中途添加不同浓度蔗糖对铁皮石斛原球茎多糖积累的影响

以铁皮石斛类原球茎为材料,研究了在培养过程中添加不同浓度的蔗糖对铁皮石斛原球茎多糖积累的影响,初步探讨中途补料对石斛原球茎多糖积累及培养液中蔗糖消耗的动态变化过程,结果表明:在培养第20d添加5g/L蔗糖对原球茎多糖积累最为有利,干重量及多糖含量、多糖产量最高,分别为16.02g/L、300mg/g、4805.85mg/L,且在整个培养过程,蔗糖的利用率最高,原球茎的活力最强。     

蔗糖对铁皮石斛原球茎生长与多糖积累的影响

在确定合适碳源的基础上,研究比较不同蔗糖浓度下铁皮石斛原球茎生长和多糖的积累情况.结果表明,在葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖4种碳源中,蔗糖和葡萄糖对原球茎生长和多糖积累的影响优于乳糖和果糖.在蔗糖浓度为30～60g/L时,浓度越高,原球茎生长受到抑制越大,而且生长周期延长,但多糖含量增加越快,多糖含量越高;当蔗糖浓度超过60g/L时,蔗糖表现出明显的抑制效应;适合多糖积累的蔗糖起始浓度为30 g/L时,有利于原球茎的生长,最大干重量为17.93g/L,多糖最高含量为208.7mg/g,培养40 d时,其产量为3 679.6 mg/L.     

培养基渗透压对铁皮石斛原球茎生长和多糖含量的影响

以无菌铁皮石斛原球茎为材料,于培养液中分别添加不同浓度的甘露醇以调节其渗透压,研究不同甘露醇浓度对铁皮石斛原球茎生长及多糖含量的影响。结果表明:添加低浓度的甘露醇可促进铁皮石斛原球茎生长及增加多糖含量,添加高浓度的甘露醇能明显抑制铁皮石斛原球茎生长及降低多糖含量。在不同的培养时间,当甘露醇质量浓度为0~20g·L~(-1)时,原球茎活力、生长量、多糖含量和多糖产量总体呈上升趋势,当甘露醇质量浓度超过20g·L~(-1),原球茎活力、生长量、多糖含量和多糖产量呈下降趋势。培养后35d,各处理的原球茎干重、多糖含量和多糖产量均达最大值,且甘露醇质量浓度为20g·L~(-1)的处理其干重、多糖含量和多糖产量均高于对照和其他处理,分别为17.30g·L~(-1)、361.52mg·g~(-1)和6 255.38mg·L~(-1)。     

铁皮石斛原球茎悬浮培养及其多糖积累的研究

将利用铁皮石斛种子诱导的原球茎在液体条件下培养,研究植物激素和有机添加物对原球茎增殖以及多糖积累的影响。结果表明,在N6液体培养基中附加1.0mg/L NAA+1.0mg/LKT+5%香蕉汁提取物+5%土豆汁提取物,最有利于铁皮石斛原球茎增殖和多糖积累,培养30d时,原球茎鲜质量达到122.9g/L,多糖含量在25d时达到24.2%。结果提示,利用液体培养规模化生产铁皮石斛原球茎是可行的,是铁皮石斛大田传统栽培方式的重要替代途径。     

高产和高生物活性的铁皮石斛液体培养体系研究

通过对野生铁皮石斛的定向诱导和逐步驯化,筛选适合液体悬浮生长的铁皮石斛原球茎,并对其ITS(内转录间隔区)和Rbcl进行分子鉴定。在此基础上,建立了适合铁皮石斛原球茎快速生长的液体培养体系,对蛋白、多糖、醇浸出物、金属含量等成分进行检测分析。结果发现,以1/2MS+2.0 mg/L KT(激动素)+0.5 mg/L NAA(萘乙酸)+2.5%蔗糖+0.6%甘露糖+30 g/L马铃薯提取物为铁皮石斛原球茎液体培养基,经5周液体培养,采收原球茎(318.3±22.5) g/L(鲜质量),平均生长率为(9.7±0.59) g/(L·d)(鲜质量),单个最大鲜质量为23.7 g,多糖含量为(19.09±1.05)%,醇浸出物含量为(37.82±3.50)%,蛋白质含量为42.51%,其中精氨酸含量高达19.23 mg/g,铅、镉、砷、汞、铜等金属含量远低于最高限定标准。结果表明,采用该液体培养体系,可培育生产出高产和高生物活性的铁皮石斛。     

铁皮石斛类原球茎液体悬浮培养增殖体系构建

以铁皮石斛(Dendrobium officinale)类圆球茎为研究材料,系统地研究了影响其液体悬浮培养增殖的诸多因素,如不同质量浓度的MS基本培养基、NAA、蔗糖、椰乳以及培养基pH值和接种量,旨在构建铁皮石斛类圆球茎液体悬浮培养增殖体系。研究结果表明:在液体悬浮培养条件下,最有利于铁皮石斛类原球茎的生长增殖的培养基为1/2MS基本培养基中添加1.0 mg/L NAA,50 g/L椰乳,蔗糖30 g/L;接种量为40 g/L。     

外源一氧化氮对铁皮石斛原球茎生长和多糖积累的影响

以硝普钠（SNP）为一氧化氮（NO）供体,研究了不同浓度的外源NO对铁皮石斛原球茎生长、叶绿素含量、蔗糖合成酶（SS）活性和多糖积累的影响。结果总体表现为低浓度的SNP有利于铁皮石斛原球茎的生长,而高浓度的SNP可以促进多糖的合成。在添加0.50 mmol·L-1SNP的培养基中培养28 d时其干质量比对照高36.9％,总叶绿素含量在14 d时为对照的1.33倍;在添加1.00 mmol·L-1 SNP的培养基中培养7 d时其多糖含量为对照的1.59倍,同时SS活性显著升高。综合多糖产量来看,0.50 mmol·L-1SNP效果最佳,在处理期间显著高于其他处理,且对其干质量、叶绿素含量、SS活性和多糖积累均有促进作用。添加NO清除剂（cPTIO）后,铁皮石斛原球茎的生长、SS活性和多糖合成受到抑制。     

不同添加物对铁皮石斛组培幼苗生长的影响

以铁皮石斛试管小苗为材料,以MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+20 g/L蔗糖+6 g/L琼脂为基础培养基,采用正交试验设计方法研究3种不同添加物(普通香蕉汁、食用马铃薯汁、活性炭)对铁皮石斛幼芽生长的影响。结果表明,香蕉汁对铁皮石斛的鲜质量、根数、茎高有促进作用,在促进茎的伸长方面效果较为显著;马铃薯汁对铁皮石斛的根长、茎粗影响不大,但在鲜质量和茎高等方面有显著性促进作用;添加一定量的活性炭可以促进铁皮石斛根的生长。在基础培养基里添加30%香蕉汁、10%马铃薯汁、0.6 g/L活性炭,有利于铁皮石斛的壮苗生根;添加10%马铃薯汁、0.2 g/L活性炭,有利于铁皮石斛原球茎的增殖和芽的分化。     

铁皮石斛开放式组织培养体系的建立

为降低铁皮石斛组织培养成本、简化组织培养程序,以铁皮石斛原球茎为试验材料,采用开放式组织培养方法研究MS固体培养基添加不同浓度代森锰锌和链霉素对铁皮石斛原球茎组织增殖、分化、生根及抑菌效果的影响。结果表明:在培养基中,添加0.3g/L代森锰锌+1.5g/L链霉素有利于铁皮石斛原球茎增殖;添加0.3~0.5g/L代森锰锌+1.5g/L链霉素的抑菌效果较好,并能促进分化幼苗生长;添加0.5g/L代森锰锌+1.5~2.0g/L链霉素有利于再生植株生根。     

铁皮石斛高效快速繁殖体系研究

为了建立铁皮石斛(Dendrobium officinale)种子高效快速繁殖体系,以铁皮石斛种子为外植体,在萌发培养基上萌发为原球茎,原球茎经悬浮培养增殖,再接种于分化培养基分化、生根长成完整植株。结果显示,原球茎增殖最佳培养基为1/2 MS培养基+0.1 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA+0.33 g/L(NH4)2SO4+0.525 g/L KNO3+30 g/L蔗糖;原球茎分化最佳培养基为N6+0.1 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA+100 g/L土豆汁+25 g/L蔗糖+6.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭;幼苗生根最佳培养基为1/2 MS+0.3 mg/L NAA+50 g/L土豆汁+30 g/L蔗糖+6.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭;悬浮培养与固体培养相结合的技术优于固体组织培养技术,其具有生长周期短、节省空间、节约成本,促进原球茎增殖、提高分化率,促进生根的特点,可为铁皮石斛快繁和大规模化生产提供基础。     

铁皮石斛原球茎固体培养和液体悬浮培养动力学研究

为筛选适合铁皮石斛原球茎的最佳培养方式，采用固体培养和液体悬浮培养两种培养方式，并研究液体悬浮培养的营养消耗变化规律，同时考察了液体培养液中pH值和电导率的变化。结果表明：原球茎在固体培养条件下，培养60d后干重达到最大，为13．40g／L，多糖产量最大值为2412．5mg／L；在液体悬浮培养条件下，干重仅需要50d可达到17．64g／L，多糖产量最大值为3081．2mg／L。液体培养在生物量、多糖产量上均优于固体培养；原球茎生长与碳源、氮源和磷的消耗存在着密切关系，培养基电导率变化与原球茎的生物量积累呈线性关系。     

荸荠试管苗壮苗培育及小球茎再生研究

【目的】探讨荸荠试管苗壮苗方法和结球茎条件。【方法】以广西荸荠品种桂蹄1号试管苗为材料,分别进行不同蔗糖、PP333、温度等因素对荸荠试管苗壮苗及小球茎再生的影响。【结果】当6-BA偏低时（1.0 mg/L）,在不同培养基中添加30.0～120.0 g/L蔗糖,均可不同程度诱导荸荠试管苗形成小球茎,其中以30.0 g/L蔗糖的效果最好;当蔗糖浓度过高时则抑制小球茎形成。当6-BA偏高时（2.5 mg/L）,荸荠试管苗仅能诱导形成匍匐茎,而以添加80.0～100.0 g/L蔗糖的效果较好。在添加NAA和IBA条件下,不同蔗糖量均能诱导荸荠试管苗长出匍匐茎,但添加30.0～60.0 g/L蔗糖时可在匍匐茎顶端膨大形成小球茎,其中以30.0 g/L蔗糖的诱导效果最好。在含有NAA和IBA的培养基中添加适宜的PP333（0.3~1.0 mg/L）均能促进荸荠试管苗生根,并具有显著的壮苗效果,而对诱导荸荠试管结球茎数量影响不明显。在15~20℃条件下培养荸荠试管苗,添加蔗糖的培养基均未能诱导形成试管小球茎,而采用培养前20 d温度28~30℃、培养后40 d温度15~26℃条件,在培养基中添加生长素类或较低浓度6-BA时,含较低蔗糖量的培养基均能诱导较多的小球茎;当6-BA浓度较高时,仅能诱导荸荠试管苗长出匍匐茎。【结论】在MS+NAA 0.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L+蔗糖30.0 g/L+琼脂粉3.5 g/L培养基中添加PP333 0.3~1.0 mg/L,均具有很好的壮苗效果。在适宜的温度条件下,添加适宜的6-BA或NAA和IBA或蔗糖（30.0　g/L）均能诱导荸荠试管苗形成小球茎。     

人参不定根生物反应器培养及其动态学研究

利用5 L气球型气升式生物反应器研究蔗糖和氧化锗浓度对不定根生长和人参皂苷合成的影响,结果表明,当MS+IBA 5 mg/L培养基中加入蔗糖50 g/L时,每个反应器可收获不定根34.5 g(干重),皂苷生产量达到61.1 mg/L,显著好于蔗糖30和70 g/L处理;培养基中加入氧化锗30或60μmol时,促进不定根...     

铁皮石斛种子无菌萌发

[目的]研究铁皮石斛种子的无菌萌发方法。[方法]以改良MS+土豆熟汁液2.0%+蔗糖2.0%+琼脂0.65%+0.1 mg/L NAA为种子萌发培养基,将铁皮石斛种子播种后统计萌发率。[结果]铁皮石斛种子萌发率达90%以上,继代培养后组培苗生长正常。[结论]该研究建立了铁皮石斛种子的无菌萌发体系,为铁皮石斛实生苗的大批量生产奠定了基础。     

贯叶连翘的组织培养和金丝桃素的生产

以贯叶连翘种子为材料,对贯叶连翘组培苗进行生根培养,筛选和优化生根培养基,进一步在生物反应器内诱导培养不定根,并研究了蔗糖浓度、铵态氮/硝态氮配比以及MS培养基浓度对不定根中金丝桃素含量积累的影响.结果表明:贯叶连翘在3/4MS+IBA 2.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂8g/L(pH 5.8)培养基上的生根效果最佳;40 g/L的蔗糖有利于金丝桃素的积累,此时不定根中金丝桃素的含量最高、达0.94 mg/g;当铵态氮/硝态氮配比为30/30时,金丝桃素的含量和生产量达到最大,分别为0.98 mg/g和12.41 mg/L;不定根在不同浓度范围的MS培养基中均可生长,金丝桃素在2MS培养基上的生产量最大、为15.70 mg/L.     

矮牵牛茎尖诱导分化研究

[目的]推动矮牵牛组培的产业化,达到使其苗木生产快速、经济的目的。[方法]共配制5种MS培养基,选择无污染、生长健壮的矮牵牛茎尖作为外植体,进行诱导分化单因素试验,研究不同浓度的NAA对矮牵牛外植体诱导成活率的影响,进而选择适合矮牵牛诱导成活的最佳培养基。[结果]培养基中NAA浓度的差异对外植体成活率的影响较大。NAA浓度为0.5mg/L的培养基为最佳诱导成活培养基,NAA浓度为0.7及0.3mg/L的培养基对矮牵牛的作用仅次于NAA浓度为0.5mg/L的培养基,但NAA浓度为0.1及0.9mg/L的培养基处理效果不是十分理想。筛选出矮牵牛组培最佳诱导分化培养基为MS＋NAA0.5mg/L＋6-BA0.3mg/L＋琼脂8g/L＋蔗糖30g/L。[结论]研究结果可为矮牵牛的组织培养提供参考。