60Coγ辐射诱导马铃薯（Solanum tuberosum）基因组变异的SRAP标记分析（英文）

[目的]探讨60Coγ射线对马铃薯(Solanum tuberosum)染色体的诱变效应。[方法]采用不同辐照剂量的γ射线对费乌瑞它微型薯进行辐射处理,利用SRAP分子标记,对不同处理的VM1代及VM2代基因组变异进行分析。[结果]VM1代分析结果表明,88对引物有30对表现多态性,引物多态性比率为34.1%,共获得225条扩增条带,其中64条为多态性条带,条带多态性比率为28.4%。多态性表现形式有条带增加和缺失。选择25对有多态性的引物对VM2代进行扫描,5对显带不良,20对中有9对表现多态性,获得多态性条带9条,其中仅4条在VM1中检测到,其余5条是新增的缺失条带。VM1代的多态性条带在VM2代中的检出率仅为9.8%。选择表现稳定、清晰的9条多态性条带进行回收、克隆、测序,获得6个片段的DNA序列。经比对分析,5个片段序列与马铃薯染色体组部分片段的相似性为77%~89%,其中3个序列位于抗性基因簇中;另1个片段序列与番茄第5染色体的部分序列相似性为93%。[结论]γ辐照可以导致马铃薯基因组DNA发生变异,多态性条带数与辐照剂量之间没有明显的相关性,变异的多态性条带缺失数高于条带增加数。     

60Coγ辐射诱导马铃薯(Solanum tuberosum)基因组变异的SRAP标记分析

[目的]探讨60Coγ射线对马铃薯(Solanum tuberosum)染色体的诱变效应.[方法]采用不同辐照剂量的γ射线对费乌瑞它微型薯进行辐射处理,利用SRAP分子标记,对不同处理的VM1代及VM2代基因组变异进行分析.[结果]VM1代分析结果表明,88对引物有30对表现多态性,引物多态性比率为34.1％,共获得225条扩增条带,其中64条为多态性条带,条带多态性比率为28.4％.多态性表现形式有条带增加和缺失.选择25对有多态性的引物对VM2代进行扫描,5对显带不良,20对中有9对表现多态性,获得多态性条带9条,其中仅4条在VM1中检测到,其余5条是新增的缺失条带.VM1代的多态性条带在VM2代中的检出率仅为9.8％.选择表现稳定、清晰的9条多态性条带进行回收、克隆、测序,获得6个片段的DNA序列.经比对分析,5个片段序列与马铃薯染色体组部分片段的相似性为77％～89％,其中3个序列位于抗性基因簇中;另1个片段序列与番茄第5染色体的部分序列相似性为93％.[结论]γ辐照可以导致马铃薯基因组DNA发生变异,多态性条带数与辐照剂量之间没有明显的相关性,变异的多态性条带缺失数高于条带增加数.     

基于SSR的藕莲新品种(系)指纹图谱构建

[目的]利用SSR分子标记构建藕莲品种(系)鉴定的DNA指纹图谱,为藕莲品种鉴定和新品种选育提供技术支持。[方法]利用SSR标记对9个莲藕新品种(系)进行鉴定,统计条带并进行遗传多样性分析,选择核心引物,建立DNA指纹图谱。[结果]从45对引物中筛选到9对多态性引物,对9个品种(系)扩增得到条带,共扩增出52条带,其中差异条带32条,多态性比率为61.54%,扩增片段大小为100～400 bp。选出4对SSR核心引物构建9个藕莲品种(系)的DNA指纹图谱。[结论]藕莲品种遗传多样性水平较低,4对引物组合所构建的DNA指纹图谱可用于藕莲品种鉴定。     

黑龙江省主栽马铃薯品种遗传多样性的SRAP分析

利用SRAP分子标记技术,对黑龙江省34份马铃薯主栽品种遗传多样性进行分析。结果显示,从45对引物中筛选出20对引物能在34份马铃薯品种间扩增出较好多态性片段,共扩增出DNA条带170条,多态性条带84条,多态性比率为49.4%,每对引物平均可扩增出4.2条多态性条带。聚类分析表明,34份马铃薯品种间相似系数为0.514~0.903,平均相似系数为0.671;供试材料可分为3大类7亚类。研究表明,黑龙江省主栽马铃薯品种的遗传相似性较高,遗传多样性程度较低。     

紫色马铃薯“黑美人”辐射处理表型及DNA变异鉴定

利用60 Coγ射线对紫色马铃薯品种黑美人萌芽薯块进行诱变处理。诱变材料表型鉴定结果表明,辐照剂量与出苗率呈显著负相关,其半致死剂量为70Gy,致死剂量为80Gy。辐照处理能显著延缓出苗时间,导致叶片减少、茎杆变细、植株变矮。高剂量处理可提高分枝数。与CK相比,各处理结薯数差异不显著。单株产量随辐照剂量增加而降低,CK处理显著高于其他处理。在表型鉴定的基础上,利用SSR分子标记对辐射材料进行DNA检测。10对引物集团选择结果表明,6对具有多态性,共获得10条多态性条带,平均每对引物有1.7条。单株检测共获得扩增条带28条,其中8条有多态性,多态性比率为28.9%。说明,辐射可引起紫色马铃薯黑美人表型和DNA水平的变异。     

钴60辐照对马铃薯的诱变效应研究(英文)

[目的]研究钴60辐照对马铃薯的诱变效应。[方法]利用钴60提供的γ射线离子束,对马铃薯品种费乌瑞它、中薯3号块茎分别进行5、10、20、30、50、70Gy剂量辐照诱变育种试验,探讨不同剂量γ射线重离子辐照对马铃薯的诱变效应。[结果]不同剂量重离子辐照后马铃薯出苗率、成苗率、植株长势、产量和商品性表现不一,10Gy对马铃薯生长发育起到正效应,高剂量对马铃薯生长发育起到负效应。辐照后M1代植物学性状变异较大,产生了许多有益的突变性状;M2、M3代部分性状趋于稳定遗传。[结论]钴60辐照育种有利于品种改良和种质创新,是马铃薯遗传改良的一种有效手段。     

贵州马铃薯推广品种SSR分子标记及遗传多样性分析

为了鉴定马铃薯品种的亲缘关系,采用10对SSR分子标记引物,对19份贵州马铃薯生产品种进行SSR分子标记及遗传多样性分析。结果表明:10对SSR引物中5对获得60条清晰条带,其中49条为多态性条带,多态性比率为81.67%,平均每个引物的多态性条带数为9.80条。19份马铃薯品种的遗传相似性系数为0.43~1.00。经聚类分析,在遗传相似系数为0.56处全部参试材料聚在一起,在遗传相似系数为0.63处可明显聚为3个类群。第Ⅰ类群包括11份材料,第Ⅱ类群包括7份材料,第Ⅲ类群只有1个材料。在相似性系数0.65处,57.89%的参加品种聚在一起,表明参试品种的遗传背景较为狭窄。     

T5代水稻变异株系的AFLP分析和特异片段序列分析

以香稻1号为材料,对64对PstⅠ-MseⅠ选扩引物进行筛选,确定19对引物能扩增出适量且清晰的条带。以19对引物对具有不同表型性状的4种T5代变异株系及其对照进行AFLP分析,结果表明,变异株系基因组较香稻1号发生了明显变化。回收克隆了变异株06-5-114-11-2的p38-114特异片段和06-5-108-11-3的p82-108特异片段,并在NCBI数据库中进行序列比对,结果显示,p38-114片段与序号为NM_001074855.1的mRNA序列相似性为99%,p82-108片段与序号为NM_001061652.1的mRNA序列相似性为100%。     

盾叶薯蓣品种的ISSR指纹图谱研究

[目的]利用ISSR分子标记构建盾叶薯蓣品种鉴定的DNA指纹图谱,为盾叶薯蓣药材鉴定和良种选育提供技术支持。[方法]筛选ISSR引物,对10个盾叶薯蓣品种进行PCR扩增和电泳检测,统计条带并进行遗传多样性分析、聚类分析等;选择核心引物,建立DNA指纹图谱鉴定体系。[结果]从50条ISSR引物中筛选出9条,对10个品种扩增共得到86条谱带,多态性条带72条,多态性条带比率为83.72%;选出3条ISSR核心引物建立了10个薯蓣品种的ISSR指纹鉴定图谱。[结论]盾叶薯蓣品种遗传多样性丰富;3条核心引物所构建的植物图谱中,每个品种均有各自特异的共有谱带、特有谱带、缺失谱带,这些谱带的组合可用于盾叶薯蓣品种鉴定。     

内蒙古自治区马铃薯常见品种差异性分析

本研究利用单序列重复(Simple Sequence Repeat,SSR)分子标记技术对内蒙古36份马铃薯品种进行基因组扩增分析.结果表明,供试的11对引物共扩增出70条条带,其中多态性条带66条,多态性百分率94.2％,平均扩增片段数和扩增多态性均呈现较好的效果.聚类分析结果表明,按不同聚类方法可分别将36份材料聚...     

“福星01”人参与黄果人参及人参农家类型的ISSR、RAMP分析

利用RAMP和ISSR2种标记分别对人参品种及农家类型间的遗传差异进行检测和分析。结果表明:2种标记均能揭示各材料间的遗传多样性,其中RAMP标记的多态性高于ISSR标记。在ISSR标记中,每个引物可扩增出1～7条DNA片段,24个引物扩增出97条带,平均为4.04条。其中45条带具有多态性,多态性比率为46.4%,揭示供试材料间遗传相似系数(GS)为0.7526～0.9691,平均值为0.8304。在RAMP分析中,每条引物可扩增出1～8条DNA片段,23对引物共扩增出112条带,平均为4.87条。其中75条带具有多态性,多态性比率66.9%,揭示供试材料间遗传相似系数(GS)为0.5625～0.9286,平均值为0.7114。聚类分析结果表明,2种标记均能将供试材料完全分开,分类具有一定的相似性,即聚类与地域性有一定关系。     

圆鼻巨蜥遗传多样性的RAPD分析

[目的]采用RAPD技术对圆鼻巨蜥（Varanus salvator）进行遗传多样性分析。[方法]用20个随机引物对圆鼻巨蜥36个个体的基因组DNA进行PCR扩增。[结果]有10对引物能扩出清晰稳定的条带,共扩增出2952条DNA片段,平均每个个体扩增出82个条带,其中47条具多态性,多态性位点比为57.32%,36个个体间遗传距离为0.035 9~0.335 9,平均遗传距离为0.135 92。Nei s基因多样性指数H=0.181 9,Shannon s多样性指数I=0.263 0,表明圆鼻巨蜥具有较高的遗传多样性。[结论]采用UPGMA法构建了36个个体相互关系的分子聚类图,发现没有形成明显的种群分化。     

中国水稻二化螟5个地理种群遗传差异的RAPD分析

以中国水稻二化螟5个地理种群的基因组DNA为材料,对其进行随机扩增多态性DNA(RAPD)分析.从50个引物中筛选出29个稳定性好、多态性高的引物,单个引物扩增出的DNA条带数从2～15条不等,其片段大小为200～3 000 bp,5个地理种群共扩增出条带220条,其中为多态片段的97条,平均每条引物扩增出条带7.59条.通过公式计算多态性位点、遗传相似性指数和遗传距离,结果表明:(1)5个地理种群遗传变异较高,其中以广西省全州市多态位点百分率最高(52.73%),吉林省柳河县多态位点百分率最低(34.55%);(2)5个二化螟地理种群间的遗传相似性指数的变异范围为0.551 88～0.849 00,遗传距离指数为0.121 42～0.448 12,平均遗传距离指数为0.312 28;安徽省庐江县与湖北省武汉市地理种群间的遗传距离最小,而吉林省柳河县与广西省全州市地理种群间的遗传距离最大.     

猕猴桃~(60)Co-γ射线辐射诱变植株变异的ISSR分子标记研究

分析不同辐射处理后"长果"猕猴桃(Actinidia longicarpa)样本的变异性,为猕猴桃诱变育种及加快猕猴桃育种进程提供理论基础。采用0(CK)、40、60、80和100 Gy~(60)Co-γ射线辐射处理"长果"猕猴桃接穗后,用ISSR分子标记技术对5种处理后的55个样品的多态性进行研究。结果表明:从100条寡聚核苷酸引物中筛选出7条引物进行标记,平均每条引物扩增出14.3条带,其中6.7条多态性带,多态性比率为46.85%;遗传相似系数为0.79~1.00,聚类分析表明,第V类为60Gy 6~8号植株,与对照的遗传距离最远,变异程度最大。因此,辐射诱变可导致猕猴桃发生显著的遗传变异,利用ISSR分析方法,可准确测定辐照样本是否为突变体。     

卫星搭载处理后辣椒突变系的分子生物学分析

[目的]为了从生化与分子水平上研究卫星搭载后辣椒突变后代的遗传变异性。[方法]对卫星搭载后的辣椒种子返地种植,经田间初步筛选,采集生长期顶端嫩叶,对SP1~SP4代进行蛋白质的SDS-PAGE电泳和RAPD检测分析。[结果]卫星搭载后辣椒叶片中的蛋白发生了变异,与对照有明显差异,SP2代起蛋白条带比对照增加了2条,分子量分别为15.0 kD和27.0 kD,且这种变异能够稳定遗传。RAPD分析表明,所用45个随机引物中有6个引物扩增出了条带,其中5个引物扩增出了特异条带。卫星搭载后的辣椒植株DNA突变程度为:S23=7.2%,S27=1.6%,S33=2.4%,S62=3.2%,S68=13.6%。突变后代在DNA水平上与对照存在差异,说明突变体基因发生了点突变或染色体互换、缺失。[结论]该研究对于辣椒空间育种具有重要的指导意义。     

刺梨RNA的有效提取及Actin基因片段的克隆

[目的]为刺梨的分子生物学研究奠定技术基础。[方法]分别采用改进的CTAB-LiCl法和CTAB法提取刺梨果实中的总RNA和基因组DNA。对刺梨总RNA进行反转录,生成cDNA第1链。根据GenBank上的蔷薇科肌动蛋白(Actin)基因保守序列设计1对跨内含子引物Actin1和Actin2,以cDNA第1链和基因组DNA为模板进行RT-PCR扩增。将含有目的片段的凝胶进行回收纯化,克隆到PMD18-T载体上,转化大肠杆菌TG1感受态细胞,选取带有目的片段的重组质粒进行测序和序列分析。[结果]将目的片段回收后克隆于T载体,可获得298 bpActin基因的cDNA序列。克隆所得核苷酸序列与蔷薇、桃和葡萄的核苷酸序列相似性达83%,与富士苹果、甜菜等的相似性也超过80%。刺梨Actin基因编码的氨基酸序列与梨的相似性最高(达97%),其次是葡萄、花生、大豆、棉花和马铃薯,而与水稻、拟南芥等的相似性也达90%以上。[结论]Actin基因跨内含子,用该Actin基因片段作内标可以减少DNA污染。     

番茄WRKY2基因的克隆(英文)

[目的]研究WRKY转录因子在番茄中的功能。[方法]根据已克隆的番茄WRKY转录因子片段设计引物,以100μmol/LJA处理6h后的番茄总RNA为模板,采用RT-PCR方法。[结果]从JA诱导的番茄幼苗中获得了608bp的cDNA片段,序列分析表明,该序列含有WRKYGQK保守结构域,与Capsicum annuum WRKY-c序列相似性是79%,与Nicotiana tabacum NtWRKY-7序列相似性是74%。[结论]已经成功克隆了番茄WRKY2基因片段。     

菠萝蜜EST-SSR标记开发及其种质资源遗传多样性分析

[目的]分析菠萝蜜EST-SSR标记的稳定性和多态性揭示能力,并将其用于菠萝蜜种质资源遗传多样性研究。[方法]利用已获得的菠萝蜜c DNA文库中的EST序列,通过搜索SSR序列,设计引物,PCR扩增后,银染检测扩增结果。[结果]设计开发出479对EST-SSR引物,其中399对能在菠萝蜜上扩增出产物,282对具有多态性,多态性扩增引物占58.87%;从中选择60对能够清晰扩增的多态性引物,对64份菠萝蜜种质资源进行遗传多样性分析,60对EST-SSR引物共扩增出188条带,不同引物的扩增条带数在2~11,平均3.13条;其中有168条为多态性条带,多态率为89.36%;每对引物的多态信息含量(PIC)为0.407 7~0.958 9,平均PIC为0.792 2,这说明供试材料具有较高的遗传多样性。系统聚类分析结果表明,在相似系数0.688 1处,可将64份菠萝蜜种质资源分成二大类群,在相似系数0.732 5处,第二大类群又可分为4个亚群。[结论]EST-SSR标记的多态性揭示能力强,用于分析菠萝蜜种质遗传多态性的能力强,其应用前景广阔。     

SSR分子标记丰富向日葵(Helianthus annuus L.)遗传图谱的研究(英文)

[目的]提高向日葵遗传图谱的密度和实用性。[方法]以123个来源于PAC-2和RHA-266杂交的F8代重组自交系(RILs)群体为材料,利用简单序列重复(Simple sequence repeat,SSR)标记,采用MAPMARKER软件对向日葵遗传图谱进行标注。从300对SSR引物中筛选出51对有多态性的引物对(RILs)群体进行扫描。[结果]有19对引物无多态性或条带不清晰,32对引物表现多态性;共检测到35个多态性位点,分布在图谱的15条连锁群上。标记后的图谱总长度为2914.5cM,比原来的图谱增长7.5cM。标记间平均距离由9.0cM缩短为8.1cM。[结论]为进一步的向日葵遗传图谱整合和分子标记辅助选择提供参考。     

丁(鱼岁)养殖群体遗传多样性的ISSR分析

[目的]分析丁[鱼][岁]养殖群体的遗传多样性水平,为其种质资源的评价、保护和合理利用提供依据。[方法]利用简单重复序列区间扩增多态性（ISSR）分子标记技术。[结果]选用77个随机引物对其20个个体的基因组DNA进行PCR扩增,有18个引物可以扩增出稳定且清晰的条带,共扩增出115条稳定的DNA位点,片段大小在100-2000bp,其中多态性位点14个,多态位点比例为12.17％。个体间遗传距离为0-0.1376,平均为0.0329±0.0056。[结论]丁[鱼][岁]群体的遗传多样性水平较低。