烟草赤星病拮抗生防菌BS06-1的筛选

[目的]筛选对烟草赤星病具有明显拮抗作用的细菌。[方法]应用平板对峙培养法对从烟草根际分离到的细菌进行烟草赤星病拮抗性鉴定,对其中对烟草赤星病菌拮抗性较高的一株细菌利用细菌16S rRNA通用鉴定引物进行PCR扩增、测序和田间抗病性试验。[结果]共从烟草根际分离120份细菌,有6份对烟草赤星病病原菌具有一定拮抗作用,其中1份细菌拮抗作用明显,定名为BS06-1。将该细菌的16S rRNA测序结果登录NCBI网站进行Blastn序列比对,结果表明该菌株与枯草芽孢杆菌BSD-2同源性达到96%,与枯草芽孢杆菌BCRC 14718同源性达到95%,证明该菌属于枯草芽孢杆菌。田间试验证明该菌株BS06-1对烟草赤星病具有显著的抑菌效果。[结论]BS06-1细菌对烟草赤星病具有明显拮抗作用。     

烟草赤星病高效生防内生细菌的分离筛选及发酵培养条件优化

为提高烟叶安全，探索曲靖烟区烟草赤星病生物防控技术，研究烟草内生菌株对烟草赤星病的防控作用。以曲靖烟区分离得到的烟草赤星病病原菌为靶标，采用平板对峙培养法从健康烟株体内分离筛选出生防内生细菌，并应用Design-Expert软件，采用响应面法对其进行发酵培养基的优化。结果表明，从曲靖烟区健康烟株体内分离筛选出15株对烟草赤星病病原真菌链格孢菌具有拮抗作用的菌株，其中编号为YWF-19-0004、YWF-19-0065、YWF-19-0068、YWF-19-0070、YWF-19-0071的5株内生细菌抑菌带宽≥10 mm、抑菌率≥50%;采用响应面法获得YWF-19-0068菌株的优化培养基配方：大豆粉浓度14 g/L,蛋白胨浓度2 g/L,鱼粉浓度2 g/L,蔗糖浓度11 g/L,玉米粉浓度为7 g/L,碳酸钙浓度5 g/L,氯化钠浓度0.3 g/L,磷酸二氢钾浓度0.3 g/L,磷酸氢二钾浓度0.3 g/L,硫酸锰浓度0.2 g/L,硫酸镁浓度0.3 g/L,硫酸铵浓度0.5 g/L,利用优化培养基进行发酵，YWF-19-0068菌株的菌量是基础培养基发酵所得菌量的4.47倍，说明...     

烟草赤星病生防菌的分离与鉴定

从连作障碍较严重的烟草根际土壤中分离出49株细菌活体纯培养物,依次编号为HHHB1～HHHB49,并筛选出对烟草赤星病病原菌（Alternaria alternate）具有拮抗活性的菌株HHHB7和HHHB19,二者抑菌圈直径分别为5、23 mm。二者初步定性为具有生防活性。多相鉴定结果表明,活性最强的菌株HHHB19隶属于假单胞菌属（Pseudomonas）,暂定名Pseudomonas sp. HHHB19。盆栽试验证实,HHHB19菌株悬液叶面喷雾混合处理对烟草赤星病不同发病阶段均表现出一定的防治效果,其中喷施14 d后防治效果达61.83%。菌株HHHB19可作为良好的生防菌备用资源。     

烟草猝倒病生防根际细菌的分离与筛选

采集重病烟田的健株根际土样5份,分离根际细菌876,平皿拮抗筛选拮抗活性较稳定的菌株44个。通过发芽测定、温室盆栽试验,筛选到防效在75．0％以上,防效较稳定的菌株16个,与甲霜灵锰锌药剂对照效果盯当的有6株。在温室试验中,也发现防效较好的16个菌株中有5株具促生作用。     

烟草赤星病菌拮抗微生物的筛选及其对病原的抑制作用

从烟草赤星病斑上分离得到14株拮抗赤星病菌的微生物，对峙培养发现其中6株对赤星病主要病原Alternaria alternata具不同致病力的6个菌株均具拮抗作用。室内离体叶片悬滴法测定发现其中的AM1、AM2、AM6三株拮抗微生物100倍带菌培养液对赤星病的防效均达100％。平皿测定发现AM6 100倍带菌培养液对强致病力病菌的抑制作用为100％，其灭菌滤液的抑制效果为81.8%。其抑菌机理主要是产生拮抗物质，显微镜观察表明AM6能使病菌孢子和菌丝畸变，细胞壁破裂，原生质泄露。     

1株烟草赤星病拮抗芽孢杆菌的鉴定与活性研究

【目的】筛选对烟草赤星病具有拮抗作用的芽孢杆菌并进行鉴定,同时研究其抗菌作用。【方法】从陕西、云南、湖北和河南4省烟区采集烟草根际土壤和烟叶,从中分离筛选烟草赤星病拮抗芽孢杆菌,并对拮抗性最强的1株芽孢杆菌进行形态学、生理生化特性、16S rDNA序列鉴定及粗提物抑菌作用测定。【结果】从烟草表面及根际土壤分离得到的芽孢杆菌中有10株对烟草赤星病有拮抗效果,将其中效果最好的1株芽孢杆菌定名为M-07C2F,其抑菌条带宽度达14.2 mm;通过16S rDNA测序并结合其形态和生理生化特征,鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌。通过显微观察发现,M-07C2F菌株使烟草赤星病病原真菌的菌丝生长出现畸形,菌丝体内部细胞原生质体分布不均匀,部分菌丝内原生质有流出形成空壳的现象。在离体条件下采用生长速率法,测得其对烟草赤星病菌丝生长有抑制作用,EC₅₀为12.82 mg/L;在活体条件下采用田间小区试验,测得当M-07C2F菌株粗提物质量浓度为80 mg/L时,其对烟草赤星病的防治效果达到86.0%。【结论】菌株M-07C2F对烟草赤星病菌的抑菌作用明显,该菌株通过抑制烟草赤星病菌菌丝生长、减少孢子萌发来抑制病菌对植株的侵染,且菌株粗提物质量浓度越高,抑菌能力越强。     

利用拮抗细菌防治烟草青枯病初步研究

从烟草、烟茄、等窕作物和根部土壤中分离并筛选到对青枯病菌具有较强抑菌作用的细菌菌株５个，初步鉴定为芽孢杆菌。通过网室盆栽试验和病地小区试验。结果表明，拮抗细菌对烟草青枯病具有一定的防治作用，其中盆栽试验拮抗菌处理防效可达７５％，病地小区试验拮抗菌处理可推迟青枯病发期７－１０天，防效可达６５％。     

烟草青枯病病原菌的分离及其拮抗菌的筛选

从福建烟田的病株中分离出烟草青枯病病原菌，从其原位土壤中经过分离纯化得到40种土壤菌株，经过平板拮抗法筛选后，得到对青枯病菌有明显抑制作用的5株土壤细菌，分别命名为T1、T2、T3、T4和T5，其中，菌株T5的拮抗带最大，菌落拮抗带达10．2～21．4mm.     

烟草青枯病拮抗菌TBWR1的筛选鉴定及防病促生能力

【目的】分离对烟草青枯病菌具有拮抗作用的细菌并对菌株进行分类、鉴定,以丰富烟草青枯病生防菌菌种资源。【方法】从健康烟株根际土壤中筛选拮抗菌株,测定其形态、生理生化特征及16S rDNA序列等,并对菌株进行分类鉴定,通过盆栽试验验证拮抗菌对烟草青枯病菌的拮抗活性及其对烟株的促生作用。【结果】在烟株根际土壤中分离获得1株对烟草青枯病有明显抑制作用的菌株TBWR1,序列基因登录号为EF562603,菌株TBWR1与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis KC849252和Bacillus subtilis MN062963在同一分支上且同源性达85%,鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);该菌株对烟草青枯病的生防效果达71.1%,并能显著促进烟草株高、叶长、茎围生长和根系生物量增加。【结论】枯草芽孢杆菌TBWR1可作为烟草病害生物防治的候选菌株,在烟草青枯病防治中具有潜在价值。     

烟草青枯病生防真菌的分离鉴定与拮抗活性的初步研究

为了获得对烟草青枯病菌(Ralstonia solancearum)具有较高拮抗活性的生防菌株,对其拮抗真菌进行了分离鉴定和活性筛选.采用系列稀释法和平板涂布法从黔江烟区土壤中分离到真菌116株.经滤纸片法测定,筛选出6株(约5.2％)对烟草青枯病菌有一定拮抗作用的菌株,并用最小抑制浓度(MIC)法测定了其中2株活性较...     

香蕉枯萎病拮抗细菌对4种土传植物病原真菌的抑制作用

测定了从果园土壤中分离的4株香蕉枯萎病拮抗细菌对粉蕉根腐病菌(Pythiumsp.)、辣椒白绢病菌(Sclerotium rolfsii)、节瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.binincasae)的抑菌效果以及对香蕉枯萎病的防治效果。结果表明,3种拮抗细菌bio-B3、bio-d4和bio-P对4种病菌的生长具有显著的抑制作用,产生明显的抑菌带,拮抗细菌bio-d5对辣椒白绢病菌不产生抑菌带,但对其他3种病菌均产生明显的抑菌带;4种拮抗菌株对节瓜枯萎病菌和香蕉枯萎病菌孢子萌发具有显著的抑制作用,其发酵原液对病菌孢子萌发的抑制率较高,抑制率为76.4%~100%,随着稀释倍数的增加,其抑制效果逐渐降低;拮抗细菌bio-B3、bio-d4b、io-d5发酵液1002、00和300倍稀释液对香蕉枯萎病的防治效果为53.3%~80.2%,它们之间无显著性差异,但显著大于bio-P和恶霉灵的防治效果。     

Screening of Antagonistic Bacteria from Phyllosphere towards Tobacco Brown Spot Fungus Alternaria alternata

The possibility of employing antagonistic bacteria for the control of tobacco brown spot was studied. Approximately 136 strains of bacteria were isolated from phyllospheres of tobacco and 9 of these possessed high levels of antagonistic properties. They significantly reduced brown spot in detached tobacco leaves when artificially inoculated with Alternaria alternata. Culture filtrate of the most effective bacterial isolate which designated as Tpb88 was shown to be very efficient in inhibiting mycelial growth of A alternata in dual cultures. Culture filtrate of Tpb88 inhibited germination and germ tube elongation of A alternata. The results showed that the culture filtrate directly inhibited spore germination of A alternata, especially during the first hours of the paired cultivation. The rate of antagonistic activity of culture filtrate of Tpb88 depended on its concentration in the mixture. The greatest inhibition of spore germination was ob served at the highest concentration of filtrate (filtrate to fungal spores inocula mixed in proportion 1: 50). These suggest that the hypothetic mechanism of Tpb88 against tobacco brown spot is to produce antagonistic substances.     

拮抗细菌GP13防治烟草黑胫病的田间应用

 生防菌不同施用时期防治效果表明,生防菌对烟草黑胫病的防治效果在40.1%～90.5%,3个时期以成活后施用,防治效果较好,移栽期效果稍差,假植期防效相对较差。生防菌不同的施用浓度发现随着生防菌浓度的提高,其防效有所提高,500倍生防菌菌剂的防效与对照药剂相当,防效为42.6％～94.5％. 因此,生防菌菌剂以500倍稀释施用对黑胫病的防治效果较好,如病害严重于伸根期加施,效果则更为明显。对烟草黑胫病进行的大田防治试验结果表明,生防菌对烟草黑胫病有较好的防治效果,防效为52.2％～83.3％,与对照药剂的防治效果相当。     

稻瘟病生防菌对四种作物土传病害病原菌的抑制作用

利用稻瘟病生防菌(短小芽孢杆菌)对4种主要作物土传病害病原菌进行抑菌作用试验。结果表明,此生防菌对4种作物土传病害病原菌具有不同程度的抑制作用,100倍生防菌发酵稀释液对4种土传病原真菌--辣椒枯萎白绢病菌、节瓜枯萎病菌、香蕉枯萎病病菌、粉蕉根腐病菌生长抑菌率在41.18%以下,显著低于对稻瘟病菌生长的抑制率(69.85%);生防菌发酵原液对香蕉枯萎病菌的孢子萌发具有较好的抑制作用,抑制率达到86.67%,显著大于其他处理的抑制作用;但不同倍数的生防菌液对节瓜枯萎病菌的抑制差异不显著,抑制率介于76.34%~84.97%之间。     

农用植物酵素液中梨树腐烂病菌拮抗细菌的筛选和防病效果

从农用植物酵素液中筛选对梨黑腐皮壳菌（Valsa pyri）具有抑菌活性的细菌菌株,明确其对梨树腐烂病的防治潜力,以梨黑腐皮壳菌为靶标菌,通过平板对峙培养和牛津杯法从分离自农用植物酵素液的细菌中筛选拮抗菌株,并分析拮抗菌株对病原菌孢子萌发和菌丝生长的影响及防病效果。结果表明,从农用植物酵素液中分离的68株细菌中初筛出15株对梨黑腐皮壳菌具有抑菌作用的细菌,占分离菌株数的22.1%,抑菌率为41.25%～74.14%。经过复筛,4个菌株（gjfn2、gjfn4、PFN41、PGY-FX67）的发酵液和除菌发酵滤液抑菌率分别大于70%和60%,显著高于其他菌株。采用形态特征、生理生化特性及16S rRNA和gyrA基因序列分析,将gjfn2、gjfn4和PGY-FX67鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）,PFN41鉴定为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。4个拮抗菌株发酵液和除菌发酵滤液对梨黑腐皮壳菌分生孢子的萌发有明显的抑制作用,gjfn4、PFN41菌株发酵液及除菌发酵滤液对梨黑腐皮壳菌分生孢子的抑制率36 h均可达到100%,并使梨黑腐皮壳菌菌丝形态畸形、弯曲、末端膨大。离体枝条法防效测定结果表明,4个菌株的发酵液防效均达到79%以上,除菌发酵滤液防效均达到73%以上,其中gjfn4菌株的防效最佳,其发酵液、除菌发酵滤液及除菌发酵滤液50倍稀释液对梨树腐烂病防效分别均达到84.79%、81.57%和67.27%。由此表明,从农用植物酵素液中筛选获得的拮抗细菌菌株具有防治梨树腐烂病的良好潜力。     

烟草黑胫病拮抗细菌菌群的筛选

从湖南烟区烟草黑胫病重发田块采集根际土壤样品共900份,经富集培养后筛选出195个对烟草黑胫病菌有拮抗效果的细菌菌群。菌群Miseq高通量测序结果表明:不动杆菌属(Acinetobacter)和寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)为拮抗细菌菌群共有的优势属。挑选5个抑菌效果较好菌群施入烟田土壤,B44R菌群对烟草黑胫病防效达51.56%。将这5个细菌菌群进行拮抗菌株分离筛选,获得的拮抗菌株分别属于芽孢杆菌属、不动杆菌属、寡养单胞菌属和克雷伯氏菌属。施入菌群后的土壤高通量测序结果显示这些拮抗细菌菌群可在土壤中定殖,其中不动杆菌属和芽孢杆菌属的种群数量显著增加。     

防治烟草青枯病生物有机肥对土壤微生物菌群的影响及其抗病效果

通过大田试验研究了生物有机肥对烟田土壤微生物菌群的影响和对烟草青枯病的防治效果.结果表明,大田试验的4个处理中,施用生物有机肥的处理3和处理4对青枯病发病率降低较为明显.与对照相比,青枯病发病率分别降低21.9％和25.0％,烟叶产量提高5.7％和5.3％,上中等烟比例提高2.3％和2.6％.施用生物有机肥后,烟株根际土壤微生物不仅数量多,而且种类丰富;发病烟株根际土壤中细菌数量增加218.5％,种类比较单一.施用生物有机肥可以改善烟田土壤的生态环境、抑制病原菌生长、减少病害的发生和提高烤烟品质.     

烟草赤星病拮抗细菌Ata28菌株的诱变选育

以烟草赤星病拮抗细菌Ata28菌株为出发菌株,采用紫外线、硫酸二已酯和微波诱变法进行诱变;再挑取诱变获得的对烟草赤星病菌Tbs3抑菌带最宽的突变株Uv-126,Des-66,Mw-110作遗传稳定性试验。其中经微波诱变获得突变株Mw-110,其抑菌带宽由出发菌株Ata28的8.4mm提高到10.9mm,比出发菌株提高了29.8%,并高于Uv-126,Des-66。Mw-110在培养基中连续培养8代以后,其遗传性状较Uv-126,Des-66更为稳定。     

防治烤烟棒孢霉叶斑病药剂试验

采用9种药剂防治烤烟棒孢霉叶斑病的盆钵烟株及田间小区药效试验,结果表明:代森锰锌对烤烟棒孢霉叶斑病的防治效果较好,防效的校正值(下同)达83.8%,在喷药后经历连续雨天的情况下,病指迅速下降并保持较为平稳的低病指,是可用于大田生产的农药;多菌灵的防效虽然较好,达84.3%,但其含有硫磺粉,不宜在烤烟采烤期使用;扑菌特与百菌清的防效分别为81.6%和68.5%;甲基托布津的防效较差,仅为31.2%.代森锰锌可作为烤烟大田发生棒孢霉叶斑病的防治药剂.