重度冷应激下民猪背最长肌应答分子调控网络分析

为解析家猪在重度冷应激下骨骼肌应答反应的分子机制,本研究利用民猪的重度冷应激模型结合RNA-seq测序技术,对遭受重度冷应激后民猪背最长肌的基因和lncRNA的表达变化、功能注释以及两者间的调控关系进行了分析。结果表明:1)民猪在遭受3 d的重度冷应激(-17 ℃~-26 ℃)后,背最长肌的53个基因发生了显著上调表达,35个基因发生了显著下调表达;53个lncRNA发生了显著上调,38个lncRNA发生了显著下调。差异表达基因中有多个与炎症反应相关的基因,如AREG、HAS1、MMP25和SLC11A1等基因发生了显著上调表达;与低温胁迫相关的TREH和与应激反应相关的TRIB3、与碳水化合物、葡萄糖和脂质代谢相关的HGFAC等基因也发生了显著上调表达。2)差异表达基因所参与的生物过程主要集中在胶原代谢、伤口愈合表皮细胞扩散和肌肉肥大调节过程等,且多位于细胞外区间;差异表达基因显著富集的生物学通路仅1个MAPK通路。3)存在显著表达差异的91个lncRNA顺式调控129个基因,反式调控750个基因,lncRNA与靶基因间的互作关系复杂。预测到的靶基因显著富集到MAPK和TNF 2个生物学通路。综上,重度冷应激导致民猪背最长肌出现了炎症反应,改变了部分与炎症、低温胁迫、应激反应和营养物质代谢相关基因的表达及部分lncRNA的表达,MAPK和TNF信号通路被激活。     

酵母铬和二氢吡啶对热应激围产期奶牛生理生化指标及HSP70 mRNA表达量的影响

为确定酵母铬和二氢吡啶是否能缓解围产期奶牛热应激,将24头体质量和胎次相近的围产期荷斯坦奶牛随机分为3组,饲养于环境温湿指数（THI）高于68的热应激条件下,对照组饲喂基础日粮,酵母铬组和二氢吡啶组饲喂基础日粮的同时饲喂8 g/（头·d）铬含量为1‰的酵母铬和3 g/（头·d）的二氢吡啶,试验周期为40 d,观测酵母铬和二氢吡啶对围产期奶牛热应激反应的影响。结果显示：① 酵母铬组和二氢吡啶组奶牛与对照组奶牛在呼吸频率上无显著差异（P>0.05）。② 各组奶牛血清中血糖和胆固醇含量在产前第7天与产后第3天均无显著差异。二氢吡啶组奶牛产前第7天血清中甘油三酯含量显著降低（P<0.05）。③ 与对照组比较,酵母铬组和二氢吡啶组产前、产后血清中Na⁺、K⁺、Cl^-的浓度均无显著差异（P>0.05）,各组在产前、产后血清中碱性磷酸酶和肌酸激酶的含量也均未出现显著变化（P>0.05）。④ 酵母铬组、二氢吡啶组与对照组奶牛血清中热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）基因mRNA表达量没有明显差异（P>0.05）。以上结果表明,热应激条件下,在围产期奶牛日粮中添加8 g/（头·d）铬含量为1‰的酵母铬和3 g/（头·d）二氢吡啶对血液生化指标和HSP70 mRNA表达量均无显著影响,说明日粮中添加8 g/（头·d）铬含量为1‰的酵母铬和3 g/（头·d）二氢吡啶对缓解围产期荷斯坦奶牛热应激无明显效果。     

不同光谱对大口黑鲈仔鱼生长性能、抗氧化和免疫功能的影响

为探究适合大口黑鲈（Micropterus salmoides）仔鱼培育的最佳光谱，于工厂化循环水养殖模式下设立全光谱组、红色光组、绿色光组和蓝色光组4个试验组，通过对比大口黑鲈仔鱼的趋光行为、生长性能，超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、溶菌酶（LZM）、碱性磷酸酶（AKP）活性，分析谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量，以及生长激素（gh）、类胰岛素生长因子1（igf-1）、促甲状腺激素（tsh）、热休克蛋白70（hsp70）、促肾上腺皮质激素释放因子（crf）、半胱天冬酶3（caspase3）等基因的相对表达水平，筛选适宜大口黑鲈苗种培育的光谱范围。结果显示：全光谱组、绿色光组、蓝色光组仔鱼的终末体长体质量、特定生长率、增重率及LZM活性均显著高于红色光组，而MDA、GSH含量及SOD、CAT活性均显著低于红色光组；全光谱组和绿色光组仔鱼AKP酶活性及生长基因gh、igf-1、tsh的mRNA表达均显著高于红色光组，而应激相关基因hsp70、crf、caspase3 mRNA表达均显著低于红色光组和蓝色光组；全光谱组仔鱼存活率显著高于其余各组，并表现出较好的集群趋光行为。结果表明，全光谱光源最有利于工厂化循环水养殖模式下的大口黑鲈苗种培育。     

小菜蛾 Hsp20家族基因鉴定及 PxHsp20-8在温和低温中的表达模式

旨在鉴定小菜蛾Plutella xylostella 的 Hsp20家族基因，明确其在8 ℃和4 ℃低温条件下的表达模式。通过生物信息学手段，从小菜蛾染色体级基因组中鉴定出17条 Hsp20家族基因，分布在5条染色体，其中11个 PxHsp20s位于27号染色体；开放阅读框（ORF）长度为501~1 002，理论等电点5.65~8.05，蛋白分子质量18.80~36.60 ku。将对照组（26 ℃恒温）、短期低温组（4龄幼虫8 ℃ 24 h，以CS表示）、适应后短期低温组（3龄幼虫15 ℃适应后4龄幼虫8 ℃ 24 h，以CA表示）的小菜蛾4龄幼虫转录组进行分析，仅 PxHsp20-8差异表达。利用RT-qPCR对温和低温（8 ℃、4 ℃）、低温暴露时间（24 h、48 h、96 h）、4龄幼虫前是否经历适应（CS和CA处理）不同组合条件下小菜蛾4龄幼虫的 PxHsp20-8基因表达量进行检测。结果表明，处理温度高低和处理时长对 PxHsp20-8表达量无显著影响，4龄前经历15 ℃适应对表达量有显著影响；4龄幼虫CS组8 ℃ 48 h、4 ℃ 48 h、4 ℃ 96 h处理后 PxHsp20-8表达量显著高于26 ℃对照，而CA组8 ℃ 24 h、8 ℃ 48 h、4 ℃ 96 h处理后显著低于对照。相同温度—时间组合下，CS组8 ℃ 24 h、8 ℃ 48 h、4 ℃ 48 h、4 ℃ 96 h PxHsp20-8相对表达量显著高于CA组相应低温处理。     

去势或热应激对筠连黄牛生产性能、瘤胃发酵和血液生化指标的影响

为研究去势或热应激对筠连黄牛生产性能、瘤胃发酵和血液生化指标的影响，本研究选用18头16月龄、体重相近（（292.35±28.71） kg）的不同去势程度筠连黄牛（全去势FCG、半去势HCG、假手术SOG），分为3组，每组6个重复，每个重复1头牛，根据试验期间牛舍温湿度指数（THI），分为热应激期（7、8月）和非热应激期（9月），分析去势和热应激对黄牛各指标的影响。结果表明：1）与非热应激期相比，热应激期牛舍THI、肉牛呼吸频率和直肠温度均显著提高（P<0.05）。2）去势或热应激均显著提高血清热休克蛋白70、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）和雌二醇浓度（P<0.05），而睾酮、甲状腺素（T4）、胰岛素和游离脂肪酸浓度显著降低（P<0.05），且除血清葡萄糖、T4和LDL-C外，去势和热应激对其他血清指标存在显著互作效应（P<0.05）。3）全去势或热应激均显著降低肉牛平均日增重（ADG），且存在显著互作效应（P<0.05）。4）热应激期，去势显著降低粗蛋白、酸性洗涤纤维和钙表观消化率以及血清总抗氧化能力（T-AOC）（P<0.05），而热应激消除后，去势显著提高了T-AOC含量（P<0.05）。5）去势或热应激均显著提高瘤胃pH（P<0.05），显著降低氨态氮（NH₃-N）、乙酸（AA）和总挥发性脂肪酸（TVFA）浓度（P<0.05），且去势和热应激对瘤胃pH、NH₃-N、AA和TVFA浓度存在显著互作效应（P<0.05）。综上，公牛去势或热应激均会影响机体性激素分泌和养分表观消化率，从而降低生产性能，为热应激期肉牛饲养管理提供科学依据。     

牦牛CCL14蛋白对HepG2细胞活性和凋亡的影响

旨在研究牦牛CCL14蛋白（Bos grunniens C-C motif chemokine 14 protein, BgCCL14）对HepG2细胞的影响和作用机制。将原核表达的BgCCL14蛋白与HepG2细胞共培养，利用CCK-8试剂盒检测细胞活性，平板克隆检测细胞克隆形成能力，细胞划痕检测细胞迁移以及荧光定量PCR检测相关基因的表达量。结果表明，1 μg/mL、10 μg/mL和20 μg/mL的BgCCL14蛋白均能显著降低HepG2细胞活性；20 μg/mL的BgCCL14蛋白对细胞增殖和迁移有极显著抑制作用；20 μg/mL的BgCCL14蛋白处理36 h极显著上调凋亡基因BAK和BAX 的mRNA水平，极显著降低 HIF1A、 PI3K和 CDK1基因的mRNA水平，显著降低mTOR基因 的mRNA水平。这表明BgCCL14蛋白可能通过促进细胞凋亡抑制肝癌细胞活性。     

胁迫条件下山新杨PdPapMYC2基因的组织表达模式

【目的】解明山新杨PdPapMYC2基因在生物胁迫、非生物胁迫及激素诱导下的组织表达模式。【方法】克隆山新杨PdPapMYC2基因，采用生物信息学技术分析其编码蛋白特性。采用qRT-PCR技术分析PdPapMYC2在山新杨顶尖、茎、叶和根等组织中的表达量，以及其在盐（NaCl）、碱（Na₂CO₃）和高渗透压（PEG6000）3种非生物胁迫处理，核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）、立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）、链格孢菌（Alternaria alternata）和金黄壳囊孢菌（Cytospora chrysosperma）5种生物胁迫处理及脱落酸（ABA）、茉莉酸 （JA）和水杨酸（SA）3种激素诱导下的组织表达量变化。【结果】PdPapMYC2基因长1 944 bp，编码647个氨基酸，存在bHLH-MYC_N superfamily和bHLH_SF superfamily保守结构域。预测PdPapMYC2蛋白定位在细胞核；二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲构成，三级结构与拟南芥4rru.1.A模型的一致性最高。系统进化结果显示，PdPapMYC2与毛白杨PtMYC2的亲缘关系最近。qRT-PCR分析结果显示，PdPapMYC2基因在山新杨顶尖、叶、茎和根中均有表达；与对照(CK)处理相比，在NaCl、Na₂CO₃和PEG6000胁迫处理下，顶尖部位PdPapMYC2的表达量均显著下调（P<0.05）；成熟叶中PdPapMYC2的表达量在NaCl胁迫时显著上调（P<0.05），在碱和高渗透压胁迫处理中下调；3种胁迫处理下其在根中的表达量均下调，但均未达显著水平。与对照(CK)处理相比，5种土传致病真菌胁迫48 h后，顶尖中PdPapMYC2表达量均下调，成熟叶中表达量仅在链格孢菌诱导下略上调，根部表达量在尖孢镰刀菌、金黄壳囊孢菌、链格孢菌和核盘菌作用下上调。JA诱导下PdPapMYC2在各组织中的表达量均显著上调（P<0.05），ABA和SA诱导下其在各组织中的表达量均下调。【结论】PdPapMYC2基因在山新杨多组织中表达，参与植物抵御逆境胁迫，并响应相关激素诱导。     

茶树CsCBF1基因表达载体的构建及其转基因烟草的抗寒性分析

【目的】通过转基因烟草验证茶树CsCBF1基因抗寒性功能,为发掘、筛选茶树重要功能基因提供理论依据。【方法】 利用根癌农杆菌介导法将构建的表达载体pBI121-CsCBF1导入烟草,通过PCR、RT-PCR和GUS活性染色鉴定外源CsCBF1基因是否导入并整合到烟草基因组上转录表达。然后将转pBI121-CsCBF1型、转pBI121型和野生型烟草分别置于25,4和0 ℃下处理48 h后,检测其膜质通透性、丙二醛（MDA）含量和叶绿素荧光参数Fv/Fm,并将0 ℃处理3 d的转pBI121-CsCBF1型和野生型烟草置于25 ℃下培养1周后观测恢复表型和统计死亡率。【结果】 成功构建表达载体pBI121-CsCBF1,PCR、RT-PCR和GUS活性染色证明,CsCBF1已整合到烟草基因组中并转录表达。25 ℃处理下,转pBI121-CsCBF1型、转pBI121型和野生型烟草的膜质通透性、丙二醛含量和Fv/Fm均无显著差异,而在4和0 ℃处理下,转pBI121-CsCBF1型烟草的膜质通透性和丙二醛含量均显著低于转pBI121型和野生型烟草,但Fv/Fm显著高于转pBI121型和野生型烟草。生长恢复试验中,转pBI121-CsCBF1型的存活率为66.7％,而野生型仅为23.3％。【结论】 茶树CsCBF1基因能够显著增强非低温驯化植物烟草的抗寒性,说明茶树CsCBF1基因存在于细胞抗寒的分子调控途径中,从而提高植物细胞的低温防御能力。     

秦川牛PLIN2基因参与脂滴形成调节机制的研究

【目的】研究PLIN2基因对秦川牛脂肪细胞分化过程中脂滴形成的功能。【方法】以秦川牛原代脂肪细胞为试验材料,采用高干扰效率的si-PLIN2及对照组si-NC,超表达PLIN2基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-PLIN2及对照pcDNA3.1(+)-empty vector（pcDNA3.1(+)-EV）,转染秦川牛脂肪细胞并进行相关基因mRNA及蛋白水平表达量验证,并对转录因子C/EBPα是否能结合在PLIN2基因启动子区域进行验证。【结果】si-PLIN2处理组中CREB基因表达量无明显变化,C/EBPβ和C/EBPα基因mRNA水平表达量与si-NC对照组相比分别出现显著或极显著下调。与对照组pcDNA3.1(+)-EV相比,过表达组pcDNA3.1(+)-PLIN2CREB相对表达量极显著上调,C/EBPα和C/EBPβ基因相对表达量上调,但差异不显著。Western blot蛋白表达水平检测发现,si-PLIN2中磷酸化水平CREB(phospho-CREB,p-CREB)、C/EBPβ、C/EBPα的表达量显著低于对照组si-NC,过表达组上述转录因子表达量未出现明显上调。ChIP试验结果表明,转录因子C/EBPα可以结合在PLIN2基因启动子区域,并调控秦川牛PLIN2基因的表达。【结论】下调秦川牛PLIN2基因可反馈抑制上游cAMP-PKA信号通路p-CREB、C/EBPβ、C/EBPα 3个转录因子的表达,从而抑制秦川牛脂肪细胞分化过程中脂滴生成。     

玉米ZmGAPDH和ZmACTIN的原核表达及抗体制备

【目的】制备玉米三磷酸甘油醛（GAPDH）和肌动球蛋白（ACTIN）的多克隆抗体,检测热激条件下玉米B73叶片中ZmGAPDH和ZmACTIN的表达,为将ZmGAPDH和ZmACTIN作为非生物胁迫下的内参基因奠定基础。【方法】利用DNAMAN 7对ZmGAPDH和ZmACTIN与不同植物同源蛋白间的氨基酸序列进行比对。通过PCR克隆ZmGAPDH和ZmACTIN的CDS,将其构建到原核表达载体pET-28a中并测序;将重组质粒载体转化大肠杆菌BL21（DE3）和RG2, 用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达;将目的蛋白透析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体。利用RT PCR和Western blot检测42 ℃热激不同时间（0,2,4,8 h）下玉米B73叶片中ZmGAPDH和ZmACTIN mRNA及其蛋白的表达水平。【结果】克隆了ZmGAPDH和ZmACTIN基因的CDS序列,成功构建了原核表达载体pET-28a-ZmGAPDH和pET-28a-ZmACTIN。在大肠杆菌中表达出了玉米ZmGAPDH和ZmACTIN蛋白,将纯化的蛋白免疫家兔后获得了多抗血清。ZmGAPDH多克隆抗体能清晰检测到4 ng原核表达的ZmGAPDH抗原,ZmACTIN多克隆抗体同样能够清晰检测到4 ng原核表达的ZmACTIN抗原。热激不同时间下玉米B73叶片中的ZmGAPDH和ZmACTIN蛋白表达水平一致,mRNA丰度稳定不变。【结论】成功制备了ZmGAPDH和ZmACTIN蛋白多克隆抗体;ZmGAPDH和ZmACTIN可以作为内参基因,用于检测热激条件下目标基因的表达水平。     

9种景天属轻型屋顶绿化植物的耐热性研究

【目的】筛选适宜无养护轻型屋顶绿化的耐热植物。【方法】以胭脂红景天(Sedum spurium‘Coccineum’)、佛甲草(S.lineare)、金叶佛甲草(S.lineare ‘JinYe’)、八宝景天(S.spectabile ‘Borea’)、松塔景天(S.nicaeense)等9种景天属植物为试验材料,通过光照培养箱模拟屋顶绿化环境进行高温试验,设置40,45 和50 ℃ 3个高温梯度处理,以25 ℃为对照,研究高温胁迫下9种植物耐热相关生理指标超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)、可溶性蛋白质、脯氨酸和叶绿素含量的变化情况,同时观察景天属植物的外部形态变化,计算各指标的耐热性系数,并进行相关性及主成分分析,采取隶属函数法对不同品种的耐热性进行综合评价。【结果】在3种高温处理中,景天属植物的SOD活性、MDA与脯氨酸含量与对照相比基本呈现上升趋势,可溶性蛋白质与叶绿素含量大多呈现下降趋势,其中金叶佛甲草多数指标变化幅度较大,八宝景天大多指标变化幅度较小。9种植物的MDA含量与脯氨酸含量呈极显著正相关关系（P<0.01）。通过主成分分析可将5个原始指标转换为3个综合指标,其中SOD活性、MDA与脯氨酸含量起主要作用。隶属函数法综合分析发现,不同高温处理下各品种耐热性排序不同：在40 ℃处理下,耐热性较强的为佛甲草、金叶佛甲草与松塔景天;在45 ℃处理下,耐热性较强的为德景天、八宝景天与佛甲草;在50 ℃处理下,耐热性较强的为德景天、胭脂红景天与佛甲草。【结论】高温胁迫下景天属植物主要通过提高SOD活性与脯氨酸含量来减轻伤害,同一品种对不同高温胁迫强度的耐受程度与生理响应具有一定的差异,综合评价后筛选佛甲草、德景天、八宝景天、垂盆草用作无人养护屋顶的绿化植物。     

高温胁迫下菊花嫁接苗中保护酶活性的变化

【目的】探讨嫁接对菊花耐热性的影响机理及对菊花不同器官耐热性的影响。【方法】比较40℃高温胁迫下菊花嫁接苗和不同生育期扦插苗的叶片、根系和茎段中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性的变化与差异。【结果】菊花嫁接苗根茎叶中3种保护酶活性均显著高于扦插苗。与扦插苗相比,嫁接苗叶片、根系和茎段中SOD、POD和CAT活性分别平均提高11.6%,378.0%,260.1%;125.5%,131.3%,203.1%;90.1%,98.0%,90.5%。嫁接苗叶片中以SOD活性最大,均值达375U/g;根系中以POD活性最大,均值达605.87U/g;茎段中3种保护酶活性差异较小,以POD活性略高。【结论】嫁接是提高菊花耐热能力的一项有效措施,嫁接苗根茎叶的耐热性差别显著。     

脲醛及热处理对钩叶藤、高地钩叶藤主要物理性质的影响

为优化藤材改性处理的方案、提高其加工利用水平,以钩叶藤、高地钩叶藤为研究对象,对其改性处理前后主要物理性质的变化进行分析。结果表明,与素材相比,经过120℃热处理后,钩叶藤密度略有增加;钩叶藤和高地钩叶藤抗胀(缩)率分别为11.94%和1.98%,阻湿率分别为4.80%和5.50%,此外高地钩叶藤的抗吸水率为1.80%。按最佳工艺改性处理后,气干密度、绝干密度和基本密度钩叶藤分别增加了9.71%、9.03%和11.70%,高地钩叶藤分别增加了23.57%、22.11%和18.18%;钩叶藤的抗胀(缩)率为5.40%,钩叶藤和高地钩叶藤抗吸水率分别为13.25%和34.16%。经过上述改性工艺处理后,对钩叶藤和高地钩叶藤密度、尺寸稳定性、阻湿性和抗吸水性有着不同的影响。     

9个东方铁筷子品种的耐热性研究

【目的】探究高温胁迫下不同品种东方铁筷子的耐热性差异,筛选适合在我国夏季高温地区园林应用的东方铁筷子耐热品种,为铁筷子耐热新品种的培育提供亲本材料。【方法】以9个东方铁筷子品种为试验材料,通过人工模拟高温胁迫,观测其热害症状,检测高温胁迫对其生理指标的影响,研究其高温耐受性;并结合隶属函数分析对其耐热性进行综合评价。【结果】 高温胁迫条件下,单瓣白和单瓣白粉脉无明显热害症状;9个东方铁筷子品种总叶绿素（Chl(a+b)）、叶绿素a（Chl a）、叶绿素b（Chl b）、类胡萝卜素（Caro）和相对含水量（REC)下降,而相对电导率(RWC)、过氧化氢(H₂O₂）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化物酶（POD）活性增加,丙二醛（MDA）和脯氨酸（Pro)含量以及过氧化物酶（CAT）活性的变化因品种而异。隶属函数分析结果表明,9个东方铁筷子品种耐热性排序为：单瓣白>银莲花白斑>单瓣白粉脉>银莲花白>重瓣白斑>银莲花红>重瓣红>重瓣白>重瓣绿斑。【结论】9个东方铁筷子品种中单瓣白耐热性最强,适宜在夏季高温地区园林中引种栽培。     

水稻抽穗开花期耐热种质资源的筛选鉴定

在水稻抽穗开花期于人工气候箱以每日35.0℃以上高温10 h、日平均温度33.5℃连续7 d对来自11个国家、具有广泛多样性的28个品种(系)进行高温处理和耐热性鉴定.结果表明,热处理后其结实率在0.6%～58.7%之间,耐热指数为0.01～0.85.其中,"赣香糯"和"N22"耐热性最强,耐热指数为0.84和0.85.选用对籼粳性具有专一分辨力的24个SSR和InDel标记对测试品种(系)进行籼粳性分析,并分析籼粳性与耐热性的关系.结果显示,品种的籼性度与耐热性显著正相关(P<0.05),表明在籼稻资源中进行耐热性筛选将有更大的机会获得强耐热性的稻种资源.     

热处理条件对越南安息香木材耐软腐性的影响

研究了以水蒸汽为保护气体,温度170～210℃、时间2～6 h 为热处理条件下越南安息香木材的耐软腐性能、pH值变化,以及腐朽后木材细胞壁破坏情况。结果表明,随着热处理温度升高和热处理时间延长,越南安息香木材耐软腐性能提高;软腐试验后,失重率从未处理的33.52%减少至处理210℃,6 h时的1.60%。软腐菌的侵蚀导致木材的pH值增加,即酸性减弱;同时,pH值变化率随着木材受腐朽程度（失重率）增加而提高,未处理材的pH值提高了22.46%。随着热处理温度升高和热处理时间延长,木材软腐前后pH值的差异减小,pH值变化率从处理170℃,2 h时的22.43% 减少至处理210℃,6 h时的0.10%。与失重率变化趋势相似。软腐菌的侵蚀使越南安息香木材构造发生变异,受细胞腔中的软腐菌菌丝侵蚀细胞壁,在细胞壁上有很多V形穿孔槽。     

苹果树主要病害内生拮抗真菌的筛选及拮抗特性

【目的】筛选苹果树腐烂病菌Valsa malimiyabe与苹果树炭疽病菌Glomeralla cingalata的内生拮抗真菌,并研究其抑菌效果。【方法】分离发病地区健康苹果树的根、茎及其根际土壤中的拮抗内生真菌,室内抑菌试验测定其对苹果树腐烂病菌和苹果树炭疽病菌的抑制作用;发酵培养试验检测其内生真菌中抑菌物质的耐热性。【结果】分离到的18株内生真菌分属3个属,其中茎分离到的内生真菌的种类和数量较多;对峙试验表明,对苹果树腐烂病菌和炭疽病菌的抑菌率高于60%的有8株,其中菌株J2、J16、J17对苹果树腐烂病的抑制率分别为82.75%、84.31%和82.35%,菌株T1对苹果树菌株炭疽病的抑制率为80.67%。拮抗真菌J2、J16、J17、J24、T1发酵液对2种病原菌分生孢子萌发的抑制率均不小于39.55%,最高达69.75%;在121℃时,J11和T1无菌滤液的热稳定性较好,而J2无菌滤液在100°C时就失去了生物活性。【结论】拮抗真菌J2、J11、J16、J17、T1均对苹果树腐烂病菌及苹果树炭疽病菌有较强拮抗作用,可为开展这2种病害的生物防治研究提供潜在资源。     

黄瓜果实耐冷性与CsHSFs基因表达关系的研究

【目的】研究CsHSFs基因的表达特征与热处理和冷锻炼处理提高黄瓜果实耐冷性的关系.【方法】测定了低温(8℃)贮藏过程中热处理(低温贮藏前50℃热水处理1 min)、冷锻炼处理(15℃预贮2 d后再低温贮藏)和对照处理的黄瓜果实的相对电导率、可溶性固形物(TSS)含量、叶绿素含量和果实色泽等生理指标,并用qRT-PCR法检测CsHSFs基因的表达特征.【结果和结论】热处理和冷锻炼处理均可提高果实耐冷性,主要表现为热处理和冷锻炼处理均显著抑制了果实相对电导率的升高和叶绿素含量的降低,较好地保持了果实的色泽和商品性状,相比较而言,冷锻炼处理减轻果实冷害的效果比热处理明显,同时,热处理与冷锻炼处理都不影响果实TSS含量.并且,CsHSF7和CsHSF11基因表达水平与热处理和冷锻炼诱导的果实耐冷性密切相关,但其参与冷害的机制可能不同,体现为CsHSF7在酵母中具有转录激活活性,而CsHSF11在酵母中不具有转录激活活性.     

小麦热胁迫响应基因TaMYB165的克隆与功能分析

【目的】MYB转录因子在植物生长发育和抗逆过程中起着重要作用,克隆小麦MYB基因并对其功能进行研究,对植物MYB转录因子的调控机制具有重要意义。【方法】利用Affymetrix小麦芯片系统,分析2个小麦品种中国春(热敏感)和TAM107(耐热)在不同热胁迫处理下的转录谱,从热胁迫上调表达的EST序列中克隆得到小麦耐热相关TaMYB165基因,并对该基因的表达特性及功能进行研究;利用实时定量RT-PCR技术分析小麦不同发育时期、不同组织器官热胁迫处理下TaMYB165基因的动态表达模式,构建超表达载体并转化拟南芥,对获得的转基因拟南芥株系进行耐热性鉴定。【结果】克隆获得1个小麦MYB转录因子家族基因TaMYB165,该基因ORF长度为847 bp,编码282个氨基酸。同源序列分析表明,TaMYB165与高粱SORBIDRAFT 03g040120亲缘关系最近(73.2%),与水稻MYB蛋白和拟南芥AtMYB165的相似性分别为70.37%和33.0%。qRT-PCR结果显示,TaMYB165在小麦苗期和灌浆期都受热胁迫诱导表达,只是响应的早晚有所不同。在拟南芥中过量表达TaMYB165,转基因株系热胁迫后成活率提高,细胞膜热稳定性增强。【结论】TaMYB165是小麦热胁迫响应的重要转录因子,可作为小麦耐热育种的重要候选基因。     

蝴蝶兰热激蛋白基因PhHsp70序列分析及对冷胁迫的响应

通过RT-PCR和RACE相结合的方法从蝴蝶兰叶片中克隆了一个热激蛋白基因PhHsp70 c DNA序列(Gen Bank登录号为MG214259),该基因全长为2 239 bp,编码647个氨基酸,与多种植物的HSP70基因具有94%以上的相似性;其编码蛋白包含HSP70结构域,属于胞质型HSP70;系统进化分析显示,该蛋白与铁皮石斛的HSP70蛋白亲缘关系最近;PhHsp70基因在营养器官和生殖器官中均有表达,其中在根中表达水平最高,在花器官中表达水平较低;PhHsp70基因在4℃冷胁迫处理0.5 h表达水平下降,冷胁迫1 h后,表达水平升高,在处理24 h时表达水平最高。由此推测,PhHsp70基因参与蝴蝶兰4℃冷胁迫的生理反应。研究结果可为研究蝴蝶兰热激蛋白在低温胁迫响应中的调控机理提供理论基础。