仔猪断奶腹泻大肠杆菌鉴定及其血清型分析

从浙江省规模化猪场采集仔猪断奶腹泻病料,经细菌分离纯化、G染色、生化试验和小鼠致病性试验等,鉴定得到56株病原性大肠杆菌。通过11种主要致病性大肠埃希氏菌O抗原的血清型鉴定,56株致病性大肠杆菌中定型了33株,共覆盖了11种血清型,其中O149、O139、O8为优势血清型,共17株,占定型菌株的51.52%。通过棉籽糖发酵试验、甘露糖血凝抵抗试验(MRHA)和血凝抑制试验(MRHI),确定37株为K88,占66.07%(其中K88ab有8株,占K88菌株的21.62%),其余的未能定型。这些血清型与已报道的常见血清型间存在一定差异。     

牛源大肠杆菌分离株菌体抗原及菌毛特性研究

对一株牛源大肠杆菌JS株的菌体抗原及菌毛特性进行了研究。大肠杆菌JS株在Minca培养基上37℃培养18～24h,能够同时良好地表达菌毛抗原K99和F41。采用保温法和裂解法进行了菌毛提纯,取得了较好的效果。应用玻片凝集试验﹑抗D-甘露糖微量血凝试验(MRHA)进行菌毛特异性和粘附性研究。结果表明,K99、F41两种菌毛抗原不存在交叉凝集反应,其血凝谱能凝集牛﹑鸡的红细胞。     

肠毒素型大肠杆菌菌毛的研究进展

1概述 肠毒素型大肠杆菌(ETEC)是猪的一种重要肠道病原菌,能够引起仔猪黄痢、白痢和猪的水肿病.猪常见致病性大肠杆菌血清型是O8、O9、O20、O60、O138、O139、O157等[1～3 ]并具有相应的菌毛.菌毛是ETEC的一个重要毒力因子,具有粘附于小肠绒毛上皮的作用,使ETEC牢固地定居于小肠粘膜上,从而导致腹泻的发生.菌毛抗原是一种蛋白质,可以用来制成菌苗免疫母猪,使其所产仔猪获得被动免疫,不受大肠杆菌的侵袭[4～6].引起仔猪腹泻的菌毛抗原主要是K88(F4)、K99(F5)、987P(F6)、F41[7].随着对菌毛的深入研究,人们又发现了新的菌毛抗原[8,9].     

集约化猪场PWD病原性大肠杆菌毒力因子分析

探索浙江省集约化猪场仔猪断奶腹泻(PWD)病原性大肠杆菌血清型和毒力因子特征,为PWD防治及耐药性研究提供资料.从10个规模化猪场以直肠棉拭子采集PWD病料,经细菌分离纯化、革兰氏染色、生化试验和小鼠致病性试验等,对病原进行鉴定.采用11种猪源大肠埃希氏茵常见O型抗原血清、应用K88及F18菌毛单因子血清对分离茵进行玻板凝集试验和PCR方法分析黏附素及肠毒素类型.分离鉴定的56株病原性大肠杆菌O抗原定型了33株,共覆盖了11种血清型,其中O149、O139、O8为优势血清型,共17株,占定型菌株的51.5%;茵毛单因子血清玻板凝集试验和PCR测得病原性大肠杆菌中产肠毒素大肠杆菌(ETEC)比例较高,占病原性大肠杆菌分离总数的67.92%(36/53),肠毒素中含STa、STb、STa+STb、LT和SL-2e分别占总检测菌株数的30.19%(16/53)、35.85%(19/53)、18.9%(10/53)、1.89%(1/53)和9.43%(5/53).黏附素类型主要有K88和F18两种,分别占总检测菌株数的24.53%(13/53)和28.30%(15/53).结果表明,浙江省PWD病原性大肠杆菌至少覆盖了包括优势血清型O149、O139、O8在内的11种血清型;大肠杆菌中以产肠毒素型为主,主要毒力因子包括黏附素F18及K88和肠毒素STa、STb、SLT-2e等.     

禽致病性大肠杆菌1型菌毛单克隆抗体的研究及其应用

本试验用提取的禽致病性大肠杆菌1型菌毛免疫BALB/c小鼠,筛选获得2株单克隆抗体;经MSHA试验和Western-blot试验证明,它们是1型菌毛,其凝集价分别为25～26、28～29,ELISA效价分别为103、104～105;对46株带有1型菌毛的禽致病性大肠杆菌优势血清型分离株进行了检测,结果表明该单克隆抗体都与之发生特异性反应。     

牦牛致病性大肠杆菌生物学特性研究

对牦牛致病性大肠杆菌的某些生物学特性进行了研究，包括分离菌株血清学特性，溶血性，血凝性，菌毛的表达，对小鼠，兔的致病性及抗生素敏感性等，结果表明，该菌株血清型属O148，为国内外首次报道，不产生溶血素，对绵羊，豚鼠，马，鸡的红细胞表现强凝集，而对猪，兔的红细胞不凝集，血凝能被D－甘露糖抑制，表现为MSHA，在营养肉汤中经37度，48h培养表达菌毛，肌肉接种兔，腹腔接种小白鼠均具有高致病性，分离菌株对恩诺沙星，环丙沙星，阿莫西林，羧苄青霉素等高度敏感，而对青霉素，四环素，土霉素，氯霉素等表现耐药性。     

天津地区仔猪水肿病病原分离鉴定

从天津地区分离鉴定猪水肿病大肠杆菌27株,并测定了分离株的部分生物学特性。鉴定结果表明,定型的23个分离株分属O139,O101,O138,O 108,O141,O147,O149,O 21,O8等9个血清型(4株未定型),其中O 139,O138,O101为优势血清型;10个试验菌株可以产生水肿毒素;11个强致病性菌株中,5株可产生明显溶血环,而16个弱致病性菌株均无溶血性。药敏试验结果表明,头孢氨苄的抑菌作用最强,但所有分离株均有不同程度的耐药性。     

鸡大肠杆菌(O78)1型菌毛单克隆抗体研制及对分离菌株的检测

将菌毛化的鸡大肠杆菌国内分离株GL7(O78)灭活后作为免疫原,经淋巴细胞杂交瘤技术,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选,获得3E1、3H1、4A9和5G4共4株能稳定分泌1型菌毛抗体的杂交瘤细胞,它们均为IgG。免疫印迹试验结果表明:4株单抗均能同鸡大肠杆菌1型菌毛反应,识别分子质量为17~17.5 ku的菌毛蛋白。同时对鸡大肠杆菌表达1型菌毛的分离株进行检测,结果表明同一血清型或不同血清型间的鸡病原性大肠杆菌1型菌毛之间存在差异,O血清型不能完全体现菌株间的遗传相关性。     

牛大肠杆菌灭活疫苗(K99、F41兼型)的研制与免疫研究

应用分离鉴定的兼有K99、F41菌毛抗原的产ST肠毒素的O142血清型大肠杆菌作菌种,制备出菌毛、全菌体和菌毛与菌体混合等3种灭活疫苗。疫苗物理性状良好,接种怀孕母牛产生良好的免疫反应,接种疫苗14 d后,抗体效价K99 为4.7～6log2, F41 为2.1～5.5 log2;28 d后K99 为6.5～8log2,F41 为2.6～6.5 log2。产犊后8～10 h,对犊牛口服攻毒800亿菌/mL O142大肠杆菌,结果3种疫苗均能使犊牛获得一定保护,保护率分别为89.1%、55.6%和94.6%,对照组为16.3%。菌毛苗和混合苗免疫效果均优于全菌体苗,K99免疫效果优于F41,两次免疫效果优于一次免疫。现地试验取得了良好的免疫效果,证明制备的油乳剂灭活疫苗安全, 免疫原性良好。     

河南省猪致病性大肠杆菌分离株的鉴定

从河南省 2 3个规模化猪场发生仔猪黄痢、白痢、水肿病的猪只十二指肠、小肠前端、心血和肝脏中分离出的致病性大肠杆菌 2 79株 ,用大肠杆菌 3 0种O抗原和K抗原 (K88、K99、987P)进行了血清型鉴定。用 2 0种抗生素对分离株进行了药敏试验。结果表明 :( 1)同一地区的不同猪场流行的主要血清型一般不同 ;( 2 )用单因子定型血清鉴定 ,大多数分离株为K88型 ,8种优势血清型占定型菌株的 69.3 5 % ;( 3 )致病性大肠杆菌存在着广泛的耐药性 ,敏感药物是头孢曲松、头孢唑啉。     

规模化养猪场仔猪黄痢病原菌优势血清型检测及其致病性试验

从临沂市规模化养猪场仔猪黄痢病例中分离病原菌、检测其优势血清型,并经动物致病性试验探讨其优势血清型菌株的致病能力,为临床选用疫苗提供血清型依据,并为灭活苗的制备及药敏试验提供菌株.对临沂市不同区域的23个规模化养猪场的112份疑似仔猪黄痢病例进行了细菌分离,对分离到的致病性大肠杆菌进行了生化试验、毒力试验、血清学鉴定,分析出其优势血清型;取三日龄仔猪进行了优势血清型菌株致病性试验.112份病料中分离出了101株致病性大肠杆菌,分离率为90.2%;不同区域猪场流行的血清型有较大差异,在101个分离株中,7株未能定型、4株自凝,其余90株能定O型血清型,这些定型菌株分布在11个血清型中,其中优势血清型为O8,O54,O115,O149,这四种血清型共占定型菌株的56.7%.上述四种优势血清型的发病率均为100%,死亡率分别是100%、75%、100%、100%,致病率和致死率与对照组相比差异显著(P>0.05).目前临沂市规模化养猪场仔猪黄痢病原菌的O型血清型分布在11个血清型中,其中优势血清型为O8,O54,O115,O149 .四种优势血清型的发病率和死亡率均较高.     

齐齐哈尔地区仔猪腹泻大肠杆菌血清型与毒力基因分析

为了解黑龙江省齐齐哈尔地区仔猪腹泻大肠杆菌的优势血清型和毒力基因流行情况,从齐齐哈尔地区40个养猪场的腹泻仔猪体内分离到100株致病性大肠杆菌,通过凝集试验和分子生物学检测方法进行血清型及毒力基因检测。血清型检测结果表明,100株大肠杆菌有49个分离株鉴定出血清型,其中O8、O9、O101、O147、O157、O64为优势血清型,占定型菌株的77.55%。毒力基因PCR测定结果表明,黏附素基因987P(50/71,70.42%)、肠毒素基因LT(65/71,91.54%)、强毒力岛FyuA(43/71,60.56%)为主要流行的毒力基因。研究揭示了齐齐哈尔地区仔猪腹泻大肠杆菌的优势血清型和主要携带的毒力基因,为临床防治大肠杆菌性仔猪腹泻提供了科学依据。     

猪源致病性大肠杆菌的流行调查及药敏实验

为了摸清本地区规模化养殖场猪源大肠杆菌的发病情况及耐药性,从四个规模化养殖场采集85份检样进行细菌的分离鉴定,结果共分离到79（92.9%）株大肠杆菌,其中55（69.6%）株对小白鼠有致病性。对55株猪源致病性大肠杆菌进行血清型鉴定,确认本地区养殖场流行的大肠杆菌的血清型为O8、O139、O54、O141、O138,其中O8、O139、O54为主要的血清型占总量的89.1%。对55株大肠杆菌进行药敏实验结果表明,细菌耐药率由高到低,差异明显。其中刚开始在兽医临床中使用的头孢噻圬也呈现耐药的趋势。为了降低细菌对抗生素产生耐药性,在临床使用中应该交替使用高敏的抗生素。     

抗致病性大肠杆菌蒙药及其组方筛选

为确立治疗致病性大肠杆菌病的蒙药组方,采用牛津杯法,选取15味蒙药对致病性大肠杆菌进行体外抑菌试验,筛选O1血清型致病性大肠杆菌的敏感蒙药。结果表明,O1血清型致病性大肠杆菌对12味蒙药敏感。并通过棋盘法测定部分抑菌浓度,筛选出5组6味蒙药,结合体外抑菌试验,通过L8(27)正交试验设计,筛选出最佳体外抑菌蒙药组合,再通过L9(34)正交试验设计进行剂量优化。结果显示,结合正交设计和体外抑菌试验确立了5组蒙药组方,且其抑菌效果显著优于各单味蒙药的抑菌效果,即5组蒙药复方中最小抑菌圈为30.49mm,而单味蒙药最大抑菌圈为24.42mm。     

贵州仔猪大肠杆菌分离物K88菌毛的鉴定

从贵州省７个种猪场发生腹泻的仔猪分离致病性细菌、对１６株病原细菌分离物进行了生化鉴定，１５株细菌符合然氏大肠杆菌的生化特征，其中１０株是普通大肠杆菌；５株是类大肠杆菌。两株细菌能在血琼脂平板上产生溶血素、两株细菌经抗Ｄ－甘露糖血凝试验表明能产生Ｋ８８菌毛；阳性率达１２．５％。本文还对Ｋ８８菌毛，肠毒素溶血素与仔猪大肠杆菌病的流行病学关系进行了讨论。     

山西省雏鸡致病性大肠杆菌病原学研究

针对雏鸡大肠杆菌病病原的复杂特性,从山西省部分地区采集疑似大肠杆菌病死亡的雏鸡病料,并进行细菌分离、生化试验、血清学鉴定和致病性试验。结果分离出37株大肠杆菌。通过血清型鉴定,有15株大肠杆菌鉴定为:O119、O60、O7、O88、O45、O10、O11、O2、O103、O81等10个血清型,其中O119和O88为优势血清型;其余菌株未鉴定出血清型。37株分离菌株的致病性试验表明:有35株为雏鸡致病性大肠杆菌;2株为非致病性大肠杆菌,其血清型均为O10。研究结果为雏鸡大肠杆菌病的防制提供了可靠的理论依据。     

张家口地区仔猪黄痢病原菌血清型检测及药敏试验

为了调查张家口地区仔猪黄痢病例大肠杆菌的耐药性及流行血清型,从发生仔猪黄痢的20个规模化猪场采集90份病料,进行致病性大肠杆菌的分离及生化鉴定。腹腔接种小白鼠以鉴定分离菌的毒力,采用玻板凝集试验和试管凝集试验鉴定分离菌O血清型,并使用16种抗菌药对50株致病性大肠杆菌进行药敏试验。结果表明,从90份病料中分离出86株大肠杆菌,其中致病性大肠杆菌79株。79株致病菌共有10种血清型,其中O8、O151、O149、O141为优势血清型,占能定型分离致病菌株的61.1%。药敏试验结果显示,头孢噻肟钠抑菌作用最强(94%),其次为诺氟沙星(90%)、丁胺卡那霉素(82%)、新霉素(80%)。50株大肠杆菌对16种抗菌药均有不同程度的耐药性,对链霉素完全耐药,其中39株为5耐以上的菌株,占供试菌株的78%。     

致鸡肝炎大肠杆菌与鸡舍空气致病性大肠杆菌生物学特性比较分析

研究了河北某地区致鸡肝炎大肠杆菌(Escherichia coli)和鸡舍空气致病性大肠杆菌的血清型和耐药性差异。根据细菌分离培养特性、形态学、生化试验、动物试验及玻板凝集试验结果,从病鸡肝脏中分离出了致病性大肠杆菌38株,其O型优势血清型与同地区鸡舍空气分离出的大肠杆菌血清型相似。药敏试验结果显示,O型致鸡肝炎大肠杆菌与已分离出的同地区鸡舍空气致病性大肠杆菌的耐药特征也具有相似性。这说明致鸡肝炎大肠杆菌与同地区鸡舍空气致病性大肠杆菌的某些生物学特性是相同的,大肠杆菌引起的鸡肝炎病与存在于空气中的致病性大肠杆菌有一定的关系。     

猪水肿病的预防及治疗

<正>猪水肿病是由致病性大肠杆菌引起的断乳后仔猪的一种肠毒血症。本病发病突然,头部肿胀,运动失调,出现神经症状、惊厥和麻痹,胃壁、肠系膜和全身水肿。病程短,发病率低,死亡率高。1.发病病原本病是由一定血清型的溶血性大肠杆菌产生的毒素引起的。主要血清型为O2、O8、O138、O139和O141等。本病病原菌形态、染色特性及培养特性和抵抗力等与前述大肠杆菌相似。     

仔猪大肠杆菌K88抗原筛选鉴定方法

应用玻片凝集、琼扩试验、抗Ｄ－甘露糖微量血凝试验（ＭＲＭＨ）证实所购３株大肠杆菌只表达Ｋ８８菌毛；该菌毛的特与资料报道的完全一致。通过比较上述３种方法的敏感性，本文还提出了筛选、鉴定Ｋ８８菌株的可行方法。用ＳＤＳ－ＰＡＱＧＥ分析该菌毛的粗提物表明其中含有一种分子量为２４０００Ｄａ的蛋白质，它可能就是Ｋ８８菌毛蛋白。