转MnSOD基因仙客来植株的获得及其对高温胁迫的抗性

【目的】制备转MnSOD基因仙客来植株,检测其对高温胁迫的抗性。【方法】以仙客来组培苗的叶片为受体材料,采用根癌农杆菌介导法将MnSOD基因导入仙客来,对获得的抗性株系进行分子生物学检测,并测定转MnSOD基因仙客来组培苗在36℃高温胁迫下的SOD活性、MDA含量、细胞膜相对透性和可溶性蛋白含量。【结果】获得35个仙客来抗性株系,其中3个株系经GUS组织化学染色、PCR和Southern印迹检测表现为阳性,表明外源基因整合到仙客来基因组中。转基因仙客来的SOD活性始终高于非转基因植株,细胞膜透性和MDA含量上升的速度低于非转基因植株,可溶性蛋白含量高于非转基因植株。【结论】获得了转MnSOD基因仙客来植株,其对高温胁迫的抗性高于非转基因植株。     

3个紫花苜蓿乙烯应答因子基因的克隆与分析

【目的】克隆3个紫花苜蓿乙烯应答因子基因,分析其在不同条件下的表达特性;构建植物表达载体并转化烟草,对转基因烟草的耐盐性进行初步鉴定。【方法】根据已获得的cDNA序列设计引物,扩增MsERF5、MsERF8和MsERF11的DNA序列,并分析基因结构;利用半定量RT-PCR技术分析其组织表达特异性和胁迫条件下的表达特性;通过农杆菌介导的方法转化烟草,鉴定盐胁迫条件下转基因烟草的表型和生理生化特性,初步验证其功能。【结果】MsERF5、MsERF8和MsERF11都不包含内含子。MsERF5在根、叶和花蕾中的表达量高于茎和花;MsERF8在根和叶中的表达量高于茎、花蕾和花;MsERF11在叶中的表达量最高;3个基因都能被多种非生物胁迫（盐、干旱、铝）和激素（脱落酸、赤霉素、乙烯利、水杨酸和茉莉酸甲酯）诱导,但表达模式不同。在盐浓度为200 mmol•L-1的筛选培养基上只有导入目的基因的愈伤组织能产生不定芽,250 mmol•L-1 NaCl处理再生植株10 d,转基因植株和野生型植株叶片的电导率和可溶性糖含量均呈现上升趋势,但野生型植株叶片的电导率显著高于转基因植株,可溶性糖含量则显著低于转基因植株（P＜0.05）;转基因植株和野生型植株叶片的叶绿素含量均呈现下降趋势,野生型植株叶片叶绿素含量显著低于转基因植株（P＜0.05）;盐胁迫条件下,转化不同基因的再生植株的电导率、叶绿素和可溶性糖含量没有显著差异（P＞0.05）。【结论】3个紫花苜蓿乙烯应答因子基因都不包含内含子,其表达具有组织特异性,都能被多种非生物胁迫和激素诱导,能够使烟草愈伤组织在含盐培养基上形成不定芽并最终产生转基因植株,且转基因植株的耐盐性高于野生型植株。     

甜菜碱醛脱氢酶基因转化速生杨107的研究

利用农杆菌介导法将甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因导入速生杨107号中,以提高其耐盐性.对650个叶盘进行抗生素筛选获得25株抗性芽,PCR检测表明,BADH基因已整合到其中10株的基因组中.耐盐筛选结果表明,转基因植株在NaCl浓度为50、100mmol/L的生根培养基上生长情况均好于未转化植株;相对电导率测定结果表明,在同等盐胁迫下转基因植株细胞膜较未转化植株能更好的保持其完整性.     

导入抗逆基因的转双抗虫基因741杨的获得

为培育更多抗非生物胁迫的转基因杨树,以转双抗虫基因741杨(P.alba×(P.davidaiana×P.sirnonii)×P.tomentosa)为材料,建立了叶片诱导的转双抗虫基因741杨的高频再生体系,并采用根癌农杆菌介导法,探索了影响其遗传转化效率的主要因子。结果表明:最佳不定芽诱导培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA;继代培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L IBA,最佳生根培养基为1/2MS+0.05 mg/L IBA。对影响转化因子的研究结果表明,共培养时间为3 d时,不定芽诱导率最高;共培养培养基加入乙酰丁香酮、pH值调到5.2时,诱导潮霉素抗性芽效果最显著;最佳潮霉素筛选质量浓度为3 mg/L;将抗逆基因AtNDPK2通过农杆菌导入到转基因741杨中,经PCR检测,在抗性植株DNA中扩增出与目的基因大小相同的片断,初步确认目的基因已经整合到转基因741毛白杨基因组中。     

转LEA3基因水稻的抗性分析

对转LEA3基因水稻植株进行了抗渗透胁迫能力分析.结果显示在相同胁迫条件下,转基因水稻植株的苗高、根长、离体叶片保水率、叶绿素含量、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、SOD活性均高于未转化的对照植株,表明转LEA3基因水稻对盐分和干旱胁迫有较强的抗性.     

马铃薯再生体系的建立

马铃薯再生体系的建立是进行马铃薯遗传转化的前提条件.本研究以马铃薯克新1号为植物材料,对马铃薯愈伤组织的诱导、不定芽的分化进行了最佳培养基优化.结果表明,马铃薯诱导愈伤组织的最佳培养基激素浓度是2.5mg/L 6-BA、0.2mg/L NAA,且茎段的诱导率要高于叶片的诱导率.不定芽分化的最佳培养基激素浓度为2.0mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA、5.0 mg/L GA3,诱导率为30％,诱导的不定芽在0.2 mg/L NAA生根培养基中可以正常生根.本研究初步建立了马铃薯再生体系,为后续的金黄色葡萄球菌奶牛乳腺炎转基因马铃薯疫苗的制备奠定了基础.     

硅对迷你椒草试管苗抗逆生理特性的影响

【目的】探究硅对迷你椒草试管苗生理特性的影响，为提高高温季节移栽成活率提供理论和技术支持。【方法】以迷你椒草不定芽为材料，采用单因子试验方法，探究不同硅源（硅酸钾、硅酸钠、硅酸钙、二氧化硅）及硅浓度（0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 g/L）对迷你椒草不定芽增殖系数、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量以及抗氧化酶活性的影响，筛选出最佳硅源及硅浓度，并用于不定芽生根培养，移栽后进行高温、高湿胁迫，研究其对迷你椒草抗逆特性的影响。【结果】除添加硅酸钾 0.6 g/L 的迷你椒草不定芽增殖系数与 CK 相比无显著差异外，其余均显著低于 CK；添加硅酸钾、硅酸钠培养 25 d 各处理的不定芽可溶性糖含量均显著高于 CK，0.4 g/L 硅酸钠处理后可溶性糖含量较 CK 增长 97.92%。添加二氧化硅后，各浓度处理的不定芽可溶蛋白含量均显著高于 CK，涨幅 13.49%~26.63%。添加硅提高了迷你椒草不定芽的 POD、SOD 活性，硅酸钙和二氧化硅处理后不定芽 SOD 活性较 CK 分别增长 13.49%~62.87%、0.86%~75.85%；添加 0.2 g/L 硅酸钠后不定芽 SOD 活性较 CK 提高 45.43%。所有施硅处理不定芽的 MDA 含量均显著低于 CK，其中添加硅酸钾 0.6 g/L 时各指标表现最佳，迷你椒草不定芽增殖系数为 2.67，其可溶性糖、可溶性蛋白含量分别比 CK 增长 95.39%、27.34%，POD、SOD 活性分别提高 137.67%、39.01%，MDA 含量降低 56.20%。高温高湿胁迫 5 d 后，0.6 g/L 硅酸钾处理不定芽的可溶性糖、可溶性蛋白、叶绿素含量以及 POD、SOD 活性均显著高于 CK。【结论】在 MS+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+AD 10.0 mg/L+ 硅酸钾 0.6 g/L 时，迷你椒草不定芽的可溶性糖、可溶性蛋白含量以及 POD、SOD 活性均显著高于CK，可增强迷你椒草苗在高温高湿环境下的抗逆性。     

黄灯笼辣椒子叶离体培养与植株再生

以黄灯笼辣椒无菌苗子叶为外植体,研究激素对不定芽分化及植株再生的影响。结果表明:6-BA对子叶不定芽的诱导效果最好;IAA与6-BA配合能明显提高子叶不定芽的分化率;在分化培养基中添加4mg/LGA3,有利于不定芽的伸长。不定芽分化的最适培养基为MS 6-BA5mg/L IAA1mg/L AgNO36mg/L,平均诱导率达75%;不定芽伸长的最适培养基为MS 6-BA3mg/L IAA1mg/L AgNO36mg/L GA34mg/L,平均伸长率可达90%;最佳生根培养基为MS IAA0.5mg/L,生根率达95%;建立了辣椒子叶植株再生体系。     

红肉猕猴桃离体快速繁殖技术研究

以红阳红肉猕猴桃为试材,通过调整植物生长调节剂浓度与种类,筛选出适宜于红肉猕猴桃植株愈伤组织形成、不定芽增殖和植株生根的最佳配方.结果表明:在MS 2.0 mg/L 6-BA 0.1 mg/L NAA培养基中,增殖率可达87.5%;使用MS 1.0 mg/L 6-BA 0.5 mg/L IBA培养基,不定芽的增殖系数达到最高值3.7个;在1/2 MS 0.7 mg/L IBA培养基中,不定芽诱导生根效果较佳.     

抗病南瓜种质482-2离体再生体系研究

以抗病南瓜种质482-2的种子为材料,通过组织培养,研究并建立了离体再生体系,结果表明:南瓜种子无菌萌发后,分别以子叶、下胚轴和胚根为外植体进行诱导培养,子叶可直接分化出不定芽,下胚轴和胚根可产生愈伤组织、但很难进一步分化出不定芽,子叶分化出的不定芽经生根培养能获得完整植株;南瓜种子无菌萌发的适宜培养基为琼脂胨,子叶诱导不定芽的适宜培养基为MS 6-BA1.0 mg/L,不定芽生根的适宜培养基为MS IBA0.2 mg/L.     

转甜菜碱醛脱氢酶基因玉米的田间筛选及生理分析

为了对已获得的转甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)玉米3个株系的后代进行田间耐盐性鉴定,采用稀释1倍的人工海水在温室内模拟田间盐胁迫进行处理,结果表明:在盐胁迫条件下,转BADH基因玉米成活率较对照高,转基因株系的叶片电导率极显著地低于对照,而叶绿素含量极显著地高于对照。转基因株系后代的耐盐性与对照材料相比具有明显的优势,验证了在田间盐胁迫条件下,BADH基因在转基因玉米后代中的表达,同时也为培育转BADH基因玉米纯系奠定基础。     

东莞大蕉超表达拟南芥CBF1基因及其抗寒性检测

【目的】研究超表达拟南芥CBF1基因（AtCBF1）对大蕉抗寒性的影响,为从大蕉克隆抗寒相关基因奠定基础。【方法】采用农杆菌介导法转化东莞大蕉的胚性细胞悬浮系,获得转AtCBF1基因的大蕉植株;利用GUS组织染色、PCR、RT-PCR以及RT-qPCR对转基因植株进行鉴定;比较低温处理后的转基因株系和对照的冷害特征以及超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量等生理生化指标,鉴定转基因大蕉植株的抗寒能力。【结果】试验共获得6个抗性再生转化系。GUS组织染色结果表明,除T1外,其余均为阳性;PCR鉴定结果表明,AtCBF1在6个抗性再生转化系均为阳性,而GUS基因在T1转化系中没有检测出;RT-PCR结果表明,AtCBF1在6个转化系均得到表达,对T1、T2和T3 3个转化系进行RT-qPCR检测发现,AtCBF1基因在3个转基因株系表达水平存在差异;在低温处理下,转基因植株的叶片相对电导率、MDA的累积都低于非转基因植株,而SOD总活性高于对照;低温处理条件下,转基因植株叶片的冷害症状明显轻于对照。【结论】AtCBF1在大蕉中超表达,具有增强大蕉SOD活性,降低因低温导致的MDA含量和离子渗漏率,缓解质膜过氧程度,进而改善大蕉植株抗低温胁迫的能力。     

巴西橡胶树HbMT2植物表达载体的构建及遗传转化烟草

将巴西橡胶树金属硫蛋白基因HbMT2插入到植物表达载体pCAMBIA 1304,得到HbMT2基因的植物表达载体pCAMBIA1304-HbMT2.通过电击法将该载体导入根癌农杆菌菌株中并转化烟草.将获得的具有潮霉素(Hyg)抗性的再生植株进行PCR鉴定.结果表明目的基因已经整合到烟草基因组中.抗逆性分析试验显示,转基因烟草对H202处理和紫外线照射耐受性显著提高;重金属离子胁迫下,转基因烟草叶绿素含量、过氧化物酶和过氧化氢酶活性明显高于对照.     

Study on Effects of Two Kinds of Auxin in vitro Regeneration of Cyclamen

Cyclamen leaves and petioles explants were cultured on MS media supplemented with different concentrations of 2, 4-dichlorophenoxyacetic acid (2, 4-D) or 1-naphthaleneacetic acid (NAA) to induce callus. The effect of 2, 4-D on shoot regeneration was also studied. Either in media containing 2, 4-D or in media containing NAA, callus was observed, but the quality or quantity of callus induced by 2, 4-D or NAA were different. The callus induced by 2,4-D was white, compact and having powerful multiplication capacity. The callus was inclined to browning then was poorly organogenetic. While the callus induced by NAA was yellowish in appearance. It was pultaceous and proliferated bradytelicly. The callus usually can give rise to many shoots. But the frequency of inducing callus of 2, 4-D is higher than that of NAA. The regenerative plantlets derived from the callus respectively induced by 2, 4-D or NAA were transferred into rooting medium. The frequency of rooting were no difference.     

农杆菌介导的矮牵牛遗传转化美洲商陆抗病毒蛋白基因的研究

为获取矮牵牛抗病毒株系,利用农杆菌介导的叶盘法,对3个品种的矮牵牛进行了PAP(美洲商陆抗病毒蛋白)基因遗传转化试验。结果表明,矮牵牛基因型对抗性芽的再生有显著影响,只有红色波浪系矮牵牛在含100 mg/L的卡那霉素筛选培养基上获得抗性芽,进一步转入含卡那霉素100 mg/L的生根培养基上进行筛选,获得31个株系的生根植株。对再生植株进行PCR检测,初步证明PAP基因已整合到其中29个株系的矮牵牛基因组中。     

四倍体酸枣组培苗生根的影响因素

以四倍体酸枣(Ziziphus acidojujuba C.Y.Cheng et M.J.Liu)组培苗为试材,研究了生长调节剂及浓度、茎段类型、温度和刻伤对生根的影响.结果表明:采用1/2MS培养基添加IBA 1.5～2.0 mg/L适合四倍体酸枣组培苗生根;带茎尖茎段与不带茎尖茎段对生根没有显著影响;茎段带3片以上...     

兰州百合微繁的研究

以兰州百合的鳞茎增殖为基础,进行了离体微繁研究。鳞茎增殖的适宜激素组合为0.9mg/LBA 0.1~0.2mg/LNAA。培养基中总离子浓度和氮浓度过高或过低都会影响兰州百合增殖,3种基本培养基N6、MS、和1/2MS以N6增殖效果最好。适当提高糖浓度对鳞茎增殖有促进作用,在各处理中以蔗糖浓度为40g/L增殖倍数高。兰州百合的适宜生根培养基为1/2MS IBA0.1mg/L,生根率达100%,生根苗移栽成活率达90%。     

北碚榕组培不定芽的两段生根

以北碚榕组培不定芽为外植体,采用两段生根法生根(在琼脂培养基中诱导不定根发生,在近黑暗多孔隙基质中完成根系发育)并将其与一般生根法比较,培养30d后统计2种方法的生根率,测定生根苗生长与生理指标;生根苗移栽30d后统计移栽成活率,测定移栽苗生长指标.试验结果表明:二者生根率均为100%;与一般生根法相比,两段生根后生根苗的根尖数、总根长、根总体积和根平均直径分别提高301.42%,27.85%,123.53%和9.68%;生根苗的株高和叶片增量分别提高307.89%和83.33%,叶绿素含量和硝酸还原酶活性分别提高13.09%和297.29%;生根苗的移栽成活率(100%)、移栽苗的株高和叶片增量分别提高15.00%、41.12%和23.81%,且二者间差异有统计学意义.实验结果证明,两段生根法显著优于一般生根法.所得试管苗根系发达,移栽成活率更高,生长状态更佳.两段生根法对于其它植物的组培生根有应用价值.     

栒子试管苗的土壤支撑生根培养和带坨移栽

[目的]完善栒子试管苗的生根与移栽技术。[方法]以粘壤土为培养基支撑物,选用不含大量元素并附加0.75mg/LIBA和15g/L蔗糖的MS液体培养基对栒子试管苗茎段进行生根培养,以琼脂支撑培养为对照,研究不同培养方法栒子试管苗的生根情况及其带坨移栽效果。[结果]土壤支撑培养栒子试管苗的生根率（95.0%）、根长（54.3mm）、根数（2.8条）及叶数（7.0片）均显著高于琼脂支撑培养;土壤支撑培养和琼脂支撑培养的栒子试管苗均具有根毛;土壤支撑培养生根栒子试管苗开瓶炼苗21d后带坨移入营养钵中,在移栽后不喷雾、不覆膜、空气相对湿度低至50%的条件下,其成活率高达96.7%。[结论]以粘壤土为培养基支撑物可显著提高栒子试管苗的生根及带坨移栽效果。     

酸枣组培苗的生根及移栽研究

以酸枣组培苗为试材,研究了IBA不同浓度、茎段不同类型及刻伤与否等对生根的影响,并以蛭石、土、珍珠岩、沙子等为基本基质进行了移栽实验。结果表明:采用1/2MS培养基添加IBA1.0～1.5 mg/L,生根效果最好,平均生根率达83.2%～96.3%;带茎尖茎段的生根率显著高于不带茎尖茎段;茎段基部刻伤处理后较对照生根量明显增加;酸枣带根组培苗适宜的移栽基质为1:1的珍珠岩和土;5月份移栽下地的组培苗,其生长呈现慢-快-慢的趋势。