黄曲条跳甲线粒体源硫辛酸蛋白连接酶的序列分析及表达

采用转录组测序和荧光定量PCR等方法,分析了蔬菜害虫黄曲条跳甲lpl基因(Pslpl基因)的cDNA序列及基因表达情况.结果表明,Pslpl基因cDNA的开放阅读框为1 182 bp,编码393个氨基酸,N端含有13个氨基酸的线粒体信号肽.Pslpl基因在黄曲条跳甲雌、雄成虫的不同组织器官中都有表达,头部和中肠相对较高.雌、雄成虫之间对比分析发现,雄虫各组织器官Pslpl基因表达量均比雌虫对应组织器官中的表达量低,但在生殖系统中相反.Pslpl基因cDNA的鉴定和表达分析为研究黄曲条跳甲硫辛酸蛋白连接酶的功能及蛋白硫辛酸修饰奠定了前期基础.     

黄曲条跳甲RCN基因的克隆与表达

【目的】克隆黄曲条跳甲钙离子结合蛋白（reticulocalbin, RCN）,并分析其序列特征和表达谱。【方法】结合转录组测序及荧光定量PCR技术,鉴定和分析黄曲条跳甲钙离子结合蛋白基因的序列特征、功能及表达谱。【结果】获得的黄曲条跳甲RCN基因的cDNA序列全长为1 197 bp,开放阅读框为984 bp,共编码327个氨基酸残基。其蛋白分子含有5个亮氨酸拉链结构域（EF-hand）,与钙离子结合的模体可能为DX（N/D）X（D/N）XXXXXXE。cDNA序列的系统发育分析表明,黄曲条跳甲的RCN与赤拟谷盗的亲缘关系最近。荧光定量PCR分析表明,RCN在黄曲条跳甲雌雄成虫的不同部位都有表达,具有一定的广谱性,其中在头部和中肠的表达量相对较高;触角中雌虫的相对表达量是雄虫的1.9倍,而在生殖系统中,雄虫的相对表达量是雌虫的2.1倍。【结论】成功鉴定了黄曲条跳甲的一种钙离子结合蛋白基因,初步分析了该基因与钙离子结合的模体序列及在虫体不同部位转录水平的表达情况。     

黄曲条跳甲JH诱导蛋白基因的克隆与表达分析

【目的】克隆黄曲条跳甲保幼激素诱导蛋白（Juvenile hormone-inducible protein,Ps-jhip-1）基因,并分析其表达特征。【方法】克隆黄曲条跳甲Ps-jhip-1基因,对其进行系统发育分析,并对其编码蛋白进行生物信息学分析。利用荧光定量PCR方法分析Ps-jhip-1基因在黄曲条跳甲不同组织器官及1个生物钟周期内表达量的变化趋势。【结果】成功克隆了Ps-jhip-1全长cDNA,其长度为1 252 bp,开放阅读框为1 230 bp,编码409个氨基酸。Ps-jhip-1基因编码蛋白具有典型的类蛋白激酶C超家族的蛋白功能域,不具备保幼激素膜受体分子的特征。系统发育分析结果表明,Ps-jhip-1与同为鞘翅目昆虫赤拟谷盗的8种JH诱导蛋白基因聚为一支。荧光定量PCR结果表明,Ps-jhip-1基因mRNA在黄曲条跳甲雌雄成虫的多种组织器官中都有表达,其中在触角和头部的表达量相对较高,而在中足和后足的表达量相对较低,约为触角表达量的6%;Ps-jhip-1基因mRNA表达水平在1个生物钟周期内存在4个下调表达时段,但并未表现出明显的节律性特征。【结论】成功克隆了黄曲条跳甲Ps-jhip-1基因,并分析了其在不同组织及1个生物钟周期内表达量的变化。     

黄曲条跳甲易化扩散载体超家族成员的cDNA序列及其基因表达

采用转录组测序和荧光定量PCR等方法,分析蔬菜害虫黄曲条跳甲Phyllotreta striolata(Fabrici-us)易化扩散载体超家族成员的cDNA序列及其基因表达。结果表明:黄曲条跳甲的一种易化扩散载体超家族成员PsMFS1,其开放阅读框为1 224bp,编码407个氨基酸,含有2个典型的功能域,即药物分子排出系统蛋白功能域和易化扩散载体超家族蛋白功能域;该基因在黄曲条跳甲雌雄成虫的不同部位中都有表达,其中头部、中肠和精巢或卵巢的相对表达量较高,触角和足部的相对表达量较低。     

黄曲条跳甲双孔道钾离子通道基因序列特征及不同组织的表达量分析

昆虫细胞膜钾离子通道与多种生命活动密切相关。结合转录组测序及荧光定量PCR技术,鉴定和分析黄曲条跳甲(Phyllotreta striolata(Fabricius))钾离子通道基因的序列特征及不同组织器官的mRNA表达谱。结果表明:所获得的钾离子通道蛋白基因(twk)cDNA的开放阅读框为1 137 bp,共编码378个氨基酸残基。蛋白结构分析表明:其含有4个钾离子通道蛋白的跨膜区(M1～M4)和2个孔道结构域(1P～2P),分别位于M1与M2、M3与M4之间,即双孔道钾离子通道。序列保守性分析表明:1P的核心序列为甘氨酸-酪氨酸-甘氨酸(GYG)模体,2P的核心序列为甘氨酸-亮氨酸-甘氨酸(GLG)模体。荧光定量PCR分析表明,twk在黄曲条跳甲雌雄成虫的不同部位中都有表达,但是在精巢或卵巢、中肠和头部的表达量相对较高;雌、雄成虫各组织器官之间的相对表达量没有显著差异。     

联苯·噻虫胺对小白菜黄曲条跳甲的控制作用

黄曲条跳甲是蔬菜重要害虫,生产实践中亟需安全高效的控制技术和替代药剂.采用土壤处理方法,进行1％联苯菊酯·噻虫胺颗粒剂防控直播小白菜黄曲条跳甲田间药效试验.结果表明,1％联苯菊酯·噻虫胺颗粒剂对黄曲条跳甲的最佳667 m2使用剂量为5 ～6 kg,小白菜2叶1心期时对黄曲条跳甲成虫的防治效果在69％以上,播后20～26 d防治效果为52.51％ ～60.81％,均显著优于对照药剂毒死蜱、丁硫克百威及联苯菊酯,具有优良的速效性和持效性,对黄曲条跳甲幼虫及蝼蛄、小地老虎等其他地下部分为害的主要害虫也有较好的防治作用.     

黄曲条跳甲对十字花科蔬菜的选择性

本文首次从产卵选择性和取食选择性两方面研究黄曲条跳甲对芥菜、萝卜、大白菜、山西白和芥蓝等5种十字花科蔬菜的寄主选择性.结果表明,黄曲条跳甲的产卵选择性与取食选择性基本一致,芥菜为其最嗜寄主,芥蓝为最不嗜寄主,两者差异显著(P<0.05).利用黄曲条跳甲在供试植株上的落虫量和取食面积来分析其取食选择性时,所得结果一致,且两者呈显著性正相关(r=0.9597,P<0.05).但该跳甲对不同寄主的子叶取食选择性与真叶取食选择性两者间表现不同.     

雌激素对荷斯坦奶牛输卵管上皮细胞中前列腺素E2受体EP2和EP4 mRNA表达的影响

本实验旨在探讨奶牛输卵管上皮细胞中是否存在前列腺素E2受体EP2和EP4,且该受体mRNA表达是否受雌激素(E2)的调控。将前列腺素类化合物PGE2和受体选择性激动剂(butaprost)按10-9mol/L-10-5mol/L的浓度分别作用于体外培养的奶牛输卵管上皮细胞,应用Elisa方法检测细胞中第二信使cAMP量的变化。然后,将E2作用于体外培养的奶牛输卵管上皮细胞,应用real time RT-PCR技术检测EP2和EP4受体mRNA表达量的变化。Elisa实验结果显示,前列腺素类化合物PGE2和受体选择性激动剂(butaprost)可引起奶牛输卵管上皮中cAMP量的变化,且cAMP量具有对PGE2和butaprost浓度依存性的变化规律,表明奶牛输卵管上皮细胞中存在前列腺素受体EP2和EP4。Real time RT-PCR实验结果表明,奶牛输卵管上皮细胞中存在前列腺素受体EP2和EP4,且E2对EP2和EP4受体mRNA的表达具有调控作用,低浓度(10-12mol/L)可提高该受体mRNA的表达量。     

几种植物基肥与生物农药混用防治黄曲条跳甲药效试验

田间比较了3种植物基肥(印楝、鱼藤和茶枯植物基肥)处理土壤,并喷施生物农药防治黄曲条跳甲.结果表明,3种植物基肥对土壤中黄曲条跳甲的落卵量和幼虫数量都有明显的控制作用;联合施用生物农药防治黄曲条跳甲成虫,药后1～10d防效达到57.41％-89.03％,可有效控制田间黄曲条跳甲的暴发为害,为控制黄曲条跳甲提供了一条有效的途径.     

药剂土壤处理对菜心田黄曲条跳甲的防治效果

采用Bt、氯虫苯甲酰胺、阿维菌素、毒死蜱和啶虫脒5种药剂在菜心田整地播种前进行土壤处理,观察处理田块黄曲条跳甲种群数量的变化动态。结果表明,5种供试药剂对黄曲条跳甲落卵量、幼虫和成虫数量均有一定控制作用,持效期可达20d以上。其中,Bt处理在菜心整个生长周期的落卵量和幼虫数量相对最低,每小区(20 m2)累积成虫数为54头,与CK的166.44头相比,累积虫量少67.56%。     

黄曲条跳甲在广西南宁地区大发生原因及防治措施

对广西南宁地区多个蔬菜产区进行实地调查,初步掌握了黄曲条跳甲在该地区的生活习性及其对当地主要蔬菜品种的为害情况,指出该地区近年来黄曲条跳甲为害逐年加重与防治不当、气候适宜、食料丰富及人们对该虫的认识不足有关。提出改进化学防治方法,提高防治效果;重视使用农业防治、物理防治措施,避免化学药剂大量使用;抓好基础工作,建立完善的技物配套服务体系等防治建议。     

增城菜心黄曲条跳甲发生特点及绿色防控技术

增城菜心是广州市增城区知名的特产蔬菜品种,为了全面落实农药使用量零增长行动,增城区建立了菜心黄曲条跳甲绿色防控示范区。本文分析了当地黄曲条跳甲的发生规律和危害特点,总结了推广和应用信息素黄板、杀虫灯、防虫网和科学用药等绿色防控措施,以有效控制黄曲条跳甲危害,减少农药使用量,提高菜心产量和品质,增加菜农收入。     

甘蔗S-腺苷蛋氨酸脱羧酶基因Sc-SAMDC的克隆和表达分析

【目的】克隆甘蔗(Saccharum officinarum)S-腺苷蛋氨酸脱羧酶(S-adenosylmethionine decarboxylase,SAMDC)基因,并进行序列特征、原核表达和不同逆境胁迫下表达特性分析。【方法】通过对甘蔗茎全长cDNA文库测序和分析,获得SAMDC基因cDNA全长,命名为Sc-SAMDC,并进行序列分析。随后将编码S-腺苷蛋氨酸脱羧酶的cDNA片段克隆到原核表达载体pET29a(+)中,构建融合表达质粒,转化至Esherichia coli BL21(DE3)中进行表达。最后利用定量PCR技术分析甘蔗幼苗中该基因在不同外源胁迫下的表达特性。【结果】序列分析显示,甘蔗Sc-SAMDC基因(GenBank Accession number:GQ246459)cDNA全长1968bp,存在3个读码框(袖珍读码框tORF、上游读码框uORF和主读码框mORF),mORF长1200bp,编码399个氨基酸的SAMDC酶原,预测分子量为43.6kD,该酶原含有两个高度保守的功能结构域(酶原剪切位点和PEST结构域)。原核表达产物经SDS-PAGE表明,Sc-SAMDC以融合蛋白形式表达,相对分子量约为50kD。定量PCR分析表明,Sc-SAMDC基因在聚乙二醇(PEG)、NaCl、水杨酸(SA)和H2O2外源胁迫下表达特性不同,受PEG和NaCl的诱导,受SA和H2O2的抑制。【结论】本研究成功地克隆了Sc-SAMDC基因并在原核生物中进行了表达研究,分析了该基因的表达特性,为其进一步的生物学功能研究及其应用奠定了基础。     

硫代葡萄糖苷对黄曲条跳甲寄主选择性的影响

硫代葡萄糖苷是影响黄曲条跳甲寄主选择的主要原因，同一蔬菜品种的不同生长期、不同器官、不同叶位上，硫代葡萄糖苷的含量越高，其选择性越大，两者呈显著性关性（相关系数分别是0．9674、0．9030、0．9909、0．7963，P＜0．05），不同品种的6种蔬菜中，黄曲条跳甲基本趋向选择硫代葡萄糖苷含量较高的蔬菜，但相关性不显著（r=0.7126、0．0287，P＜0．05），说明存在影响黄曲条跳甲寄主选择的其他因素。     

杀虫剂胁迫对小白菜B. campestris体内营养物质和黄曲条跳甲P. striolata取食的影响

采用生物测定与生理生化方法,研究不同杀虫剂胁迫下小白菜B.campestris体内的蛋白质和可溶性糖含量变化,以及对黄曲条跳甲(P.striolata)取食的影响.结果显示,杀虫剂处理对小白菜体内蛋白质含量的影响不显著,但对小白菜体内可溶性糖含量的影响显著.统计分析表明,杀虫剂处理后,黄曲条跳甲对小白菜的取食与植株体内蛋白质含量呈显著的负相关(P<0.05),与小白菜的可溶性糖含量呈极显著的正相关(P<0.01).