黑加仑稳定增殖体系的建立

本试验以两年生黑加仑盆栽苗新梢为外植体,探索在不同无机盐含量、蔗糖浓度、不同植物生长调节剂配比的条件下,黑加仑腋芽诱导、萌发的最优条件,并结合试管扦插的方法建立黑加仑稳定增殖体系。结果表明,黑加仑腋芽诱导的最优条件为:1/2 MS+0.5 mg·L^-1 IAA+2.0 mg·L^-1 GA₃+20 g·L^-1蔗糖;在MS+0.25 mg·L^-1 IAA+2.0 g·L^-1活性炭+20 g·L^-1蔗糖的培养基上可获得生长健壮的黑加仑组培壮苗。本试验建立了黑加仑组培稳定增殖体系,可为黑加仑工厂化育种及其相关研究奠定一定基础。     

金耳类酵母型菌株分离与高产胞外多糖培养基优化

为获得纯金耳多糖,采用担孢子弹射法分离获得金耳类酵母型菌株(EF145),通过ITS序列测定对分离的菌株进行鉴定,测定金耳多糖的抗氧化性,通过正交试验优化高产胞外多糖培养基配方。结果显示：EF145菌株的菌体呈卵圆形,大小约为(2.5～4.0)μm×(2.0～4.0)μm,出芽增殖;菌落乳白色、表面凸起、光滑、湿润;其ITS序列与金耳子实体小条带一致,经Blast比对确定该菌株为金耳(Tremella aurantialba);该菌株多糖的羟自由基清除率为57.67%,超氧阴离子清除率为51.73%,DPPH自由基清除率为17.43%。EF145菌株培养的最佳碳源、氮源和无机盐分别是蔗糖、酒石酸铵和磷酸二氮钾,EF-145菌株产胞外多糖最佳培养基配方为蔗糖40 g·L^-1、酒石酸铵7.5 g·L^-1、磷酸二氢钾4 g·L^-1、土豆浸粉3 g·L^-1、维生素B₁ 0.2 g·L^-1。     

一株红霉素降解菌的筛选、鉴定与降解特性

优良的菌种资源是污染环境微生物修复技术的核心。为获取红霉素高效降解菌,采用梯度驯化法,以长期堆放鸡粪的有机肥生产车间土壤为对象,开展降解菌筛选鉴定,并研究不同红霉素质量浓度、培养温度、转速、初始pH值,以及外加碳氮源、金属离子对菌株降解红霉素的影响。结果表明,筛选获得一株红霉素高效降解菌株Ery-6。通过菌落形态和16S rDNA序列分析方法,将该菌株鉴定为甲基菌属(Methylobacillus sp.)。Ery-6菌株可以在以红霉素为唯一碳源的无机盐培养基中快速生长,60 h后进入生长稳定期。接种Ery-6菌株可提高红霉素在培养基中的降解速率常数,使其半衰期从88.4 h降低至30.7 h。该菌株在含有100 mg·L^-1红霉素的无机盐培养基中,在温度35 ℃、转速120 r·min^-1、初始pH值7.0、外加50 mg·L^-1蔗糖的条件下,对红霉素的降解效果最佳,48 h降解率达88.68%。菌株可耐受1 000 mg·L^-1高质量浓度的红霉素,在温度35 ℃、转速120 r·min^-1、初始pH值7.0的条件下48 h降解率达31.95%。该菌株对多种金属离子具有良好的耐受性;但Cu²⁺既会抑制Ery-6菌株的生长,也会对其降解红霉素产生一定的影响。本研究首次发现甲基菌属菌株具有降解红霉素的能力,且降解效果较好,为生物降解养殖废弃物与环境中的抗生素污染提供了一种新的微生物资源。     

泰山赤灵芝菌株生物学特性研究

研究不同营养和条件因子对泰山赤灵芝菌丝生长速度和生长势的影响。结果表明,泰山赤灵芝菌丝生长的适宜温度为25~30℃,适宜p H值为6~7,适宜碳源为蔗糖、葡萄糖和淀粉,适宜氮源为酵母膏、牛肉膏,适宜碳氮源浓度组合为蔗糖2%、葡萄糖0.5%、酵母膏0.1%、牛肉膏0.3%。     

2001杨组培再生体系建立

以2001杨的春季新发嫩枝茎段、叶柄、叶片为外植体,尝试在MS和WPM基本培养基中添加多种组合激素,探索不定芽诱导、丛生芽伸长和生根最优条件,建立组织培养与植株再生系统。结果表明:MS培养基的诱导分化效果比WPM好;在MS+TDZ 0.025 mg·L^-1+6-BA 0.05 mg·L^-1+NAA 0.05 mg·L^-1+蔗糖30.00 g·L^-1的培养基上,不定芽诱导分化效果最好,茎段和叶柄诱导分化率可达90%,叶片诱导分化率 60%;丛生芽转入MS+KT 0.25 mg·L^-1+GA3 1.00 mg·L^-1+果糖30.00 g·L^-1的培养基中茎伸长效果最佳;每个叶片外植体诱导茎伸长的芽平均达6.4个,芽数量最多;不定芽在1/2MS+IAA 0.02 mg·L^-1+IBA 0.02 mg·L^-1+AC 3.00 g·L^-1+蔗糖30.00 g·L^-1培养基上形成的根条数多,生根率达90%。     

堆肥臭味物质——粪臭素高效降解菌Rp3的分离和鉴定

为获得粪臭素高效降解菌株,采用摇瓶富集培养和平板划线方法进行降解菌分离,通过感官法和趋化反应初步判定菌株的降解效果,利用高效液相色谱测定菌株对粪臭素的降解率,采用16S rRNA基因序列分析和Biolog鉴定系统对降解菌株进行初步鉴定。结果表明：从羊粪堆肥下土壤分离出的菌株Rp3对粪臭素具有趋化性;菌株Rp3对粪臭素的降解时间随粪臭素浓度的升高而延长。当粪臭素浓度为50 mg·L^-1时,28℃培养24 h,菌株Rp3对粪臭素的降解率达100%;当粪臭素浓度提高到100 mg·L^-1时,培养48 h降解率达到98.4%。菌株Rp3生长适宜pH为7~8;具有较强的耐盐性,在0~10%盐度下,菌株能生长正常。根据其形态特征、16S rRNA基因序列同源性分析和Biolog鉴定系统结果,将该降解菌鉴定为嗜吡啶红球菌Rhodococcus pyridinivorans。上述结果表明：菌株Rp3可以高效降解堆肥臭味物质粪臭素,为堆肥臭味物质的降解提供了新的微生物资源。     

蜡蚧轮枝菌的碳·氮营养源研究

[目的]筛选影响蜡蚧轮枝菌生长的营养因子,为该菌的开发生产提供科学依据。[方法]以固体基础培养基1L水中20g葡萄糖的含碳量（8．00g／L）、2g蛋白胨的含氮量（0．29g/L）及少量无机盐为标准,用蔗糖等碳源及酵母膏等氮源分别取代基础培养基中的葡萄糖和蛋白胨。研究了固体培养基中不同碳、氮源对6株蜡蚧轮枝菌菌丝生长和产孢的影响。[结果]葡萄糖有利于V2、V4、V5和V6菌株的菌丝生长和产孢;可溶性淀粉为碳源时,V1和V3菌株的生物量和产孢量均很高;有机氮源酵母膏可大大提高各菌株的生物量及产孢量。[结论]葡萄糖与酵母膏组合是适合于多数供试蜡蚧轮枝菌菌株菌丝生长和产孢的碳氮源。．     

裂褶菌高产菌丝体发酵培养基的优化

【目的】探明裂褶菌高产菌丝体液体发酵培养基配方,为其菌丝体的批量生产及活性产物的开发提供依据。【方法】采用单因素及正交试验方法,通过摇瓶培养优化裂褶菌高产菌丝体发酵培养基中的碳源(葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、淀粉)、氮源(牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、土豆浸粉、大豆蛋白胨)及生长因子(维生素B₁、L-谷氨酸、α-萘乙酸、油酸、吲哚丁酸)。【结果】筛选出最优碳源(蔗糖)、氮源(牛肉膏)、生长因子(L-谷氨酸)进行正交试验的3个浓度水平(30 g/L、40 g/L和50 g/L,6 g/L、8 g/L和10 g/L,1.5 mg/L、2 mg/L和2.5 mg/L),各因子菌丝体的产量分别为16.10～19.56 g/L,13.26～14.53 g/L,9.40～9.78 g/L;裂褶菌高产菌丝体发酵培养基的优化配方为蔗糖50 g/L+牛肉膏8 g/L+L-谷氨酸2 mg/L+MgSO₄·7H₂O 1 g/L+KH₂PO₄ 2 g/L,pH 6.0。在此条件下裂褶菌菌丝体产量达21.51...     

响应面法优化酿酒酵母发酵产谷胱甘肽工艺

为了探索酿酒酵母发酵生产谷胱甘肽(Glutathione, GSH)的最佳工艺条件。在单因素试验基础上,通过Plackett-Burman试验结合响应面设计方法对液体发酵培养基进行优化。结果表明：酿酒酵母发酵生产GSH的最优培养基配方为葡萄糖71 g·L^-1、酵母膏4 g·L^-1、NH₄Cl 6 g·L^-1、KH₂PO₄ 2.0 g·L^-1、MgSO₄ 0.5 g·L^-1,pH 6.0,在此条件下,GSH理论产量达79.51 mg·L^-1。经3批次平行试验验证,GSH实际产量均值为80.5 mg·L^-1,与预测值相近,较优化前产量(65.03 mg·L^-1)提高了约19.2%。     

戊唑醇降解菌B1的培养基优化

为了获得戊唑醇降解菌的培养基,扩大菌株生长繁殖,提高其降解能力。试验以实验室分离出的戊唑醇降解菌B1为研究对象,通过单因素试验和正交试验确定该菌株生长的最适碳氮源、无机盐及其基础盐培养基的最佳配方。结果表明:降解菌B1的基础盐培养基最佳碳氮源分别为蔗糖、酵母浸粉,培养基最优配方:蔗糖0.2%,酵母浸粉0.1%,K_2HPO_4 0.15%,KH_2PO_(4 ) 0.1%,MgSO_4·7 H_2O 0.03%,CaCl_2·2H_2O 0.002 5%,Fe_2(SO_4)_3 0.000 8%。影响菌体生长的主次因素:K_2HPO_4蔗糖酵母浸粉CaCl_2·2H_2OKH_2PO_4Fe_2(SO_4)_3MgSO_4·7H_2O。优化培养基组成,可为B1的大量繁殖提供理论依据。     

铁皮石斛原球茎富硒悬浮培养条件优化

通过对铁皮石斛原球茎富硒悬浮培养的生长指标及多糖、生物碱、总蛋白质、硒含量等指标进行评价,优化铁皮石斛富硒悬浮培养条件,为开发富硒铁皮石斛产品提供理论依据与物质基础.研究结果表明,优化的铁皮石斛原球茎富硒悬浮培养基为MS+2.0 mg·L-1 6-BA+0.50 mg·L-1 NAA+30 g·L-1蔗糖+0.05 m...     

金寨县桑黄的菌种鉴定与生长特性研究

针对皖西大别山金寨县永福桑黄菌种植合作社种植的桑黄菌开展研究,通过现代分子生物学技术对其18S rDNA 基因ITS区段进行克隆测序和序列特征分析,依据ITS序列分析结果将菌种鉴定为瓦宁木层孔菌(Sanghuangporus vaninii);对JS-1的基础培养基进行筛选,结果显示,PDA培养基最适合其生长;测定了JS-1菌株的生长特性,结果显示,温度在5~35 ℃区间内菌丝均可生长,最适生长温度为28 ℃;pH在4~10范围内菌丝均可生长,pH为7时最适合菌丝生长。以菌丝生长情况为指标筛选碳源和氮源,碳源为葡萄糖的培养基上菌丝生长速度最快且长势浓密,认为葡萄糖为其生长最适碳源;以马铃薯浸汁为氮源的培养基虽然生长速度略慢于蛋白胨和玉米粉,但菌落长势最为茂盛,且最早出现黄褐色软木状环纹,认为马铃薯浸汁为其生长最适氮源;在以葡萄糖为碳源,马铃薯浸汁为氮源的基础上,通过L₉(3⁴)正交试验得到JS-1菌株菌丝生长速度最快的培养条件为葡萄糖20 g·L^-1,马铃薯100 g·L^-1,pH为8,培养温度30 ℃;测定菌丝的致死温度为45 ℃。     

百花山葡萄组织培养和快速繁殖

百花山葡萄(Vitis amurensis Rupr. var. dissecta)野外仅见一株,是北京市重点保护濒危物种。通过比较不同消毒方法、植物生长调节剂的种类和浓度配比、生根培养基类型,建立百花山葡萄组织培养快速繁殖体系。结果表明,15%的H₂O₂消毒4 min的效果最好,培养基MS+0.6 mg·L^-16-BA+0.3 mg·L^-1NAA为愈伤组织最佳诱导培养基,培养基1/2MS+1.0 mg·L^-16-BA+0.1 mg·L^-1NAA有利于丛生芽的诱导,在诱导不定根时,使用1/2 WPM + 0.2 mg·L^-16-BA培养基培养效果最好。采用组培快繁技术,已经获得百花山葡萄完整植株,并于室外移栽成活,为百花山葡萄这一极小种群的保存与繁殖提供了保障。     

除草活性菌株HL-1产孢发酵条件研究

以分离自青海患病刺儿菜中具有除草活性的植物内生真菌HL-1菌株为研究对象,通过单因素试验筛选最适合该菌株生长的碳氮源、固态发酵基质、接种量和固-液发酵条件。结果表明:在供试的材料中最适碳源是葡萄糖,氮源是酵母浸膏;该菌株在PDA培养基中的最大产孢量是5.79×10⁸ CFU·mL^-1;而在最适碳源和最适氮源混合培养基中,它的最大产孢量是 4.81×10⁹ CFU·mL^-1。菜籽饼为HL-1在供试材料中产孢最大的培养基质;在体积分数为40%接种量下,它的产孢量最大。通过正交优化试验发现该菌株在培养温度27.5 ℃,培养基质含水量37%,发酵时间8 d条件下,产孢量最大。     

山桐子离体培养植株再生

以种子和叶片为外植体,研究了离体条件下外植体类型及植物生长调节剂对山桐子器官发生和植株再生的影响。结果表明:种子为诱导愈伤组织的适宜外植体; 在MS+1.0 mg·L^-16-BA +1.0 mg·L^-1 NAA +3%蔗糖+0.6%琼脂的培养基上,愈伤诱导率达96.8%; 继代培养在MS+0.08 mg·L^-1 TDZ + 1.5 mg·L^-16-BA +0.05 mg·L^-1 NAA 培养基上能成功的诱导芽的分化,诱导率达48.3%以上; 芽增殖的适宜培养基为1/2MS +0.03 mg·L^-1 TDZ +2.0 mg·L^-16-BA +0.1 mg·L^-1 NAA +3%蔗糖+0.6%琼脂,增殖系数为4.83; 在1/2MS+ 0.5 mg·L^-1 IBA +2%蔗糖+0.6%琼脂培养基上,无根苗生根率达88%。     

基于响应面法的粘质沙雷氏菌BRC-CXG2发酵培养基优化

为了将粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）应用在松墨天牛（Monochamus alternatus）防治上,对粘质沙雷氏菌的培养基配方进行了优化。通过单因素试验筛选粘质沙雷氏菌发酵培养基的碳源、氮源和无机盐,利用Plackett-Burman试验设计确定3个主要影响因素,通过最陡爬坡试验,结合Box-Behnken Design试验设计及响应面分析法优化培养基组成成分,获得培养基最佳配方与发酵条件：葡萄糖23.27 g·L^-1、蚕蛹粉22.37 g·L^-1、酵母粉10 g·L^-1、硫酸镁2 g·L^-1、磷酸氢二钠3 g·L^-1,氯化钠2 g·L^-1;在28 ℃、150 r·min^-1条件下发酵36 h,装液量体积分数为50 mL/250 mL,接种量4.73 %,pH 7.1~7.3。最后,根据最优培养条件验证发现优化后培养基中生长的菌落数为6.0×10⁹ cfu·mL^-1,是初始培养基的9.42倍,与模型预测值相符。研究结果为粘质沙雷氏菌的发酵生产提供了理论基础,为松材线虫病（pine wilt disease）的防治提供了新的途径。     

板栗成熟胚再生体系的建立与优化

研究了外植体消毒方法、植物生长调节剂组合对胚萌发和生长的影响。以迁西板栗主栽品种‘燕山早丰’成熟胚为试验材料,采用L₉(3⁴)试验设计对增殖培养基进行筛选。结果表明,二次消毒处理可以有效抑制污染,污染率最低为16.67%。胚萌发和生长最佳基本培养基为WPM+6-BA 1.0 mg·L^-1,萌发率最高达到95.00%,胚萌发苗最高为59.65 mm。不定芽诱导的最适培养基为:MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+IBA 0.1 mg·L^-1。芽诱导率最高为92.50%。最适增殖培养基为GD+ZT 2.0 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1,增殖系数最大为3.91。     

优异党参种质“凤党”离体繁殖技术

以“凤党”优株种子离体培养的无菌苗茎段为外植体，研究植物生长调节剂对其愈伤组织诱导及再分化的影响。结果表明，愈伤组织诱导的最适培养基为MS+0.5 mg·L^-1 NAA+1.0 mg·L^-1 6-BA，芽分化的最适培养基为MS+0.1 mg·L^-1 NAA+0.5 mg·L^-16-BA，生根的最适培养基为1/2 MS+0.2 mg·L^-1 NAA+0.2 mg·L^-1 IBA，愈伤组织诱导率、芽分化率及生根率分别可达91%、100%和97%。建立的离体再生植株快速繁殖体系，为“凤党”优异种质推广利用和工厂化育苗奠定了基础。     

2苹果品种叶片胚状体再生体系的建立

以苹果“富士”和“鲁加6号”为材料,建立叶片胚状体再生体系。结果表明:先经胚性细胞诱导培养基MS+BA1.0 mg·L^-1+NAA5.0 mg·L^-1+TDZ0.5 mg·L^-1诱导胚性细胞,再置于胚胎发育培养基MS+BA1.0 mg·L^-1+NAA0.1 mg·L^-1上进行暗培养,最佳时间为10 d,2品种叶片再生率分别为96.7%和100%。经胚状体不同时期形态学组织学观察,显示胚状体发育时期经历原胚、球形胚、心形胚、子叶形胚、鱼雷形胚、成熟胚等阶段。“鲁加六号”苹果最佳生根培养基为1/2MS+IAA0.1 mg·L^-1+IBA0.1 mg·L^-1,生根率达86.7%。     

‘凤丹’牡丹组织培养研究

以‘凤丹’牡丹芽为材料,对其外植体消毒、褐化防治、组培苗扩繁和生根技术进行研究。结果表明:用75% 酒精消毒30 s,0.1% 升汞消毒8 min消毒效果最佳,外植体的污染率和成活率分别为32.31%和64.32%;其最适初代诱导和继代增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+NAA 0.2 mg·L^-1和MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+NAA 0.2 mg·L^-1+PIC (毒莠定,Picloram) 1.0 mg·L^-1,增殖系数为4.84;生根培养基为1/2MS+CaCl₂ 220 mg·L^-1+IBA 3.0 mg·L^-1+NAA 0.5 mg·L^-1,生根率为74.30%;低温结合3 mg·L^-1硝酸银培养可使褐化率降至29.15%。