转水稻几丁质酶基因烟草植株及其对烟草赤星病(Alternaria alternata)的抗性

通过根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导 ,将水稻几丁质酶基因导入烟草 (Nicotianatabacum)栽培品种中 ,并得到转基因植株。导入的 3个基因即nptⅡ、bar和几丁质酶基因在子一代以近 3∶1的比例分离。表达水稻几丁质酶的子一代转基因烟草表现出对烟草赤星病病原真菌 (A .alternata)的抗性。     

基因枪介导的转基因小麦的获得与鉴定

运用基因工程技术将外源抗病基因直接导入具有优良农艺性状的小麦品种中,能够获得抗赤霉病小麦新品种。采用基因枪介导的共转化法,以bar基因为筛选标记,将几丁质酶基因导入长江中下游小麦栽培品种郑麦9023,T0代经过PCR鉴定,获得6株阳性植株,表明几丁质酶基因已整合到小麦基因组中。     

含几丁质酶基因的粪产碱菌工程菌（BC2007）的构建

从苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)中扩增出几丁质酶全长基因,通过克隆,测序得到2 025 bp的序列.通过再线生物信息学软件,得到该几丁质酶的一级、二级、三级结构.将该基因通过电转化导入原核表达载体pET29a,筛选到含该几丁质酶基因的BC2007.初步研究表明BC2007在含胶体几丁质的平板上产生了透明圈.     

抗源蛋白质在植物基因工程中的应用

近十年来,随着植物分子生物学技术的快速发展,植物抗病基因工程已成为热门课题,例如抗真菌病害基因工程、抗细菌病害基因工程和抗病毒病害基因工程等。在抗真菌病害基因工程中,研究最多的是两种抗真菌病原蛋白质———几丁质酶和β-１,３-葡聚糖酶以及将两种蛋白基因导入作物,通过基因表达产生几丁质酶或葡聚糖酶,达到防治真菌病害的目的。一、几丁质酶和β-１,３-葡聚糖酶的生化特性几丁质酶和β-１,３-葡聚糖酶通常都是纯蛋白,几丁质酶的分子量在２５～４０ＫＤａ之间,β-１,３-葡聚糖酶的分子量为３２～３７ＫＤａ。它们和其他蛋白质一样…     

抗纹枯病转基因水稻的研究

水稻纹枯病是水稻三大病害之一,常年因病害流行导致的损失达20％左右.目前已鉴定和克隆了许多真菌病害的基因,其中植物防卫反应中重要的抗真菌基因(几丁质酶基因和β-葡聚糖酶基因等)的研究工作尤其令人瞩目.如Leah,Lin,Hower等人对几丁质酶基因导入植物后引起对立枯丝核菌(Rhizoctonia Sclani)的抗性进行了颇有成效的工作.……     

抗真菌、抗渗透胁迫基因多价植物表达载体构建及对黄瓜遗传转化的研究

本研究以黄瓜为试材,建立黄瓜植株再生体系和遗传转化体系;构建了分别由双35S组成型启动子、E12强组成型启动子和rd29A诱导型启动子调控的核糖体失活蛋白基因、几丁质酶基因和DREB1A基因的多价基因植物表达载体;利用农杆菌介导入法将其导入黄瓜优良品种,获得了转pBDCR T0及T1代PCR阳性植株。T1代转基因植株的抗逆性实验表明,DREB1A基因的表达可以提高黄瓜的抗旱性。本研究为培育抗逆境及抗真菌病转基因植株探索途径,并为进一步揭示核糖体失活蛋白基因、几丁质酶基因和DREB1A基因的分子机理提供了理论依据。     

昆虫β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶研究进展

β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶是昆虫几丁质代谢中的一种关键酶,在昆虫的多种生理活动中发挥重要作用。因其能够水解几丁质,从而破坏昆虫体壁和围食膜。可以将此酶导入昆虫的体内来破坏其正常的组织结构,也可以通过调控此酶的活性来影响昆虫的生长发育,并为进一步构建杀虫工程菌以及转基因植物提供基因来源。     

转几丁质酶基因毛壳菌的抗病原真菌作用

含有来自绿色木霉Trichoderma viride 的内切几丁质酶基因chbi的真菌表达载体pECHBI,通过原生质体转化将该基因导入球毛壳菌Chaetomium globosum CG12菌株,内切几丁质酶活性的测定结果表明,1/5的CG12转化子的内切几丁质酶活性得到了明显提高,PDA平板测定证实毛壳菌转化子对9种病原真菌具有拮抗能力,其中4株转化子的拮抗能力被显著提高.     

华山松疱锈病的重寄生真菌(深绿木霉)中几丁质酶基因cDNA片段的克隆

[目的]分离深绿木霉S5003中的几丁质酶基因,为获得高抗病的转基因植株奠定基础。[方法]采用华山松疱锈病的锈孢子壁作为诱导物,诱导深绿木霉SS003中几丁质酶基因的表达,并通过lit—PER方法扩增得到几丁质酶基因片段。[结果]锈孢子壁可诱导出高活性（40．17μg／10min）的几丁质酶,PCR扩增得到了长度为834bp的特异片段,经序列测定及分析显示该片段为几丁质酶基因片段。[结论]深绿木霉SS003的几丁质酶基因片段的获得,为分离全长基因以及进一步利用该基因生产几丁质酶以及进行基因转化提供了可能。     

转基因烟草植株的检测

对采用叶盘法以质粒PBLGC为介导转化烟草的3个品种。经Kan抗性筛选获得的119株转化的烟草再生植株分别以启动子CaMV35S、几丁质酶基因和β—1，3-葡聚糖酶基因的引物进行PCR检测，分别获得91、72、47株阳性植株。其中，同时具有几丁质酶基因和β-1，3-葡聚糖酶基因的植株有36株。对部分转化植株进行PCR—Southern杂交实验的结果表明，外源基因的转化频率与植物品种、外源基因片段的大小有关。又对4株转基因植株后代(T1)进行了PCR、PCR—Southern杂交，结果发现，几丁质酶基因和β-1，3-葡聚糖酶基因已经稳定地遗传给后代，但二者的遗传传递率不同，β—1，3-葡聚糖酶基因似乎比几丁质酶基因更易于传递。另外，对转化植株T0代几丁质酶活力检测结果表明，转基因植株中几丁质酶活力显著增强，含有几丁质酶基因和β-1，3-葡聚糖酶基因的植株内切几丁质酶活力最强。