| 刺梨RNA的有效提取及Actin基因片段的克隆 |
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| 引用本文： | 杨玉,安华明,刘明,黄伟,李德燕,王立新,刘厚宇,李顺雨.刺梨RNA的有效提取及Actin基因片段的克隆[J].安徽农业科学,2008,36(4):1373-1374. |
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| 作者姓名： | 杨玉 安华明 刘明 黄伟 李德燕 王立新 刘厚宇 李顺雨 |
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| 作者单位： | 贵州大学喀斯特山地果树资源研究所,贵州贵阳,550025;贵州大学喀斯特山地果树资源研究所,贵州贵阳,550025;贵州大学喀斯特山地果树资源研究所,贵州贵阳,550025;贵州大学喀斯特山地果树资源研究所,贵州贵阳,550025;贵州大学喀斯特山地果树资源研究所,贵州贵阳,550025;贵州大学喀斯特山地果树资源研究所,贵州贵阳,550025;贵州大学喀斯特山地果树资源研究所,贵州贵阳,550025;贵州大学喀斯特山地果树资源研究所,贵州贵阳,550025 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（30660114）;贵州省自然科学基金项目（20062038）. |
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| 摘 要： | 目的]为刺梨的分子生物学研究奠定技术基础。方法]分别采用改进的CTAB-LiCl法和CTAB法提取刺梨果实中的总RNA和基因组DNA。对刺梨总RNA进行反转录,生成cDNA第1链。根据GenBank上的蔷薇科肌动蛋白(Actin)基因保守序列设计1对跨内含子引物Actin1和Actin2,以cDNA第1链和基因组DNA为模板进行RT-PCR扩增。将含有目的片段的凝胶进行回收纯化,克隆到PMD18-T载体上,转化大肠杆菌TG1感受态细胞,选取带有目的片段的重组质粒进行测序和序列分析。结果]将目的片段回收后克隆于T载体,可获得298 bpActin基因的cDNA序列。克隆所得核苷酸序列与蔷薇、桃和葡萄的核苷酸序列相似性达83%,与富士苹果、甜菜等的相似性也超过80%。刺梨Actin基因编码的氨基酸序列与梨的相似性最高(达97%),其次是葡萄、花生、大豆、棉花和马铃薯,而与水稻、拟南芥等的相似性也达90%以上。结论]Actin基因跨内含子,用该Actin基因片段作内标可以减少DNA污染。
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| 关 键 词： | 刺梨 肌动蛋白 克隆 |
| 文章编号： | 0517-6611（2008）04-01373-02 |
| 收稿时间： | 2007-09-28 |
| 修稿时间： | 2007年9月28日 |
Extraction of Total RNA from Rosa roxburghii Tratt and the Ooning of Actin Gene Fragment |
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| YANG Yu et al.Extraction of Total RNA from Rosa roxburghii Tratt and the Ooning of Actin Gene Fragment[J].Journal of Anhui Agricultural Sciences,2008,36(4):1373-1374. |
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| Authors: | YANG Yu |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Rosa roxburghii Tratt Actin Cloning |
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