铁皮石斛无公害标准化种植技术及产品质量分析

【目的】明确铁皮石斛无公害标准化种植技术规程及产品质量标准。【方法】以野生＂红皮软脚＂铁皮石斛种质作为组培材料,探讨不同规格组培苗（优质、合格）、不同栽植方式（床架栽、地厢栽）对铁皮石斛生长势、生长量及成药茎条产量的影响,同时测定鲜茎和枫斗中石斛碱和石斛多糖的含量。【结果】不同栽植方式对铁皮石斛组培苗种植成活率影响不大,但优质苗栽后成活率、生长势和成药茎条产量均明显优于合格苗,床架栽的生长势、生长量和成药茎条产量均明显优于地厢栽;地厢栽产品中检测到部分有机磷农药残留,床架栽因远低于限量标准而未检出;1年生、2年生鲜茎及枫斗中石斛多糖含量分别为19.72%、18.54%、29.41%;在生长年限不超过2.5年范围内,石斛碱含量随种植年限增长而增加。【结论】在广西自然气候条件下,采用优质组培苗、搭床架栽植及生态防治病虫害是实现铁皮石斛无公害标准化种植的关键。实际生产中,可以鲜茎多糖含量≥18%、枫斗多糖含量≥25%、重金属和农药残留量不超过无公害食品规定标准作为无公害铁皮石斛产品质量鉴定指标。     

3种不同产地铁皮石斛与铁皮枫斗多糖、氨基酸及必需元素含量分析

以贵州、安徽、浙江3地铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)与铁皮枫斗为研究对象,分别对其多糖、氨基酸和必需元素含量进行测定分析。结果表明:多糖含量以浙江铁皮枫斗最高,达32.82%,黔产铁皮石斛叶片最低,为17.21%,含量排序为浙江铁皮枫斗黔产铁皮石斛下茎黔产铁皮石斛上茎安徽铁皮枫斗黔产铁皮石斛叶片;铁皮石斛各类氨基酸含量排序均为黔产铁皮石斛叶片安徽铁皮枫斗黔产铁皮石斛上茎浙江铁皮枫斗黔产铁皮石斛下茎;钾(K)、铜(Cu)含量均以安徽铁皮枫斗最高,黔产铁皮石斛上茎最低;钙(Ca)、锌(Zn)含量均以黔产铁皮石斛叶片最高,安徽铁皮枫斗最低;铁皮石斛多糖含量与猛(Mn)含量为显著负相关关系(r=-0.93,P0.05);甲硫氨酸含量与Ca含量,苏氨酸、亮氨酸、谷氨酸、酪氨酸、组氨酸和精氨酸含量与Mn含量均为显著正相关(r=0.67~1.00,P0.05),天冬氨酸含量与Mn含量呈极显著正相关(r=-0.99,P0.01);多糖含量与各氨基酸含量均为负相关关系,其中天冬氨酸含量与多糖含量相关性显著(r=-0.93,P0.05)。     

铁皮石斛组培苗多糖含量的变化规律

以组培生产的铁皮石斛原球茎、丛生芽和植株茎段为材料提取石斛,测定其多糖含量,计算多糖累积效率,以了解不同形态铁皮石斛组培苗的多糖含量及其变化规律。结果表明,不同形态的铁皮石斛组培苗多糖含量差异较大,植株茎段的多糖含量相对最高,可达26.20%,原球茎多糖含量次之,为25.26%,二者均可达到《中华药典》中对石斛中药材多糖含量要求的规定;原球茎和植株茎段的多糖含量与培养时间呈正相关;原球茎多糖的积累效率相对最高,可以成为生产石斛多糖的原料新来源。     

铁皮石斛多糖提取工艺及优化研究

【目的】考察铁皮石斛多糖提取方法及不同产地多糖含量的差异。【方法】采用正交试验设计筛选料液比、提取时间、提取次数对铁皮石斛多糖提取率的影响。【结果】铁皮石斛多糖提取最佳工艺条件为料液比1∶40,提取时间2 h,提取次数3次;分析云南省不同产地的铁皮石斛多糖含量,结果表明景洪勐龙的含量最高,可达到45.23%。【结论】获得铁皮石斛多糖提取的最佳工艺条件,不同产地的铁皮石斛多糖含量存在较大差异。     

不同品系铁皮石斛茎叶生物量分配特征及多糖含量比较

【目的】探讨相同栽培条件下,不同品系铁皮石斛(Dendrobium officinale)生物量茎、叶分配特征和多糖含量差异。【方法】测定云南3个品系铁皮石斛植株茎、叶生物量、多糖含量等相关性状数据,并对数据进行多变量分析。【结果】祥馨2号的株高(23.22 cm)最高,茎、叶鲜重(5.59,4.21 g)最重,茎、叶生物量(0.58,0.97 g)最高与其他品系植株差异显著(P0.05);茎中多糖含量受品系影响明显,祥馨2号多糖含量最高(40.00%),祥馨3号多糖含量最低(32.19%),叶片多糖含量受品系影响小,所有样品平均含量在12.42%~11.90%。频度分析结果显示,同一品系铁皮石斛植株茎、叶鲜重数值频度分布范围较接近,但生物量相差较大。不同品系铁皮石斛茎叶生物量比差异不显著(P0.05)。Pearson相关性分析发现,株高与茎、叶鲜重,茎、叶生物量等性状呈极显著正相关(P0.01)。多元线性回归分析研究表明,3个品系产量变化的总体趋势随株高的增长,茎、叶产量呈现出正向增长的趋势,且茎鲜重和生物量增长速率较叶部快。【结论】结合多糖含量及生物量分析,祥馨2号在3个品系中最优,通过筛选该品系中株高较高的个体作为种源可进一步提高品系的整体产量。研究结果为云南铁皮石斛高产、优质种源筛选提供科学依据。     

丹霞地貌铁皮石斛及其人工繁育苗性状比较分析

【目的】以丹霞地貌铁皮石斛和人工繁育苗的2年生和3年生茎作为材料,研究其性状显微特征和多糖含量变化,分析丹霞地貌铁皮石斛在人工繁育和栽培过程中有无品质变化,以期为丹霞地貌铁皮石斛资源的开发利用和人工繁育苗的质量标准制定提供科学依据。【方法】采用显微性状鉴别、组织化学定位和含量测定方法,对丹霞地貌铁皮石斛与人工繁育苗的性状特征、茎显微构造和多糖的组织化学定位及含量特征进行比较研究。【结果】丹霞地貌铁皮石斛的茎呈紫红色,叶为紫绿色,节间不明显;人工繁育苗的茎则呈深绿色,叶为浅绿色,节间明显,其株高、茎粗和节间长度均大于丹霞地貌铁皮石斛。两者的角质层厚度、表皮细胞直径、皮下层细胞直径和层数、鞘纤维直径和数目、维管束直径和数目、木质部和韧皮部厚度、草酸钙针晶长度、导管直径、木薄壁细胞直径、鞘细胞壁厚度等均存在显著性差异。丹霞地貌铁皮石斛和人工繁育苗茎的基本组织中分布着大量多糖颗粒,经染色后呈深紫红色,人工繁育苗的多糖颗粒呈现聚集状,被显色更深;多糖颗粒直径与含量间均存在显著差异,丹霞地貌铁皮石斛的总多糖含量高于人工繁育苗。【结论】丹霞地貌铁皮石斛与人工繁育苗在性状显微特征和代谢产物量上均存在显著差异。其性状特征、显微结构特征、多糖组织化学定位和含量特征均可作为鉴别丹霞地貌铁皮石斛和人工繁育苗的鉴别与评价指标。     

利用不同树种木头附生栽培铁皮石斛研究初探

【目的】研究利用不同树种种植铁皮石斛的可行性,为研究适宜广西种植名贵药材铁皮石斛提供参考。【方法】选用广西本地常见的资源较丰富的五种树种,龙眼木、荔枝木、三角梅、芒果木、苦楝木进行铁皮石斛附生种植比较试验,观察不同树种对铁皮石斛苗移栽成活率、萌芽数、株高、茎粗和根数的影响。【结果】铁皮石斛选择不同附生树种木头栽种的成活率大小为:龙眼木芒果木苦楝木荔枝木和三角梅。龙眼木上的铁皮石斛生长120天后萌芽数达4. 2个、株高4. 35cm、茎粗3. 54mm和根数24. 6条。【结论】龙眼木栽培铁皮石斛长势更好,建议铁皮石斛选择附主木头时,选与龙眼木相类似的木头。     

不同品种和采收时间铁皮石斛有效成分含量变化

为明确不同品种、不同采收期对铁皮石斛多糖、甘露糖和浸出物含量等的影响,对9个品种铁皮石斛每月取样检测并分析其有效成分含量,结果表明,加工成铁皮枫斗的铁皮石斛适宜采收期在1—2月,用来提取多糖的铁皮石斛适宜采收期在5—7月。     

霍山产3种石斛多糖含量变化规律

[目的]研究霍山产3种石斛多糖含量变化规律。[方法]采用硫酸-苯酚法测定霍山石斛、霍山铁皮石斛和霍山细茎石斛3种霍山产石斛在8个不同生长阶段的多糖含量,并分析了其变化的规律和影响因素。[结果]在组培苗繁育阶段,石斛多糖含量在相对较低的水平上稳步增长,且呈现出霍山铁皮石斛霍山石斛霍山细茎石斛的规律;石斛在栽培2年后多糖含量达到最高,品种间的规律表现为霍山石斛霍山铁皮石斛细茎石斛,其中霍山石斛2年生茎多糖含量高达35.74%,在3种石斛中是最高的。[结论]试验研究了霍山产3种石斛多糖含量变化规律,为石斛的繁育、栽培以及应用提供了依据。     

不同干燥工艺对铁皮石斛多糖及石斛碱的影响

【目的】研究不同干燥工艺对铁皮石斛主要有效成分多糖和石斛碱的影响,为铁皮石斛产后初加工及规模化生产提供理论依据。【方法】以铁皮石斛为原材料,采用自然晾干、热风干燥、真空干燥和真空冷冻干燥4种不同干燥方式对铁皮石斛进行干燥,探讨4种方式对铁皮石斛多糖和石斛碱含量等的影响。【结果】真空冷冻干燥产品L值最大,颜色较为鲜亮,色泽保持得较好,明显优于自然晾干、热风干燥、真空干燥产品。铁皮石斛干燥后多糖含量大小排列为：热风干燥〉真空干燥〉真空冷冻干燥〉自然晾干。在热风干燥条件下,铁皮石斛多糖含量最高,达31．13％;自然晾干条件下,铁皮石斛多糖含量最低,为20．72％。不同干燥工艺对石斛碱含量几无影响。【结论】热风干燥方式下的铁皮石斛有效成分含量高、能耗低,且所需设备简单,在铁皮石斛加工企业中值得推广应用。     

广西南宁铁皮石斛林下附树生态种植技术试验及评析

以中药材铁皮石斛为研究对象,选取种植基质、有机质为试验因子,对种植的铁皮石斛的成活率、生长情况、产量及主要有效成分多糖含量在种植前后的变化进行研究。结果表明,所有处理的附树栽培产量和多糖含量比栽植前提高。特别是用花生壳做基质,添加有机肥栽植的铁皮石斛在120d后株高15.17cm、单株平均鲜重24.58g、萌芽数达5.8条/丛、根数26.5条/丛、多糖含量36.88%,存在显著差异。并从附树生态种植的经济效益、生态效益及社会效益进行了简要评价分析。     

CO2 倍增对铁皮石斛光合特性和生长的影响

【目的】评估CO_2倍增对铁皮石斛光合特性和生长的影响。【方法】以铁皮石斛秋芽为试材,比较CO_2浓度400 μmol/mol(大气浓度,对照)和800 μmol/mol(处理浓度)处理180 d对铁皮石斛光合特性、生长和有效成分的影响。【结果】CO_2倍增提高了铁皮石斛的净光合速率、气孔导度、蒸腾速率和水分利用率,但铁皮石斛未出现"光合适应"现象。CO_2倍增也显著增加了铁皮石斛的茎干质量、茎鲜质量、茎高、单株叶片数和叶片厚度,分别比对照提高30%、13%、49.3%、42%和3.5%,而单叶面积和比叶面积则分别显著下降11.8%和20%;CO_2倍增处理叶片可溶性蛋白含量比对照显著提高19%,而茎的多糖、生物碱、总氨基酸和总黄酮等有效成分含量均有所提高,但与对照差异不显著。【结论】CO_2倍增处理能显著促进铁皮石斛的生长,提高其主要药用部位茎的产量。     

瘤菌根菌对铁皮石斛生长和营养成分的影响

【目的】了解瘤菌根菌与铁皮石斛建立共生关系后对植株地上部生长和营养物质积累的影响。【方法】通过液体培养瘤菌根菌属菌株,浇灌无菌盆栽铁皮石斛苗的根部共培养,观察铁皮石斛植株的农艺性状的变化,并比较不同年限铁皮石斛鲜条的营养物质含量的变化。【结果】接菌处理的铁皮石斛盆栽苗比未接菌的对照生长旺盛,叶色浓绿,植株健壮,1年条和2年条的有效茎杆数分别增加了65.67%和74.25%,单茎重分别增加了55.29%和51.45%,差异显著(P0.05),提高了铁皮石斛的产量。接菌后还提高了粗多糖、石斛碱、粗蛋白和氨基酸的含量,其中接菌后1年条的粗多糖和粗蛋白含量较未接菌的对照分别提高了30.39%和18.7%,差异显著(P0.05);接菌后1年条和2年条的氨基酸总量显著增加,分别增加了27%和30.25%;粗纤维和灰分的含量在接菌后减少,分别减少了17.76%和36.36%,差异显著(P0.05)。【结论】接入瘤菌根菌能够显著提高铁皮石斛的产量和营养成分的含量,说明增加产量与提高营养物质含量并不矛盾,这对铁皮石斛的有机菌肥的开发应用、人工栽培有机种植以及鲜条采收时间具有重要的指导意义。     

不同培养基对铁皮石斛组培快繁的影响

【目的】探讨铁皮石斛种子萌发、芽增殖和生根的适宜培养基,为铁皮石斛组织快繁技术提供依据。【方法】以铁皮石斛种子为外植体进行培养,研究6-BA (0-3.0 mg/L)、NAA(0.1-0.3 mg/L)、香蕉泥(15%～25%)和马铃薯泥(15%～25%)对铁皮石斛种子萌发、芽增殖和生根壮苗的影响。【结果】适宜种子萌发的较好培养基为MS+20%马铃薯泥,芽增殖最适培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA,增殖率达282.7%;最适生根培养基为MS+15%香蕉泥,生根率达100%。【结论】经马铃薯泥、香蕉泥培养的铁皮石斛组培苗,生长健壮,能为生产提供大量的种苗,因而此类培养基可用于大规模生产铁皮石斛组培苗。     

不同培养基对铁皮石斛组培快繁的影响

【目的】探讨铁皮石斛种子萌发、芽增殖和生根的适宜培养基,为铁皮石斛组织快繁技术提供依据。【方法】以铁皮石斛种子为外植体进行培养,研究6-BA（0-3.0mg/L）、NAA（0.1-0.3mg/L）、香蕉泥（15%～25%）和马铃薯泥（15%～25%）对铁皮石斛种子萌发、芽增殖和生根壮苗的影响。【结果】适宜种子萌发的较好培养基为MS＋20%马铃薯泥,芽增殖最适培养基为MS＋2.0mg/L6-BA,增殖率达282.7%;最适生根培养基为MS＋15%香蕉泥,生根率达100%。【结论】经马铃薯泥、香蕉泥培养的铁皮石斛组培苗,生长健壮,能为生产提供大量的种苗,因而此类培养基可用于大规模生产铁皮石斛组培苗。     

铁皮石斛多糖的提取工艺优化及其抗氧化活性研究

【目的】优化铁皮石斛多糖的提取工艺,并评价铁皮石斛多糖的抗氧化活性。【方法】以铁皮石斛多糖提取率为响应值,在单因素试验基础上,以提取时间、提取次数及液(mL)料(g)比为试验因素,采用响应面法建立数学模型,筛选最佳提取工艺条件。采用自由基清除能力体系初步评价铁皮石斛多糖的抗氧化活性。【结果】通过二次回归模型响应面分析,获得最佳的铁皮石斛多糖提取工艺为:提取次数3次、提取时间2h、液(mL)料(g)比75。在此最佳工艺条件下,铁皮石斛多糖提取率为34.96%,与理论值(36.57%)相对误差小于5%。铁皮石斛多糖对DPPH和ABTS自由基的半数清除率分别为1.20和3.65mg/mL。【结论】采用响应面法优化得到了铁皮石斛多糖的最佳提取工艺,该工艺方便可行,得到的多糖具有较强的抗氧化活性。     

铁皮石斛原球茎与野生铁皮石斛多糖的抗菌及体外抗氧化活性比较

【目的】比较铁皮石斛原球茎多糖与野生铁皮石斛多糖的抗菌及体外抗氧化活性,为铁皮石斛组织培养物的应用提供依据。【方法】以大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、白色念珠菌(Candida albicans)为供试菌,用抑菌圈法测定2种铁皮石斛多糖对目标菌的抗菌活性;分别用羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O-·2)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)法和硫代巴比妥酸法(TBA法)结合分光光度法检测2种铁皮石斛多糖清除·OH、O-·2和DPPH·及抗脂质过氧化的能力,比较2种铁皮石斛多糖的抗菌及体外抗氧化活性。【结果】铁皮石斛原球茎多糖与野生铁皮石斛多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌均具有显著的抑制作用,且野生铁皮石斛多糖的抑菌效果比铁皮石斛原球茎多糖优;2种铁皮石斛多糖对·OH、O-·2和DPPH·均有极显著的清除作用,对小鼠肝组织脂质过氧化均有极显著的抑制作用,且野生铁皮石斛多糖比铁皮石斛原球茎多糖效果更好,2种铁皮石斛多糖的抗菌及抗氧化活性与多糖质量均存在剂量效应关系。【结论】与野生铁皮石斛多糖相比,铁皮石斛原球茎多糖在抗菌、抗氧化能力方面虽存在一定差距,但仍具有进一步开发的价值。     

遮阴对铁皮石斛生长与品质的影响

为了明确铁皮石斛农艺性状和糖类成分之间的相互关系,为铁皮石斛种植和新品种选育提供理论依据,探讨了遮阴对铁皮石斛农艺性状与糖类成分积累的影响,测定遮阴条件下铁皮石斛农艺性状和糖类成分的变化情况,并对农艺性状与糖类成分进行相关性分析、多元回归分析和通径分析。结果表明：遮阴组的叶长、叶宽、纤维素、半纤维素显著小于对照组,而茎粗、生物量、可溶性多糖含量、甘露糖含量、甘露糖/葡萄糖值显著大于对照组;对生物量负向影响最大的是叶数（﹣0.840）;对可溶性多糖含量正向影响最大的是茎长（0.864）;对甘露糖/葡萄糖值负向作用最大的是茎长（﹣1.230）,其次是茎粗（﹣0.427）。可见遮阴处理能显著提高铁皮石斛甘露糖含量以及甘露糖/葡萄糖值,减少粗纤维的积累,从而促进了石斛茎粗的生长和生物量的积累。因此,可将遮阴处理适时应用于铁皮石斛人工种植中,生产中也可以通过控制茎长、茎粗等性状指标来筛选高品质、高产量的铁皮石斛品种。     

不同来源铁皮石斛不同部位生物碱的分布规律研究

[目的]分析铁皮石斛组培苗、野生植株和栽培植株中生物碱的含量及分布规律。[方法]通过绘制石斛碱标准曲线,对铁皮石斛不同部位、不同采收阶段以及不同干燥方法测定的生物碱含量进行了系统的分析比较。[结果]铁皮石斛的生物碱含量,茎上段〉叶≈根〉茎中段≈茎下段;石斛的生物碱含量,1年生≥2年生≥野生型;不同干燥方法处理的铁皮石斛中的总石斛碱含量几乎没有什么变化,但茎上段的石斛碱含量经过自然晒干处理后比杀青烘干处理的提高了23.18%～41.49%,根部的石斛碱含量也提高了8.82%～16.20%,而茎中下段和叶等其他部位的生物碱含量则下降。[结论]铁皮石斛的组培苗和栽培株均有一定的药用价值,且除茎之外,其叶和根也有一定的研究应用潜力。     

铁皮石斛组培苗生根条件优化研究

【目的】培养生根优良的铁皮石斛组培苗,提高移栽成活率。【方法】在生根培养基中添加不同激素配比（1.0~3.0 mg/L NAA、0.5 mg/L 6-BA）进行铁皮石斛组培苗生根培养,并采取正交试验考察光照强度、pH和琼脂用量对铁皮石斛组培苗生根效果的影响。【结果】随着MS培养基中NAA浓度的升高,试管苗的鲜重和生根率呈逐渐降低的趋势,以添加NAA 1. 0 mg/L（处理1）和NAA 2. 0 mg/L（处理3）的试管苗长势最好。极差分析和方差分析结果表明,在3个培养条件中,对试管苗生根的影响大小表现为光照强度>琼脂用量>pH值,生根培养基3因素最优水平组合为光照强度2000 lx,pH 5.5,琼脂用量8.0 g/L。【结论】铁皮石斛试管苗适宜的生根培养基为1/2MS + 10%香蕉泥 + NAA 1.0 mg/L + 2%蔗糖 + 0.05%活性炭,适宜的生根条件为光照强度2000 lx、琼脂用量8.0 g/L、pH 5.5。