大叶蒲公英愈伤组织耐盐突变体诱导与鉴定

为获得大叶蒲公英耐盐突变体,以其叶片为外植体,进行了愈伤组织耐盐突变体的筛选。结果表明,愈伤组织诱导和增殖的最佳培养基分别为MS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 0.04 mg/L与MS+6-BA 0.4 mg/L+2,4-D 0.02 mg/L+NAA 0.2 mg/L。将继代培养5次的愈伤组织接种在含有不同质量浓度盐的诱导培养基上,经过4次耐盐胁迫,筛选出了耐盐的愈伤组织突变体。通过RAPD检测发现,在NaCl质量浓度为8、10、12 g/L的培养基上愈伤组织扩增条带与不含NaCl的培养基(对照)有差异,证明耐盐的愈伤组织中确实产生了DNA的突变。     

杜仲愈伤组织继代培养条件的优化

为了建立杜仲愈伤组织再生体系,为转基因研究提供平台,以成熟胚诱导的浅黄色愈伤组织和幼胚诱导的乳白色愈伤组织为材料,研究不同培养基、继代时间、继代次数对杜仲愈伤组织生长和不定芽诱导的影响。结果表明:浅黄色愈伤组织继代培养后具有不定芽的分化能力,乳白色愈伤组织继代培养后褐化死亡;愈伤组织继代培养基为MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.05mg/L,继代周期为18d;愈伤组织继代次数对愈伤组织增殖有显著影响,以继代4次的增殖倍数最高,达2.5;愈伤组织继代次数对不定芽的诱导有显著影响,以继代2次的愈伤组织不定芽诱导率最高,达到66.7%,继代4次的愈伤组织不定芽的增殖系数最高,为3.2。     

大叶蒲公英耐盐突变体的筛选与植株再生

为获得大叶蒲公英耐盐突变体再生植株,以其叶片为外植体,将诱导出的愈伤组织经过不同浓度耐盐胁迫处理,经过筛选与随机扩增多态性DNA(RAPD)检测,确定了耐盐愈伤组织突变体。再分别通过诱导突变愈伤组织形成不定芽和不定根,获得了耐盐突变体的再生植株。结果表明,大叶蒲公英愈伤组织诱导最适培养基为MS+0. 5 mg/L 6-BA+0. 04 mg/L 2,4-D,耐盐突变体不定芽发生的最适培养基为MS+0. 2 mg/L 6-BA+0. 01 mg/L NAA,最适生根培养基为1/2MS+0. 3 mg/L NAA。     

影响"扬稻6号"成熟胚愈伤组织再生植株的因子

以水稻中籼品种“扬稻6号”的成熟胚为外植体材料诱导愈伤组织发生,在愈伤组织继代培养阶段,研究山梨醇、甘露醇、脱落酸、蔗糖和麦芽糖对愈伤组织分化植株能力的影响作用,并探讨在愈伤组织诱导阶段添加6－苄基氨基嘌呤对后期愈伤组织分化植株能力的影响程度。试验结果表明,在愈伤组织继代培养基中添加30g/L山梨醇,3－5mg/L脱落酸和在愈伤组织诱导培养基中附加0.2mg/L 6-苄基氨基嘌呤有利于建立起较高频率的植株再生体系,愈伤组织经过继代培养后其植株再生的频率保持在50％左右。     

超甜玉米自交系成熟胚愈伤组织诱导及再生方法研究

研究超甜玉米自交系1132成熟胚愈伤组织诱导和植株再生频率的影响因素,丰富诱导愈伤组织的外植体来源。以1132成熟胚为材料,通过比较研究蔗糖、脯氨酸、2,4-D等因素对愈伤组织诱导率和分化再生的影响,确定适合1132成熟胚外植体愈伤组织诱导和再生的方法。结果表明,蔗糖浓度40g/L,脯氨酸1.4g/L、2,4-D浓度为4 mg/L的诱导培养基上愈伤组织出现最早,且愈伤组织诱导率最高,达到75%。在继代培养基中2,4-D浓度为2 mg/L,其他相同的条件下,愈伤组织继代性最好,最易产生胚性愈伤组织。植株再生培养通过含60g/L蔗糖的MS培养基培养2~3周,后转入含30g/L蔗糖的MS培养基培养再生植株的方法最好,可实现芽和根的同步再生。利用1132成熟胚诱导产生愈伤组织,并分化再生植株是对幼胚再生体系的有效补充,可以克服玉米基因工程育种研究中幼胚受季节限制的不利条件,丰富甜玉米基因工程育种中外植体的来源。     

玉米体细胞抗盐突变体的筛选及耐盐性鉴定

玉米幼胚所诱导的愈伤组织在继代繁殖后,用NaCl作选择剂,在含质量浓度10～20g·L-1NaCl的N6筛选培养基上连续筛选3代,再转移到无盐的继代培养基上培养3代,得到耐20mg·L-1的抗盐愈伤组织变异体.对愈伤组织相对生长量和游离脯氨酸含量等指标的测定表明,该愈伤组织变异体是耐盐的.耐盐愈伤组织变异体在分化培养基上可分化出再生植株,在10g·L-1NaCl胁迫下耐盐变异体再生植株相对电导率小于对照再生植株,而可溶性糖含量高于对照植株.耐盐株自交得T1代种子,在不同质量浓度NaCl胁迫下测定其发芽率,耐盐变异体后代种子发芽率均高于对照种子发芽率,说明变异体的耐盐性是可遗传的.     

多年生黑麦草品种夜影再生体系的建立

分别以多年生黑麦草品种夜影的成熟胚和生长点为外植体,在6种培养基上进行愈伤组织诱导,比较接种60 d时的诱导率及愈伤组织形态,并将继代培养后的胚性愈伤组织转接到4种不同的分化培养基上进行再生苗分化。结果表明,生长点愈伤组织诱导率和分化率明显高于成熟胚,5.0 mg/L的2,4-D是诱导黑麦草品种夜影愈伤组织的最佳浓度,胚性愈伤组织在添加1.0 mg/L 6-BA的培养基上分化率最高。     

小麦成熟胚愈伤组织的诱导和植株再生

从完整的小麦种子和它的离体胚成功地诱导出了愈伤组织。愈伤组织诱导和继代培养基中2,4-D、VB_1和肌醇的浓度影响植株再生频率。在分化培养基中加入500mg/L 水解酪蛋白促植再生。KT 对于愈伤组织的生长和分化有抑制作用。不同品种愈伤组织的植株再生能力相差很大,京红8号的植株再生频率较高,为76%。     

刺槐子叶的不定芽诱导及植株再生

以刺槐种子在无菌条件下播种生长7 d的子叶为外植体,研究不同植物生长调节剂和继代培养次数对愈伤组织诱导及植株再生的影响。结果表明:生长调节剂种类和质量浓度对刺槐子叶的愈伤组织诱导及愈伤组织再分化有一定影响,刺槐子叶诱导愈伤组织的最佳培养基:MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 0.2 mg/L,诱导率为98.9%,愈伤组织再生不定芽的最佳培养基:MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L,再生率为74.4%。愈伤组织的不定芽诱导率随继代次数的增加呈下降趋势。对刺槐子叶进行了直接诱导不定芽的试验,诱导率最高达87.8%,其培养基为:MS+6-BA 5.0 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L。     

多年生黑麦草成熟种子愈伤组织的诱导和植株再生（摘要）

[目的]探索多年生黑麦草的愈伤组织诱导和植株再生,为多年生黑麦草的转基因研究奠定基础。[方法]以多年生黑麦草成熟种子为外植体,施以浓度不同的外源激素,探讨不同激素组合对愈伤组织诱导、继代培养以及植株分化的影响。愈伤组织诱导以MS培养基为基础培养基,添加300 mg/L水解酪蛋白,300 mg/L脯氨酸,300 mg/L谷氨酰胺,并附加不同浓度2,4-D（2、4、5、8、10 mg/L）和6-BA（0.025、0.100、0.200、0.300、0.400、0.500 mg/L）,pH值调节至5.8。继代培养基为MS＋2,4-D减半的诱导培养基。愈伤组织分化以MS培养基为基础培养基,添加300 mg/L水解酪蛋白,300 mg/L脯氨酸,300 mg/mL谷氨酰胺,并附加不同浓度6-BA（0.50、1.0、2.0、3.0 mg/L）,pH值调节至5.8。[结果]黑麦草在附加了8 mg/L2,4-D和0.025 mg/L6-BA的MS培养基中诱导率最高,达56.42%。愈伤组织经过2～3次继代后分化,分化培养附加2.0 mg/L6-BA,分化率最高,达34.14%,且愈伤组织继代后的状态明显影响分化率,带有毛状根的愈伤组织分化能力明显低于表面光洁的愈伤组织。在大量元素减半的MS培养基中附加0.5 mg/L NAA进行生根培养,生根率达98%。[结论]建立了高频的遗传再生体系,移栽成活率可达98%。     

玉米耐盐愈伤组织变异体筛选体系的建立

为了寻找离体筛选耐盐作物类型的新途径,特选配了4个适于幼胚培养的玉米杂交组合,以其幼胚为外植体,诱导出胚性愈伤组织。继代5次后,用200 mmol/L的NaCl和5.5 mmol/L的Hyp连续筛选3次,获得耐盐愈伤组织变异体。试验确定了适于玉米幼胚培养的诱导培养基和分化培养基,比较了2种筛选剂的选择效果:用Hyp筛选得到的愈伤组织,其分化频率高于用NaCl筛选的愈伤组织;Hyp的选择频率是NaCl的两倍,表明用Hyp间接筛选玉米耐盐变异体,是一条较为合适的途径。     

栽培番茄耐盐突变体的离体筛选

栽培番茄品种“矮黄”的子叶作为外植体诱导愈伤组织 ,用 Na Cl进行直接高盐胁迫筛选。结果表明 ,2 2 5 mmol/LNa Cl直接高盐胁迫获得了耐盐突变体 ,1 0株完整的再生耐盐植株 ,在 1 5 0 mmol/L Na Cl的盐胁迫下 ,成活率可达 70 % ,而未经胁迫筛选过的原始株成活率则为零。其中 ,1株耐盐突变株能正常开花、结果。对其后代离体培养的茎尖和下胚轴外植体耐盐性进行比较 ,表明其后代仍然保持耐盐性     

玉米耐盐愈伤组织变异体的筛选及耐盐性分析

为了筛选玉米耐盐愈伤组织变异体,选用4个适于玉米组织培养基因型的幼胚为外植体,诱导出胚性愈伤组织。继代5次后,分别用200 mmol/L NaCl和5.5 mmol/L Hyp连续筛选3次,获得耐盐愈伤组织变异体,分别称为rn变异体和rh变异体,以普通继代培养基上培养的愈伤组织为对照。经一代回复培养,分别在200,250和300 mmol/L NaCl胁迫下,分别测定了rn变异体r、h变异体和对照愈伤组织存活率,胚性愈伤组织百分率,K+、Na+含量;在300 mmol/L NaCl胁迫下,测定了rn变异体、rh变异体和对照愈伤组织的生长量及脯氨酸含量。结果表明,rh变异体愈伤组织的分化频率高于rn变异体,Hyp的选择频率是NaCl的2倍左右;在不同浓度NaCl胁迫下,rh变异体具有较高的愈伤组织存活率和K+、Na+含量;在300 mmol/L NaCl胁迫下,rh变异体的生长量和脯氨酸含量均最高,表现出了较好的耐盐性。     

番茄耐盐愈伤组织的筛选及显微结构观察

以番茄下胚轴为外植体诱导愈伤组织，转入含10g/LNaCl的筛选培养基上培养，经过3代高盐直接筛选，获得耐盐愈伤组织，进行电镜观察，结果表明，存活下来的耐盐绿色愈伤组织细胞及细胞器（与对照相比）形态结构正常，代谢活动旺盛，而处于死亡状态的浅褐色愈伤组织和解体死亡的黑色愈伤组织细胞及细胞器形态结构异常。     

体细胞突变体筛选法获得象草耐盐植株

以象草幼穗离体培养诱导产生的胚性愈伤组织为外植体,在愈伤组织继代培养基中添加10～0 g/LNaCl,离体筛选得到的白色颗粒状愈伤组织在分化培养基上再生出植株.再生植株耐盐性鉴定结果:6 g/L海盐的1/2 Hoagland营养液每隔7 d浇灌1次,共浇灌4次,处理24 d时,对照植株全部致死;处理42 d时,24 g/L NaC1离体筛选获得的MN12-1和MN12-2体细胞再生植株生长良好.取MN12-1、MN12-2植株和对照株的节间嫩芽组培苗进行耐盐盆栽鉴定:4 g/L、6 g/L海盐的1/2 Hoagland营养液每隔7 d浇灌1次,共浇灌3次,生长28 d时,MN12-1 和MN12-2植株的叶、茎、根干重显著高于对照植株,MN12-2植株各部分的干重比对照植株提高100%以上,差异极显著.SRAP检测结果表明,MN12-1、MN12-2植株与对照植株在分子水平上存在差异,确认获得了耐盐体细胞突变体.     

海雀稗种质资源的耐盐性评价

对海雀稗耐盐体系进行优化，并通过测定坪用质量和枯黄率对27份海雀稗种质资源进行了耐盐性评价。结果表明，7个不同NaCl浓度（0，5，10，15，20，25，30 g·L?1）处理下，坪用质量、枯黄率和叶色各指标之间存在显著差异（P<0.05）。随着NaCl处理浓度的增加，坪用质量显著下降（P<0.05），枯黄率显著增加（P<0.05），叶色显著变浅（P<0.05）。建立回归方程，以枯黄率50%为标准，确定海雀稗最适盐处理浓度为25 g·L?1。利用25 g·L?1 NaCl对27份海雀稗种质资源进行耐盐性评价，筛选出2种极端耐盐种质:USA17-18（耐盐）和USA17-26（敏盐）。对海雀稗耐盐极端材料的钠钾离子含量进行测定，发现盐处理后，地上和地下Na+含量均显著增加，但K+含量和K/Na值都显著下降。减少Na+的摄入，维持较高的K+含量，可能是海雀稗耐盐的机制。     

不同香稻品种种子萌发和苗期对NaCl胁迫的响应

【目的】研究不同香稻品种的耐盐性,筛选出适应新疆盐渍化稻区的香稻耐盐品种。【方法】分析不同NaCl浓度(0、3、6、9和12 g/L)对20个香型水稻品种种子萌发和幼苗生长的影响。【结果】不同香稻品种的发芽势、发芽率、芽长、根长、根数、成活率及叶片成活率均随着NaCl浓度的增加呈下降的趋势;中、高盐浓度(9、12 g/L)显著抑制种子的萌发,降低种子的发芽势和发芽率,缩短芽长和根长,减少根数,致使盐害指数增加;同一盐浓度处理下,不同水稻材料的耐盐表现有差异。【结论】香型水稻品种的芽期和苗期的适宜筛选NaCl盐浓度可为6 g/L,超过其浓度对水稻的萌发及苗期生长均不利;粮香6-4香型品种的芽期和苗期的综合耐盐性好,97-4-3、粮香2-1、新策粳1号、新粳香1号、新粳香83号和新粳香8号的芽期耐盐性强,以上香稻品种可作为耐盐的香稻品种或资源进行利用。     

狗牙根耐盐性材料初步筛选

狗牙根（Cynodon dactylon）是暖季型草坪草中得分最高,应用最广泛的草种之一,具有耐盐碱,生长快、建坪迅速等优点。本试验采用荷格伦特营养液培养法,依次用20、26、31g/L的NaCl营养液对403份狗牙根材料进行耐盐处理30d,筛选出在26g/L的NaCl溶液中存活的耐盐种质21份,再对这些耐盐种质进行不同盐质量分数梯度（20、22、25、28和30g/L）复选,初步筛选出较耐盐种质11份,次耐盐种质10份,这些材料为培育耐盐狗牙根品系提供了优良亲本。     

柚汁胞愈伤组织的诱导及耐盐性的研究

本试验以柚汁胞为培养物,脱分化产生愈伤组织。研究了汁胞愈伤组织布不同NaCl浓度处理下矿质营养元素的变化。试验表明:在MT附加2,4-K 0.5+BA 1.0.培养基中,柚汁胞愈伤率达98.5％。愈伤组织几乎都是从汁胞柄上产生。在NaCl盐逆境下,愈伤组织生长受抑制。在NaCI 0％～0.5％范围内愈伤组织能够生长,在1.0％～2.0％范围内,生长量不到对照的10％。则定的13种矿质元素中,愈伤组织内Na~+含量为外源Na~+浓度的2.3～4.6倍。而P,K,Ca与Na~+含量成线性相关。     

不同耐盐性水稻幼苗叶绿体光能转化特性对盐胁迫的反应

[目的]探讨盐逆境下光合器官的光合潜力,为提高全株光合能力提供理论依据。[方法]以耐盐性不同的水稻品种Pokkali(耐盐)、Peta(盐敏感)幼苗为材料,研究叶绿体光能转化对盐胁迫的响应。[结果]结果表明:随着NaCl胁迫浓度和时间的增加,2个水稻品种净光合速率、叶绿体放氧活性、ATP含量下降;100 mmol/L NaCl胁迫下,叶绿体ATP酶活性先上升后基本不变,叶绿体光合磷酸化活力先上升后下降;200 mmol/L NaCl作用下,叶绿体ATP酶、叶绿体光合磷酸化活性一直下降;且耐盐品种Pokkali下降的程度明显小于盐敏感品种Peta。[结论]盐胁迫下耐盐品种叶绿体光能转化能力强于盐敏感品种。