能分离到 ,是普遍存在病木组织中松材线虫携带的主要细菌 .致萎活性测定结果表明 :所有假单胞菌属和泛菌属的菌株对无菌黑松切根苗均有致萎活性 .用假单胞菌和泛菌分别与无菌松材线虫混合接种室内无菌黑松苗和野外多年生黑松 ,结果表明 :用细菌单独接种 ,无菌黑松苗和野外黑松均不发病 ,无菌松材线虫单独接种的无菌黑松苗和野外黑松也不发病或发病轻、慢 ,无菌线虫和致萎细菌二者混合接种能使无菌黑松苗和野外黑松发病快且严重 .由此认为松材线虫携带到寄主组织中的假单胞菌和泛菌属的一些种对松材线虫病有明显的协同作用     

赣南地区松材线虫病发生规律研究

对赣南地区松材线虫病的基本情况进行调查分析,以确定感染松材线虫病枯死松树的症状特点、病木分布和症状变化时间,寻求感染松树发病情况与树种、树龄、松墨天牛及其他虫害、立地条件之间的关系,观察越年枯死型和枝条枯死型松树的 发生特点,探索松材线虫随时间在树体上发展的规律。结果表明：赣南地区松材线虫感病松树以中龄马尾松为主,7~11月为马尾松病症高发期,松树感病2~3个月后表现出症状;枝枯型、越年枯死型马尾松的树龄主要集中在15~25年生之间,比当年枯死型松树的树体略大,且枝叶浓密、病虫害稀少;马尾松越年枯死和枝枯症状还与树形及树皮厚度有关,厚皮类型和宽冠密枝类型的马尾松出现上述症状的频率大于薄皮类型和窄冠疏枝类型。     

松材线虫及携带细菌对黑松复合的侵染

从不同松树上分离松材线虫、拟松材线虫、滑刃线虫和小杆线虫,并从松材线虫和小杆线虫体上分离细菌,将线虫无菌化处理后与从线虫体上分离到的荧光假单胞杆菌、产气肠杆菌混合接种无菌黑松苗和愈伤组织。结果表明,单独接种无菌线虫或细菌不能使黑松致病,无菌松材线虫、无菌拟松材线虫只有与有毒性的荧光假单胞杆菌混合接种时才能使黑松无菌苗和愈伤组织发病,细菌通过线虫携带在树体内传播扩散,使松树致病。研究进一步证明了线虫和细菌在松材线虫病致病过程中起协同作用。     

松树泌脂速度对松材线虫病的抗性影响

依据松树不同树种、树龄、树势对松材线虫病的抗性差异,分别进行了树干泌脂速度的测定与分析.结果表明,在不同的树种中,松树泌脂速度为火炬松>马尾松>黑松;在马尾松不同的树龄中,幼龄林>老龄林;在马尾松不同树势中,树势强>树势中等>树势弱.依据已知的树种、树龄、树势与松材线虫病的抗性关系,泌脂速度与松材线虫病的发病程度正好呈负相关性.因此,树干泌脂速度或树脂含量可能是评价松树对松材线虫病抗性的重要性状之一.在今后的松材线虫病防治中,应注意选择树脂含量高的树种和品种;或通过栽培管理措施增加树脂含量,以提高树木的抗病性.     

松材线虫病入侵对紫金山马尾松林植物群落演替的影响

[目的]探索松材线虫病入侵30余年紫金山马尾松林植物群落结构特征及演替进程。[方法]对松材线虫病危害前为马尾松林,现为阔叶林、针阔混交林、马尾松林的植物群落结构、Margalef物种丰富度(S1)、个体数量、Shannon-wiener多样性指数(H')、Pielou均匀度指数(J)、Simpson生态优势度(C)及重要值进行了调查、分析和比较。[结果]紫金山原马尾松林植被群落正处在被地带性混交森林植被群落逐渐替代的不同演替阶段;3种植被群落乔木层主要树种相互间具有相关性,这种相关性与马尾松重要值的消涨密切关联,马尾松重要值的消涨除受到松材线虫病的影响外,还受到植树造林、直播造林、卫生伐、森林抚育等人为因素的影响;3种植被群落灌木层均未见马尾松,灌木层主要树种的相对密度消涨除了人为因素的影响外,树种的生态适应性和生理生态功能的差异是其中重要的原因;3种植被群落草本层以阔叶林中物种最为丰富,马尾松林草本层种类多于针阔混交林,草本层植物种类分布对环境有极大的依赖性;现在的马尾松林、针阔混交林、阔叶林乔、灌层中的植物种类、S1和H'均呈递增趋势,与C的变化趋势相反,H'和J的变化趋势不一致,原马尾松林整体朝着马尾松阔叶混交林、落叶阔叶混交林、常绿落叶阔叶混交林方向进行演替。[结论]该研究可为紫金山森林培育提供指导。     

福建枯死松材中的莱奴尔夫伞滑刃线虫鉴定

从福州城郊湿地松和马尾松的枯死树上分离到一种在伞滑刃线虫,经鉴定确认为莱奴尔夫伞滑刃线虫(BursaphelenchusrainulfiBrassch,2002).该线虫发现于马来西亚的加勒比松上,在我国湿地松和马尾松上为首次记录.     

松材线虫对马尾松不同地理种源酚类物质的影响

对接种松材线虫后衡阳和广西2个地理种源马尾松的多酚氧化酶活性、总酚含量以及绿原酸含量的动态变化进行了研究。结果表明:接种后,随着接种时间的推移,马尾松体内多酚氧化酶活性呈现增高趋势,在抗病种源中酶活性的变化程度和速度大于敏感种源;同时,与敏感种源相比,抗病种源总酚和绿原酸含量在积累水平上要高,并且也能在较长时间内维持较高浓度。因此,马尾松针叶中多酚氧化酶活性及酚类物质变化差异与松材线虫病抗性具有密切关系。     

松材线虫侵染对马尾松苗不同部位内生细菌菌群结构的影响

  目的  探究松材线虫Bursaphelenchus xylophilus侵染下松干、松针与根系部位内生细菌菌群的结构变化,可充分挖掘马尾松Pinus massoniana内生细菌资源。  方法  采用变性梯度凝胶电泳(DGGE)及高通量测序技术,对松材线虫侵染下3年生马尾松不同部位内生细菌的结构多样性进行分析。  结果  ①马尾松不同部位内生细菌菌群结构存在较大差异,菌群多样性从大到小依次为松干、松针、根系。②松干部位部分细菌属在侵染15 d时丰度明显增加,但苗木表面并不表现任何症状。③马尾松体内共检测到内生细菌442属,分属35门49纲110目210科。其中松干与松针部位的甲基杆菌属Methylobacterium、假平胞菌属Sphingomonas、薄层菌属Hymenobacter、泛菌属Pantoea、假单胞菌属Sphingomonas与短小杆菌属Curtobacterium在侵染过程中相对丰度变化较大。  结论  松材线虫侵染下,马尾松根部基本不受影响,但松干部位内生细菌菌群结构变化极显著,其次是松针。部分内生细菌可能对松材线虫病具有潜在生防效果,有助于后期生防菌株的挖掘。在侵染高峰期实时监测干部内生细菌菌群结构变化,有助于松材线虫病的早期诊断。图5表1参25     

松林线虫群体致病性测定和潜伏侵染的探讨

由松材线虫（Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓｘｙｌｏｐｈｉｌｕｓ）引起的松树萎蔫病 ,是松树上的一种毁灭性病害 ,已在日本、美国、黑西哥、加拿大、韩国发生和流行。目前松材线虫的发生范围还在继续扩大。我国最早在１９８２年秋于南京紫金山的松林中发现该病 ,当年仅见枯树２６０株 ,现已查明在苏、浙、粤、皖、港、台均有分布 ,各地呈迅速扩展蔓延趋势。至１９９９年底该病在我国的发病面积已超过６０万公顷 ,累计死树１６００万株 ,直接经济损失１．２８亿元。ＴｏｍｏｙａＫｉｙｏｈａｒｅ从日本松材线虫分布区内收集到３７个线虫群…     

云南省松墨天牛地理分布及危害程度调查

松墨天牛是松材线虫的主要传播媒介昆虫,为了预防松材线虫病,采用路线调查法、查迹调查法和样地调查法调查云南省松墨天牛的地理分布与危害程度。在云南省129个县市区中,尚未发现松墨天牛的县市区13个,占10．1％;有松墨天牛分布的县市区116个,占89．9％。其中轻度危害的县市区85个（65．9％）,中度危害的县市区16个（12．4％）,重度危害的县市区15个（11．6％）;松墨天牛的垂直分布范围为649～3255m,海拔高差2606m;危害的寄主树种有云南松、思茅松、高山松、马尾松和华山松。