金霉素微囊颗粒在猪体内的比较药动学研究

【目的】采用高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）建立了金霉素在猪血浆中的药动学检测方法,以三元健康杂交猪为对象,研究了10%和15%金霉素微囊颗粒在猪体内的药物代谢动力学,为金霉素的临床应用提供依据。【方法】16头大长白三元杂交猪,体重(20±2.5)kg,随机分为禁食组和非禁食组2组,采用三药剂三周期三交叉试验设计,分别按10 mg·kg^-1 b.w.静注盐酸金霉素溶液、40 mg·kg^-1 b.w.灌服10%和15%金霉素微囊颗粒。每次给药间隔为7 d,根据试验前设定好的时间点采集血样,分离血浆,进行HPLC-MS/MS测定,血药浓度-时间数据采用WinNonlin5.2.1软件非房室模型处理,计算主要药动学参数。血浆样品用0.1 mol·L^-1 Na₂EDTA-McIlvaine缓冲液超声提取,HLB固相萃取柱净化,35℃水浴吹干后用甲醇定容,进行HPLC-MS/MS分析测定。色谱柱为CNW C₁₈柱;流动相为乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱,流速为0.25 mL·min^-1;电喷雾离子源,多级反应监测正离子模式,外标法定量。猪血浆中金霉素的检测限为5 ng·mL^-1,定量限为10 ng·mL^-1,在5—500 ng·mL^-1范围内,方法的线性关系良好,低、中、高三个添加水平下,金霉素的平均回收率为76.90%—89.25%,批内、批间变异系数分别为2.97%—9.45%、6.16%—13.39%。该方法准确、灵敏,适用于金霉素在猪血浆中的测定。【结果】禁食组静注盐酸金霉素溶液主要药动学参数：AUC_0-∞为（57.42±23.53）mg·h·mL^-1,V/F为（5.67±2.12） L·kg^-1,MRT为（13.87±2.00）h,t_1/2为（19.93±5.26）h;分别灌服10%金霉素微囊颗粒和15%金霉素微囊颗粒后主要药动学参数：AUC_0-∞分别为（34.46±10.28 ）mg·h·mL^-1和（33.15±12.76） mg·h·mL^-1,C_max分别为（2.48±1.05） mg·mL^-1和（2.97±1.88 ）mg·mL^-1,T_max分别为（4.88±1.25）h和（3.13±1.55）h,V/F分别为（31.53±15.98）L·kg^-1和（32.30±9.69）L·kg^-1,MRT分别为（19.93±3.83）h和（17.41±1.80）h,t_1/2分别为（16.87±3.49）h和（17.13±3.58）h,F分别为（17.03±0.08）%和（15.82±5.16）%。非禁食组静注盐酸金霉素后药动学参数：AUC_0-∞为（37.58±21.30）mg·h·mL^-1,V/F为（12.59±6.43） L·kg^-1 ,MRT为（22.17±14.47）h,t_1/2为（27.79±12.82）h;分别灌服10%金霉素微囊颗粒和15%金霉素微囊颗粒后药动学参数：AUC_0-∞分别为（20.81±7.46）mg·h·mL^-1和（19.72±5.69）mg·h·mL^-1,C_max分别为（1.02±0.38）mg·mL^-1和（0.95±0.32）mg·mL^-1,T_max分别为（6.38±4.44）h和（8.00±5.24 ）h,V/F分别为（52.40±22.90） L·kg^-1和（52.47±19.69） L·kg^-1,MRT分别为（24.67±9.52）h和（23.37±4.21）h,t_1/2分别为（18.57±10.67）h和（16.64±5.12）h,F分别为（16.07±6.78）%和（15.26±5.26）%。【结论】灌服10%金霉素微囊颗粒（40 mg·mL^-1 b.w.）及15%金霉素微囊颗粒（40 mg·mL^-1 b.w.）后,药物在猪体内吸收缓慢,分布广,消除较慢,生物利用度低。与禁食组相比,非禁食组10%和15%金霉素微囊颗粒达峰时间更慢、峰浓度更低,但表观分布容积更大,生物利用度偏低,但统计学差异不显著。表明饲料不影响金霉素在猪胃肠道中的吸收,但会改变金霉素进入体内的药代动力学过程。     

金霉素对獭兔盲肠菌群和免疫功能的影响

为研究饲用金霉素对獭兔盲肠菌群和免疫功能的影响,采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCRDGGE)和实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析獭兔盲肠菌群;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞因子;qPCR技术对TLR2、TLR4mRNA进行定量检测。试验分为2组:对照组饲喂基础日粮;金霉素组在基础日粮中添加金霉素50mg/kg。结果表明:1)PCR-DGGE图谱显示,与对照组比较,金霉素组盲肠菌群结构和多样性等没有显著变化(P0.05);2)qPCR检测金霉素组普雷沃氏菌属数量是10.48(logcopy/g),对照组是10.10(logcopy/g),差异显著(P0.05);3)金霉素组獭兔外周血细胞因子IL-2、IL-4、TNF-α的浓度显著升高(P0.05),脾脏和肝脏指数均降低;4)回肠的TLR2、TLR4mRNA相对表达量和肝脏的TLR2 mRNA相对表达量均高于对照组,但差异不显著(P0.05)。在饲料中添加50mg/kg金霉素,对獭兔盲肠菌群结构和免疫功能均没有显著影响。     

硼砂对绵羊瘤胃微生物数量、酶活性及血液生化指标的影响

将8只装有瘘管绵羊分为2组,采用反转试验设计,研究在基础日粮中添加2g·kg-1日粮的硼砂对绵羊瘤胃微生物数量的影响。选用4只装有瘘管绵羊,采用4×4拉丁方设计,4种处理为:A组(基础日粮,对照组)、B组(基础日粮+1g硼砂·kg-1日粮)、C组(基础日粮+2g硼砂·kg-1日粮)和D组(基础日粮+25mgAHA·kg-1日粮),研究饲喂硼砂对绵羊瘤胃酶活性及血液生化指标的影响。结果表明,饲喂2g·kg-1日粮硼砂对绵羊瘤胃细菌和原虫数量未产生影响。与对照组相比,B组、C组和D组蛋白水解酶活性分别比对照提高108.2%,200.39%和173.8%,其中C组差异达显著水平(P<0.05)。与对照相比,添加脲酶抑制剂各组,脲酶活性略有降低,纤维素酶、总脱氢酶和淀粉酶活性略有升高,但均未达到显著水平(P>0.05)。饲喂硼砂对绵羊血液生化指标未产生影响。说明1～2g·kg-1日粮的硼砂添加量对绵羊是安全的。     

日粮粗精比对奶牛瘤胃液和血清乙酸、丙酸、丁酸的影响

【目的】研究不同日粮精粗比条件下奶牛瘤胃pH,挥发性脂肪酸(VFA,主要包括乙酸、丙酸、丁酸)浓度和血清乙酸、丙酸、丁酸浓度的动态变化规律。【方法】选用5头健康的干奶期荷斯坦奶牛(体重(502±25)kg),饲喂精粗比(质量比)分别为30∶70、35∶65、40∶60、45∶55、50∶50、55∶45、60∶40、70∶30和100∶0的9种日粮,对奶牛瘤胃内pH、VFA和血清VFA浓度进行检测。对5头奶牛连续进行9期饲喂试验,前8期试验每期30 d,最后一期试验为3 d。【结果】随日粮中精料比例的提高,奶牛瘤胃pH逐渐降低,其中饲喂精粗比为100:0日粮组的奶牛瘤胃pH显著低于其他精粗比日粮(P<0.05);精粗比为55∶45日粮组的奶牛瘤胃乙酸、丙酸和丁酸浓度,显著低于粗精比为30∶70、35∶65、40∶60、45∶55日粮组(P<0.05);精粗比50∶50日粮组奶牛血清乙酸浓度显著低于粗精比为30∶70、35∶65和100∶0日粮组(P<0.05);不同精粗比日粮条件下,奶牛血清丙酸和丁酸浓度组间差异不显著(P>0.05);血清乙酸和丁酸浓度与瘤胃中乙酸、丁酸浓度无明显相关性(P>0.05),但血清丙酸浓度与瘤胃丙酸浓度间呈极显著负相关性(P<0.01)。【结论】不同精粗比日粮对奶牛瘤胃pH、VFA和血清丙酸具有显著影响,奶牛在饲喂过程中逐渐对精料产生了耐受性,获得了稳定的瘤胃生态系统。     

畜禽排泄物中金霉素残留的测定方法

建立了猪粪便、猪尿液和鸡排泄物中金霉素残留的提取和色谱分析方法.先用提取液(丙酮 水 4mol/L盐酸,体积比为13∶6∶1)处理畜禽排泄物样品,提取样品中的金霉素,再用高效液相色谱仪检测其中的金霉素含量,色谱条件:流动相为0.01 mol/L乙二酸 甲醇 已腈(体积比为10∶2∶3),固定相为ZORBAX SB-C18,检测器波长为375 nm.结果表明:在上述色谱条件下,0.2～10.0 μg/ml金霉素标准溶液的金霉素峰面积与其质量浓度呈线性相关关系(R2=0.999 9);当金霉素添加浓度为0.5～5.0 mg/kg时,添加回收率为79.60%～92.78%,变异系数为3.88%～10.20%;该方法的检测限为0.5 mg/kg.     

杆菌肽锌和金霉素对蛋鸡产蛋性能和蛋品质的影响机理

选300日龄罗曼蛋鸡576羽,随机分为三组,每组设四个重复,每一重复48羽。饲喂相同的基础饲粮,两试验组饲粮分别添加50 mg/kg杆菌肽锌和100 mg/kg金霉素。试验为期90 d,进行屠宰测定,并对血液激素水平和常规生化指标进行分析。结果显示：饲粮中添加杆菌肽锌和金霉素均能显著提高产蛋率(P<0.05)、蛋壳厚度(P<0.01)和蛋壳相对重(P<0.05),降低料蛋比(P<0.05)。但对采食量、蛋重、蛋比重、蛋黄指数、蛋形指数和哈夫单位无明显影响(P>0.05)。它们还显著提高了血清中促黄体生成素、促卵泡生成素和甲状旁腺素水平(P<0.05),且明显降低了尿酸的含量和超氧化物歧化酶活性(P<0.05)。此外,金霉素还显著提高了碱性磷酸酶活性(P<0.05)。     

硫化钠对绵羊瘤胃微生物的影响

本试验旨在研究硫化钠对瘤胃微生物生长情况的影响。试验采用装有永久性瘤胃瘘管的内蒙古半细毛羊羯羊4只,以玉米秸杆加精料为基础日粮(精粗比为2:8),研究日粮干物质中的不同硫含量分别为0.12%(对照组)、0.18%(水平1组)、0.25%(水平2组)、0.30%(水平3组)时,对瘤胃微生物的影响。结果表明,在低硫日粮的条件下,添加硫化钠能促进瘤胃微生物的生长。瘤胃原虫的数量在水平1组时达到最大(9.11×105/m l),显著高于对照组(p<0.05);而瘤胃细菌和真菌的总数在水平2组达到最大,分别为14.61×108/m l、11.23×103/m l,显著高于其它几组(p<0.01)。     

甘露寡糖、糖萜素及金霉素在肉仔鸡饲粮中添加效果的研究

采用 2× 4二因子试验设计方案 ,通过饲养试验和微生物试验 ,比较了甘露寡糖、糖萜素和金霉素对肉仔鸡生产性能及肠道菌群的影响。结果表明 ,(1)经过金霉素前处理 (5 0 0 mg· kg- 1 ) ,盲肠菌群数量无论是厌氧菌还是好氧菌都显著降低 (P <0 .0 5 ) ,且生产性能得到提高 (P <0 .0 5 )。 (2 )在肉仔鸡粮中添加 5 0 mg· kg- 1金霉素未表现出明显提高生产性能的效果 ,甘露寡糖能够改善肠道菌群状况 ,糖萜素对肠道菌群未表现显著影响 ,但能够显著提高生产性能。     

瘤胃微生物蛋白质合成测定方法的研究

采用不完全拉丁方设计给5头装有瘤胃和真胃瘘管的绵羊饲喂7种不同日粮,其日粮中加入三氧化二铬(Cr_2O_3)和聚乙二醇(PEG)作真胃食糜标记物,当用核糖核酸(RNA)作瘤胃微生物蛋白质合成标记物时,测定每千克瘤胃表观可发酵有机物(FOM)和瘤胃表观可发酵碳水化合物(FCHO)合成瘤胃微生物蛋白氮(M-N)的效率分别是26.96gM-N/kgFOM 和27.36gM-N/kgFCHO;用2,6-二氨基庚二酸(DAPA)作标记物时,测定值相应微生物蛋白氮的效率为26.90和26.97。用 RNA 作标记物测定瘤胃微生物蛋白质合成时,日粮降解蛋白质氮转化为微生物氮的利用效率为0.81。     

密蒙花颗粒的急性毒性实验研究

目的 观察密蒙花颗粒对小鼠的急性毒性反应及死亡情况,为临床应用安全性提供依据。方法 将30只小鼠分别用不同浓度及最大浓度密蒙花颗粒混悬液灌胃进行预实验,观察7 d未见小鼠死亡,无法测出LD₅₀,故进行最大耐受量（MTD）的测定。将40只小鼠随机分为给药组和空白对照组,根据小鼠可承受的最大体积分别用最大混悬浓度的密蒙花颗粒和蒸馏水1 d内灌胃2次,连续观察14 d,每天记录小鼠的一般状况、体质量,14 d后处死动物,测定小鼠的血常规指标,肝、脾、肾等主要脏器指数,观察解剖学及病理组织学改变情况。结果 给药组小鼠无死亡,与空白对照组比较,给药组小鼠的体质量变化无显著差异（P>0.05）,血常规指标与空白对照组亦无显著差异（P>0.05）,小鼠密蒙花颗粒日最大耐受量为114 g/kg。结论 急性毒性结果表明,密蒙花颗粒临床常用量是安全的。     

金霉素多克隆抗体的制备与鉴定

    研究制备能有效用于金霉素残留检测的特异性多克隆抗体采用戊二醛法和混合酸酐法合成2种不同的金霉素-BSA完全抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,应用ELISA法鉴定抗金霉素多克隆抗体结果表明,2种血清的抗体效价最高均达32×105,而戊二醛法制备的抗原产生的抗体具有更高的亲和力,抑制率为50%时的金霉素的质量浓度(IC50)为962 μg·mL-1,金霉素的最低检测限为667 ng·mL-1,金霉素和四环素的交叉反应率为77%研究结果为畜产品中四环素类抗生素残留的检测奠定了较好的基础     

玉米秸秆生物质炭对外源金霉素的吸持与解吸

【目的】针对环境中抗生素污染日益严重的问题,通过室内分析试验研究玉米秸秆生物质炭对外源金霉素的吸持与解吸特性,以期为合理处理含金霉素废水和消减畜禽粪便中四环素类抗生素污染提供理论参考和技术支持。【方法】采用 OECD Guideline106批平衡方法研究了玉米秸秆生物质炭对金霉素的吸持动力学和吸持解吸热力学特征。【结果】玉米秸秆生物质炭对金霉素的吸持动力学过程包括快速反应和慢速平衡两个阶段,适合用伪二级动力学方程进行拟合（平均R2为0.9999）,反应进行12 h时基本达到吸持平衡;不同温度下吸持等温线能用Freundlich方程进行很好地拟合（平均R2为0.9174）,玉米秸秆生物质炭对金霉素有很大的吸持容量（lgKf为3.6575-3.7377)和吸持强度（1/n为0.8647-1.0478）,且均随温度升高而增大,吸持等温线随温度升高由“L”型逐渐趋于线型;生物质炭对金霉素的吸持作用是自发进行的、熵推动的吸热过程,主要吸持机制为物理吸持;金霉素在生物质炭上的解吸率为2.57%-6.99%,且随环境温度的升高显著降低。【结论】玉米秸秆生物质炭能够强烈吸持溶液中的金霉素且解吸率较低,因此玉米秸秆生物质炭对外源金霉素有很好的去除效果。     

高效液相色谱法测定金霉素药渣中金霉素的含量

采用反相高效液相色谱法测定金霉素药渣中金霉素含量的方法研究。用C18分析柱 ( 3 .9× 15 0mm ,5 μm)。 0 .1mol/L草酸铵 -二甲基甲酰胺 - 0 .2mol/L磷酸二氢钾 ( 68:2 7:5 )为流动相。紫外检测器 :λ =3 70nm ,柱温 40℃ ,在 2 .5 - 10 0 μg/mL之间呈良好的线性关系 ,相关系数R =0 .9991,平均回收率为 98.3 4%。本法简便、快速、准确。适合于金霉素药渣及饲料中金霉素含量的测定     

蚯蚓对金霉素污染土壤酶活性和微生物群落的影响

为探究蚯蚓对抗生素污染土壤酶活性和微生物群落的影响,选取金霉素为目标污染物,威廉环毛蚓（内层种）和赤子爱胜蚓（表层种）为实验生物,通过高效液相色谱-串联质谱法、土壤酶试剂盒（微板法）、高通量测序技术和冗余分析对土壤中金霉素残留、酶活性和微生物群落进行了测定与分析。结果表明：经过28 d的培养,蚯蚓处理组中金霉素浓度（0.022 4~1.006 0 mg·kg^-1）显著低于对照组土壤（0.033 5~1.585 0 mg·kg^-1）。金霉素抑制了土壤脱氢酶、蔗糖酶、脲酶和碱性磷酸酶的活性,激活了过氧化氢酶的活性。两种蚯蚓均激活了土壤脱氢酶、过氧化氢酶、蔗糖酶和脲酶的活性,最大激活率分别为77.80%~88.50%、4.00%~6.16%、69.20%~72.60%、43.20%~48.80%;碱性磷酸酶的活性受到抑制,最大抑制率为23.8%~25.0%。高通量测序结果表明两种生态型蚯蚓均可改变土壤中细菌群落结构,不同蚯蚓类型对细菌群落结构的影响存在有差异。两种蚯蚓的加入均未改变土壤中优势菌门的组成,但都改变了其丰度占比。在属水平上,Flavobacterium、Aeromonas、Luteolibacter、Adhaeribacter和Pseudomonas等潜在金霉素降解菌被两种蚯蚓刺激丰度显著增加,加速了土壤中金霉素的降解。冗余分析结果表明,土壤中pH、有机质含量、金霉素浓度和细菌群落结构是影响土壤酶活性变化的重要因子。研究表明,威廉环毛蚓对脱氢酶、蔗糖酶和脲酶的促进作用优于赤子爱胜蚓。     

三种抗生素对蔬菜种子芽与根伸长的生态毒性效应

采用水培法研究金霉素(Chlortetracycline,CTC)、诺氟沙星(Norfloxacin,NFLX)、磺胺对甲氧嘧啶(Sulfametoxydiazine,SMD)三种抗生素对黄瓜、油菜、小白菜三种蔬菜种子芽和根伸长的影响,比较分析了抗生素的生态毒性差异和相对敏感的蔬菜与指标。结果表明:(1)根长是更为敏感的生态毒性指标;(2)三种抗生素对黄瓜的生态毒性依次是金霉素磺胺对甲氧嘧啶诺氟沙星,对油菜和小白菜的生态毒性则分别是磺胺对甲氧嘧啶金霉素诺氟沙星和磺胺对甲氧嘧啶诺氟沙星金霉素;(3)三种蔬菜对于金霉素和磺胺对甲氧嘧啶胁迫的敏感性均为油菜小白菜黄瓜,而对于诺氟沙星胁迫的敏感性依次是小白菜黄瓜油菜。该结果为评价抗生素污染对生态环境和人体健康的潜在影响提供了理论依据。     

金霉素在鸡排泄物中的残留及降解动态

研究了肉鸡经由饲料摄入不同剂量金霉素后其排泄物中金霉素残留量的变化,以及不同处理条件下排泄物中金霉素残留的降解动态.结果表明:肉鸡分别摄入含金霉素204.23 mg-kg-1和589.66 mg·kg-1饲料,分别有62.37%和79.84%的金霉素被排入排泄物;排泄物中的金霉素残留浓度分别在6和8 h达到峰值,然后逐渐减少,到50和72 h分别降到检测限以下.金霉素在鸡排泄物中的降解动态符合一级动力学方程(R2>0.993 7) .排泄物中金霉素的降解方式主要是微生物降解和光解,并且与排泄物中金霉素含量有关,金霉素含量越高,降解半衰期越长.灭菌和避光处理明显减缓了金霉素的降解速率,灭菌兼避光处理组半衰期为138.62 d,避光未来菌组半衰期为63.01 d,光照未灭菌处理排泄物中金霉素含量从高到低为33.57、20.34和10.49 mg·kg-1,其半衰期分别为67.29、37.87和13.46 d.这表明肉鸡经饲料服用金霉素后有较高比例金霉素以原形形式随排泄物排出,且不易被降解.提示排泄物中高含量金霉素残留存在较大环境风险.     

壳寡糖与金霉素在肉仔鸡生长性能上的对比效应

试验选用400羽1日龄健康肉公雏[初始体重为(43.0±0.4)g]以研究壳寡糖与抗生素(金霉素)对肉仔鸡生长性能的对比效应。试验鸡按完全随机区组设计分为4个处理,每个处理5个重复,每个重复20羽鸡。处理1为金霉素组,其前期(1~21日龄)和后期(22~42日龄)添加量分别为80 mg/kg和50 mg/kg;处理2至4为壳寡糖组,3组前期添加量分别为50 mg/kg、100 mg/kg、150 mg/kg,后期添加量同前期。试验期为42 d,分别在21日龄和42日龄计算肉仔鸡的平均日增重、日采食量和饲料转化效率。结果表明,4个处理肉仔鸡在1~21日龄时平均日增重和日采食量差异均不显著(P>0.05)。当壳寡糖水平为100 mg/kg和150 mg/kg时,22~42日龄和1~42日龄的肉鸡日增重和日采食量均显著高于金霉素组(P<0.05)。壳寡糖和金霉素组肉鸡之间的饲料转化效率差异不显著(P>0.05),但随着壳寡糖剂量的增加,22~42日龄和1~42日龄肉鸡的饲料转化效率呈现出改善趋势(P=0.10;0.16)。由此可知,肉仔鸡日粮中添加一定水平的壳寡糖具有较好的促生长效果并能用于替代肉鸡日粮中的金霉素,本试验获得的最佳添加量为100 mg/kg。     

金霉素对肉鸡生长、肠道菌群和细菌酶、肠组织形态的影响

取1日龄AA商品代混合雏鸡160只,随机均分2组,分别饲喂添加含0 mg/kg(对照)和50mg/kg金霉素的玉米豆粕型日粮42 d.24 h光照,笼养,粉料饲喂,自由采食和饮水.结果表明:金霉素有明显的促生长作用,并显著改善1～21日龄段的饲料转化效率;金霉素可降低肠道梭菌和大肠杆菌数,但对总需氧菌、总厌氧菌和乳酸杆菌数均未产生显著影响;金霉素能降低肠道中β-葡萄糖苷酶和β-葡萄糖苷酸酶的活性,改善小肠粘膜组织的形态结构.