猪卵泡卵母细胞体外受精研究

采用３种获能方法（常规获能法、肝素获能法、钙离子载体获能法）进行猪冷冻附睾精子的外获能研究，其相应的受精率分别为４２．５％，３２．０％，３０．８％，卵裂率分别为１８．６％，１５．７％，１６．１％，受精率、卵裂率间均无显著差异。精子与ＳＭＴ－ＰＧＨ基因质粒混合培养后引起卵裂率下降，实验组的卵裂率（７．５％）显著地低于对照组的水平（２１．０％）．３９℃与３７℃下受精，其受精率分别为３８．８％，１８．７     

猪体外受精技术中生殖细胞体内外成熟及获能的比较

猪体内、外成熟卵子与体外获能精子进行受精，其卵裂率分别为４３．６％和１９．６％，两者差异极显著。体内获能精子与体外成熟卵子进行受精，其受精率和卵裂率分别为５５．０％和２２．５％，增高于体外获能精子组的水平，但差异都不显著，体内获能精子不能经受常规的精子冷冻程序。     

肝素和羊血清对绵羊附睾精子体外获能的影响

通过体外受精试验检验了肝素和羊血清在绵羊附睾精子体外获能中的作用。结果表明,在获能液ＳＯＦＭ＋０．６％牛血清白蛋白（ＢＳＡ）中加入５、１５、２５、５０ＩＵ／ｍｌ肝素不能有效诱导精子获能,所得卵裂率（１６．１％,１１．２％,１４．５％,１５．８％）与不加肝素的对照组（１０．０％）相比,差异不显著;获能液ＳＯＦＭ＋２０％羊血清（ＳＳ）对精子获能效果优于ＳＯＦＭ＋０．６％ＢＳＡ＋肝素,二者卵裂率差异显著（５０％ＶＳ１４．７％Ｐ＜０．０５）;获能液ＳＯＦＭ＋２０％ＳＳ中再加入５、１５、２５ＩＵ／ｍｌ肝素可明显增强获能效果,所得卵裂率（８１．４％,８０．４％,８１．３％）与不加肝素的对照组（４６％）相比,差异显著（Ｐ＜０．０５）。     

体外成熟猪卵母细胞的体外受精研究

实验采用体外成熟的猪卵巢卵母细胞，将鲜精以前培养结合咖非因法获能后进行ＩＶＦ实验．体外成熟卵ＩＶＦ后的卵裂率为２４．７％～３８．４％，与目前文献报道的近似；授精时精子浓度为２×１０５／ｍＬ，１×１０６／ｍＬ和５×１０６／ｍＬ体外受精后的卵裂率分别为４０．８％（８２／２０１）．４５％（８５／１８９）和３０．５％（５０／１６４）．前二者无显著差异，但都与最后一组差异显著．我们认为，在本实验条件下，体外受精时适当的精子浓度要比目前常用的１×１０６／ｍＬ低．我们将肝素结合咖啡因的精子在能方法与前培养结合咖啡因法进行了比较，卵裂率分别为１０．７％（９／８４）和４０％（３２／８０），前者虽然在牛体受精实验中很成功．但在猪效果差．将体外成熟体外受精卵移入同步的受体猪输卵管后．有一头母猪成功地产下了５只“试管猪’，存活３只．     

肝素和羊血清对绵羊附睾精子体外获能的影响

通过对体外受精试验检验了肝素和羊血清有绵羊附睾精子体外获能中的作用。结果表明,在获能液ＳＯＦＭ＋０．６％牛血清白蛋白（ＢＳＡ）中加入５、１５、２５、５０ＩＵ／ｍｌ肝素不能有效诱导精子获能,所得卵裂率（１６．１％,１１．２％,１４．５％,１５．８％）与不加肝素的对照组（１０．０％）相比,差异不显著;获能液ＳＯＦＭ＋２０％羊血清（ＳＳ）对精子获能效果优于ＳＯＦＭ＋０．６％ＢＳＡ＋肝素,二者卵裂率差异显     

猪卵母细胞的体外成熟

取自猪卵巢含卵丘细胞且胞质均匀的、胞质不均匀和不含卵丘细胞胞质均匀３类卵母细胞，台盘蓝染色的存活率分别为１００％，１０％和４０％，３者差异极显著。Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ４种培养液培养的成熟率分别为１６．２％，６１．５％，５５．２％，４１．５％，差异极显著。Ｅ，Ｃ，Ｆ３种培养液培养的成熟率分别为３５．５％，４７．８％，５２．６％，在Ｅ培养液中加入ＰＭＳＧ和Ｅ＿２能显著地提高成熟率。Ｃ液与卵泡液［加入２×１０￣（－６）ｍｏｌ／（Ｌ·ｓ）ＦＳＨ］培养的成熟率分别为５０％，４４．４％，受精后的卵裂率分别为１６％，１０％，成熟率、卵裂率间均无显著差异。卵母细胞体外成熟培养３６，４０，４４ｈ后授精，其相应的受精率分别为２６．７％，４４．４％，４５．８％；卵裂率分别为０．３０％，２０％；以培养４０，４４ｈ的效果稍好，但三者差异不显著。     

特定电磁波照射对家兔体外受精的影响

家兔精液用特定电磁波（ＴＤＰ）照射３ｍｉｎ，精子体外获能采用ｍ—ＨＩＳ（１５ｍｉｎ）＋ｍ－ＤＭ（２－４ｈ）．家兔卵母细胞经ＴＤＰ照射５ｍｉｎ并体外培养１０－１２ｈ．家兔的卵泡卵母细胞经体外受精和体外培养的结果表明，经ＴＤＰ照射的精液与未经ＴＤＰ照射的卵母细胞的体外受精，原核形成率达６４．７％，对照织为４４．４％，两者差异显著（Ｐ＜０．０５），２－细胞以上的受精卵发育率分别为５６．８％和５０％（Ｐ＞０．０５），经ＴＤＰ照射的卵母细胞与未经ＴＤＰ照射的精液的体外受精，原核形成率达６３．７％，对照组为４６．７％，两者差异显著（Ｐ＜０．０５），２－细胞以上的受精卵发育率分别为５８．９％和４７．２％（Ｐ＞０．０５）、用ＴＤＰ照射精液或卵母细胞能显著提高其体外受精率．     

特定电磁波照射对家兔体外受精的影响

家兔精液用特定电磁波（ＴＤＰ）照射３ｍｉｎ，精子体外获能采用ｍ－ＨＩＳ（１５ｍｉｎ）＋ｍ＿ＤＭ（２－４ｈ），家兔卵母细胞经ＴＤＰ照射５ｍｉｎ并体外培养１０－１２ｈ，家兔的卵母细胞经体外受精和体外培养的结果表明，经ＴＤＰ照射的精液与未经ＴＤＰ照射的卵母细胞的体外受精，原核形成率达６３．７％，对照组为４４．４％，两者差异显著（Ｐ＜０．０５），２－细胞以上的受精卵发育率分别为５６．８％和５０％（Ｐ＜０．     

山羊小腔卵泡卵母细胞的体外成熟和体外受精

采集繁殖和非繁殖季节山羊卵巢，回收大腔（３～６ｍｍ）和小腔（＜２ｍｍ）卵泡卵母细胞，进行体外成熟和受精，结果如下：①繁殖季节的大腔和小腔卵泡卵母细胞体外成熟率（６８．４％，２７．５％）均显著（Ｐ＜０．０５）高于非繁殖季节（５２．５％，２０．６％）；②１和１．５周岁龄羊与成年羊相比，前两者的小腔卵泡卵母细胞采集数显著（Ｐ＜０．０５）多于后者（２５．６，２２．５：１５．ｌ），但卵母细胞体外成熟率无显著差异（Ｐ＜０．０５）；③随卵母细胞直径增加，其体外成熟率呈显著上升趋势；④与加新生犊牛血清和生殖激素在颗粒细胞悬浮液中培养相比，加发情山羊血清和激素在颗粒细胞单层上培养可显著（Ｐ＜０．０５）提高小腔卵泡卵母细胞体外成熟率（２０．８％：３４．５％）；⑤将体外成熟的小腔卵泡卵母细胞与体外获能精子进行受精，其受精率为３５．７％（５１／１４３）。     

咖啡因预处理解冻精液对牛体外受精的影响

用２．５ｍＭ咖啡因处理解冻牛精液１０ｍｉｎ，或５．０ｍＭ咖啡因处理３０ｍｉｎ，精子经离心后加入到不含咖啡因的受精液中进行体外受精，均获得较高卵裂率（分别为８９．１％、８９．９％）及囊胚率（分别为４４．４％、４５．９％），并且第７天一级囊胚数较多。     

基于均匀设计法优化长白瑞香离体培养及种质试管保存体系

以长白瑞香嫩茎为外植体,应用均匀设计法筛选其离体培养和种质试管保存最适合的培养基.结果表明,长白瑞香组织培养的不同阶段需要不同的培养基.最适合的嫩茎基部直接再生芽苗培养基为:N-68+2ip 3.56 mg/L +NAA 0.03 mg/L,诱导率为93.5%;生根培养基为:1/2MS+6-BA 0-04 mg/L+IAA 0.08 mg/L,生根率达99%以上;试管保存培养基为:N-68+KT0.02 mg/L+根皮苷2.00 mg/L,保存时间可达30个月以上,常温条件下,宜采取"延缓生长"的方法在试管内保存长白瑞香种质.成功建立了长白瑞香的离体培养和种质试管保存体系.     

达呼尔奥斯特线虫的体外培养

在38～40℃,CO_2与空气比例为40:60和60:40的条件下,利用50%鸡胚提取液,50%鸭胚提取液,M_(100)、F_(12)、羊血清、牛血清、酵母提取物,混合维生素和多种有机和无机物分别组成8组不同成分与浓度的培养液,对达呼尔奥斯特线虫进行了寄生阶段的体外培养试验。在以鸡胚或鸭胚提取物为主,分别加入 M_(100)、牛或羊血清、酵母提取物等成分的培养液中,幼虫经14～17d 培养后,有大约14%～20%通过第三次蜕化达到了第四期。实验结果表明,(1)商品培养基 F_(12),M_(100)对幼虫发育无明显作用;(2)鸡胚或鸭胚提取物对幼虫一定阶段的发育有较好的效果;(3)不同寄生阶段的幼虫要求不同的营养成份和环境条件。     

大蒜蒜瓣离体繁殖研究

以山东苍山大蒜蒜瓣为外植体进行离体培养,在MS+KT_1.0+NAA_0.005(单位:mg/l,下同)培养基上,外植体可直接分化出新梢.新梢在MS+KT_1.0+IBA_1.0+NAA_2.0培养基上进行2次继代增殖,然后在B₅+BA_1.0培养基上进行1次继代增殖,繁殖系数依次为7.6,6.5,4.0.共经160～180天,单瓣蒜累积繁殖系数可达1640.新梢在MS+NAA_0.1+BA_0.1培养基上生根率可达87.5%.在MS+NAA_2.0+BA_0.05培养基上,小鳞茎发生率可达85.7%.采用有根单鳞茎试管苗移栽,成活率为92%.细胞学观察表明,该途径保持了原材料的遗传稳定性.     

小苍兰的离体培养

本文选用小苍兰茎尖、球茎和不同品种的花蕾为外植体,分别培养在不同的培养基上,取得了下列结果:1.将茎尖培养在 B_5+0.5mg/LBA 的培养基上,不仅会诱导出愈伤组织,而且也能分化出幼苗,幼苗分化率高达85.3%。2.培养在 MS+4mg/LBA 培养基上的球茎,有80%的外植体能诱导出愈伤组织。愈伤组织中有40%能分化出苗。3.16个品种的花蕾,在 MS+2mg/LBA+0.2mg/LNAA 的培养基上能诱导出愈伤组织,出愈范围为36.1～86.7%。当愈伤组织转入 MS+0.2mg/LBA+0.2mg/LBA+0.2～1.0mg/LNAA 的培养基上时,能分化不定芽和不定根,不定芽的分化率为2.3～86.4%。     

山羊卵母细胞体外成熟因素的研究

建立和优化山羊卵母细胞体外成熟的培养体系,对山羊卵母细胞的采集方法、割卵液种类、培养液添加血清种类等因素进行了研究.结果显示切剖法与抽吸法对山羊卵母细胞的成熟有显著差异(P<0.05);割卵液DMEM/F-12与PBS+BSA对山羊卵母细胞的成熟有极显著差异(P<0.01);添加EGS(自然发情)、EGS(PG诱导发情)、FBS对山羊卵母细胞的成熟有极显著差异(P<0.01).结论:切剖法能更好地支持卵母细胞的成熟;DMEM/F-12作为割卵液,能显著提高卵母细胞的成熟率;自然发情的山羊血清对卵母细胞的成熟效果最好,同种血清对卵母细胞的成熟效果要好于异种血清.