斑鳜卵巢发育与血清蛋白磷含量变化关系的初步分析

斑鳜(Siniperca scherzeri)是近年来新开发的名贵淡水养殖鱼类之一,但规模化繁育技术尚未完全解决。为进一步了解斑鳜卵巢成熟发育的规律,利用组织切片技术观察了3月中旬-5月中旬长江斑鳜卵巢的成熟发育过程,并用生化法测定了血清蛋白磷(SPP)的含量,结果表明:这一时期,斑鳜卵母细胞正经历由Ⅲ时相(3月中旬-4月上旬)向Ⅳ时相(4月中旬-4月下旬)、Ⅴ时相(5月中旬)的渐近生长,并发现卵母细胞生长不同步的现象;与此同时,血清蛋白磷含量由0.12 mg/mL逐步上升至0.62 mg/mL。斑鳜血清蛋白磷含量的变化趋势与卵巢的成熟发育过程基本一致,并有着密切的生理相关,血清蛋白磷含量可以作为卵巢发育阶段和成熟程度判定的重要生化指标。     

雷帕霉素对稀有鮈鲫卵子发生的影响

【目的】为鱼类生殖生理学和繁殖生物学研究提供参考。【方法】以稀有鮈鲫为试验动物,采用mTOR通路抑制剂雷帕霉素处理3月龄雌性个体至4月龄,正常饲养至5月龄,以同时注射等量不含雷帕霉素的稀释剂和二甲基亚砜(DMSO)为对照,测定不同阶段性腺指数(GSI)和卵巢发育情况,Real-time PCR检测卵子发生相关基因的表达情况。【结果】3、4、5月龄对照组和3月龄处理组卵巢具有Ⅳ时相卵母细胞,4月龄处理组只具有Ⅰ、Ⅱ时相卵母细胞,5月龄处理组卵巢中观察到Ⅲ时相卵母细胞;处理组GSI显著低于对照组;处理组中foxl2、fshr、cyp11a1、cyp19a1a和bmp15表达显著低于对照组,figlα在处理组中表达显著高于对照组。【结论】雷帕霉素处理导致稀有鮈鲫卵母细胞发育停滞在Ⅱ时相,推测mTOR通路可能通过调节类固醇发生和TGFβ信号通路促进卵母细胞的发育和成熟。     

4种多糖对山羊卵母细胞体外成熟的影响

为优化卵母细胞体外成熟培养液,研究白术多糖、黄芪多糖、灵芝多糖及香菇多糖对卵母细胞体外成熟的作用。利用废弃卵巢收集未成熟卵母细胞,在成熟培养液中添加低（0.01、0.05 mg/mL）、中（0.10 mg/mL）、高（0.15、0.20 mg/mL）5个浓度梯度的4种多糖溶液培养卵母细胞。结果显示,4种多糖成熟培养液均在低浓度添加时对卵母细胞成熟率有明显的促进作用,以白术多糖效果最好,卵母细胞成熟率与对照组相比提高了27.28%,高浓度的多糖培养液对卵母细胞均有不同程度的抑制作用,导致细胞皱缩甚至死亡。低浓度的多糖培养液能够促进卵母细胞的成熟,并能提高卵母细胞进一步发育的能力。     

斑石鲷性腺发育的组织学观察与初步分析

为研究斑石鲷(Oplegnathus punctatus)雌、雄性腺发育规律及特征,本研究通过采用生物学解剖和常规石蜡组织切片观察方法,对斑石鲷性腺的雌、雄分化与发育过程进行了研究,研究发现：斑石鲷的性腺发育为雌雄异体的分化类型,雄鱼精巢属于小叶型结构,共分为6个发育时期,水温在24-26℃,120日龄,全长56.1-64.5mm时出现输精管原基,标志精巢分化开始,180日龄时形成精小叶标志着精巢解剖学分化的完成,并同时出现初级精母细胞,标志着精巢细胞学分化的开始;精子的发生分为5个阶段,即精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞、精子。雌性性腺发育分为6个时期,水温在24-26℃, 90日龄,全长30.4-49.5mm原始性腺开始出现成簇发育的卵原细胞群,标志卵巢解剖学分化的开始,150日龄出现卵巢腔的雏形,180日龄形成初级卵母细胞标志着卵巢细胞学分化的开始;卵母细胞发育分为6个时相,第Ⅰ时相卵母细胞处于卵原细胞阶段,第Ⅱ时相卵母细胞体积明显变大,进入卵母细胞小生长期阶段,第Ⅲ时相卵母细胞前期出现核仁,到中后期数量增多,并出现滤泡细胞,第Ⅳ时相卵母细胞处于大生长期阶段,细胞体积明显增大,卵黄颗粒增多,第Ⅴ时相卵母细胞细胞核溶解,核仁消失,整个细胞充满卵黄,第Ⅵ时相卵母细胞开始出现萎缩变小。研究表明斑石鲷卵巢在解剖学分化时间上早于精巢,在细胞学分化上精巢和卵巢大致同步,卵母细胞和精母细胞的发育均表现出不同步特征。     

条石鲷卵巢发育的组织学研究

采用常规的生物学调查和石蜡组织切片法,对条石鲷Oplegnathus fasciatus卵巢发育周期和卵巢发育中各个时期卵母细胞的形态特征以及产卵类型等进行了组织学研究。结果表明,条石鲷卵母细胞的发育过程在年周期中可分为6个时相：Ⅰ时相的卵母细胞呈原始分化状态,Ⅱ时相卵母细胞出现明显的卵黄核,Ⅲ时相卵母细胞出现皮质液泡,Ⅳ时相的卵母细胞分化明显,卵黄颗粒部分融合,Ⅴ时相和Ⅵ时相分别为卵子形成和退化吸收时相。卵巢发育可分为6个时期：繁殖期主要在5—7月,其卵巢有Ⅳ期、V期;8月卵巢开始退化,9月进入重新发育的Ⅱ期,直到翌年3月都为越冬Ⅱ期卵巢;3月下旬条石鲷卵巢开始重新发育为Ⅲ期卵巢。条石鲷卵巢的平均成熟系数为0.70%~12.57%。组织学观察结果表明,各时相卵母细胞发育不同步,因此条石鲷属多次产卵。     

牛卵巢卵母细胞体外成熟的研究

研究了卵巢采卵方法以及卵巢保存温度和时间、性周期阶段、激素和培养基对牛卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:从屠宰场获取的卵巢,先切剖或抽吸卵泡再切割卵巢,可显著提高可用卵母细胞数。卵巢保存时间在 2 h 以内最好,最长不超过 6 h。30~39 ℃的生理盐水保存卵巢,卵母细胞的成熟率(63.9 %)和卵裂率(34.4 %)均显著高于 2~8 ℃(16.7 %、0 %)和 20~29 ℃(54.1 %、31.7 %)保存的。采集卵母细胞时卵巢所处性周期阶段(卵泡期、黄体期)对卵母细胞体外成熟的影响不大(成熟率分别为 69.2 %、64.3 %)。M199 是牛卵母细胞体外成熟理想的培养基,M199 + 50 IU/mL LH+ 100 IU/mL FSH + 1μg/mL 17?-E2和 M199 + 50 IU/mL GnRH+1μg/mL 17?-E2都是牛卵母细胞体外成熟理想的培养系统(成熟率分别为 69.4 %、67.5 %,卵裂率分别为 35.4 %、42.7 %)。     

丁(鱼岁)卵巢周年变化的组织学观察

丁是我国新疆地区经济鱼类之一,也是近年来养殖、增殖的渔业对象之一。对新疆地区丁卵巢周年变化和卵母细胞发育的观察结果表明,丁性成熟年龄在3~4龄;繁殖期在5月下旬-7月下旬,期间卵巢成熟系数在11.50%~12.25%,平均为11.88%;繁殖期过后,部分未产出的成熟卵退化,吸收,从11月至来年3月其卵巢发育处在重复发育的II期,至翌年4月卵巢再次发育;根据卵巢发育特点,丁属分批产卵类型。     

丁(鱼岁)卵巢周年变化的组织学观察

丁是我国新疆地区经济鱼类之一,也是近年来养殖、增殖的渔业对象之一。对新疆地区丁卵巢周年变化和卵母细胞发育的观察结果表明,丁性成熟年龄在3~4龄;繁殖期在5月下旬-7月下旬,期间卵巢成熟系数在11.50%~12.25%,平均为11.88%;繁殖期过后,部分未产出的成熟卵退化,吸收,从11月至来年3月其卵巢发育处在重复发育的II期,至翌年4月卵巢再次发育;根据卵巢发育特点,丁属分批产卵类型。     

绵羊卵母细胞体外受精培养体系的建立与优化

本试验对影响绵羊体外成熟和受精的因素进行了比较分析,以期建立并优化这一培养发育体系。从呼市屠宰场采集绵羊卵巢,抽吸卵巢表面2~6mm的卵泡卵母细胞,在体外进行成熟培养;成熟后的卵母细胞,与处理后的附睾精子共同培养进行受精。结果表明,添加10%~15%ESS,10μg/mL FSH,20μg/mL LH,1.5μg/mL 17-βE2,100IU青霉素,100 IU链霉素的TCM-199成熟培养液能较好地促进绵羊卵母细胞体外成熟。绵羊卵母细胞体外成熟培养22-24h,用附睾精液进行体外受精,用Sofaa,10%FBS Sofaa高糖组合或CM,BM组合的发育液培养,置于38.5℃、三气(5%CO2、5%O2、90%N2)、饱和湿度的条件下,可获得较高的卵裂率76.0%和囊胚率(31.1%)。     

齐口裂腹鱼卵巢发育的组织学研究

采用石蜡组织切片和扫描电镜法,对齐口裂腹鱼卵巢发育进行了组织学研究。结果表明:卵母细胞的发育分为5个时相,卵巢发育可分为6个时期。第2时相卵母细胞中具有卵黄核、围核透明层,并可见核仁物质外排现象;液泡中的内含物和卵黄颗粒呈现多种形态;卵母细胞发育过程中,核仁数增加较多;卵膜由质膜和放射带组成。在第5时相成熟卵子的受精孔中仍有精孔细胞堵塞。产卵时间为2月下旬至4月下旬,属分批同步产卵类型。     

锦江河大眼鳜和斑鳜肌肉营养成分及氨基酸组成分析

对锦江河特有鱼类国家级水产种质资源保护区大眼鳜(Siniperca kneri)和斑鳜(S.scherzeri)肌肉的营养成分进行了分析,比较了2种鱼的营养价值.结果表明,斑鳜肌肉鲜样的水分、粗蛋白、粗脂肪含量分别为78.12％、18.54％、1.70％;大眼鳜肌肉鲜样分别为78.66％、17.77％、1.71％.在两种鳜肌肉中,含量最高的5种氨基酸依次为Glu、Asp、Lys、Leu、Ala,占总氨基酸含量的50％以上,其中大眼鳜占51.63％、斑鳜占51.47％;含量最低的5种氨基酸依次为Tau、His、Met、Pro、Tyr,不足总氨基酸含量的15％,其中大眼鳜为14.62％、斑鳜为14.67％;两种鳜的第一限制性氨基酸均为蛋氨酸和半胱氨酸,第二限制性氨基酸均为缬氨酸.每克大眼鳜肌肉和斑鳜肌肉干样的氨基酸总量分别为827.57 mg和844.20 mg,必需氨基酸总量为337.53 mg和344.08 mg,4种呈味氨基酸总量为308.87 mg和315.14 mg.     

翘嘴鳜和斑鳜肌肉营养成分及氨基酸组成比较

对斑鳜和翘嘴鳜肌肉进行营养成分分析,然后对2种鱼的营养价值进行比较评价,结果表明,斑鳜肌肉鲜样的蛋白质含量为18．77％,高于翘嘴鳜的16．77％;但斑鳜脂肪含量为0.37％,低于翘嘴鳜的1．50％。从氨基酸组成来看,每g翘嘴鳜肌肉干样的氨基酸总量为776．4mg,必需氨基酸总量为302．4mg,4种呈味氨基酸的总量为311．7mg：而每g斑鳜肌肉千重的3者含量分别为812.9,317.9,324．9mg。因此,2种鳜鱼营养价值高,都是优良的养殖品种：相比较之下,斑鳜的粗蛋白含量高、脂肪和灰分较低,营养价值高于翘嘴鳜。     

三种鳜对柱状嗜纤维菌脂多糖免疫应答的比较研究

从柱状嗜纤维菌提取菌体脂多糖作为免疫原,分别注射接种翘嘴鳜,斑鳜和大眼鳜后,检测了供试鱼血清中凝集抗体效价和血液中白细胞吞噬活性以及采用直接荧光抗体法测定了受免鳜血液中各种淋巴细胞数量的变化。结果表明,接种ＬＰＳ后,３种受免鳜血清中凝集抗体效价均在第３周达到峰值,血液中蚕噬细胞的吞活性和Ｔ,Ｂ淋巴细胞样细胞的比率均在第２周最高。     

我国斑鳜不同群体mtDNA控制区序列的遗传变异

采用PCR技术扩增了鸭绿江、长江、钱塘江、闽江、西江5个群体36尾斑鳜（Siniperca scherzeri Steindachner）mtDNA控制区的基因序列。在长度818bp片断序列中共检测到112个多态性核苷酸位点，具有20种单倍型，不同地理群体的单倍型表型不同，鸭绿江、钱塘江群体中含有多个特异性的核苷酸位点。用MEGA3．0构建了NJ分子树，鸭绿江、长江、钱塘江、西江群体内的个体均能单独聚成群，而闽江群体未能单独成群，个体分别与长江、西江群体聚在一起。这些表明我国斑鳜不同群体间有较明显的遗传分化。     

翘嘴鳜、斑鳜及其杂交种形态差异分析

运用传统形态学方法和框架分析法分析了斑鳜、翘嘴鳜及其杂种(翘嘴鳜×斑鳜)的形态差异.可数性状中,腹鳍棘数、腹鳍条数、臀鳍棘数在3种鳜中都一致,对其他可数性状进行卡方检验,结果表明:斑鳜与杂交鳜只有在臀鳍条数目上存在显著性差异,其他可数性状差异不显著,斑鳜与翘嘴鳜、翘嘴鳜与杂交鳜之问差异显著或极显著.对可数性状和框架数据进行聚类分析、判别分析和主成分分析,并计算欧氏距离,结果显示:杂交鳜在形态上较接近于其父本斑鳜,在头部和尾部继承了更多翘嘴鳜的特征.     

福建地区斑鳜胚胎与仔鱼早期发育的研究

2011-2013年,连续观察了福建地区斑鳜(Siniperca scherzeri)受精卵的胚胎和仔鱼早期发育的全过程,描述了从受精卵到晚期仔鱼发育时期的时序和形态特征。结果表明:斑鳜的成熟卵近圆球形,淡黄色,平均卵径为(1.76±0.08)mm;受精后5 min左右,卵膜吸水膨胀,平均卵膜径达(2.20±0.09)mm。在20℃温度条件下,孵化时间为189.33h。24℃温度条件下,初孵仔鱼平均全长(5.57±0.18)mm,具趋光性;3日龄仔鱼开始摄食,避光,进入混合营养期;5日龄时卵黄耗尽,6日龄时油球也完全消失。仔鱼全长y与日龄x成极显著的直线相关关系:y=0.4916x+5.7209(P0.01)。     

我国斑鳜不同群体mtDNA控制区序列的遗传变异

采用PCR技术扩增了鸭绿江、长江、钱塘江、闽江、西江5个群体36尾斑鳜（Siniperca scherzeri Steindachner）mtDNA控制区的基因序列。在长度818bp片断序列中共检测到112个多态性核苷酸位点，具有20种单倍型，不同地理群体的单倍型表型不同，鸭绿江、钱塘江群体中含有多个特异性的核苷酸位点。用MEGA3．0构建了NJ分子树，鸭绿江、长江、钱塘江、西江群体内的个体均能单独聚成群，而闽江群体未能单独成群，个体分别与长江、西江群体聚在一起。这些表明我国斑鳜不同群体间有较明显的遗传分化。     

斑鳜的人工繁殖及网箱养殖技术

斑鳜是重要的经济鱼类,本文总结了人工催产、获取受精卵、人工孵化、网箱设置、鱼种的放养和养殖等技术。     

斑鳜♀×鳜♂杂交一代胚胎及仔稚鱼发育研究

[目的]为鳜鱼种间杂交利用提供基础资料。[方法]对斑鳜♀×鳜♂杂交一代胚胎发育与仔稚鱼生长特征进行观察,分析不同杂交方式对杂种一代早期生长发育的影响。[结果]杂交F1受精卵卵径为(2.20±0.09)mm,在水温18～25℃下流水孵化,杂交F1经历卵裂期(7 h)、囊胚期(8 h)、原肠期(8 h)、神经胚期(4 h)、器官形成期(40 h),受精后67 h达到半数出膜。杂交F1初孵仔鱼全长为(4.12±0.12)mm,初孵至孵出后43 d全长日均增长率为1.03 mm。[结论]斑鳜♀×鳜♂杂交F1胚胎发育介于双亲之间,仔、稚鱼生长速度与父本接近。