奶山羊精子体外获能与体外受精

供体用FSH+LH超排,卵母细胞从注LH后约30h回收。将获能精子与10枚卵母细胞在受精液(mDM+输卵管上皮细胞)和培养液(mDM+30％供体羊血清)中连续培养(38℃)24h后,有6枚卵受精,抛出第二极体。将6枚受精卵移植到3只受体中,有1只妊娠,产出1只试管母山羊。初步表明,本试验的奶山羊精子体外获能与体外受精程序是简便而有效的。     

试管奶山羊的研究

1990年6月7日,1只“试管奶山羊”在我校家畜生殖内分泌研究室降生,这是国内首例、世界第二例。 家畜精子体外获能与体外受精是本世纪80年代以来迅速发展起来的一项胚胎工程技术,是纯粹通过体外培养条件达到生产“试管动物”的先进繁殖技术。体外受精研究己有120多年历史,1951年张明觉和Austin分别发现精子获能现象后,开创了哺乳动物体外受精研究的新纪元。当今,通过此项技术已有20种动物获得成功,其中10种动物获得试管后代,包括牛、猪、绵羊和山羊等家畜。 精子体外获能与体外受精主要包括以下技术:(1)精子体外获能;(2)获能精子与成熟卵母细胞共同培养;(3)受精卵的体外培养与移植。其中精子体外获能是关键技术之一。     

家兔精子体外获能与体外受精试验

本试验目的在于建立一种简便而有效的系统,能使家兔射出的精子完成体外获能,并获得体外受精、早期卵裂和正常产仔。精子体外获能采用三种方法:A.HIS(15min)+DM(1～2h);B.HIS(15min)+DM(11～12h);C.m-HIS(15min)+m-DM(2～4h)。经上述方法处理的精子与512枚输卵管卵母细胞进行体外受精和体外培养的结果表明,A组的受精和早期卵裂发育延迟;B组的受精卵大都停留在原核期;C组的受精和早期卵裂发育正常。将C组60枚2-4细胞移植至9只受体兔,5只妊娠,其中2只产4只试管仔兔,另外3只获得12个胎儿。     

家畜体外受精的研究进展

家畜体外受精技术已日趋成熟。卵泡卵母细胞体外成熟率在牛、猪、绵羊和山羊分别达到90%、87%、83%和79%。精子体外获能方面,趋向于应用肝素代替钙离子载体诱导家畜的射出精子和冷冻精子体外获能,已在牛、猪、绵羊和山羊有试管后代产生。精子注入法是80年代后期发展起来的一种新型的体外受精方法,目前已取得将兔和牛精子注入的成功,并获得了发育正常的后代。     

我国“试管动物”诞生

今年9月间国际著名体外受精专家勃拉吉特和杜克洛两位教授与江苏省农科院胚胎工程试验室合作研究,家兔体外受精的两批两只受体兔分别于10月18日和21日共生下5只由体外受精发育而成的正常仔兔,这是我国首次获得的哺乳动物试管后代,从而填补了我国这一研究领域的空白。这标志着我国体外受精的研究进入了新的阶段。 “试管动物”与人的“试管婴儿“一样,是从供体获得卵子与获能精子在体外条件下完成受精过程,并在体外继续培养至4—细胞期胚胎,然后移入受体生殖道内获得后代。     

山羊卵巢卵母细胞的体外受精试验

将18枚细胞质均匀、包有完整致密卵丘细胞的山羊小卵泡(2～5mm)卵母细胞培养于含有hCG(20μg/mL)和FCS(10％)的TCM_(199)中30h,然后用经含有肝素(20μg/mL)和BSA(10mg/mL)的BO液诱导获能的山羊新鲜精子进行授精处理,授精后8h,转移入含有10％FCS的TCM_(199)中继续培养12h,结果有10枚卵子成熟,成熟率为55.6％,7枚卵子受精,受精率为70％。把7枚原核期受精卵移植给3只同期发情的受体山羊,2只妊娠,妊娠率为66.7％,并获得一只雄性试管山羊胎羔,胎龄为52d。     

波尔山羊羔羊超数排卵及体外受精的研究

本试验探索波尔山羊羔羊超数排卵的可行性及体外受精效果。应用4种不同的促性腺组合,对16只7周龄的波尔山羊进行超排,并对采集的卵子实施体外受精。共获得卵母细胞918枚,其中超排处理Ⅰ组到Ⅳ组的可用卵母细胞数分别为49,87,429,293枚,各组间差异显著（0．01〈P〈0．05）。卵母细胞进行体外培养24h后与上游法获能的精子体外受精,48h后各组的卵裂率分别为27％,21％,60．2％,69％,其中CIDR＋PMSG＋FSH处理组、GnRH＋FSH处理组、PMSG＋FSH处理组差异极显著（P〈0．01）;6d到10d各组囊胚率分别为7％,6．5％,18％,13％,PMSG＋FSH处理组、GnRH＋FSH处理组、CIDR＋PMSG＋FSH处理组差异极显著（P〈0．01）。结果表明,CIDR＋FSH处理组和CIDR＋PMSG＋FSH处理组能显著提高超排效果,两组获得的卵子受精后的卵裂率和囊胚率高于其他组。     

卵母细胞经体外成熟、受精及用输卵管细胞共培养后产羔

卵母细胞经体外成熟、受精处理后,转移到中间受体母羊体内培养。5天后,回收到59％的卵子,其中31枚(38％)达到桑椹或囊胚期胚胎,移植给6只受体母羊,结果5只妊娠,其中4只保持妊娠,并产羔羊9只(43％)。本试验,72个卵母细胞成熟和体外受精,用羊输卵管细胞共培养5天,31个受精卵(43％)发育到非植入桑椹胚,21个胚胎移植到11只受体体内,结果2只(18％)妊娠,并产2只公羔。结果表明:体外成熟和受精的羊卵与绵羊输卵管上皮细胞共培养以通过预移植阶段,这对其进一步发育到移植时期是适合的。     

猪卵巢卵母细胞体外成熟与体外受精的研究

 自屠宰场取猪卵巢825个，得卵母细胞8346个，将其分为3类。分类后卵母细胞在含有pFF或PMSG的TCM-199培养液中于5%CO#-2、95%空气、饱和湿度、39℃下培养36小时。成熟卵母细胞用前培养法加肝素或咖啡因获能的鲜精，以2×10#+5/ml的精子密度体外受精。在授精12-17小时以后，一些受精卵以手术法移至受体母猪输卵管中，另一些则更换BMOC-2培养液继续体外培养。3类卵母细胞间的成熟率与卵裂率有明显的差异。成熟培养液中加入PMSG和pFF，可明显提高卵母细胞成熟率（67.7%:17.8%）和桑椹胚率（6.5%∶2.8%）用笔者的培养液，有些胚胎成功地越过4细胞阻断而获得了猪的纯体外培养桑椹胚（1990.5）。移入受精卵的9头母猪，有3头妊娠，其中1头于1990年9月产5头仔猪。离子测定结果显示不同离子（Na、Ca、Cl、K）在精子某些部分、卵母细胞和受精卵的表面分布有明显改变。RMP检测指出培养前A类和部分B类卵母细胞为负值，C类和剩余部分B类为正值。培养后不同时间3类卵母细胞RMP差异明显，说明其代谢水平强弱不一。受精后皆为负值，说明物质代谢比受精前更为活跃。     

体外成熟猪卵母细胞的体外受精研究

实验采用体外成熟的猪卵巢卵母细胞，将鲜精以前培养结合咖非因法获能后进行ＩＶＦ实验．体外成熟卵ＩＶＦ后的卵裂率为２４．７％～３８．４％，与目前文献报道的近似；授精时精子浓度为２×１０５／ｍＬ，１×１０６／ｍＬ和５×１０６／ｍＬ体外受精后的卵裂率分别为４０．８％（８２／２０１）．４５％（８５／１８９）和３０．５％（５０／１６４）．前二者无显著差异，但都与最后一组差异显著．我们认为，在本实验条件下，体外受精时适当的精子浓度要比目前常用的１×１０６／ｍＬ低．我们将肝素结合咖啡因的精子在能方法与前培养结合咖啡因法进行了比较，卵裂率分别为１０．７％（９／８４）和４０％（３２／８０），前者虽然在牛体受精实验中很成功．但在猪效果差．将体外成熟体外受精卵移入同步的受体猪输卵管后．有一头母猪成功地产下了５只“试管猪’，存活３只．     

哺乳动物显微受精研究进展

全面系统地总结了哺乳动物显微受精的发展历史和现状，从注射部位、精子状态、精子发生、卵子状态、卵子激活等方面阐述了影响显微受精的主要因素，并指出了在我国开展显微受精的重要性和必要性。     

盘锦冬季日光温室小气候特征研究

为了进一步提高设施农业气象服务水平,对盘锦地区冬季日光温室小气候变化规律进行了分析。结果表明：不同天气条件下日光温室各月气温日变化趋势相似,均呈“单峰”曲线型。晴天和多云天气日光温室内相对湿度昼高夜低;阴天和雨雪天日光温室内相对湿度变化比较平稳。不同天气条件下冬季日光温室室内总辐射最大值出现月份不同,有无草帘对温室内总辐射值影响较大。     

相思树种的体外繁殖及基因工程研究进展

该文从茎尖的培养、器官发生和体细胞胚胎发生3个方面详细综述了国内外近30年来相思树体外繁殖的研究进展,并分析总结了相思树基因工程育种的研究近况,从而提出了相思树体外繁殖及基因工程研究所存在的问题及发展趋势.认为只有在阐明相思树体外再生的生化、生理机制的基础上,才能对其体外繁殖进行有效的控制,进而促进更多、更有价值的林木基因工程新品种的培育.      

试管开花研究进展

植物试管开花的研究越来越受关注,本文主要从不同外植体、植物激素、营养水平和环境因素4个方面说明对植物试管开花的影响及其研究进展。     

我国苜蓿抗霜霉病的研究进展

介绍了霜霉病的症状和发生规律及病原菌的生物学特性，提出苜蓿霜霉病的防治更侧重于“防”，更依赖于科学的田间管理与草地利用等综合防治措施，即牧草混播、合理施肥、合理利用、搞好田间卫生、种子处理，最后指出了苜蓿育种工作中存在的主要问题。     

我国苜蓿褐斑病研究进展

苜蓿是农牧业发展中不可缺少的牧草之一。苜蓿褐斑病是由苜蓿假盘菌引起的一种最常见的世界性豆科牧草病害,对它的研究多数集中于褐斑病的田间病情调查与病原菌的鉴定。近年来,由于生物技术的迅速发展,国内的研究者开始对褐斑病进行一些比较深入的研究,本文对苜蓿褐斑病的研究进展做一介绍,不仅指出了存在的问题,同时还提出了一些建议,以供我国有关的科技人员和生产参考。     

新辟山地桃园化学除草试验

对适宜新辟桃园的除草剂品种进行了比较,筛选并研究了合理的混用技术。在所选的５ 种药剂中,克芜踪的速效性最好,但持效期短。用２０％ 克芜踪３ ０００ｍ ｌ／ｈｍ ２ 喷施,药后１０天,杂草平均株防效和鲜重防效达９１．１％ 和９６．２％ ;药后１５ 天,杂草开始复生,防效下降;药后６０ 天株防效和鲜重防效降至３５．４％ 和６７．７％ 。草甘膦系列的除草净度高、防效持久,但药效发挥较缓慢。用４１％ 农达５ ２５０ｍ ｌ／ｈｍ ２,药后２０ 天株防效和鲜重防效达９０．７％ 和９３．１％ ;药后６０ 天株防效和鲜重防效仍达９４．０％ 和９３．７％ 。克芜踪、草甘膦系列除草剂与禾耐斯（乙草胺）混配,能互补长短,提高药效。混用后,克芜踪防效提高２％ ～８％ ;农达、草甘膦防效提高２％ ～５％ 。人工锄草株防效和鲜重防效仅为７０．６％ 和８４．１％ ,且山地表土层松动后易造成水肥流失。     

2007年广西玉米引种试验综合评价

为加快广西玉米新品种的推广步伐,2007年继续在我区玉米主产区对29个已通过外省审定的品种进行引种试验。结果表明,引入的新品种多数产量较高,但品质和综合抗性表现较差,其中耕源14、东单68号、郑单518、中单808和遵玉205等5个品种综合性状表现优良,通过了广西普通玉米品种引种试验,可在广西适宜地区大面积推广种植。     

中国植物源农药的研究进展

与传统的化学农药相比,植物源农药具有低毒、低残留、环境友好等特点,因此受到越来越多人的重视。主要综述了中国几类主要的植物源农药(杀虫剂、杀螨剂、杀菌剂、除草剂)的研究进展,分析了存在的问题以及发展前景,以期为今后植物源农药的开发提供参考。     

纳米硒用于小白菜补硒的研究

[目的]利用低毒纳米硒对小白菜进行补硒。[方法]利用水浴法在表面活性剂辅助下制备表征纳米硒;将红色纳米硒用于小白菜补硒试验,并使用邻苯二胺紫外分光光度法测定样本含硒量、回收率和稳定性,分析低毒纳米硒对小白菜进行补硒的可行性。[结果]经过纳米硒补硒的小白菜含硒量平均为5.326μg/g,比未经补硒的小白菜含硒量提高了6倍多。试验回收率在97.84%～100.47%,样本在24 h内稳定,补硒效果明显。[结论]该研究为富硒蔬菜的开发与研究提供了有益的参考。