春季枣疯病植原体在树体内的分布及对叶片组织发育的影响

为明确枣疯病植原体早春在枣树植株体内的移动和分布,揭示枣疯病植原体的致病机制,利用nested-PCR法检测春季枣树新生枝叶中枣疯病植原体的积累情况,结果显示,发病丛枝春季可以部分萌发,初期即含有植原体。轻度发病植株植原体分布不均匀,主要分布在发病枝和相邻部位;重度发病植株各部位枝条均可带毒,植原体检出时间与距离发病枝条远近相关。用石蜡切片法比较分析叶片组织结构,结果显示,枣疯病植原体侵染导致叶片结构发育受到抑制,叶片厚度减小,角质层和表皮细胞变薄,薄壁细胞显著减少,叶脉组织结构排列紊乱,形成层和薄壁细胞明显变形和减少,厚角细胞和晶体分泌细胞明显减少。     

陕西枣疯病发病规律与苗木带病检测

从彬县、佳县和清涧县采集的枣树苗、酸枣苗、枣树昆虫样品中提取总核酸,克隆与测序。结果表明,陕西彬县、佳县和清涧县3个枣区的枣疯病(JWB)植原体16S rDNA基因大小为1.2kb,基因序列基本一致,为同一个种,JWB和酸枣(WJWB)植原体16SrDNA的亲缘关系达到99.9%。由于JWB与16S rⅤ组B亚组成员榆树黄化(Elm yellows, EY)和悬钩子丛枝病(Rubuswitches’broom,RuS)的同源性分别是98.5%和98.3%。因此,JWB归属于植原体16S rⅤ组B亚组。PCR检测苗木结果显示,市场上的枣树苗带病较多,以佳县枣树苗的带病率最高,达到7.69%,彬县带病率最低,为4.35%;清涧县酸枣苗的带病率最高,达到19.05%。对枣疯病品种抗病性调查结果显示,‘婆枣’发病率较高(25.32%),‘晋枣’发病率最低(11.18%)。对在彬县与佳县枣园采集的中华拟菱纹叶蝉(Hishimonoides chinensis)、凹缘菱纹叶蝉(Hishimonus sellatus)、大青叶蝉(Cicadella viridis)和条沙叶蝉(Psammotettix striatus),用PCR检测带毒情况,结果显示,只有中华拟菱纹叶蝉和凹缘菱纹叶蝉携带枣疯病植原体,说明这两种叶蝉是陕西的枣疯病的媒介昆虫。在温室内,采用菟丝子和嫁接方式,能够传播枣疯病。     

大雪枣的嫁接技术

<正> 大雪枣是一个新兴的枣树新品种,既可用普通枣树直接换头嫁接,也可用野生酸枣作砧木嫁接。现将大雪枣的嫁接技术介绍如下: 1 接穗的采集 嫁接的成活率取决于接穗的质量。因此,接穗的采集非常重要。接穗可在冬天或在春天采集。采集接穗的原则是:选取一年生的发育枝条,要求枝条节间均匀、生长充实,枝条上的芽眼饱满。接穗采集后如不马上进行嫁接,要及时进行处理,以防止水分散失。     

氯化铯密度梯度离心法提纯枣疯病植原体DNA

本研究利用CTAB法提取感染枣疯病的枣树叶片总DNA,再通过氯化铯-双苯酰亚胺密度梯度离心从总DNA中富集纯化枣疯病植原体DNA。利用枣树26S r DNA基因和枣疯病植原体16S r DNA基因的特异引物,分别对富集纯化前后感病枣树叶片总DNA进行PCR扩增。结果表明,模板浓度为1 ng/μL时,富集后的总DNA模板扩增枣树26S r DNA的电泳条带亮度低于富集前,扩增枣疯病植原体16S r DNA电泳条带亮度明显高于富集前。Real-time PCR检测结果表明,模板浓度为1 ng/μL时,纯化后的枣疯病植原体DNA中26S r DNA相对纯化前的量为0.0638,而JWB相对纯化前的量为0.5035,这说明采用氯化铯-双苯酰亚胺密度梯度离心法可以有效地从感染枣疯病枣树总DNA中富集纯化枣疯病植原体DNA。     

安徽地方枣种质枣疯病植原体16S rDNA序列分析

为研究安徽地方枣种质枣疯病16S rDNA序列特性,以健康及表现枣疯病症状的繁昌长枣叶片DNA为模板,克隆枣疯病植原体16S rDNA序列,获得1条1 248 bp的片段,命名为JWB-FJP1。同源性分析结果表明,JWB-FJP1属于16Sr V-B组,与重庆地方枣枣疯病植原体JWB-Xch(JQ675716)同源性最高,达到99.92%;与河北枣枣疯病植原体JWB-Hebei(GU184186)同源性最低,为67.06%,说明不同地区枣疯病植原体存在一定的生物学特异性。本研究结果为安徽地方枣种质枣疯病病原分类及其快速鉴定提供了理论依据。     

枣疯病脱除方法及病原检测技术研究进展

枣疯病是对枣具有毁灭性危害的病害。自从20世纪40年代国内外将枣疯病作为枣树病害研究的焦点以来,研究人员对枣疯病脱毒及其检测技术等已进行了大量研究。报道了利用热处理、茎尖培养、试管微嫁接、选育抗病品种、化学防治以及生物防治等技术对枣疯病的脱除方法,以及电子显微镜检测、分子生物学检测等检测技术在枣疯病病原检测中的应用研究现状,并对它们之间的优缺点进行了初步探讨。通过对不同技术的比较,建议在生产中将几种脱除技术及检测方法结合使用,可实现枣树脱除植原体与无病毒化栽培。     

超速离心结合Real-time PCR分离纯化枣疯病植原体DNA

分离纯化枣疯病植原体基因组DNA,有助于进一步开展对此病原全基因组测序的研究,CTAB法提取枣疯病叶片的总DNA后,采用氯化铯双苯酰亚胺密度梯度离心法从枣树总DNA中富集纯化枣疯病植原体DNA,并通过Real-time PCR方法对分离纯化效果进行定量检测。在此基础上,探索了不同CsCl初始密度对DNA分离效果的影响。在20℃,初始密度为1.650 0g/cm3,经206 000×g下离心23h后,感染枣疯病样品(IS)的离心管中出现2条DNA亮带,正常枣树样品(NS)离心管中只有1条。Real-time PCR检测结果表明NS管中的条带为枣树基因组DNA;IS管中与NS管中相同位置的条带为枣树基因组DNA,另1条带为枣疯病植原体基因组DNA。在保留其他试验条件下,不同CsCl初始密度,会影响DNA条带的位置,也会影响枣疯病植原体DNA与枣树DNA的分离效果,在1.562 2g/cm3的初始浓度下分离效果最好。采用超速离心法可以有效地从感染枣疯病的枣树中分离得到纯的枣疯病植原体DNA,同时利用Real-time PCR法可以实现分离效果的评价,利用此方法分离得到的DNA可用于枣疯病植原体的全基因组测序。     

枣树枣疯病防治要及时

枣疯病又称丛枝病、公枣树,是枣树的毁灭性病害,主要通过传病昆虫来传播。影响枣疯病潜伏期长短的因素主要有:一是嫁接时间。6月底以前接种的当年可发病,以后接种的翌年花后才出现症状。二是接种部位。接种于根部的当年就发病,接种于枝上的发病较晚,到翌年才发病。三是接种量。皮接块数多时发病较快。枣树发病一般从部分枝条、枣股及根蘖上先发生,也有整株同时发病的,症状由局部扩展到全株。枣疯病的发生与枣树品种有关,枣树品种不同,抗病能力也不相同。枣园土壤干旱瘠薄、管理粗放、树势弱的发病较重,反之则轻。但在盐碱地很少发病。枣疯病…     

采用荧光显微技术对枣疯病病原进行鉴定

采集越冬期条枣品种枣疯病枝条对其进行水培,以正常枝条水培为对照,采用荧光显微技术(DAPI)对水培枝条的幼茎进行对比诊断研究。结果表明,越冬期枝条水培采集最佳时间为1月份,水培适宜溶液为1%霍兰格营养液,试材需固定在5%戊二醛溶液中放置于4℃冰箱2 h以上、1.0μg/m L DAPI染色剂中染色20 min,便可快速、便捷、定量定性判断枣疯病病原。     

枣疯病植原体的分子检测与同源性鉴定

[目的]采用植原体16S通用引物建立枣疯病植原体PCR检测体系.[方法]采用植原体16S rDNA通用引物R16mF1/R16mR1,对陕西和山西具有枣疯病的枣树植株总DNA进行PCR扩增,获得了相关的枣疯病植原体序列.采用DNAMAN软件分析其同源性,绘制系统进化树.运用pDRAW32软件对17种具有16S rDNA分组的典型的限制性内切酶进行计算机模拟RFLP,确定枣疯病植原体同源性关系.[结果]从陕西和山西的枣疯病的植株中,分别得到1 433 bp和1 432 bp的条带,与已报道的枣疯病植原体比较,同源性达到99;以上,而与其他植物的植原体16S rDNA同源性多低于93;,并且与16S rDNA V-B组的遗传距离最近.pDRAW32软件模拟RFLP结果表明它们和已报道的JWB的RFLP图谱相似.[结论]枣疯病植原体归属于16SrDNA V-B,为枣疯病植原体PCR检测体系提供了理论基础.RFLP分析进一步验证了枣疯病植原体属于16SrDNA V-B,具有随地域变异性较小的特性,这将有利于不同地区枣疯病检测技术的建立.     

枣疯病和酸枣丛枝病植原体16S rDNA和tuf基因的序列同源性分析

 【目的】枣疯病是枣树上由植原体引起的一种毁灭性病害，遍布于中国华北、西北、华东、华南等25个省(市)的枣区，造成了巨大的经济损失。【方法】经PCR扩增，分别对中国陕西的彬县、阎良、武功、佳县、杨凌，河北沧州和山东德州7个枣区的枣疯病样品和杨凌4个酸枣丛枝病样品植原体16S rDNA基因保守序列和延伸因子tuf基因进行克隆和测序。【结果】获得枣疯病和酸枣丛枝病植原体的16S rDNA基因片段均为1 239 bp，tuf基因均为851 bp。通过序列同源性比较，结果表明中国陕西、河北、山东的枣疯病的病原一致，归属于植原体16S rⅤ-B组。由于枣疯病和酸枣丛枝病的植原体16S rDNA有5个碱基的差异，tuf基因的同源性为99.6%，推测为同一个种的不同寄主生物学型。【结论】首次报道了中国枣疯病和酸枣丛枝病植原体16S rDNA和延伸因子tuf基因的序列，确定了枣疯病和酸枣丛枝病植原体的分类地位，为研究枣疯病植原体的致病分子机理、遗传本质提供理论依据。     

枣疯病植原体胸苷激酶基因的克隆、序列分析与原核表达

枣疯病(jujube witches’-broom, JWB)俗称枣树的“癌症”,是由枣疯病植原体导致的侵染性病害，给我国的枣栽培与生产造成了严重危害，对枣疯病植原体增殖基因的研究有助于枣疯病的有效防治。为获得枣疯病植原体胸苷激酶基因(tdk),利用PCR方法扩增该基因并测序，结果表明，该基因的开放阅读框长度为576 bp,编码191个氨基酸，其蛋白质分子量为21.76 ku。序列分析和预测表明，该蛋白质为植原体细胞质中性质相对稳定的亲水蛋白质。遗传距离和进化树分析显示，植原体tdk基因比其16S rDNA基因的保守程度低，tdk基因和16S rDNA基因序列的进化树高度相似，表明tdk基因适于植原体分子分类。为获得枣疯病植原体TDK蛋白，成功构建了原核表达载体pET-28a-JWB-Heze-tdk;在诱导条件为0.1 mmol·L^-1 IPTG、20℃、140 r·min^-1时，该原核表达载体在Escherichia coli BL21(DE3)菌株中可表达出大量可溶性的N端融合了6×His标签的JWB-Heze TDK蛋白；利用Ni-I...     

宁夏中部干旱带圆枣为砧木嫁接酸枣方法筛选

为了明确宁夏中部干旱带以野生圆枣为砧木嫁接酸枣的最佳嫁接技术,试验对芽接、劈接、舌接及皮下接4种常用的果树嫁接技术的应用效果进行了比较。结果表明,在以圆枣为砧木嫁接酸枣时,采用皮下接技术嫁接成活率最高,劈接和芽接成活率差异不明显,舌接成活率最低;嫁接穗成活后的新生枝条生长能力表现为皮下接>舌接﹦劈接﹥芽接;不同处理嫁接穗嫁接成活率为现剪现接与长枝条在保温箱存放3 d的成活率无明显差异,但蜡封保存嫁接穗成活率较低。综上所述,建议宁夏中部干旱带以野生圆枣为砧木嫁接酸枣应采用皮下接技术,嫁接穗最好现采现用,如需从较远距离获取嫁接穗,可以将酸枣枝条尽量剪成长枝放入保温箱运输或邮寄。     

大连枣树丛植病病原鉴定

针对辽宁大连地区首次发现的枣树丛枝病病原进行了鉴定,利用植原体16S rDNA通用引物对R16mF2/R16mR1和R16F2n/R16R2对枣疯病(jujube witches’- broom phytoplasma,JWB - DL)植株总DNA进行巢式PCR扩增,并且通过软件pDRAW32进行RFLP电子酶切,根据分析结果构建系统发育树.结果表明,该病原序列与榆树黄花组( 16SrV)中的各亚组植原体同源率为99％以上,其中与16S rV -B亚组樱桃致死黄化(Cherry lethal yellow,CLY)同源性高达100％,而与其他组的植原体16S rDNA序列的同源率均低于96％,由此推断引起大连枣树丛枝病的为16SrV-B亚组的枣疯病植原体.     

枣离体嫁接影响因素研究

利用患枣疯病的婆枣组培苗作砧木,健康冬枣组培苗作接穗,进行微嫁接。试验采取加入植物生长素调节、暗培养、嫁接口处理的方法改善砧木的茎粗状况,结果表明暗培养可增加茎粗,增长节间,减少后期除萌,更适用于枣树微嫁接;而加入植物生长调节剂等方法基本无效。试验进行了"婆枣—冬枣"和"冬枣—冬枣"的不同嫁接组合处理。结果表明,嫁接亲和性是影响嫁接成活的关键因素之一。     

枣疯病与过氧化物酶活性变化的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法 ,测定了由植原体 (Phytoplasma)引起的枣疯病病株和枣树健株的花器、叶片、枝条和根中的过氧化物酶 (POD)酶活性和同工酶的变化。研究表明 ,病株各不同器官中的酶活性显著地比健株相应的各器官中的酶活性提高 ,同时病株的酶谱中有新的酶带出现 ,说明有特异同工酶组分产生     

枣树嫁接技巧

<正>枣树是嫁接成活率相对较低的树种,笔者对嫁接措施稍作改进,使劈接的成活率达到95%以上。1．选取接穗。3月上旬前后枣树临萌芽前,在嫁接品种树上选一年生     

不同砧穗比对3个观赏枣品种萌芽及生长的影响

研究了观赏枣嫁接繁殖中,不同砧穗比对3个不同枝型观赏枣萌芽及生长的影响。结果表明:嫁接中各品种保持砧穗比>1对提高嫁接萌芽率有正面影响;3个品种粗度小的接穗萌芽期总体上早于粗度大的接穗,但随着嫁接后时间的推移,不同粗度接穗的萌芽率趋于接近;各品种植株的生长状况主要与品种自身生物学特性及砧木的粗度有关,砧木粗度大,苗木生长强,而且强弱苗之间的差距在不断加大。     

枣疯病植原体LAMP可视化检测方法的建立

根据枣疯病植原体16SrDNA基因保守序列,设计出4条特异性环介导等温扩增(LAMP)引物。通过对反应条件的优化,建立一种适用于枣疯病植原体的可视化LAMP检测技术,对优化后的方法进行特异性、灵敏度评价。结果显示,该方法能够特异性地检测出枣疯病植原体,且LAMP产物的特异性通过MaeⅡ酶切得到验证;灵敏度较常规PCR高出100倍;并可通过肉眼观察反应液颜色变化,直接判定结果。建立的枣疯病植原体LAMP可视化检测方法适用于基层及现场快速检测,为枣疯病的快速检测提供了新方法。     

枣疯植原体rp基因和secY基因序列分析

【目的】基于核糖体蛋白基因(rp)和运输蛋白基因(secY),明确了陕西、山西及山东3省枣疯植原体的亚组分类地位。【方法】采集陕西、山西及山东3省枣产区的枣疯病样品,提取样品总DNA;设计引物对rpF1、rpF2、rpR1和secF1、secF2,对枣疯植原体的rp基因和secY基因进行PCR扩增及核苷酸序列测定与系统发育分析。【结果】获得枣疯植原体的rp基因和secY基因,大小分别为1 196和1 421bp。序列比对结果表明,陕西、山西及山东3个省枣疯植原体的rp基因和secY基因序列均一致;系统发育分析表明,这3省的枣疯植原体与樱桃致死黄化植原体(CLY5)和桃树黄化植原体印度株系(PY-In)的亲缘关系最近。【结论】以rp和secY基因作为植原体16SrRNA基因分类系统的辅助分子证据,将陕西、山西、山东的枣疯植原体归属到16SrⅤ-B亚组,明确三省内枣疯植原体的亲缘关系。