草鱼肠道胰蛋白酶同工酶GT-B的纯化及性质

深入了解草鱼消化蛋白酶的性质有利于充分探讨草鱼内脏的可利用途径和研究草鱼消化生理学.将草鱼肠道用冰丙酮脱脂,用磷酸盐缓冲溶液提取,然后经过硫酸铵粗分级沉淀,再经过离子交换层析、凝胶层析等纯化,分离得到一种碱性蛋白酶.SDS-PAGE分析表明其相对分子质量为26400.SDS-底物-PAGE以及抑制实验等表明酶可以水解酪蛋白和N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐(BAEE),其活性被大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)和甲苯磺酰氟(PMSF)强烈抑制,表明这是一种胰蛋白酶,命名为GT-B.用BAEE作底物时,该酶的最适作用温度为45℃,在65℃加热20 min,酶活性基本丧失;最适作用pH为8.5,在pH5.5～10.5范围内保持稳定,但在酸性环境里很容易失去活性.该酶的Vmax和Km值分别为3.33×103 min-1和31.68 μmol·mL-1,其生理转化效率高,为105.26 mL·μmol-1·min-1.该酶催化水解合成底物时的活化能Ea比较低,为18.31 kJ·mol-1.其活性不受Ca2+的影响,但是Ca2+能提高该酶的热稳定性.Zn2+, Cu2+, Hg2+和 Al3+等的存在会使此酶活性降低.     

草鱼肠道胰蛋白酶同工酶GT-B的结构信息

    为了解草鱼胰蛋白酶GT-B的组成、结构与其性质之间的关系,用仪器分析结合化学分析方法.研究草鱼肠道胰蛋白酶同工酶GT-B的氨基酸组成、紫外吸收特性及其二级结构单元.氨基酸组成分析表明,GT-B有很高的酸性氨基酸对碱性氨基酸比例,含有较多的亲水性氨基酸残基,较少的半胱氨酸残基和较少的芳香性氨基酸残基.GT-B在280 nm处只有微弱的吸光度,在变性剂存在下,其紫外吸收大幅度增加,依据"二状态模型"计算得到其变性自由能为39.825 kJ.mol-1.圆二色谱(CD)测定表明,GT-B酶蛋白分子具有较少的α-螺旋、β-折叠以及β-转角等规则二级结构单元和较多的无规则卷曲结构.这些信息结合起来可以合理解释GT-B的理化、动力学和热力学等性质.     

黄牛肉中钙激活酶系统的动力学性质

【目的】阐明牛肉中钙激活酶系统的主要动力学特征。【方法】通过温度、时间、Ca2+浓度、反应时间、酶量、底物浓度等的变化,分析μ-钙激活酶,m-钙激活酶和钙激活酶抑制蛋白的动力学特性。【结果】随冷冻温度的升高和贮存时间的延长,钙激活酶系统活性都逐步降低,但冷冻处理可以显著降低钙激活酶抑制蛋白的活性,而钙激活酶对冷冻处理不太敏感;μ-钙激活酶达到最大活性一半时所需的Ca2+浓度为50μmol·L-1,m-钙激活酶为320μmol·L-1;在测定钙激活酶活性时,反应时间应控制在60min以内,酶活单位应小于0.45;在以酪蛋白为底物时,m-钙激活酶的Km值为3.185mg·mL-1,Vmax为0.015U·min-1,而μ-钙激活酶的Km值为5.320mg·mL-1,Vmax为0.017U·min-1。【结论】钙激活酶系统活性受贮藏温度和时间、Ca2+浓度、酶促反应时间、酶量、底物浓度影响明显。     

米胚芽谷氨酸脱羧酶的分离纯化及部分酶学性质的研究

【目的】分离纯化米胚芽谷氨酸脱羧酶(Glutamate decarboxylase,GAD),并对其酶学性质进行研究。【方法】通过(NH4)2SO4分级沉淀、DEAE-Sephrose FF离子交换色谱、Superdex 200凝胶过滤色谱和Glu SephroseCL 4B亲和色谱等分离纯化技术,对米胚芽GAD进行分离纯化。用体积排阻高效液相色谱测定米胚GAD的相对分子质量,SDS-PAGE测定其亚基的相对分子质量。测定米胚GAD的最适温度和pH,通过酶动力学试验测定其动力学常数(Km)和最大反应速度(Vmax),并测定KCl和MgSO4等化学物质对酶活性的影响。【结果】分离纯化得到了米胚GAD,其纯化倍数为65.7,比活达223.4 U/mg,酶活回收率为10.8%。米胚GAD的相对分子质量为78 ku,亚基相对分子质量为40 ku,说明米胚GAD是由2个相同亚基构成的二聚体。米胚GAD的最适反应温度为40℃,最适反应pH为5.6;米胚GAD的热稳定较差,80℃时酶几乎完全失活;米胚GAD在pH 4.5~8.0较为稳定,能保持88%以上的酶活。米胚GAD对谷氨酸Glu的Km为32.3 mmol/L,Vmax为1.159 mg/min;对磷酸吡哆醛(PLP)的Km为1.7μmol/L,Vmax为1.171 mg/min。K+和Ag2+对米胚GAD的活力有较大抑制,Mg2+、Mn2+、Al3+和Li2+等对活性影响不大,500μmol/L Ca2+对米胚GAD有较强的激活作用。【结论】米胚GAD的性质与其他植物GAD存在差异。     

黄土高原沟壑区宅基地复垦土壤酶动力学研究

【目的】研究不同培肥措施对宅基地复垦土壤酶动力学特征的影响,探讨适宜农村闲置宅基地复垦的培肥模式。【方法】在位于黄土高原沟壑区的长武县,采用田间试验,设置不施肥以及施用化肥、有机复合肥、有机复合肥+菌肥、有机肥、有机肥+菌肥共6个处理,分析不同培肥措施下复垦土壤转化酶、脲酶、碱性磷酸酶的动力学参数(米氏常数(Km)、最大反应速度(Vmax)和Vmax/Km)的变化特征。【结果】复垦培肥后,化肥处理降低了土壤脲酶Vmax及磷酸酶的Vmax、Vmax/Km值,有机复合肥处理降低了土壤脲酶的Vmax/Km值,有机复合肥+菌肥处理降低了土壤脲酶及磷酸酶的Vmax、Vmax/Km值,有机肥+菌肥和有机肥处理均较大幅度地提高了土壤脲酶、磷酸酶、转化酶的Vmax、Vmax/Km值。相关性分析和主成分分析表明,转化酶Vmax,脲酶Km、Vmax和磷酸酶Vmax可用于评价土壤肥力水平的高低。【结论】有机肥单施或与菌肥配施是黄土高原沟壑区宅基地复垦较为适宜的培肥方式。     

费氏丙酸杆菌谢氏亚种和植物乳杆菌亚油酸异构酶结构及酶学性质

 【目的】对来源于植物乳杆菌（Lactobacillu plantarum）和费氏丙酸杆菌谢氏亚种（Propionibacteriu freudenreichii ssp. shermanii）亚油酸异构酶酶学特性开展研究,探讨不同来源的亚油酸异构酶酶学性质存在的差异。【方法】通过酶反应动力学方法及电泳技术测定了酶的最适反应条件、米氏常数、酶的分子量,并在此基础上,采用高效液相色谱（HPLC）与电喷雾离子化/质谱（ESI-MS）相结合的方法测定了L. plantarum和P. freudenreichii ssp. shermanii亚油酸异构酶的氨基酸序列。【结果】P. freudenreichii ssp. shermanii亚油酸异构酶的最适pH为8.0,最适反应温度是30℃,Km=20.53 μmol•L-1,Vmax=0.44 μg•ml-1•min-1;L. plantarum亚油酸异构酶的最适pH为7.5,最适反应温度是为50℃,Km=17.85 μmol•L-1,Vmax=0.73 μg. ml-1•min-1。【结论】来源于L. plantarum和P. freudenreichii ssp. shermanii亚油酸异构酶的全氨基酸序列不同,但两者具有一定的同源性,且两者酶学特性也有差异。     

林生山黧豆谷氨酸脱羧酶的性质及其比较研究

林生山黧豆谷氨酸脱羧酶的亚基分子为量70kD,天然分子量为140kD,是2个相同亚基组成的二聚体。N-末端氨基酸为丙氨酸。圆二色谱分析表明,该酶在207．5nm和215nm有一平缓的负峰,二级结构中α-螺旋占34．28％,β-折叠占33．24％,无规则卷曲占32．28％,紫外吸收表现一般蛋白质的特征吸收光谱,在278nm处有最大吸收。酶最适pH5．4,对谷氨酸的Km值为1．62×10-3mol·L-1,最适温度40℃,酶特异性地使谷氨酸脱羧,不能使门冬氨酸等其他氨基酸脱羧。比较结果说明该酶在已知结构和性质上与人及大鼠脑的谷氨酸脱羧酶接近,但和已知的几种植物的酶相差较远。     

不同乳酸菌亚油酸异构酶酶学性质的比较

对不同乳酸菌菌种中提取出的亚油酸异构酶进行了酶学性质的比较。结果表明,嗜酸乳杆菌CGMCC1.1854亚油酸异构酶的最适p H为6.5,最适温度为30℃,以亚油酸为底物时酶的米氏常数Km为18.99mmo L·L-1,Vmax为1.58μg·m L-1·min-1;植物乳杆菌CGMCC 1.557亚油酸异构酶的最适p H为6.5,最适温度为45℃,以亚油酸为底物时酶的米氏常数Km为14.83 mmo L·L-1,Vmax为1.75μg·m L-1·min-1;植物乳杆菌3-9亚油酸异构酶的最适p H为6.5,最适温度为45℃,以亚油酸为底物时酶的米氏常数Km为14.26 mmo L·L-1,Vmax为1.94μg·m L-1·min-1。     

苦马豆素降解酶的酶促降解特性

【目的】研究苦马豆素(Swainsonine,SW)降解酶的酶促降解特性。【方法】应用渗透休克原理,提取SW降解菌株YLZZ-1粗酶液,进行酶促降解研究,并考察SW降解酶的酶活力、动力学参数及稳定性。【结果】YLZZ-1菌株的胞内粗酶液对SW的降解率高达91.73%。SW降解酶对SW酶促降解的最适pH为8.0,最适温度为30℃,在pH6.0~8.5、温度25~45℃具有较好的降解活性,其米氏常数Km为0.073 98 mmol/L,最大反应速度Vmax为0.111 5μmol/(mg.min)。SW降解酶有较好的pH稳定性,但对热不稳定。【结论】菌株YLZZ-1的SW降解酶属于胞内诱导酶,具有良好的降解能力。     

牦牛乳酸脱氢酶A的分离纯化、酶学性质及其基因的克隆

 【目的】分离纯化牦牛骨骼肌中的乳酸脱氢酶-A（LDH-A）,并克隆其cDNA。通过比较牦牛与普通牛的LDH-A的酶学性质和cDNA序列,为研究牦牛适应高海拔、低氧环境,在分子水平上找到一些线索。【方法】采用染料亲和层析和DEAE-Sephadex离子交换层析等方法,分别从牦牛和普通牛骨骼肌中纯化LDH-A,并对其酶学性质进行比较;通过RT-PCR方法克隆牦牛LDH-A的cDNA序列,并与GenBank登录的普通牛LDH-A的cDNA序列进行比对。【结果】纯化的牦牛LDH-A比活力为103.9 U•mg-1蛋白,纯化倍数为18.2。SDS-PAGE和PAGE分析均显示一条带。酶动力学参数测定显示,牦牛LDH-A的Km NADH为0.097,Km 丙酮酸钠为1.897,均不同程度高于普通牛,其中对丙酮酸钠的Km大约是普通牛的2倍。根据牦牛LDH-A的cDNA序列预测的氨基酸序列与普通牛LDH-A的氨基酸序列比较,只有2个氨基酸残基的改变（257Val-Ala和315Tyr-Cys）。【结论】牦牛LDH-A对丙酮酸的高Km可避免骨骼肌中产生过多的乳酸,是适应进化的结果;这种升高可能与其氨基酸序列变化导致的空间结构微小改变有关。     

几种不同属性鱼类血液流变学性质的比较研究

虹鳟鱼、鲤鱼、白斑狗鱼、尼罗罗非鱼、额河银鲫、鲢、鳙和草鱼分别属于不同的科属 ,且它们的食性、生活水温等条件均有差异。本研究测定了这 8种鱼血液的生理、生化、血液流变学较突出的 2 0个指标 ,并统计了 9项计算指标 ,运用多重比较和逐步回归的分析方法 ,以全血粘度和血浆粘度为应变量进行了生理、生化和血液流变学性质的比较 ,发现 :影响这 8种鱼全血粘度的共同因子有红细胞压积和血浆粘度。这 8种鱼红细胞聚集性的大小依次为 :草鱼 <额河银鲫 <虹鳟鱼 <鲢 <白斑狗鱼 <鲤鱼 <鳙 <尼罗罗非鱼。红细胞变形能力的大小依次为 :虹鳟鱼<草鱼 <额河银鲫 <鲤鱼 <尼罗罗非鱼 <鲢 <鳙 <白斑狗鱼。从 8种鱼的属性来看 ,冷水肉食性的虹鳟鱼、白斑狗鱼的全血粘度较高 ,其次是尼罗罗非鱼 ,广温性的杂、草食的鲤科鱼类的全血粘度最低 (鲤鱼比较特殊 ,全血粘度值仅次于虹鳟鱼 )。     

论我国夫妻财产制的缺陷及立法完善

通过与其他国家的立法比较,分析我国法定夫妻财产制和约定夫妻财产制的不足,建议缩小法定财产制的范围、提升约定财产制的立法高度,充分尊重当事人的意思自治.     

农村产权流转交易市场体系建设与配套制度研究——以四川省为例

以四川省为例进行分析,得出我国农村产权流转交易市场在体系建设与配套制度上仍存在市场定位、产权主体不明,中介机构缺乏,法律、资金贫乏,参与度不高等不足之处.提出为改善农村产权流转交易市场应理顺农村产权与市场主体、产权交易所之间的关系;完善市场体系建设;破解产权政策约束;改善治理机制.     

产权社会化

产权社会化与产权私有化、公有化之间既有区别又有联系。产权社会化作为一种经济制度,其合理性判断的依据是是否最大限度地实现社会公正。实现产权社会化是我国国有企业改革的最终出路。     

黑龙江省稻米品质性状的相关分析

对黑龙江省５１个生产应用品种和中试品种（系）稻米的碾米品质，外现品质、蒸煮食味品质等９项指标进行了分析，测定结果表明，达国家优质米一般标准最高的是糊化温度（达标率１００％）、达省优质米一级标准最高的是精米率，达标率９７．０５％），无论国标还是省标，达标率最低的垩白米率（达标率９．６２％），通过相关分析得知，糙米率与精米率、精半率与整精米率达极显著正相关而且二者均与外观品质呈负相关，直链淀粉含量与胶稠度是极显著负相关。同时探讨了我省稻米品质，改良的重点及途径。     

Physicochemical and Sensory Properties of japonica Rice Varied with Production Areas in China

Northeast of China and Jiangsu Province are major production areas of japonica rice in China.Rice from northeast of China is well-known for its good-eating and appearance quality,and that from Jiangsu Province is viewed as inferior.However,little is known concerning the difference in physicochemical and sensory properties of rice between the major two production areas.Analysis of 16 commercial rice samples showed marked differences in physicochemical properties,including chalky grain rate,contents of amylose and protein and pasting properties between the two main areas.Northeastern rice contained more shortchain amylopectin as compared with Jiangsu rice.However,Jiangsu rice is comparable to northeastern rice in terms of sensory quality including overall acceptability and textural properties of springiness,stickiness and hardness as evaluated by trained panel.Our results indicated the limitation of conventional index of physicochemical properties,and suggested the necessity of identification of new factors controlling rice sensory property.In addition,the taste analyzer from Japan demonstrates limitation in distinguishing the differences between northeastern and Jiangsu rice,and therefore needs localization to fit China.     

论综合性大学的知识产权教育

本文论述了知识产权对现代社会的重大影响,人才的知识产权意识在知识经济中的作用,新知识、新技术的涌现和西方发达国家跨国公司的知识产权策略带来的知识产权保护和利用的新问题,并就大学如何对学生进行高效率的知识产权教育,使大学生将来成为各行各业的知识产权保护和运用的启蒙者和排头兵进行探讨。     

产权理论中的财产权、知识产权及其效益价值取向——兼论利益平衡原则功能及其适用

从产权理论出发,可以认识到财产权、知识产权的效益价值取向。这种动态效果与克服产权制度的外部性有关。就知识产权而言,通过对竞争的适度限制和对社会公众利用知识产品的保障,知识产权制可以克服消极的外部性。在实现知识产权的效益价值方面,利益平衡原则发挥了独特的作用,主要体现为利益平衡原则引领财产权的理想分配,保障了知识产权人的垄断效益和社会效益。     

天山马鹿清原品系选育研究

 采用个体表型选择、单公群母配种和闭锁繁育等方法，经过风土驯化、确定系祖鹿和建立选育群；多组选育群自繁、“杂交”、选育，精选F#-1和F#-2代种公鹿和扩繁；扩大品系群数量、改善品系群质量、推广应用三个阶段，育成了天山马鹿清原品系鹿1100只。该品系具有体貌一致，体型较大，体质结实，鲜茸平均单产7.857kg, 鹿茸粗大、肥嫩、粗蛋白质（63.7%）和氨基酸总含量(39.6%)高,茸的优质率达93%,繁殖成活率较高(59.67%),生产利用年限长(15年),适应性强,遗传性能稳定,茸重遗传力0.37、重复力0.75，经济效益和社会效益显著等典型优良性状。     

玉米与小麦秸秆无土栽培基质的理化性状分析

将1～5cm的玉米与小麦秸秆，按质量添加15％鸡粪与1％尿素，堆制90d后风干，测定其理化性状。结果表明：两种秸秆单独作为栽培基质时存在物理性状的缺陷，体积质量偏小，大小孔隙比偏大；玉米秸秆基质pH值偏高，而小麦秸秆基质电导率（EC）偏大，两种秸秆混合后基质的pH值与EC在基质适宜指标的上限；秸秆基质的营养元素丰富，以全氮、钾和钙含量较高，两种秸秆基质间各种营养元素含量差异较小。但混合后基质的全氮、全磷、全钾及速效磷、速效钾含量均显著高于草炭；秸秆基质的砷、汞、铅与铜含量均在绿色食品生产要求范围内，镉的含量符合无公害蔬菜生产的要求。因此，合成无土栽培基质是农作物秸秆资源化利用的一条有效途径。