迟钝爱德华氏菌鞭毛蛋白的提取与分析

采用不同的方法提取迟钝爱德华氏菌鞭毛蛋白(Edwardsiella Tardaflagellin,ETF),选出合适的方法提取ETF,同时制备了ETF的鼠抗血清和迟钝爱德华氏菌菌株ETY全菌的鼠抗血清,通过ELISA法和Western blottig法分析了ETF的抗原性和免疫原性。试验结果表明,酸化高速离心法可获得高纯度分子量约为44 kDa的ETF,该蛋白可被爱德华氏菌的全菌鼠抗血清识别,同时由ETF制备的鼠抗血清除了能特异识别该蛋白之外,也可识别爱德华菌菌体裂解产物中44 kDa的蛋白,证实爱德华氏菌鞭毛蛋白具有抗原性和免疫原性,可作为亚单位疫苗的候选抗原。     

黄金鲫内脏类结节病的病原鉴定与药物敏感性试验分析

淡水养殖鱼类结节病是近年来时常爆发的疾病之一,为了有效预防和防治该病,从合肥郊区某养殖场濒死的黄金鲫(鲤鱼♀×鲫鱼♂)体内分离优势致病菌(命名为AH菌株),对其进行了鉴定。采用传统细菌分类方法,测定该菌株的形态特征、生理生化特性和常见药物的敏感性;应用分子生物学方法,对病原菌16S rRNA特异片段进行克隆、序列测定分析。AH菌株与对照鮰爱德华氏菌在形态特征和生理生化特性基本一致。序列分析结果显示分离的AH菌株与鮰爱德华氏菌(AB050826,NR_024769)菌株间基因序列同源性为99.9%以上,在系统发育树上与鮰爱德华氏菌聚为一族。人工回归复感染健康黄金鲫鱼,出现与原发性相似的内脏类结节病症状。药敏实验结果显示:AH菌株对氧氟沙星等11种药物敏感,对四环素等4种抗生素耐药,对磺胺类药物复方新诺明中度敏感。综合分析认为鮰爱德华氏菌是黄金鲫内脏类结节病的重要致病菌,该结果为黄金鲫内脏类结节病有效防控提供有益参考。     

养殖大菱鲆感染迟缓爱德华氏菌的分离、毒力基因及ERIC-PCR分析

为了调查辽宁省葫芦岛市养殖患病大菱鲆Scophthalmus maximus病原菌感染情况,选用迟缓爱德华氏菌Edwardsiella tarda特异性引物对分离菌株进行PCR鉴定,共分离得到22株迟缓爱德华氏菌。结果表明:迟缓爱德华氏菌毒力基因的PCR扩增显示,22株菌均含有kat B、fim A、gad B、esa V等基因;人工感染试验表明,22株迟缓爱德华氏菌感染并致大菱鲆累积死亡率均为100%;ERIC-PCR结果显示,迟缓爱德华氏菌模式菌株(ATCC15947)与分离株可分为2个基因型,分别标记为Ⅰ和Ⅱ型,其中22株迟缓爱德华氏菌分离株均为Ⅱ型,与ATCC15947菌株为Ⅰ型明显不同。本研究结果为养殖大菱鲆迟缓爱德华氏菌感染的防控提供了依据。     

养殖黄颡鱼腹水症病原研究

对近年来黄颡鱼养殖过程中暴发的腹水症的病原进行了研究.病鱼症状主要为游动迟缓,体表、肝脏充血,积有腹水,后期伴有皮肤溃烂等,采用光镜及透射电镜超薄切片观察,生理生化指标鉴定及16S rDNA同源性分析及系统发育树构建等方法,对从多处组织中分离获得的病原菌进行了鉴定:其形态特征及生理生化指标符合迟钝爱德华氏菌特点,GenBank中同源序列检索结果显示,该菌与迟钝爱德华氏菌的16S rDNA序列同源性高达99%,系统进化树中与迟钝爱德华氏菌自然聚为一支.     

大宗淡水鱼细菌性疾病研究进展

细菌性疾病是大宗淡水鱼类的主要疾病之一,本文对大宗淡水鱼类病原菌(爱德华氏菌、鲁氏耶尔森氏菌、弧菌、气单胞菌、荧光假单胞菌、柱状噬纤维菌、鱼害黏球菌、柱状屈挠杆菌)的分类、生物学性状、所致疾病及防治方法等方面的研究概况进行了系统的综述,并对鱼类细菌性疾病的研究前景进行展望。     

迟钝爱德华菌鞭毛基因克隆表达及其免疫学活性分析

从鳗源迟钝爱德华菌Edwardsiella tarda菌株ETY的基因组克隆到其鞭毛基因(flagella gene,ETF)。该基因开放阅读框为1 257bp,编码419个氨基酸,推导的蛋白分子量为43.951kD。ELISA和Western-blotting试验证实表达的蛋白与迟钝爱德华菌菌株ETY表达的鞭毛蛋白具有相同的抗原性和免疫原性。免疫攻毒保护试验证明:经表达产物(ETF-rxA融合蛋白)与ISA佐剂结合免疫的日本鳗鲡对爱德华菌ETY的免疫保护率可达到100%。本试验首次成功实现了ETF基因的高效表达,并初步证实了迟钝爱德华菌鞭毛可诱导产生免疫保护,为进一步研制合适的高效的迟钝爱德华菌鞭毛亚单位疫苗奠定了基础。     

鰤鱼诺卡氏菌感染斑马鱼模型的建立与组织病理学研究

鱼类诺卡氏菌病近年来在我国南方省份不断蔓延,对水产行业造成巨大影响,鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)是鱼类诺卡氏菌病的主要病原,危害约20种海、淡水养殖鱼类。本研究以斑马鱼为模式动物,腹腔接种不同稀释度的强毒株鰤鱼诺卡氏菌ZJ0503,通过临床症状观察、病理剖检、病原菌分离鉴定、Kaplan-Meier生存曲线分析、半数致死剂量(LD_(50))统计和组织病理学研究,初步建立了鰤鱼诺卡氏菌-斑马鱼模型。研究发现攻毒后斑马鱼出现明显的发病症状,鰤鱼诺卡氏菌ZJ0503对斑马鱼的LD50为3.39×106CFU·尾,斑马鱼感染后,肾脏、肝脏、胰脏、鳃、皮肤和肌肉等组织出现明显病理学变化。结果表明,斑马鱼是鰤鱼诺卡氏菌良好的动物感染模型,该动物模型的建立将有助于诺卡氏菌病致病机理的研究和疫苗的研制。     

鱼类神经坏死病毒衣壳蛋白MCP和鮰爱德华氏菌外膜蛋白ompN1融合基因的原核表达

目前在针对鱼类神经坏死病毒的疫苗研究中，主要是将神经坏死病毒某些蛋白作为抗原进行注射免疫，但是传统的注射免疫并不能有效地激发黏膜免疫。笔者将鱼类神经坏死病毒的衣壳蛋白（MCP）与鮰爱德华氏菌的跨粘膜蛋白ompN1融合表达，拟制备能够抵抗神经坏死病毒的粘膜疫苗；利用从NCBI GenBank库里获得的鱼类神经坏死病毒的外壳蛋白MCP和鮰爱德华氏菌的外膜蛋白ompN1的基因序列，将两者进行序列优化与全基因合成，分别构建原核表达载体:MCP-ompN1 pET28a和MCP pET28a和ompN1 pET28a，并在大肠杆菌内分别诱导表达融合蛋白MCP-ompN1，MCP，ompN1后，再利用包涵体纯化及透析复性获得MCP-ompN1，MCP，ompN1蛋白。SDS-PAGE结果显示，原核表达纯化得到了较纯的MCP-ompN1 融合蛋白，Western Blotting结果表明，纯化得到的MCP-ompN1 融合蛋白不仅具有MCP抗原性，还具有ompN1抗原性。本实验通过原核表达纯化得到了鱼类神经坏死病毒衣壳蛋白MCP和鮰爱德华氏菌外膜蛋白ompN1的融合蛋白MCP-ompN1，为进一步验证融合蛋白MCP-ompN1能否作为抵抗神经坏死病毒的粘膜疫苗奠定了基础。     

鮰爱德华氏菌的红色荧光蛋白标记及其应用

为研究鮰爱德华氏菌与宿主的相互作用关系,本研究构建带有红色荧光蛋白基因的pM DmC herry表达载体,通过电击转化法将载体成功导入鮰爱德华氏菌zbl141菌株中,获得了红色荧光蛋白标记的鮰爱德华氏菌菌株。在倒置荧光显微镜下观察,重组鮰爱德华氏菌显示特异性红色荧光。稳定性检测结果表明,标记菌株传至28代,重组质粒稳定率仍为100%。用标记菌株感染斑马鱼仔鱼后,能在激光共聚焦显微镜下实时观察到细菌在鱼体内的分布情况;标记菌株体外感染小鼠巨噬细胞后,也能观察到病原菌与巨噬细胞的相互作用情况。说明标记菌株具有良好的特异性和可视性,为鮰爱德华氏菌对宿主的致病性研究提供了一种良好的生物材料。     

牛蛙常见病原菌对青蛙的致病性研究

用克氏耶尔森氏菌、奇异变形菌、不动杆菌和爱德华氏菌等４株牛蛙致病菌，在相同条件下分别感染牛蛙和青蛙，均可发病和死亡，且两种蛙感染同一病原菌后的症状及病变也相同，证实青蛙对牛蛙的常见传染病有易感性，是牛蛙病发生的重要传染来源之一。     

鄱阳湖沿湖渔区养殖鱼类车轮虫病调查初报

对鄱阳湖沿湖渔区 1 1个县进行了调查 ,初步结果为 :镜检出车轮虫 1 2种 ;养殖鱼类对车轮虫的整体感染率依次为草鱼 >鳙鱼 >鲤鱼 >团头鲂 >白鲢 >白鲫 ;一般利用池塘水进行人工繁殖的水花鱼苗 ,其车轮虫感染率为 1 0 %～ 35 % ,利用循环用水或有机物含量较高的水源孵化鱼苗时 ,鱼苗的感染率则成倍提高 ;车轮虫对夏花鱼种的感染率达1 0 0 % ,且主要以大型车轮虫为主。秋片鱼种以上规格的鱼体主要感染小车轮虫。适宜车轮虫繁殖、生长的水温为 1 8～ 30℃ ,车轮虫可诱发某些细菌性鱼病。探讨了车轮虫的综合防治措施 ,包括切断传染源、用生石灰清塘消毒、用 1～2mg/kg硫酸铜与硫酸亚铁混合液 (5∶2 )杀虫等。     

鱼源维氏气单胞菌的研究进展

维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)是一种可感染包括鱼类、人类在内的多种动物的革兰阴性菌，尤以水生变温动物为甚。此病原菌中的某些菌株致病性较强,可以导致感染该菌的鱼类表现出多种病症，如败血症等，严重时会导致死亡。该菌当前已在全球包括我国在内的部分地区对水产养殖造成了较大经济损失。综述了维氏气单胞菌的研究进展和新进报道，旨在报道维氏气单胞菌的分类地位、毒力因子、耐药性等特征，为水产养殖中防治此类细菌病提供新思路，并勘正当前对维氏气单胞菌部分毒力因子的同物异名现象。     

Antibiotic Resistance and Heavy Metals Tolerance in Gram-Negative Bacteria from Diseased American Bullfrog （Rana catesbeiana） Cultured in Malaysia

A total of 140 bacterial isolates have been successfully isolated from various organs of diseased American bullfrog （Rana catesbeiana） cultured in Malaysia. The most frequently isolated bacteria was Edwardsiella spp. （46 isolates） followed by Aeromonas spp. （33 isolates）, Flavobacterium spp. （31 isolates）, and Vibrio spp. （30 isolates）. Majority of the bacterial isolates were found sensitive to furazolidone （85.0%）, chloramphenicol （85.0%）, oxolinic acid （90.0%）, florfenicol （95.0%）, and flumequine （97.5%）. On the other hand, most of the bacterial isolates were resistant to oleandomycin （77.5%） and lincomycin （87.5%）. Nitrofurantoin and flumequine can be inhibited the growth of all of Vibrio spp. whereas all isolates of Edwardsiella spp. were found sensitive to florfenicol and flumequine. Multiple antibiotic resistance （MAR） index were in range of 0.30-0.40, indicating that bacterial isolates from cultured bullfrogs may have received high risk exposure to the tested antibiotics. In addition, 90-100% of the isolates were resistant to copper, cadmium, and chromium. These results provided insight information on tolerance level of bacterial isolates from cultured bullfrogs to 21 antibiotics as well as heavy metals.     

应用微机对常见鱼病自动诊断

本文根据鱼病学家,总结多年实践工作所积累的经验,充分利用计算机逻辑判断的特点,用微机对常见鱼病进行诊断的初步探索。在无专家帮助的条件下,一旦发生常见鱼病,本诊断程序有助于迅速地对发生的病情作出判断,尽快采取紧措施,以避免发病后造成重大的损失。     

气单胞菌和嗜水气单胞菌双重PCR检测方法的建立

针对GenBank中登录的气单胞菌属(Aeromonas)的毒力基因甘油磷脂胆固醇酰基转移酶基因(GCA T)和嗜水气单胞菌(Aeromonash ydrophila)的16S rRNA基因的保守区设计2对特异性引物.通过进行双重PCR反应体系优化,PCR产物的测序鉴定和特异性试验,建立了一种能同时检测气单胞菌(Aer...     

鱼用基因工程疫苗研究进展

疫苗是目前控制鱼类病害最经济有效的方式。免疫学及生物工程的迅速发展极大地促进了鱼类基因工程疫苗的研究。基因工程疫苗克服了传统疫苗的一些缺陷和不足，显示出巨大的应用前景，已成为国内外水产养殖业的研究热点，近年对鱼用基因工程疫苗的研究已取得较大进展，但鱼用基因工程疫苗在研究和应用过程中也面临着急需解决的若干问题。     

金泽水库鱼类的群落结构和资源量

通过2017年9月到2019年12月按季节共9次对金泽水库运行初期进行了鱼类资源的调查，分析了鱼类群落结构特征，并用水声学DIDSON 双声纳鱼探仪对金泽水库的鱼类资源量进行了探测，结果如下：共调查到30种鱼类，隶属于5目7科，其中淡水型鱼类28种、河口性1种、洄游性1种；草食性、植食性、滤食性、杂食性、初级肉食性和次级肉食性鱼类分别有2、3、2、9、5和9种; 渔获物中滤食性鲢和鳙无论在个体数还是重量均排在第一位；优势种（IRI>1000）有鲢、鳙、鲫和刀鲚；水声学双声纳鱼探仪探测金泽水库目前的资源量约在13.33万尾、11.58万kg，鱼产力处在高产水平。现在的鱼类群落结构与水库建成投入使用前相比，已有较大的差异；现有鱼类与太湖鱼类区系相似性高。 关键词：金泽水库；鱼类；群落结构；运行初期；资源量     

环境胁迫因子对鱼类氧化压力的影响

活性氧(ROS)是鱼类生活中不可或缺的成分,一般情况下ROS的产生与分解都处于稳定的动态平衡中。这种平衡一旦被打破,ROS含量上升,细胞组分发生改变,机体将产生氧化压力。综述了鱼类对ROS的应对方式,并对氧化压力进行了定性分析。环境胁迫因子(如温度、氧含量、盐浓度、过渡金属离子和农药等)能通过改变ROS的产生和分解的平衡来改变自然条件和人工条件下的氧化压力。该领域未来发展的方向将对氧化压力进行更精确地描述,包括其主要特性和作用机理。研究鱼类氧化压力对发育学、衰老学、病理学能起到一定的作用。     

不同贮藏条件对新疆赤鲈鲜度和质构特性的影响

将赤鲈鱼分别在0、-5、-18℃贮藏,分析其肌肉组织失水率、新鲜度、质构性能的变化,以研究赤鲈在不同贮藏条件下鲜度和质构性能的变化.结果表明,在0℃贮藏,鱼肉失水率低,硬度、咀嚼性和弹性均能很好地保持,但保鲜期短,贮藏仅12d就已不可食用.在-18℃冷冻贮藏,微生物生长繁殖几乎被完全抑制,贮藏30 d后鲜度几乎与新鲜鱼相同,但冷冻贮藏的鱼解冻后汁液流失严重,鱼的质构性能下降较明显.赤鲈在-5℃微冻贮藏,与-18℃冷冻贮藏相比,解冻后失水率较小、质构特性保持较好,保鲜期较0℃冰鲜贮藏长,经18 d,TVB-N值仍符合国家水产品一级新鲜标准,贮藏27 d后鱼肉仍可食用.     

7种常用渔药及组合对致病性鮰爱德华氏菌的体外抗菌试验

为探讨7种常用抗菌渔药对致病性鮰爱德华氏菌的体外抗菌作用,采用2倍稀释法测定了7种渔药对致病菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),在初筛MIC的基础上,以MIC、5倍MIC、10倍MIC和20倍MIC下平板抑菌圈直径为参数,分别比较5种药物抗菌效果并优化最佳参数;利用优化的最佳参数比较5种药物单独用药与联合用药对鮰爱德华氏菌的抑菌效果.结果表明,抗菌先锋对鮰爱德华氏菌的MIC和MBC最小,分别为3.2和6.4μg/mL,其次是伯乐立康,分别为12.8和25.6μg/mL,而鱼康和肠炎烂鳃灵的浓度为1638.4μg/mL时仍无抗菌效果;5倍MIC下抑菌圈直径为筛选抗菌药物的最佳参数,5倍MIC下,鮰爱德华氏菌对抗菌先锋高度敏感,对伯乐立康、菌必清、菌毒康和海鱼安中度敏感;菌必清+抗菌先锋的联合抗菌效果最佳.