重庆市甘兰病毒病毒原研究

1984～1985年在重庆市郊区采集的甘兰样品176份中,经汁液摩擦接种实由病毒引起的有143份。芜青花叶病毒(TuMV)占病样总数的67.14%,黄瓜花叶病毒(CMV)占9.79%,烟草花叶病毒(TMV)占5.59%,还有由TuMV 与 CMV 或 TuMV 与 TMV 复合侵染的占9.09%,尚需继续研究的其他病毒占8.39%。     

侵染蚕豆的芜菁花叶病毒(TuMV)和大豆花叶病毒(SMV)的鉴定

南京地区蚕豆上的病毒病种类很多,除了去年已经鉴定的有蚕豆萎蔫病毒(BBWV)和菜豆黄花叶病毒(BYMV)(已载本刊1984年第3期)之外,对另外两种病毒又作了进一步的鉴定,其一是芜菁花叶病毒(TuMV),其二是大豆花叶病毒(SMV),它们都能侵染蚕豆而引起发病。现将测定结果简报如下:     

不结球白菜抗芜菁花叶病毒基因的遗传分析及SSR标记

为了找到与不结球白菜抗芜菁花叶病毒(TuMV)基因连锁的分子标记,采用群体分离分析法(BSA法)和SSR标记进行了与抗病基因连锁标记的筛选。通过对亲本、F1、BC1和F2群体进行病毒接种,研究了试验材料对TuMV的抗性遗传模型,结果表明:不结球白菜对TuMV的抗性由显性单基因控制。通过SSR引物筛选,得到在双亲间稳定表现多态性的引物54对。用这些引物筛选抗感池,得到1个与芜菁花叶病毒抗病基因连锁的SSR标记Ra3E05,连锁距离为8.7 cM。将该标记测序,得到1条184 bp的序列,根据该序列重新设计引物,将SSR标记转化为序列特异扩展区城(SCAR)标记SCRa2,用F2群体对其验证,带型与原SSR标记表现一致,可用于分子标记辅助育种。     

新疆大白菜病毒病毒原类型鉴定

从昌吉、石河子和博湖等三地区采集32个大白菜病毒病标样,经寄主范围测定、病状反应、抗性测定、虫传特性观测、病毒粒子形态观察和血清学检测,确认新疆大白菜可被芜菁花叶病毒(TuMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)和烟草花叶病毒(TMV)感染,其中以TuMV感染为主,CMV和TMV感染较少,也有复合感染(TuMV+TMV+CMV或TuMV+CMV)现象。     

不结球白菜抗病育种的研究：Ⅱ.TuMV抗源鉴定与筛选

1984～1988年以87个不结球白菜自(近)交系为原始材料,进行了芜菁花叶病毒(TuMV)抗性鉴定,并选留无症或轻症单株进行了4轮系谱选择.试验结果表明,未经筛选的原始材料均为高感,在高感群体中选择无症或轻症单株进行系谱选择后,抗病性逐渐提高,选择效应随品种和世代而异。经4轮系谱选择后获得15个抗芜菁花叶病毒的株系,作为抗源加以保存和有效利用。     

湖北省蔬菜病毒病主要毒原种类检测

采用斑点酶联免疫吸附法(Dot-ELISA)和RT-PCR法对采自湖北省7个地区的966份疑似感染病毒的蔬菜样本进行黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)、番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)、芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)、蚕豆萎蔫病毒(Broad bean wilt virus,BBWV)、黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)共7种病毒的检测。结果显示检出阳性样本695份,占总样本数的71.9%。其中,十字花科蔬菜上主要毒原为TuMV,检出率高达86.4%,其次为CMV,检出率为26.7%;茄科、葫芦科和豆科蔬菜上主要毒原均为CMV,检出率分别为34.3%、59.2%和56.2%。CMV几乎能侵染所有蔬菜,为湖北省蔬菜病毒病的主要毒原。在检出的6种病毒中,存在TuMV+CMV、TuMV+BBWV、TuMV+CMV+BBWV、CMV+BBWV、CMV+ToMV和CMV+BBWV+TSWV+TMV等6种复合侵染类型,其中TuMV+CMV为十字花科蔬菜上的主要复合侵染类型,复合侵染率为23.8%,其他蔬菜上主要侵染类型为CMV+BBWV,复合侵染率为28.0%。     

南京市郊萝卜病毒病的调查和病原鉴定

南京郊区萝卜病毒病以夏秋萝卜受害最重,但品种间的感病性有差异,主栽品种泡里红、五月红等十分感病,而中秋红和六十日早白萝卜发病很轻。芜菁花叶病毒(TuMV)是危害萝卜的主要病原;黄瓜花叶病毒(CMV)也占一定的比例;从少数样本中也分离到烟草花叶病毒(TMV)。约有1/3的样本是由两种或两种以上的病毒复合侵染,复合侵染病株中的病毒主要是芜菁花叶病毒、黄瓜花叶病毒、蚕豆萎蔫病毒(BBWV)和烟草花叶病毒。     

不结球白菜抗病育种的研究——Ⅳ.矮抗二号和矮抗三号新品种的选育

1984～1989年在对不结球白菜种质资源抗芜菁花叶病毒(TuMV)鉴定的基础上,利用杂种优势育种技术,以抗病矮脚黄雄性不育两用系为母本、抗病矮脚黄和雪克青自交系为父本,选育出综合性状优良的矮抗二号和矮抗三号新品种。其特点:(1)丰产:生产试验平均产量分别达52.4和56.6t/hm~2,比对照矮脚黄分别增产29.9%和40.2%;(2)抗病:两品种 TuMV 和霜霉病人工鉴定病情指数比对照分别降低79.5%、98.7%和69.8%、88.0%;(3)优质:矮抗二号叶片重/叶柄重比对照提高17.0%,矮抗三号略低于对照,但其 V~c 灰分、叶片和叶柄中可溶性固形物含量等主要营养成份均高于对照,且纤维素含量低;(4)商品性好:矮抗二号叶柄短且宽,色白。矮抗三号叶柄短且宽,色绿白,分别符合全国大部分喜食白梗菜和青梗菜两大类型地区的消费习惯。     

大白菜中与芜菁花叶病毒(TuMV)感病基因连锁的AFLP标记

 TuMV是大白菜病毒病的主要病原物之一,所以抗TuMV病毒病成为白菜抗病育种的主要目标,寻找与抗性基因紧密连锁的分子标记,进行分子标记辅助育种,是提高白菜抗病育种效率的有效手段。以抗病自交系Brp0058和感病自交系Brp0181杂交后代的F2分离群体为试材,采用分离群体分组分析法(BSA),筛选到2个与TuMV感病基因紧密连锁的AFLP分子标记,利用MAPMAKER/EXP(Version3.0)作图软件统计,其遗传距离分别为7.5和8.4cM。     

不结球白菜谷胱甘肽还原酶基因NhccGR1的克隆与表达分析

利用cDNA-AFLP技术,从芜菁花叶病毒(TuMV)侵染的不结球白菜(Brassica campestris ssp.chinensis Makino)幼叶中分离到1条编码谷胱甘肽还原酶的基因片段,通过电子克隆得到其cDNA全长为1 503 bp,编码501个氨基酸,命名为Nhc-cGR1。对该基因进行生物信息学分析,并利用实时定量PCR研究其在TuMV侵染和水杨酸(SA)、茉莉酸(JA)、乙烯(ET)诱导下的表达情况。结果表明:该基因作为病原相关基因参与了TuMV病害响应,并通过增加自身表达量来激活细胞内的信号转导途径,诱导各种防卫反应相关基因的表达;同时,SA和JA抑制该基因的表达,外施ET能诱导其正向表达。     

小白菜新品种

一、绿领青梗菜鉴定编号:苏鉴不结球白菜201101。来源与类型:原名"不育901",由江苏省南京绿领种业有限公司于2006年育成,属青梗不结球白菜品种,适宜江苏省秋季露地栽培。1.产量水平及特征特性(1)产     

小白菜新品种

一、绿领青梗菜鉴定编号:苏鉴不结球白菜201101。来源与类型:原名"不育901",由江苏省南京绿领种业有限公司于2006年育成,属青梗不结球白菜品种,适宜江苏省秋季露地栽培。1.产量水平及特征特性(1)产     

福建地区不结球白菜黑腐病病原菌的分离与初步鉴定

为鉴定福州地区不结球白菜黑腐病致病菌,以感染黑腐病的不结球白菜植株为材料进行了病原菌分离和鉴定。通过观察所分离病原菌的形态及接种试验发现其形态和发病症状与黑腐病的形态和发病症状相一致。以细菌通用引物16S对该病原菌进行16SrDNA的PCR扩增测序分析,发现该病原菌与野油菜黄单胞菌(Genbank:CP017308.1)16SrDNA序列同源性为99.8%。从接种病原菌植株中重新分离病原菌,其16SrDNA序列与之前接种菌株序列一致。以上结果初步证明分离的病原菌为不结球白菜黑腐病病原菌,且该病原菌为十字花科黑腐病野油菜黄单胞菌野油菜致病种。     

新审定的两个不结球白菜新品种

<正>一、青伏令青伏令由南京理想农业科技有限公司以自交不亲和系X208为母本、自交不亲和系Y101为父本的F1杂交组合育成,属青梗类型不结球白菜品种。品种鉴定编号:苏鉴不结球白菜201515。(一)产量水平及特征特性2014～2015年夏季参加江苏省鉴定试验,播种后28天左右采收。2014年平均每667平方米(1亩)产787.6千克,比对照华冠增产13.1%;2015年平均每667平方米产1148.6千克,比对照     

芜菁花叶病毒的分离鉴定及其多克隆抗体的制备与应用

从呈花叶症状的芥菜病株上分离到毒源,经CP基因克隆、序列分析以及电镜观察鉴定为芜菁花叶病毒(turnip mosaic virus,TuMV).利用提纯的病毒免疫新西兰大白兔,获得TuMV多克隆抗体,其效价为1:40000,多抗仅对TuMV起特异性反应.以1:10000稀释度为TuMV多抗最适工作浓度,建立TuMV间接酶联免疫吸附测定法(ID-ELISA),该方法检测到提纯病毒的绝对量约1.765ng.说明本试验所建立的TuMV ID-ELISA检测方法可有效运用于TuMV的检测.     

芜菁花叶病毒对不结球白菜内源激素含量及代谢相关基因转录水平的影响

以不结球白菜感病品种‘矮脚黄’为材料,采用ELISA和Real-time PCR技术研究了芜菁花叶病毒(TuMV)侵染后不结球白菜内源生长素(IAA)、赤霉素(GA3)、脱落酸(ABA)和茉莉酸(JA)的动态变化以及内源激素相关基因的表达差异。结果表明:TuMV侵染后,植株发病症状的严重程度与IAA含量呈正相关;光敏色素相关蛋白基因PAP1对IAA的合成起负调控作用。处理植株体内GA3含量及其代谢相关基因,即原表皮因子基因PDF1表达量均明显低于对照植株,而ABA含量则随着接种时间的延长不断积累,始终高于对照植株。且发病症状越严重的植株中,GA3含量越低,ABA含量越高。处理植株JA含量和JA诱导基因,即营养贮藏蛋白基因Vsp1表达量在接种后均出现2次上升,且植株病症越严重,JA含量越低。TuMV侵染后,植株中IAA/ABA和GA3/ABA的值则明显低于对照植株,表明TuMV的侵染破坏了内源激素的平衡,干扰了植物的正常生长发育。     

白菜BrYUCCA5.1基因表达和生物信息学及功能分析

[目的]本文旨在研究白菜YUCCA家族基因BrYUCCA5.1在结球白菜和不结球白菜叶片中的表达模式,并探索其在白菜叶片发育中的作用。[方法]利用生物信息学软件对BrYUCCA5.1基因的进化关系、编码蛋白质的保守结构域、蛋白质的理化性质等特性进行分析;利用实时荧光定量PCR检测结球白菜W30和不结球白菜082及其F_2代植株不同部位BrYUCCA5.1表达量的差异;利用芜菁黄化花叶病毒(TYMV)介导的病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术沉默不结球白菜082植株的BrYUCCA5.1,研究该基因的功能。[结果]结球白菜BrYUCCA5.1所编码的蛋白与拟南芥、野生甘蓝、甘蓝型油菜、萝卜的同源性较高;保守结构域分析结果表明BrYUCCA5.1蛋白属于FMO类超家族。该基因在结球白菜W30叶片基部和中部以及F_2代结球单株叶片基部的表达量极显著高于其他不结球单株。利用VIGS技术沉默不结球白菜的BrYUCCA5.1,沉默效率达84%,且与对照组相比,BrYUCCA5.1-pTY发病株叶片出现大面积病毒侵染症状,叶片卷曲皱缩,表现出远轴化的形态。[结论]BrYUCCA5.1基因参与调控白菜的叶片发育,且在结球白菜叶球发育过程中具有重要作用。     

江苏地区秋冬茬移栽不结球白菜品种资源评价

为了更好地比较与评价不结球白菜种质资源,以江苏省近年来育成的25个品种为试验材料,调查其田间生长情况,并对13个主要农艺性状进行差异性、相关性、主成分和聚类分析。结果表明:大多数不结球白菜品种的整齐度较高。其农艺性状的变异系数在10.26%—33.65%,其中叶质量、叶柄质量、叶柄长、叶片质量的变异系数超过25%,说明不结球白菜品种间性状差异较大。相关性分析表明:不同品种各性状之间均存在不同程度的关联,各性状至少与1个其他性状显著相关,其中产量与单株质量和叶柄质量呈极显著正相关。主成分分析显示:4个主成分的累计贡献率达78.561%,其中第一成分的特征值及贡献率最大,分别为4.476和34.434%。聚类分析在遗传距离为10处将不结球白菜品种分为3个类群,第Ⅰ类群包含品种最多,主要表现为株高较平均,植株及其质量较小;第Ⅱ类群和第Ⅲ类群植株产量较高,单株及叶片质量较大。研究表明:不结球白菜遗传多样性丰富,品种间农艺性状存在差别,也互为联系,可为江苏地区不结球白菜的生产及种质资源评价提供参考。     

3种大白菜病毒多重RT-PCR检测技术的建立

【目的】建立3种大白菜病毒病多重RT-PCR检测技术,为病毒病快速检测、白菜病毒病防治与抗病育种提供参考。【方法】针对我国大白菜芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)3种病毒的外壳蛋白(CP)基因保守区序列,设计特异性检测引物,从多重RT-PCR(mRT-PCR)扩增引物、Mg~(2+)浓度、Taq DNA聚合酶及dNTPs浓度、退火温度、延伸时间和循环次数等方面对RT-PCR检测技术进行优化。【结果】在dNTPs浓度为0.24 mmol/L,Mg2+浓度为2.8mmol/L,Taq DNA聚合酶浓度为0.12U/μL,退火温度为52℃,延伸时间为30s,循环30次,即可成功地在一个体系中对TuMV、TMV和CMV 3种病毒复合侵染的大白菜病样进行多重RT-PCR扩增,扩增得到228,305和460bp3条特异性条带,其大小与试验设计相符合。灵敏度接近单重RT-PCR(sRT-PCR),体现了多重RT-PCR的优越性。【结论】建立了能同时检测大白菜样品中TuMV、TMV和CMV的多重RT-PCR检测体系,该多重RT-PCR方法能对田间大白菜样品进行3种病毒的准确、快速、高效检测。     

夏秋萝卜抗芜菁花叶病毒品种资源的研究

1977～1986年,先后收集国内外夏秋萝卜材料(包括品种、品系和自交系)269份进行田间自然鉴定,选出53份较好的材料,再在室内接种芜菁花叶病毒(TuMV)诱发鉴定。筛选出对TuMV(N-100)高抗材料1份(R-7),抗病材料3份(R-40,R-41,R-42),耐病材料3份(R-50,R-52,R-53),还鉴定了中抗材料8份,中感材料8份,感病材料23份,高度感病材料2份(R-4,R-6)。这表明萝卜品种资源中存在抗TuMV基因资源,在萝卜和其它十字花科蔬菜抗病育种中可以利用。