捕食线虫性真菌—少孢节丛孢菌口服生物制剂安全性试验

为研究少孢节丛孢菌口服生物制剂的安全性,将20只6月龄绵羊分成4组,前3组分别灌服含有1.0×105、1.0×106、1.0×107少孢节丛孢菌分生孢子口服生物制剂,第4组为对照组灌服灭菌的生理盐水,灌服后连续30d观察绵羊的各项临床指标;并在7d后每组分别剖检2只绵羊,无菌采集绵羊各器官组织,进行组织切片和少孢节丛孢菌的分离鉴定;另外,将12只感染捻转血矛线虫后的绵羊分成3组,灌服3个不同剂量的生物制剂后测定其对粪便中线虫的捕食活性。结果表明,绵羊的精神状态、食欲、饮水、体温、粪便、增量正常;绵羊肝脏、脾脏、肾脏、肠道淋巴结等组织器官没有出现病理变化;也未从上述组织中分离出少孢节丛孢菌;3个不同剂量的生物制剂均可显著降低绵羊粪便中的幼虫数量。研究结果证实,少孢节丛孢菌口服生物制剂安全有效,无毒副作用。     

捕食线虫性真菌少孢节丛孢菌CIMHI株捕食特性研究

报道了首次从国内土壤中分离出的捕食线虫性真菌少孢节丛孢菌 CIMHI 株(Arthrobotrys oligosporaStrain:CIMHI)对马线虫三期幼虫捕食活性、捕食效力以及杀虫机理。研究表明该菌株生长环境对其捕食活性有很大影响。其捕食活性在20℃、有氧环境、玉米粉浓度相对较低且菌丝较稀疏的培养基中最强,菌株的捕食活性是在马线虫三期幼虫体内存在的可以诱导少孢节丛孢菌 CLMHI 产生捕食线虫性器官的物质以及虫体运动刺激下产生的。其杀虫机理是通过菌株产生的收缩或不收缩的菌环粘性茵网菌丝,菌结等捕     

捕食线虫性真菌少孢节丛孢菌（Arthrobotrys oligospora）CIMH1株形态学研究

捕食线虫性真菌少孢节丛孢菌CIMH1株在不同发育时期有菌丝和孢子两种形态。只有在捕食对象－活的线虫幼虫存在条件下，该菌株才能产生捕食性结构－菌环、菌网等。菌环、菌风孢子具有一定的形态学特征。     

叶状枝节丛孢大孢变种(Arthrobotrys cladodes var. macroides)对两种毛圆科线虫幼虫杀虫效果的研究

【目的】评估叶状枝节丛孢大孢变种(Arthrobotrys cladodes var.macroides)分离株(F69)的生物学特性及对绵羊胃肠线虫感染性幼虫(L3)的捕食能力.【方法】通过光镜和扫描电镜观察该菌的形态及捕食作用;用2%水琼脂培养基评估该菌对两种混合的毛圆科线虫L3的体外杀虫能力;将该菌的孢子用海藻酸钠制备成包埋颗粒,分析绵羊采食后的杀虫能力.【结果】1)所获得的光镜和电镜结果显示了该菌形态学及其与L3相互作用;2)该菌在体外对L3的杀虫率为73.70%(P0.05);3)该菌通过绵羊消化道后能够存活,采食后12、24、36、48、72 h粪便中排出真菌孢子,对绵羊粪便中的L3减少率分别为46.74%、60.41%、44.19%、37.36%、21.53%.【结论】本研究为反刍动物寄生线虫生物防治提供了一个有潜力的新候选菌株.     

碳氮源对少孢节丛孢生长及捕食线虫能力的影响

[目的]探索不同碳氮源对少孢节丛孢生长及捕食线虫能力的影响。[方法]通过对菌株进行分离、接种与培养,观察、测定少孢节丛孢在含有葡萄糖、蔗糖、乳糖、可溶性淀粉4种碳源和尿素、氯化铵、硫酸铵、硝酸铵4种氮源培养基上生长时的菌落形态、大小、稠密度、菌丝粗细及其捕食线虫的能力。[结果]碳源不同,少孢节丛孢的生长及捕食能力不同。4种碳源中,可溶性淀粉的效果最好,最适合少孢节丛孢的生长,且菌丝捕食线虫的能力最强。3种无机氮源对少孢节丛孢生长及捕食能力的影响没有显著差异,但与有机氮源尿素的影响相比,差异较大。在含尿素的培养基中,少孢节丛孢生长速度最慢,但菌丝捕食线虫能力最强。[结论]碳源和氮源对少孢节丛孢的生长和捕食线虫能力均有明显影响。     

捕食线虫真菌的分离鉴定

本文报道首次从国内土壤中分离出一株捕食线虫性真菌,该菌株适宜在20℃,pH6,玉米粉浓度0.4g·L~(-1)的玉米粉琼脂(CMA)培养基中生长。通过对其菌丝、孢子及捕食性器官的形态学观察,鉴定其为节丛孢属的少孢节丛孢菌 CIMHI 株(Arthrobotrys oligospora strain:CIMHI).     

刀孢蜡蚧菌的鉴定及其对南方根结线虫不同生活阶段的定殖

【目的】明确卵寄生真菌（Lecanicillium psalliotae）刀孢蜡蚧菌对根结线虫的防治潜力。【方法】采用分离自山东青岛城阳丝瓜根结线虫的卵寄生真菌CGMCC5329,通过形态学特征观测及分子生物学分析,鉴定该菌株为刀孢蜡蚧菌。显微观察刀孢蜡蚧菌对南方根结线虫（Meloidogyne incognita）不同生活阶段的定殖。【结果】刀孢蜡蚧菌能够寄生南方根结线虫生活史中的卵、2龄幼虫和雌虫,同时对卵块内卵孵化具有明显的抑制作用。该菌菌丝在卵表面形成侵染钉,卵壳皱缩凹陷,卵胚胎发育停止和内容物凝集,卵内长满菌丝,有时可见到菌丝上形成瓶梗细胞和分生孢子。第6天卵寄生率为85.76%;15 d卵块相对孵化抑制率为91.41%。被真菌寄生的2龄幼虫体表形成致密菌网,穿透体壁,体内长满菌丝,5 d后寄生率为79.23%。寄生的雌虫体壁形成致密菌网和侵染钉,体壁皱缩变形,有时内容物外渗。【结论】刀孢蜡蚧菌CGMCC5329不仅能寄生根结线虫生活史中定居态的雌虫和卵,还能寄生侵染态2龄幼虫。该菌是具有生物防治应用潜力的根结线虫寄生真菌。     

高原地区捕食线虫性真菌的分离与鉴定

采用玉米琼脂粉培养基对祁连县、共和县和泽库县4个地区的不同土壤样品进行捕食线虫性真菌的分离,并利用藏绵羊马歇尔线虫第3期幼虫诱导真菌捕食器官的产生。结果表明,从祁连县土壤样品中分离到1株捕食线虫性真菌,根据菌丝及捕食器官的形态特征,鉴定为少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)。     

小兴安岭地区捕食线虫真菌研究初报

从206份带岭的森林土壤样品中,分离出捕食线虫真菌2属5种,分别为:叶状枝节丛孢(Arthrobotrycladodes)、泡环单顶孢(Monacrosporium aphrobrochum)、弯孢节丛孢(Arthrobotry musiformis)、环捕节丛孢(Arthrobotry brochopaga)、少孢节丛孢(Arthrobotry oligospora)。其中,叶状枝节丛孢、泡环单顶孢、弯孢节丛孢、环捕节丛孢为黑龙江省新纪录种。少孢节丛孢(A.oligospora)分布最广、数量最多,为该地区的优势种。大青山顶土壤中捕食线虫真菌的检出率最小,仅为该地区分布的10%。凉水地区18~29林班、14、16林班及9林班50%左右的土样中均有捕食线虫真菌出现,8林班的捕食线虫真菌物种比较丰富,但捕食线虫真菌出现的频率比较低,且产孢量最少。     

少孢节丛孢菌XJ-A1几丁质酶AO-483基因的克隆及生物学活性

为弄清少孢节丛孢菌几丁质酶的生物学功能,对少孢节丛孢菌XJ-A1几丁质酶AO-483基因进行克隆及分子特征分析,并在大肠埃希菌中进行诱导表达;采用DNS还原糖法检测经镍柱纯化的重组几丁质酶活性,将其作用于秀丽隐杆线虫幼虫,分析其生物活性。结果显示,AO-483基因编码309个氨基酸,与少孢节丛孢菌标准株(ATCC 24927)的几丁质酶AO-483基因序列的同源性为96.88%,氨基酸序列同源性为97.73%;AO-483含有1个Glyco-hydro-18结构域,位于20~297位氨基酸,属于糖苷水解酶18家族,还含有特征序列GMLGG和LDGLDLDVE;三级结构为典型的三磷酸异构酶桶形结构。SDS-PAGE分析结果表明,重组蛋白AO-483分子质量约为52 ku,与预测大小一致;Western blot分析证实,该重组蛋白能与小鼠抗少孢节丛孢菌多克隆血清抗体发生特异性反应。经DNS还原糖法检测,该重组几丁质酶活性为223.31 U·mL^-1;重组几丁质酶对秀丽隐杆线虫Ⅰ期和Ⅳ期幼虫有较强的降解活性。     

圆锥掘氏梅里霉侵染秀丽隐杆线虫周期的扫描电镜观察

食线虫真菌在生物防治线虫领域发挥着举足轻重的作用,日益受到广泛关注。圆锥掘氏梅里霉（Drechmeria coniospora）是一种典型内寄生真菌,专一地侵染和寄生其宿主--线虫。利用高分辨率的扫描电子显微镜,观察得到D. coniospora侵染秀丽隐杆线虫整个过程的清晰图片,为研究D. coniospora侵染线虫及与侵染相关的基因提供了直接、客观地依据。扫描电镜结果显示,D. coniospora 通过分生孢子完成对线虫的识别,特异地吸附在线虫头部或生殖孔,进而进入线虫体内。分生孢子在线虫体内萌发,长出菌丝。当菌丝生长到一定程度后,进一步穿透线虫体壁,造成线虫死亡。在空气中生长的菌丝体产生新一代分生孢子,这些孢子成熟后,遇到线虫幼虫又将开始新一轮侵染周期。D. coniospora的这种特异侵染方式和高效侵染能力,使其成为生物防治线虫的潜在优良菌株,具有广阔地应用前景。     

动物线虫抗药机制研究进展

[目的]克服由于驱寄生虫药物抗药性的产生而严重制约世界畜牧业发展的问题。[方法]介绍动物线虫对苯并咪唑类、咪唑并噻唑类和大环内酯抗生素类3类驱虫药物的抗药机制的研究进展。[结果]动物寄生线虫对驱虫药的抗药机制主要是在线虫与药物选择压力的共同作用下,首先发生于药物受体基因的点突变,使其编码的药物受体结构改变而引起与药物的作用效应发生不同程度的变化,线虫获得一定的抗药性并将这些抗药基因变异遗传。[结论]动物线虫抗药机制的研究对控制线虫的感染和准确检测线虫抗药性均有重要意义。     

宁波地区主要出口盆景及盆栽线虫种类调查及防控对策

[目的]摸清宁波地区盆景线虫种类,以有针对性地进行线虫防控。[方法]2005～2008年,对宁波市3家主要盆景出口企业及周边的29种主要出口盆景及盆栽植物的根际土壤、栽培介质和根组织进行线虫种类调查,共采集样品142份。[结果]分离并鉴定线虫12属,发现了剑线虫属（Xiphinema sp.）、长针属（Longidorus sp.）、短体属（Pratylenehus sp.）、毛刺属（Trichodorus sp.）和拟毛刺属（Paratri-chodorus sp.）等检疫性线虫,未发现根结线虫属。提出了线虫防控措施。[结论]宁波盆景线虫种类较多,盆景出口前需要综合治理,以确保顺利出口。     

南方根结线虫在不同茉莉酸含量番茄株系中发育状态观察

【目的】探究内源茉莉酸对番茄中南方根结线虫生长发育的影响。【方法】以番茄野生型株系CM、过量表达前系统素转基因番茄35S∷PS(35S∷prosystemin)和茉莉酸合成缺失突变体spr2为试验材料,采用石蜡切片的方法,观察接种南方根结线虫二龄幼虫(J2)后不同时间各株系内线虫的发育。【结果】接种南方根结线虫J2 5d和7d,CM、35S∷PS和spr2根系中线虫发育无显著差异;接种J2 14d,21d和28d,35S∷PS根系中线虫发育较CM根系中线虫和spr2根系中线虫缓慢。【结论】茉莉酸在一定程度上可以抑制南方根结线虫在番茄中的发育。     

佳木斯地区土地利用方式对土壤线虫群落组成的影响

[目的]对佳木斯地区5种土地利用类型的土壤线虫群落组成进行研究。[方法]采用5点取样法取样,采用淘洗-过筛-蔗糖离心法分离线虫,同时对线虫进行科属鉴定。[结果]土壤线虫25科36属,植物寄生线虫比例较高,共有优势属为盘旋属和野外垫刃属。土壤线虫总数、植物寄生线虫和食细菌线虫数量在土地利用类型间差异在0.05水平显著,赤小豆地和玉米地线虫数量多于林地和林边湿地;盘旋属集中分布于赤小豆地和玉米地;林地和林边湿地土壤生态系统的多样性和稳定性高于玉米地。[结论]土地利用方式对土壤线虫群落组成有一定影响。     

绵羊胃肠道线虫季节动态的研究

本文采用粪便幼虫培养法和剖检过筛法研究了绵羊胃肠道线虫的季节动态.结果表明:成年羊胃肠道线虫的卵排出量或成虫寄生量4～6月出现一次明显的高峰,8、9月又出现一次较小的升高,一年的其它月份很低.羔羊粪便中最早检获虫卵是在7月上旬,8月下旬排卵量达高峰,此后,虫卵排出量相当低.剖检成年羊体内,捻转血矛线虫受阻幼虫百分率1～6月逐渐下降,7～12月逐渐上升,受阻率最高的是12月下旬.放牧地幼虫检查发现,感染性幼虫夏末秋初出现一次高峰,到翌年3、4月仍可检到少量的毛圆线虫幼虫.越冬试验证明,毛圆线虫的感染性幼虫能越冬.本文还提出了适合黑龙江省特点的有效防治措施的建议.     

洛阳温室蔬菜根结线虫的初步鉴定及其毒力测定

[目的]测定药剂对蔬菜根结线虫的毒力。[方法]采用传统的制作会阴花纹的方法,对洛阳温室蔬菜根结线虫的种类进行鉴定,并选择4种药剂对根结线虫的二龄幼虫进行室内毒力测定。[结果]结果表明,洛阳温室蔬菜根结线虫病主要由南方根结线虫引起,未发现其他种类;4种药剂中5%阿维菌素乳油对根结线虫有较高的毒力。[结论]该研究为根结线虫的有效防治奠定了基础。     

荆州市蔬菜携带土源性线虫情况的调查

[目的]了解荆州市蔬菜污染土源性线虫情况,提高广大市民饮食卫生意识。[方法]取样品菜每份约500 g,通过反复清洗、沉淀、离心法后,采用饱和硝酸钠漂浮法检查每份样本受土源性线虫污染情况。[结果]在受检的19种蔬菜(230份)样品中,有19种(93份)查出有线虫虫卵或幼虫,检出率为40.61%,其中香菜、大葱、小葱、蒜等土源性线虫检出率较高,黄瓜、大白菜、泡菜检出率较低。普通菜市场、自选超市和绿色无公害蔬菜的线虫检出率分别为40.43%、31.82%和33.33%。[结论]荆州市蔬菜中香菜、大葱、小葱、蒜、韭菜的线虫感染率较高,在食用时应仔细清洗,炒熟,炒透。     

广西甘蔗线虫种类及分布

[目的]了解广西甘蔗主产区甘蔗线虫的种类、分布及虫口密度等信息,为进一步深入研究及有效防控提供科学依据.[方法]采集桂南沿海、桂南、桂西南、桂中、桂西11个主要蔗区甘蔗线虫土样,采用贝尔曼浅盘漏斗分离法对线虫进行分离,在光学显微镜下鉴定种类及数量.[结果]共收集到甘蔗寄生线虫16属,占线虫总数的70.3%,腐生线虫占29.7%;在寄生线虫中,以螺旋线虫和矮化线虫为主,分别占54.0%和26.9%,其次是短体线虫,占12.1%.水田蔗地线虫数量比旱坡地多,宿根蔗地比新植蔗地多;水田及宿根蔗地矮化线虫和短体线虫比旱坡地及新植蔗地多,但水田及宿根蔗地螺旋线虫比旱坡地及新植蔗地少.[结论]共鉴定出16个属的寄生线虫,优势寄生线虫为螺旋线虫、矮化线虫和短体线虫.研究结果为广西甘蔗主产区开展线虫普查及线虫病害防治和检疫奠定了基础.     

陕南蔬菜根结线虫群体的mtDNA-PCR-RFLP快速种类鉴定

[目的]运用mtDNA-PCR-RFLP技术快速鉴定陕南蔬菜根结线虫,为根结线虫的有效防治提供参考。[方法]在形态学、同工酶鉴定的基础上,运用mtDNA-PCR-RFLP电泳技术,对采自陕南3市18县区的37个为害蔬菜的根结线虫种群进行了鉴定。[结果]在所鉴定的种群中,32个种群为南方根结线虫（Meloidogyne incognita）,2个种群为花生根结线虫（M.arenaria）,1个种群为北方根结线虫（M.hapla）,1个种群为南方根结线虫和花生根结线虫的混合群体,1个种群为南方根结线虫和北方根结线虫的混合群体;其中南方根结线虫是陕南为害蔬菜的主要根结线虫。[结论]形态学方法应仅作为辅助鉴定手段,而同工酶表型和mtDNA-PCR-RFLP分析均可作为快速而可靠地鉴定中国常见根结线虫种类的方法。