香豆素对灰葡萄孢霉菌的生长代谢及保护酶活性的影响

为探究香豆素对灰葡萄孢霉菌作用机理的影响，通过酶活试验、丙二醛（MDA)含量、葡萄糖含量变化试验，来分析香豆素对灰葡萄孢霉菌体内保护酶（SOD、POD、PPO）活性的影响，探究灰葡萄孢霉菌细胞代谢活动的强弱和细胞膜损伤程度变化。运用菌丝处理对照前后菌丝干重变化的方法来进行抑菌活性测定，以及用试剂盒测定的方法来进行酶活测定、MDA含量测定、葡萄糖含量的测定。结果表明，在液体培养基中香豆素对灰葡萄孢霉菌的EC₅₀为101 μg·mL^-1；香豆素对灰葡萄孢霉菌孢内的过氧化物酶（POD）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、多酚氧化酶（PPO）的最高抑制率分别为82.7%、66.67%、56.36%；经香豆素处理的菌丝体各时间点的丙二醛（MDA）含量明显>对照组，细胞膜透性显著增强，第72 h时，处理组MDA含量为16.53 nmol·mg^-1 prot，为对照组MDA含量的1.5倍；处理组葡萄糖含量始终<对照组，第36 h与对照组相比，处理组下降了45.63%。可见，香豆素可抑制灰葡萄孢霉菌的生长，致使细胞膜菌丝膜酯损伤，抑制灰葡萄孢霉菌酶的活性，降低细胞中葡萄糖的含量，影响细胞正常代谢生长，为灰霉病的防治提供一定的理论参考。     

丁香提取物对枝孢霉菌的抑菌效果及抑菌机理

以壳梭孢菌、青霉菌及枝孢霉菌为靶标菌,检测丁香提取物的抑菌效果,并进一步探究丁香提取物的抑菌机理,结果表明:丁香乙醇提取物对3种真菌的抑制效果较佳,特别是对枝孢霉菌抑菌效果显著,3.125 mg·m L~(-1)丁香乙醇提取物对枝孢霉菌具杀菌作用。与无药物处理的对照组相比,经过1 mg·m L~(-1)的丁香提取物处理的枝孢霉菌表现为:菌丝形态畸形、电导率上升、菌丝可溶性蛋白质含量约为对照组的3倍、菌丝总糖含量下降了87.18%、孢子梗瘦弱纤细,容易倒伏、产孢抑制率为69.31%,推测其抑菌机理是通过破坏枝孢霉菌的细胞膜结构,抑制菌的生长代谢及其繁殖来达到抑菌目的。     

苍耳提取物对番茄灰霉病菌抑制机理的研究

以番茄灰霉病菌为供试材料,对苍耳提取物的抑菌机理进行了研究.结果表明:苍耳提取物对番茄灰霉菌的菌丝生长、分生孢子的形成和萌发都具有较强的抑制作用,当处理浓度为30 mg/mL时,苍耳提取物对番茄灰霉菌菌丝生长的抑制率达78.1%,对分生孢子形成和萌发的抑制率分别为85.1%和77.4%.苍耳提取物能引起番茄灰霉菌菌丝细胞膜透性发生变化,造成菌丝体内含物的渗漏,从而导致液体培养基电导率增加.用苍耳提取物处理番茄灰霉病菌后,可使菌丝体可溶性蛋白含量下降.     

植物内生放线菌Lj20发酵液萃取物对真菌作用＊机理的研究

【目的】明确植物内生放线菌Lj20发酵液萃取物对真菌的抑菌作用机理。【方法】观察100 mg/LLj20萃取物对灰葡萄孢菌菌丝形态的影响,测定0.02,0.2,2,20和200 mg/L Lj20萃取物对灰葡萄孢菌、拟盘多孢菌、弯孢霉和茄链格孢菌菌丝生长及孢子产生、萌发的影响,并测定200 mg/L Lj20萃取物对灰葡萄孢菌菌丝细胞膜的影响。【结果】用100 mg/L Lj20萃取物处理灰葡萄孢菌后菌丝量减少,菌丝体皱缩、断裂、原生质外渗,菌体细胞表面有许多瘤状畸形;Lj20萃取物对4种病原真菌的菌丝生长、孢子产生和萌发均有明显抑制作用,其中对灰葡萄孢菌的抑制作用最强,抑制菌丝生长的EC50为0.96 mg/L,抑制孢子萌发的EC50为8.33 mg/L,200 mg/L Lj20萃取物对其孢子产生的抑制率为89.4%;用200 mg/L Lj20萃取物处理后的灰葡萄孢菌培养液在260 nm处均出现1个吸收峰,而对照(10 g/L NaCl处理)无吸收峰出现。【结论】Lj20萃取物对4种供试病原菌的菌丝形态和生长、孢子产生和萌发均有抑制作用,对细胞膜透性也有明显影响。     

细辛精油和4种化学药剂对黄瓜灰霉病菌的抑制作用

采用菌丝生长速率法及孢子萌发法分别测定了细辛精油和4种化学药剂(30%嘧霉胺BC、50%双福生WP、75%百菌清WP、70%正品甲津托 WP)对引起黄瓜灰霉病的灰葡萄孢菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用.结果表明,供试药剂对灰葡萄孢菌的菌丝生长和孢子萌发均有抑制作用,且对孢子萌发的抑制效果明显好于对菌丝生长的抑制效果;百菌清对灰葡萄孢菌菌丝生长的抑菌效果最好,EC50为1.6231 mg/L;双福生对灰葡萄孢菌孢子萌发的抑制效果最好,EC50为0.0042 mg/L;细辛精油对黄瓜灰葡萄孢菌的抑菌效果与其他4种化学药剂相比效果较差,对菌丝生长的EC50为159.580 mg/L,对孢子萌发的EC50为71.1840 mg/L,虽然其EC50偏高,但作为纯植物提取物,其抑菌中浓度低于160 mg/L.     

重寄生链霉菌F46与链霉菌SC1融合子的筛选

运用原生质体融合技术将重寄生链霉菌F46与生防链霉菌SC1融合,获得40株融合子.依据形态特征、皿内拮抗试验对获得的融合子进行初筛,发酵液抑菌活性测定,筛选出2株抑制效果明显的融合子FSf-11和FSf-13.皿内拮抗试验结果表明,2个融合子对灰葡萄孢(B.cinerea)有明显的抑制作用,抑制率比亲本SC1分别提高了27.99%和20.56%,镜检发现灰葡萄孢的基内菌丝畸形,经FSf-13处理后还出现原生质凝聚现象.融合子的发酵滤液对胶孢炭疽菌(C.gloeosporioides)抑制效果显著,抑菌圈直径超过了20 mm;融合子FSf-11的发酵滤液对尖镰孢萎蔫专化型(F.oxysporum f.sp.vasinfectum)和大丽轮枝菌(V.dahliae)的孢子萌发抑制作用最强,其孢子萌发率低于10%;融合子FSf-13对2种靶标菌的孢子萌发抑制率也超过了50%.     

苍耳愈伤组织提取物对番茄灰霉病菌的抑菌活性

以野外采集苍耳和室外种植苍耳提取物为对照,利用生长速率法、孢子萌发法及显微观察,研究了苍耳愈伤组织提取物对番茄灰霉菌活性的影响。结果表明:苍耳愈伤组织提取物对番茄灰霉菌具有较强的抑制作用,其抑制菌丝生长的EC50为20.27 mg/mL,在30 mg/mL浓度下,对番茄灰霉菌孢子形成和孢子萌发的抑制率均达到70%以上,其对孢子形成和孢子萌发的EC50分别为9.06 mg/mL和15.21 mg/mL,其抑菌活性与野外采集苍耳和室外种植苍耳抑菌提取物相当.     

拮抗细菌R26发酵滤液对灰葡萄孢菌的抑菌活性研究

在离体条件下,测定了拮抗细菌R26对灰葡萄孢菌的抑制作用,结果表明,R26发酵滤液能抑制灰葡萄孢菌丝生长,EC50值为10.63μL/mL;经R26发酵滤液(40μL/mL)处理后,灰葡萄孢菌体形态发生明显变化;R26发酵滤液能抑制灰葡萄孢菌孢子萌发,并能抑制芽管伸长,当浓度达80μL/mL时,对灰葡萄孢菌产孢量的抑制率达57.51%。     

几种植物提取物对4种植物病原真菌的抑制作用

以链格孢菌、芭蕉炭疽菌、尖孢镰刀菌、灰葡萄孢菌等4种植物病原真菌为供试菌,对采自福建省福州地区16种植物乙醇提取物的抑菌活性进行测试,结果表明,0.0lg·mL-1下,有8种植物对至少1种病原真菌孢子的萌发抑制率达60%以上,大飞扬、杨梅、桃金娘3种植物的乙醇提取物对孢子萌发与菌丝生长都有较好的抑制效果.对这3种植物用极性从小至大的溶剂依次提取,提取物抑菌活性表明,活性物质多只分布在其中1至3种极性溶剂层中,不同极性提取物的抑菌能力与抑菌范围存在较大差异.大飞扬的丙酮提取物对芭蕉炭疽菌孢子可能具有毒害作用,乙酸乙酯提取物使芭蕉炭疽菌和链格孢菌的孢子芽管生长不正常.     

鄂西北野生植物蒲公英提取物对几种真菌的抑制活性

以采自鄂西北山区的蒲公英无水乙醇提取物为供试药液,测定了其对立枯丝核菌Rhizoctonia solani、灰葡萄孢菌Botrytis cinerea、齐整小核菌Sclerotium rolfsii、终极腐霉Pythium ultimum和尖镰孢菌黄瓜专化型Fusarium oxysporum f.sp cucum-ber的抑制活性。结果表明:不同浓度的蒲公英提取物对供试真菌菌丝生长的抑制作用均随菌丝生长时间的延长而降低。蒲公英提取物对这5种真菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用均随着提取物浓度的升高而增强,且对终极腐霉、尖镰孢菌黄瓜专化型、立枯丝核菌和灰葡萄孢菌均有较好的抑制作用,而对齐整小核菌的抑制作用较弱。     

菱角壳黄酮类化合物的提取工艺优化及抑菌活性研究

采用乙醇提取法对菱角壳中黄酮类化合物进行提取,以黄酮类化合物提取率作为指标,经正交实验获得菱角壳中黄酮类化合物提取的最佳工艺.结果表明,乙醇体积分数65％,液料比1:20,提取温度70℃,提取时间85min时,提取率为3.78％.抑菌试验发现菱角壳中黄酮类化合物提取物对尖孢镰刀菌、禾谷镰孢菌、灰葡萄孢菌病原菌的菌丝生长均有抑制效果,对灰葡萄孢菌、尖孢镰刀菌、禾谷镰孢菌菌丝生长的抑制率分别达到29.41％、23.52％、29.41％.     

中华散尾鬼笔的液体培养条件优化及生物安全性测定

以中华散尾鬼笔为对象，以菌丝生物量为指标，通过单因素试验筛选了接种量、pH、温度、装液量等4种非营养因子对中华散尾鬼笔液体发酵的影响，优化了培养条件，并测定了中华散尾鬼笔正丁醇提取物水溶液对绿豆的他感作用及对斑马鱼的急性毒性。结果表明，中华散尾鬼笔液体发酵的优化培养条件为:培养温度25℃、pH中性、接种菌饼3片、装液量220 mL·瓶^-1，在此培养条件下，中华散尾鬼笔菌丝干重为0.66 g，较未优化之前增加了1倍。同时，中华散尾鬼笔正丁醇提取物水溶液对绿豆种子的发芽和胚轴芽的伸长均产生抑制效果，且随着提取物浓度的升高，绿豆发芽率和胚轴芽长均趋于下降，抑芽率显著升高（P<0.05）；对斑马鱼的急性毒性试验结果表明，中华散尾鬼笔正丁醇提取物水溶液对斑马鱼96 h的致死中浓度LC₅₀为426.54 mg·L^-1，属于低毒。研究为中华散尾鬼笔的进一步研究和利用提供了参考和依据，为其作为微生物源农药提供了可能。     

21种中草药醇提物抑菌活性研究

[目的]开发理想的植物源杀菌剂。[方法]以链格孢菌和灰霉菌为供试菌种,用生长速率法分别对21种中草药乙醇提取物进行室内抑菌活性测试。[结果]用提取物质量浓度为0.02 g/ml进行初次筛选时,丁香、牵牛子等7种提取物对灰霉菌抑菌率在70.00%以上;丁香、牵牛子等7种提取物对链格孢菌菌丝生长的抑制率达50.00%以上;用提取物质量浓度0.01 g/ml进行二次筛选,丁香、细辛、辛夷和苦参4种提取物对灰霉菌的抑菌率分别为100%、69.67%、62.52%、62.21%,与多菌灵相当;丁香、黄连、苦参、高良姜、细辛5种提取物对链格孢菌抑菌活性分别为100%、72.60%6、7.30%、63.90%、54.30%,均明显高于多菌灵6.90%抑菌率。[结论]丁香、苦参、细辛对两种真菌的抑制作用较明显。     

一株拮抗葡萄灰霉病的嗜线虫致病杆菌发酵条件优化

【目的】分析单因素试验和响应面法优化嗜线虫致病杆菌(Xenorhabdus nematophila-ALL)对葡萄灰霉菌抑菌活性的发酵条件,提高拮抗菌(ALL)对灰葡萄孢菌丝的抑制率,为Xenorhabdus nematophila-ALL菌株发酵生产及生物防治应用奠定基础。【方法】以菌丝抑制率为指标,经菌丝生长速率法,单因素试验及Box-Behnken设计对菌株发酵条件进行优化,确定菌株最佳发酵抑制条件。【结果】最佳培养条件为培养基初始pH值改为7.12,装液量为56％,发酵培养时间为77 h。经验证的抑制率为87.70％,比优化之前提高了1.82倍。【结论】发酵条件优化有效提高了嗜线虫致病杆菌对葡萄灰霉菌的抑菌活性。     

拮抗菌对致病疫霉生长及抗性酶活性的影响

为获得更为有效的致病疫霉拮抗菌并探讨拮抗菌的作用机理,本研究利用对峙培养法、滤纸片法测定了10个待测菌株的活体及发酵液的抑菌作用,用分光光度法测定了受显著抑制后再恢复生长的致病疫霉体内多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性。结果表明:活体状态下以核桃细菌的抑制作用最强(抑菌率为84.50%);发酵液中以梨黑斑病菌(Alternaria alternate)的抑制作用最强(抑菌率为76.68%),其次是白菜黑斑病菌(A.brassicae)。将梨黑斑病菌和白菜黑斑病菌的发酵液复配后其抑菌率达到了81.31%。受抑制的致病疫霉菌落中紧靠抑菌带边缘的菌丝不能恢复正常生长,较远的菌丝易恢复正常生长;受抑制的致病疫霉体内PPO、POD、PAL活性均明显降低,与对照相比,PPO活性下降了45%~68%,POD下降了27%~58%,PAL下降幅度最大,约80%~90%,这与植物受病菌抑制或侵染后PPO、POD、PAL活性增加相反。     

活体条件下辽细辛精油对灰葡萄孢菌细胞壁降解酶活性的影响

以辽细辛精油为材料,以黄瓜灰霉病菌即灰葡萄孢菌为靶标,在活体条件下,利用紫外可见分光光度计,采用比色法,研究了辽细辛精油对灰葡萄孢菌细胞壁降解酶活性的影响.结果表明:辽细辛精油对胞外PMTE酶、果胶总酶、胞外C1酶和蛋白酶表现为激活作用,对PMG酶和胞内C1酶则表现为先激活后抑制再激活作用,对胞内PMTE酶主要表现为抑制作用:对Cx酶表现为完全的抑制作用,且酶活抑制率与精油浓度成正比.说明Cx酶可能是辽细辛精油的作用位点之一.对Cx酶的抑制作用可能是辽细辛精油对灰葡萄孢菌的抑菌机制之一.     

灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)次生代谢产物的抑菌活性初步研究

用生长速率法及抑菌圈法测定了灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)高产菌株次生代谢产物提取物对6种植物病原菌的抑菌活性。结果表明,灰葡萄孢菌的提取物对稻瘟病菌(Pyricularia oryzae)、烟草赤星病菌(Alternaria alter-nata)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)和梨黑星病菌(Venturia nashicola)的菌丝生长有明显的抑制作用,能够完全抑制菌丝生长的浓度分别为2、2、4和8mg/mL,EC50则分别为0.1039、0.3816、0.8418和1.4950mg/mL。对烟草野火病菌(Pseudomonas syuringae pv.tabaco)、白菜软腐病菌(Erwinia carotovora)2种细菌也有抑制作用,在浓度为2mg/mL时,抑菌圈直径均为2.8cm。     

8种菌株代谢物对茄链格孢菌菌丝生长及孢子萌发的抑制

为防治由茄链格孢菌(Alternaria solani)引起的番茄早疫病,研究了8株有益微生物的代谢产物对茄链格孢菌菌丝生长及孢子萌发的抑制,并且测定了曲霉、细黄链霉菌对病菌的持续抑菌作用。结果发现5株芽孢杆菌代谢物原液对茄链格孢菌菌丝生长均有一定的抑制作用,茄链格孢菌分生孢子萌发的受抑制率分别为:地衣芽孢杆菌44.87%、胶冻样芽孢杆菌51.97%、枯草芽孢杆菌55.44%。细黄链霉菌对茄链格孢菌具有较强的持续抑制作用,且黑曲霉、米曲霉、细黄链霉菌作用后茄链格孢菌菌丝发生了畸变、原生质浓缩等现象。表明8种微生物代谢物对茄链格孢菌具有抑菌活性,且效果明显。     

花椒提取物对薏苡黑粉病菌的抑菌机理

从角质酶、果胶酶、纤维素酶以及细胞膜透性等方面研究花椒提取物对薏苡黑粉病菌的抑制机理。结果表明:花椒提取物处理后,黑粉病菌的果胶酶和纤维素酶的活性显著弱于对照,说明花椒提取物能够抑制病原物的致病相关酶活性的表达,进而减轻黑粉病菌的危害;花椒提取物处理后,孢子培养液的电导率及其变化率都随着时间的延长而变大,处理9 h后菌丝电导率变化率为9.52%,说明花椒提取物对菌丝的细胞膜有很强的破坏作用,导致细胞内电解质外渗,从而迅速增加菌丝培养液的电导率。黑粉病菌的果胶酶以及纤维素酶的活性都在6 h时达到峰值,之后活性开始降低,说明该病菌在6 h时能够冲破植物各种抵抗屏障,成功侵入寄主植物。黑粉病菌分泌的角质酶的量很低,这可能是薏苡黑粉病菌极少能从薏苡叶片侵入的关键因子之一。     

酵母菌菌株4-41的分类属性鉴定及其对灰霉菌的防病机制研究

为明确一株对灰霉菌具有明显抑菌效果的酵母菌菌株4-41的分类地位，明晰其抑菌防病机制，通过形态特征和26S rDNA序列分析对其进行鉴定，并利用平板对峙法检测其抗菌谱，借助灰霉菌与圣女果互作体系验证其在果实上的抑菌活性，检测其在果实伤口处的定殖动态，产挥发性抑菌物质、氨气、铁载体的能力以及溶磷、溶锌和生物成膜能力，揭示其抑菌机制。结果表明，菌株4-41为Cyberlindnera saturnus，该菌株对6种植物病原菌具有抗性，其中对灰霉菌（Botrytis cinerea）拮抗能力最强，能显著抑制灰霉菌对圣女果果实的侵染。菌株4-41能产挥发性抑菌物质，具有产铁载体和氨气的能力，能溶解培养基中的磷酸盐和氧化锌，具有生物膜形成能力，能诱导圣女果中过氧化物酶（POD）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）、几丁质酶（CHI）和β-1,3-葡聚糖酶（GLU）活性升高，抑制多酚氧化酶（PPO）活性。综上，拮抗酵母菌Cyberlindnera saturnus 4-41能够有效抑制灰霉菌的生长，可作为灰霉菌生物防治的有效拮抗菌材料。