阴沟肠杆菌ACC脱氨酶基因的克隆和载体构建*

乙烯作为植物体内5大内源激素之一,其对植物的生长发育和果实成熟等生理过程起着重要的调节作用,特别是对一些跃变型果实(如香蕉、番茄、苹果等)和花卉(如矮牵牛、金鱼草、兰科植物等),其在叶、花的衰败和果实成熟过程中起着关键性的作用。因此,减少乙烯的生成可以延长植物果实     

植物果实发育调控的分子机理研究进展

果实的发育及成熟在植物整个发育进程中是非常复杂的一个环节,而果实的形状、大小、颜色及品质等均随着果实发育及其成熟而发生某些特定的变化,并且受到一系列与果实发育相关基因的影响和调控。通过对植物果实发育调控分子机理的研究,为今后果实品质的改良做出一定贡献。因此,主要综述了几种单子叶和双子叶植物中果实发育及成熟的相关基因的调控与相互作用,为今后研究植物果实发育过程提供一定的理论基础。     

园艺植物果实品质的调控技术

在园艺植物管理中,果实品质是影响经济效益与园艺效果的关键,而果实的品质应当重点考虑色泽、硬度、风味等3项因素并进行技术方面的调控,使园艺植物果实各方面均达到要求。文章对园艺植物果实品质的调控技术进行论述,希望对园艺植物果实生产起到指导作用。     

早熟增色防落剂

早熟增色防落剂是根据植物生长学原理研制的新型高科技生物制剂。使用方法简单,对水稀释后可直接喷施在果实表面,也可以喷施在植物叶表,通过植物传导组织传导给果实,从而实现果实早熟增色效果。和传统的增色剂相比该产品不含激素,用后果实不变绵,着色面可达70%～100%,色度高、果面光洁、果实脆甜艳丽,可大幅度提高商品果率。     

植物生长调节剂在葡萄上的应用现状

阐述了目前生产上植物生长调节剂在葡萄上的应用范围和方法,指出植物生长调节剂对葡萄营养器官的控制,表现在促进生根和繁殖、提高苗木移栽成活率和抑制枝梢生长、提高坐果率上;而对生殖器官的控制,主要表现在诱导葡萄形成无籽果实、提高果实品质、防止落花落果、疏花疏果和调节果实成熟期上。同时也提出了目前植物生长调节剂在葡萄应用上存在的问题。     

影响果实形状发育相关因素的概述

果实形状是评价果实外观品质的一个重要指标,果实形状发育过程中受很多因素影响,在很多坐果植物栽培中,都会出现果实形状发育品质差,甚至出现畸形果的现象。笔者阐述了栽培品种、栽培环境、植物营养、植物激素等因素对果实形状发育的影响,旨在为提高果实外观品质提供参考。     

农残降解剂在果树上的应用

农残降解剂,由北京绿色太阳零农残研究院生产。果树喷施能使植物、果实的叶片,茎部,果实吸收,通过植物进行一系列的生化反应,生产一种旷解物质,使植物体内的农药残留自然降解为零。而且能把植物体内的有害重金属结构发生变化,同时大幅度地减少植物茎部、果实的有害金属含量。在     

3种植物生长调节剂对花椒果实脱落的影响

通过对适采期的花椒喷施乙烯利、萘乙酸、噻苯隆,研究3种植物生长调节剂对花椒果实脱落的影响。结果发现上述3种植物生长调节剂对花椒果实脱落有一定的促进作用,不同类型和剂量的植物生长调节剂对果实脱落的促进效果不同,400倍液的乙烯利整树喷施造成果实和叶的脱落率最高,但大量落叶会对树体造成较大影响,综合比较,果梗基部喷施对树体负面影响较小,建议在生产上使用。     

红耳鹎对城市绿地植物果实的取食和传播研究

2020年9月底至2021年1月采用焦点动物扫描法对红耳鹎的取食行为进行观察，详细记录其取食的植物种类、取食频次、取食时间、取食数量和取食方式等信息，探讨红耳鹎在城市绿地中植物果实传播及种群更新中的生态作用。结果表明：红耳鹎(Pycnonotus jocosuson)共取食秋枫(Bischofia javanica)、香樟(Cinnamomum camphora)、雅榕(Ficus concinna)、海桐(Pittosporum tobira)及苦楝(Melia azedarach)5种植物的果实。红耳鹎对不同植物果实的取食频次、平均取食只数、平均取食时间和平均取食量间都存在极显著差异(P<0.01)。红耳鹎对秋枫果实的取食频次和雅榕果实的取食数量最高，对于香樟、雅榕、海桐和秋枫4种植物红耳鹎属于潜在传播者，而对于苦楝则属于种子捕食者。相关分析表明，果实的长度、宽度和重量都与果实平均取食量间均呈负相关。在鸟类取食后停歇的树木下方地面上常散落着较多表面洁净、无果肉包裹的裸露种子，且有部分植物的幼苗成功更新，说明城市绿地中的植物可以借助红耳鹎的取食和传播来实现其种群的更新。     

几种果实中白黎芦醇含量的研究

白黎芦醇是植物体内的一种具有抗病及许多保健功能的次生代谢物。用高效液相色谱法测定 了十几种植物的果实。结果表明:桑椹、菠萝、葡萄、蒲桃和假槟榔的果实中含有白黎芦醇。因此这些 果实具有一定的开发前景。     

利用反义技术和RNA干扰技术改良番茄品质特性的研究

综述了利用反义技术和RNA干扰技术,通过抑制番茄果实发育过程中许多重要基因(如PG基因、ACC合成酶基因、ACC氧化酶基因、LeCOP1LIKE、TBG6等)的表达,使番茄的耐贮性、番茄红素含量和裂果率等品质特性发生显著变化的研究进程,试验证明,反义技术和RNA干扰技术是抑制靶基因表达的有效手段。     

果树果实总RNA提取方法的改良研究

植物总RNA的提取尽管已成为一种常规的技术,但由于果树果实材料的特殊性,其RNA的提取至今没有一种比较理想的技术和方法。本研究在以往CTAB方法的基础上,对其进行改良以探讨一种适于果实总RNA提取的通用方法,从而为果实分子生物学研究奠定基础。研究结果表明,在提取缓冲液中加入PVP和β-巯基乙醇,使其终浓度分别为16%和3%,在匀浆上清液中加入1/3体积5 mol/L KAC(pH4.8),可有效地提高RNA提取的质量。利用改良后的CTAB法成功地从苹果、桃、草莓和葡萄果实中提取出总RNA。经过紫外、电泳、反转录分析结果表明,该改良的CTAB法是一种适合果实总RNA提取的首选方法。     

蟠桃磷脂酶D基因RNAi表达载体构建

[目的]构建蟠桃磷脂酶D基因的RNAi表达载体.[方法]以英格尔蟠桃为材料,将CTAB改良法提取的蟠桃总RNA反转录成cDNA作为模板,通过RT - PCR扩增约347 bp的保守片段,将目标片段插入到pSK - int中间表达载体中,获得pSK - PLD - RNAi中间表达载体,然后将其转入植物双元表达载体pCAMBI1301中,构建该基因的shRNAi表达载体pCAMBIA - PLD - RNAi.[结果]经限制性内切酶酶切和测序鉴定证明蟠桃磷脂酶D基因的RNAi表达载体pCAMBIA - PLD - RNAi已构建成功.[结论]蟠桃磷脂酶D基因的RNAi表达载体的构建为进一步通过RNAi技术延长蟠桃果实的贮藏寿命奠定了基础.     

反义RNA技术控制果实成熟的研究进展

简要回顾反义 RNA技术的产生与发展 ;并在介绍果实成熟的生理学和分子生物学的基础上 ,着重综述利用反义 RNA技术控制果实成熟 ,包括控制乙烯产生、细胞壁降解、色素生物合成等 3个方面的国内外研究进展 ,并对今后的研究方向进行了初步探讨 .     

蟠桃果实总RNA提取方法的研究

[目的]筛选获得提取蟠桃果肉中总RNA的适宜方法.[方法]以盛花后100 d的蟠桃为材料,采用Transplant plus植物总RNA提取试剂提取法、RNAisoTM试剂盒法、改良SDS法、改良CTAB法等四种方法提取总RNA.[结果]两种试剂盒法提取的总RNA质量差,有严重的基因组污染;改良SDS法提取物中含有大量的多糖;采用改良CTAB法所得RNA完整性好,条带清晰无降解,无基因组污染.经过RT - PCR和Northern blot检测后,表明该RNA能够满足后续分子生物学操作的要求.[结论]蟠桃果实总RNA适宜提取方法-改良CTAB法的确定为后续果实发育分子生物学的研究奠定了基础.     

草莓果实cDNA文库的构建及鉴定

草莓是研究果实发育的模式植物。基因表达谱分析已成为目前分子生物学领域重要的研究方向。草莓cDNA文库构建是研究果实发育基因表达的基础工作。本研究从草莓白果中提取高质量的总RNA,通过MMLV反转录酶的作用,把RNA中的mRNA反转成cDNA第一链,再利用特异引物通过LD-PCR扩增合成双链cDNA。将纯化带有黏性末端的双链cDNA与λTrip I Ex2载体进行连接,最后对重组载体进行E.coli XL1-Blue体外包埋为cDNA原始文库。经过鉴定,原始文库的滴度为1.13×10-7 cfu/mL,重组率为100%,插入片段多分布在0.2~2.0kb之间,表明构建的草莓果实cDNA文库质量较高,能够满足后续的分子生物学研究工作的需要,同时也为其他果树相关研究提供借鉴。     

无花果RNA的提取和半定量RT-PCR内参基因的优选

本试验以无花果的根、茎、叶、果作为材料,比较了CTAB法和Trizol法对无花果材料RNA的提取效果。以CTAB法提取的不同无花果材料的RNA为模板,反转成cDNA第一链,通过半定量RT-PCR,研究了植物常用内参基因18SrRNA、Actin和Tubulin的表达量变化。结果表明:CTAB法是适合不同无花果材料的RNA提取法;18SrRNA在无花果不同组织中的表达水平较高,且相对稳定,Tubulin在无花果不同组织中相对表达量较低,且相对稳定,是研究无花果不同组织基因表达水平较为适宜的内参基因。     

RNA干扰用siRNA的体外转录合成

RNA干扰(RNA interference，RNAi)作为一种特异性沉默基因表达的方法，正在成为研究基因功能、胚胎发育及病毒性疾病治疗的重要工具，而获得符合干扰要求的短双链干扰RNA(small interference RNA，siRNA)是进行RNA；研究的首要步骤。本研究建立了体外转录合成siRNA方法。并用其生成的siRNA干扰鸡成纤维细胞外源绿荧光蛋白(GFP)基因和内源3—磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因的表达。结果显示，siRNA能特异性降低鸡成纤维细胞中内外源基因的表达。本实验认为这种以DNA为模板体外转录合成siRNA方法操作简单、成本低、产物得率高，值得从事RNA研究者参考借鉴。     

枣果实不同发育阶段蛋白质组动态研究

枣果实在发育和成熟过程中涉及多种复杂的生理生化变化。为了解枣果实在发育过程中蛋白质组的变化情况,利用液质联用(LC-MS)技术对主栽制干枣品种——骏枣幼果期、膨大期、白熟期、初红期和全红期5个阶段的果实进行了非标记定量蛋白质组动态变化研究。结果表明,各时期果实与其前一阶段相比分别有差异表达蛋白189、356、82、69个。基因本体(GO)注释结果显示:幼果与膨大果的差异蛋白主要富集在核酸代谢过程,膨大期果实与白熟果的差异蛋白主要富集在碳水化合物代谢过程。从5个阶段的果实中分别鉴定到604、186、91、83、189个特异表达蛋白。Mercator注释和KEGG通路注释结果显示,幼果期特异表达蛋白主要参与了RNA转运通路。加权基因共表达网络(WGCNA)分析显示,幼果期高表达蛋白主要与核糖体合成相关。总之,枣果实在白熟期以前与细胞分裂和膨大相关的蛋白表达量和富集程度高,从白熟期开始与碳水化合物积累相关的蛋白质表达上调。本研究从蛋白质组学水平阐明了枣果实发育成熟过程中蛋白质组分的动态变化,为提高枣果实品质奠定了理论基础。