山桃对根癌病的抗性评价

为探明山桃(Prunus davidiana(Carr.)Franch.)的抗根癌病种质资源价值,采用人工接种的方法评价了实生山桃苗对发根土壤杆菌(Agrobacterium rhizogenes Conn)和根癌土壤杆菌(A.tumefaciens Conn)的抗性。结果表明:接种后70d,接种发根土壤杆菌的山桃株最大瘤茎为0~20.3mm,病情指数为59,根据抗性评价标准判定为低度抗病类型;接种根癌土壤杆菌的山桃株最大瘤茎为0~5.3mm,病情指数为15,根据抗性评价标准判定为高度抗病类型;实生山桃群体对根癌菌的抗性存在广泛的株间分离现象,其对发根土壤杆菌的抗性分离为免疫、高度抗病、中度抗病、低度抗病、感病和易感病6种类型,分别占群体总数的20.8%、5.0%、12.5%、11.7%、20.0%和30.0%;对根癌土壤杆菌的抗性分离为免疫、高度抗病、中度抗病和低度抗病4种类型,分别占群体总数的35.0%、55.8%、8.4%和0.8%。山桃实生群体存在大量对发根土壤杆菌和根癌土壤杆菌免疫型单株,是优异的抗根癌病桃树砧木种质资源树种。     

大叶草樱对根癌病的抗性评价

为评价大叶草樱对根癌病的抗性,以4个月的实生大叶草樱为材料,采用人工接种根癌土壤杆菌(Agrobacterium tume aciens Conn)和发根土壤杆菌(A.rhizogenes Conn)的方法研究了大叶草樱对根癌病的抗性及其抗性分离情况.结果表明:60 d后,大叶草樱接种根癌土壤杆菌的最大瘤径为8.3 mm,病情指数为23.65,为中度抗病类型(MR);对发根土壤杆菌的最大瘤径为4.7mm,病情指数为18.63,为高度抗病类型(HR).大叶草樱群体内对根癌土壤杆菌和发根土壤杆菌的抗性均存在显著的分离现象,其实生群体对根癌土壤杆菌存在免疫、高度抗病、中度抗病和低度抗病和感病5种抗病类型,分别占32.69％、31.73％、24.04％、7.69％和3.85％;对发根土壤杆菌存在免疫、高度抗病和中度抗病3种抗病类型,分别占16.67％、73.53％和9.80％.大叶草樱是优异的抗根癌病种质资源.     

蒙古扁桃对根癌病的抗性评价

以实生苗新梢为试材,采用人工接种的方法研究了蒙古扁桃(Prunus mongolica)对发根土壤杆菌(Agrobacterium rhizogenes)的抗性.结果表明:接种后70 d,株平均瘤径范围在0～16.6 mm, 群体平均瘤径6.6 mm,蒙古扁桃对发根土壤杆菌中度感病,实生群体抗性分离宽泛,其中存在免疫、高抗、中抗、中度感病和高度感病5种类型,分别占8.60%、19.23%、14.42%、33.65%和24.04%.蒙古扁桃是发根土壤杆菌的优异抗原植物,是核果类果树抗根癌病砧木品种选育的珍贵种质资源,具有极为重要的开发价值.     

东北山樱桃对根癌病的抗性评价

以两年生实生苗新梢为试材,采用人工接种根癌土壤杆菌与发根土壤杆菌(浓度比为1∶1)混合液的方法,研究了东北山樱桃对根癌病的抗性。结果表明:接种后70d,接种根癌菌的东北山樱桃根部最大病瘤直径为10.24mm,病情指数为29.0,根据抗性评价标准判定东北山樱桃群体对根癌病中度抗病;其实生群体内存在显著的株间分离现象,有免疫、高度抗病、中度抗病、低度抗病、感病和易感病6种类型,分别占群体总数的18.0%、40.0%、28.0%、8.0%、5.0%和1.0%。东北山樱桃是优异的抗根癌病种质资源。     

陕甘山桃对根癌病的抗性评价

为评价陕甘山桃(Prunus davidiana var.potaninii Rehd)对根癌病的抗性,以实生钵苗为试材,采用人工接种的方法研究了其对根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens Conn)和发根土壤杆菌(A.rhizogenes Conn)的抗性。结果表明:接种后60d,接种根癌土壤杆菌的陕甘山桃的株最大瘤径范围为0～10.1mm,平均瘤径2.7mm,接种发根土壤杆菌的株最大瘤径范围为0～11.6mm,平均瘤径3.0mm,根据抗性评价标准判定陕甘山桃群体高抗根癌土壤杆菌和高抗发根土壤杆菌。但陕甘山桃对根癌土壤杆菌和发根土壤杆菌的抗性存在广泛的的株间分离现象,均分离为免疫、高抗、中抗、低抗、感病和易感病6种类型,对根癌土壤杆菌免疫、高抗、中抗、低抗、感病和易感病型植株分别占群体总数的28%、33%、19%、13%、6%和1%,对发根土壤杆菌免疫、高抗、中抗、低抗、感病和易感病型植株分别占群体总数的16%、46%、15%、13%、8%和2%。陕甘山桃是优异的抗根癌病种质资源。     

毛桃对根癌病的抗性研究

为评价毛桃的根癌病抗原价值,以实生苗为试材,采用人工接种的方法研究了毛桃(Prunus persica)对发根土壤杆菌(Agrobacteriumrhizogenes)的抗性。结果表明:接种的103株实生苗的株平均瘤径0～24 mm,群体平均瘤径8.77 mm;其中3株未发病,3株瘤径1.00～3.00 mm,7株3.01～5.00 mm,32株5.01～8.00 mm,58株>8.00 mm;评价为免疫、高度抗病、抗病、感病和高度感病型株率分别为2.90%、2.90%、6.79%、31.10%和56.31%。本研究中,毛桃对发根土壤杆菌高度感病,实生群体内存在广泛的抗性分离现象,其中有免疫基因型植株,是珍贵的根癌病桃树抗原和桃砧木抗根癌病品种选育的种质资源。     

东北山樱桃对三种主要根结线虫的抗性评价

为评价东北山樱桃抗根结线虫种质资源价值,以实生钵苗为试材,采用人工接种等方法,研究了其对南方根结线虫,北方根结线虫和花生根结线虫的抗性。结果表明:接种后30d,南方根结线虫的侵入率为0.40%,根内雌成虫数量占接种总量的0.16%,依据抗性评价标准判定东北山樱桃高抗南方根结线虫;北方根结线虫的侵入率为1.20%,根内雌成虫数量占接种总量的0.80%,依据抗性评价标准判定东北山樱桃高抗北方根结线虫;花生根结线虫的侵入率为0.82%,根内雌成虫数量占接种总量的0.60%,依据抗性评价标准判定东北山樱桃高抗花生根结线虫。其对3种根结线虫的抗性均存在显著的株间分离现象,均分离为免疫、高度抗病、中度抗病3种类型,对南方根结线虫免疫、高度抗病、中度抗病型植株分别占群体总数的16.0%、80.0%和4.0%;对北方根结线虫免疫、高度抗病、中度抗病型植株分别占群体总数的2.0%、68.0%和30.0%;对花生根结线虫免疫、高度抗病、中度抗病型植株分别占群体总数的6.0%、78.0%和16.0%,东北山樱桃是优异的抗南方、北方和花生根结线虫砧木和种质资源。     

几种李属植物对花生根结线虫的抗性

为筛选抗根结线虫桃树砧木,以实生钵苗为试材,采用人工接种(每株1 000条二龄幼虫)的方法研究了5个树种、品种对花生根结线虫(Meloidogyne arenaria)的抗性.结果表明:5个树种毛桃、筑波4号、筑波5号、蒙古扁桃、长柄扁桃均为高抗基因型树种或品种,其实生个体间有明显的抗性分离现象,均存在免疫和高抗2种基因型;长炳扁桃、筑渡4号、筑波5号具有极强的抗侵入和抗发育能力,绝对免疫株率分别高达77%、56%和40%,线虫接种侵入率分别只有0.057%、0.11%和0.14%,且根内幼虫分别只有22%、22%和15%发育至三、四龄阶段,未发现成虫;蒙古扁桃和毛桃具有极强的抗侵染能力和很强的抗发育能力,绝对免疫株率为2%和4%,接种侵入率为0.77%和0.85%,根内幼虫分别有63%和51%停留在二龄幼虫或二龄贮虫阶段,只有10.6%和7.7%发育为雌成虫,未发现卵块.筑波4号、筑波5号是优异的抗花生根结线虫桃砧木品种和种质资源;毛桃、蒙古扁桃和长柄扁桃为优异的抗花生根结线虫种质资源.     

5种核果类果树的耐盐性与抗盐性分析

为了筛选耐、抗盐桃树砧木,笔者以蒙古扁桃、长柄扁桃、毛桃、筑波4号实生苗和毛樱桃扦插苗为试材,研究其耐盐性、抗盐性及其分离情况。结果表明:正常生长的基质含盐量:毛樱桃接近0.08 g/kg,其他树种/品种<1.8 g/kg;致死基质含盐量:毛樱桃1.8 g/kg,筑波4号、长柄扁桃、毛桃2.8 g/kg,蒙古扁桃>4.8 g/kg。蒙古扁桃、毛桃、长柄扁桃、筑波4号、毛樱桃的抗盐性分别为极强、强、中、弱、极弱。5个树种/品种的实生后代均存在显著的耐盐性及抗盐性分离现象,分离范围:毛樱桃<筑波4号、蒙古扁桃<长柄扁桃<毛桃,可从中筛选抗性较强的植株。     

桃品种资源抗根癌病评价

为了明确不同桃品种对根癌病的抗性,挖掘抗病基因,为抗病育种提供抗源材料。采用嫁接苗枝条接种强致病力根癌土壤杆菌AT4-3,60d后测定最大瘿瘤直径评价不同材料的抗病性。对179个桃栽培品种的抗根癌病能力进行评价,结果表明,不同品种的瘤直径平均值分别为3.44～25.48mm(2014年)和5.89～31.40mm(2015年);在2014年的抗性鉴定中,高度抗病材料1份,来源于华北平原区品种群,中度抗病材料20份;在2015年的抗性鉴定中,中度抗病材料2份,分别来源于华北平原区品种群和西北干旱区品种群。2a鉴定中抗性表现较好且稳定的品种有‘二接白’‘肉蟠桃’‘绯桃’‘红桃’‘砂子早生’‘南山甜桃’‘深州离核水蜜’‘张黄9号’‘鸳鸯垂枝’‘临白10号’等。     

拮抗根癌土壤杆菌的桃内生细菌的筛选鉴定

【目的】从对根癌病具有获得抗性(SAR)的桃单株"西北13-1"的枝条内分离鉴定内生细菌,分析其种群组成并从中筛选拮抗根癌土壤杆菌的高效生防菌,为桃根癌病的生物防治探索新方向并提供新的生防菌资源。【方法】首先,将根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)接种到"西北13-1"的桃树枝条上,并以无菌水接种作为对照;然后,分别于接种前、接种后10 d和接种后60 d采集接种处理和对照处理的"西北13-1"枝条。表面消毒桃树枝条样品后采用涂布平板法分离内生细菌;并结合16S r DNA序列鉴定,比对初步鉴定菌株,分析内生细菌的数量及组成差异。采用平板拮抗法、温室防病效果测定筛选拮抗根癌土壤杆菌的活性菌株,通过生理生化测定和分子鉴定,明确其分类地位。为揭示拮抗菌可能具有的其他拮抗作用机制,通过电击转化将含有GFP基因的p BBR1MCS-2质粒导入拮抗菌株中,然后进行GFP标记菌株对根癌土壤杆菌的抑菌试验、生长动力学分析、稳定性测试。采用灌根法提前接种标记菌株菌悬液,第2天接种根癌土壤杆菌菌悬液,应用激光扫描共聚焦显微镜和平板稀释法研究标记菌株在番茄根部的定殖情况。【结果】从"西北13-1"桃枝条中共分离到108株内生细菌,基于16S r DNA序列,这些菌株分别属于伽马变形菌类(Gammaproteobacteria)、阿尔法变形菌类(Alpharoteobacteria)、放线菌类(Actinobacteria)、厚壁菌类(Firmicutes)、拟杆菌(Bacteroidetes),共计5个细菌类群17个属,显示了桃树枝条中内生细菌丰富的种群多样性。其中,伽马变形菌类的肠杆菌属(Enterobacter)、泛菌属(Pantoea)和根瘤菌属(Rhizobium)最多,其数量在接种根癌土壤杆菌后显著上升,包含了14株产抑菌圈的拮抗菌中的10株细菌。经鉴定,筛选出的两株抑菌活性较高、具有生防潜力的拮抗菌10DM4-1和10DI2-2分别为泛菌(Pantoea deleyi)和肠杆菌(Enterobacter cowanii),它们可显著抑制向日葵根癌瘤的形成,防治效果分别为86.08%和89.87%。标记菌株10DM4-1-gfp和10DI2-2-gfp灌根番茄后,可在根部细胞间隙观察到目标菌落,标记菌株的数量在0—10 d时呈现急剧下降趋势,最后保持相对稳定的较低水平(104CFU/g),说明了它们在番茄根组织内具有良好的生存和定殖能力。【结论】桃"西北13-1"的内生菌中存在着能够拮抗根癌土壤杆菌的细菌,这些具有拮抗活性的菌株与桃"西北13-1"具有根癌病抗性有关。分离得到的泛菌10DM4-1和肠杆菌10DI2-2可能通过产拮抗物质、占据根部有利生态位拮抗根癌土壤杆菌。     

新疆野生樱桃李抗根癌农杆菌与致瘤菌表达以及组织形态学观察

以新疆野生樱桃李实生群体为试材,通过接菌对其抗性进行鉴定,并对冠瘿瘤形成过程进行了观察,同时对抗病机理进行了初步探讨,结果显示:在对126棵新疆野生樱桃李抗根癌农杆菌的鉴定中,有25棵表现为高度抗病,约占鉴定总数的20%,说明新疆野生樱桃李是优良的抗根癌农杆菌种质资源。冠瘿瘤内部导管来源于寄主的木质部组织并先于筛管形成;冠瘿瘤形成早期对水分和养分的需求可能会大于同化产物。冠瘿瘤中存在有树状和球状2种结构维管束,树状维管束在冠瘿瘤不断扩大生长中发挥作用,而发育完成的冠瘿瘤主要以球状结构维管束行使运输功能。抗病植株中在侵染根癌农杆菌后玉米素核苷含量与对照差异不大,但感病植株在接菌18d时玉米素核苷含量显著增高;同时,ipt、iaaM和iaaH表达也明显高于抗病植株。说明ipt基因大量表达导致玉米素核苷含量在感病植株中快速上升,从而导致发病。     

大樱桃根癌病原细菌分类地位鉴定

从烟台地区采集13份大樱桃根癌病样本,分离纯化出26个菌株,致病性测定表明23个菌株在指示寄主番茄上具有致病性;进一步经生理生化反应、碳源利用、选择性培养基等试验鉴定出16个根癌病菌菌株为Agrobacterium tumefaciens生物型2,占69.57%,为优势种群,其余7个菌株为生物型1.对大樱桃根癌病菌分类地位的确定为今后病原菌的系统研究和病害防治提供了理论基础.     

烟草品种对南方根结线虫抗性鉴定及抗性指标筛选

为了综合评价烟草抗南方根结线虫的能力,筛选出抗病指标,以20份烟草品种为试验材料,采用盆栽培育烟草幼苗人工接种南方根结线虫的方法,测量供试烟草品种在接种60 d后相对生长量和有关抗性指标,利用隶属函数和聚类分析相结合的方法对试验数据进行分析。结果表明,20个烟草品种受到南方根结线虫侵染后各器官的相对生长量、有关抗性指标均有差异。相对于其他指标,根结指数、抗性综合指标的聚类结果最相似,与相对生长量综合指标的聚类结果差异性也较小;通过隶属函数和聚类分析相结合的方法对烟草品种进行综合鉴定的结果与其他研究结果相符。综合表明,根结指数可基本反映烟草品种抗南方根结线虫的水平。