1种提取产紫杉醇内生真菌高质量核酸的方法

介绍1种从产紫杉醇真菌中快速提取高质量DNA和RNA的方法.该方法由传统CTAB法改进而来,包括抽提液试剂浓度的提高、纯化步骤的改进和离心力的增加等,有效保证了细胞杂质的清除和核酸质量的提高.使用该方法能在24h内提取高质量的核酸,为进一步开展产紫杉醇真菌的分子生物学研究奠定了基础.     

提高红豆杉内生真菌及紫杉醇含量的途径分析

近年来,利用植物内生真菌发酵法生产紫杉醇含量普遍偏低,国内外学者也正在不断探索能够提高内生真菌产紫杉醇产量的途径,分析研究表明,寻找高产菌株、优化发酵条件及研究代谢调控将是提高紫杉醇产量的有效途径。     

鼠尾草属植物的DNA及RNA高效提取方法

以鼠尾草属植物为原料,采用CTAB法提取DNA,并在TSB法及氯化锂沉淀法的基础上改进并建立了一种高效高质量提取RNA的方法。用核酸测定仪测浓度和琼脂糖凝胶电泳检测质量,均获得了高浓度和高质量的DNA及RNA,为RT-PCR、分子克隆等分子生物学实验提供了很好的模板。     

趋磁细菌RNA提取方法的比较研究

[目的]筛选磁螺菌(Magnetospirillum gryphiswaldense)MSR-1的总RNA提取方法。[方法]通过比较实验室法和试剂盒法提取RNA的效果,选择适合趋磁细菌RNA提取的方法。用琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度仪检测趋磁细菌RNA的纯度、浓度及质量。[结果]RNAiso Plus试剂盒利用其特殊成分能选择性的与RNA结合,使蛋白等杂质不能与之结合,能更有效地清除DNA及蛋白质污染,提取的RNA纯度、质量较高。[结论]该研究成功的得到一种快速、高质量提取趋磁细菌RNA的方法。在提取中发现产磁小体菌株的RNA较不产磁小体菌株的量少,推测磁小体对核酸具有吸附性,为今后利用磁性吸附对生物的核酸提取方面提供依据。     

中国红豆杉中产紫杉醇内生真菌的分离与鉴定

为了开发生产紫杉醇的新途径,以中国红豆杉根、茎、叶为试验材料,对其中产紫杉醇的内生真菌进行分离和鉴定。结果表明:从中国红豆杉中共分离出10株内生真菌,在PDA液体培养基中发酵后经薄层层析法检测,出2株能够产生紫杉醇,对产紫杉醇的菌株进行形态学鉴定表明,其中一株为青霉属,另一株为芽枝霉属。     

改良RNA提取法及樱桃PDV和PNRSV的RT-PCR检测

介绍了一种从木本植物组织中获得高质量RNA的快速、简单和高效的核酸提取方法。该方法是基于核酸的二氧化硅捕获,避免了使用苯酚、氯仿等有机溶剂。利用该方法从樱桃组织中提取的总RNA用RT-PCR技术检测PDV,PNRSV均获得成功。从感病植株的一年生枝的叶片、韧皮部及芽组织中扩增出了预期的目的片段,即172和449bp,而健康组织中无此扩增带。该法提取的总RNA用于RT-PCR技术检测,其敏感性至少与商业出售的QiagenRNeasy提取试剂盒相当,但简单经济。     

青稞及其加工制品的核酸提取方法的研究

【目的】从青稞及其制品中提取高质量的基因组DNA。【方法】选择改良的CTAB法、Tiangen核酸提取法和Qiagen核酸提取法,对所提取的核酸分别选用紫外分光光度计法、琼脂糖凝胶电泳法和实时荧光PCR法对各种方法提取的核酸进行质量评估。【结果】从实验的青稞及青稞制品中都可以提取到高质量的DNA,为后续青稞的真伪鉴别、溯源分析以及基因组检测奠定基础。【结论】青稞种子、糌粑粉、青稞谷物棒、青稞糕点、糌粑饼干、藏舒茶更适合用Tiangen核酸提取法,青稞精华片和青稞酵素则更适合用CTAB改良法+纯化法。     

紫杉二烯合成酶基因转化红豆杉内生真菌XT5的研究

[目的]研究紫杉二烯合成酶基因转化短叶红豆杉（Taxus brevifolia）内生真菌XT5的情况。[方法]采用土壤农杆菌介导法将来自红豆杉中的紫杉二烯合成酶基因转入红豆杉内生真菌XT5中,研究紫杉醇发酵产量。[结果]成功转化得到8株重组子,其中XT5-TS-2的紫杉醇含量得到了大幅提高,其最高产量为423.983 4μg/L,比原始菌株提高了53.19%,表明转化紫杉二烯合成酶基因能够有效提高紫杉醇产量。[结论]该研究可为提高红豆杉内生真菌发酵生产紫杉醇产量提供理论支持。     

胶树白粉菌收集及DNA和RNA提取方法比较

橡胶树白粉菌（Oidium heveae）是专性寄生的病原真菌,难以获取足量和纯度高的菌体,因而不易提取到足够多和质量高的核酸,阻碍了该菌的分子生物学研究袁目前关于橡胶树白粉菌核酸提取方法少有报道.采用软毛笔刷取和醋酸纤维乙酯撕取两种方法收集白粉病菌遥在尝试使用常规的菌物RNA提取方法基础上袁通过优化操作步骤、方法等,研究出改良的Trizol法,用该法能高效率提取到纯度高的橡胶树白粉菌RNA。比较不同DNA提取方法的效率,推荐使用得率高、纯度好的OMEGAFungalDNA kit提取法,用于提取橡胶树白粉菌的DNA。     

几种提取乌苏里貉毛囊核酸方法的比较(英文)

[目的]该研究旨在探讨提取乌苏里貉毛囊核酸的可靠方法。[方法]本实验分别利用改进的有机酚法,chelex-100法,PCR缓冲液法和试剂盒法,从乌苏里貉毛发中提取核酸DNA,对所提核酸进行PCR扩增及电泳分析,并且对四种方法进行比较。[结果]经分光光度计测定和凝胶电泳检测,本实验研究结果表明chelex-100提取的核酸有蛋白质等杂质,PCR缓冲液法提取核酸浓度低有机酚法和试剂盒法提取的DNA浓度高,且没有杂带。[结论]本研究为进一步探索高效,简便的提取乌苏里貉毛囊核酸DNA提供了有力的科学理论基础。     

木薯块根总RNA提取方法的比较和改进

[目的]为更好地利用基因操作手段改良木薯品质和提取高质量的木薯总RNA提供科学依据。[方法]采用4种方法提取木薯块根RNA,筛选一种最简单、有效的方法,并利用RT-PCR技术克隆木薯淀粉分支酶,分析所提取RNA的质量。[结果]结果表明,用改进的CTAB法和plant RNAReagent kit均能提取高质量的RNA,用plant RNAReagent更能节省时间,而且纯度比较高。对plant RNAReagent提取的RNA进行RT-PCR克隆,克隆出了与木薯淀粉合成有关的SBEII基因。[结论]plant RNAReagent kit提取的RNA,其质量可以满足基本的试验要求。     

Method for Isolating Mitochondrial DNA from Etiolated Tissue of Cabbage

Isolation of high-quality mitochondrial DNA（mtDNA） is an important premise for researching molecular mechanisms in cytoplasmic male sterility of cabbage（Brassica oleracea L.var.capitata）. An efficient protocol for separation and purification of mitochondria and extraction of mitochondrial DNA（mtDNA） from etiolated tissues of cabbage was developed. We took a method combined mannitol density gradient with differential centrifugation, selected appropriate rotational speed, extended DNase I treating time and changed mitochondria cracking condition. The results showed that the extracted mitochondria in this protocol had complete structure, appeared to ellipsoid and had not been contaminated with other impurities under the Jannus Green B staining. The isolated mitochondrial DNA had high purity and yield through detecting the optical density, nuclear specific primer PCR and agarose gel electrophoresis. The results indicated that mitochondrial DNA extracted by this protocol had high quality and enabled to be used in futher genetic studies.     

利用改良CTAB法提取淮山叶片高质量DNA

[目的]为淮山的分子生物学研究奠定基础。[方法]以淮山嫩叶为试材,用改良CTAB法提取其中的DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳和ISSR—PCR扩增对所得DNA的质量和浓度进行检测,考察该方法对DNA的提取效果。[结果]所提取DNA的分子量与λDNA相近,各泳道均出现1条清晰的DNA条带,且条带的完整性较好,无蛋白质和RNA污染,无DNA降解现象;以所提DNA为模板进行ISSR-PCR扩增,可获得稳定的扩增条带。[结论]改良CTAB法简单高效,所得DNA质量较高,RNA消化彻底,DNA无明显降解,进行ISSR分析时,务带清晰,多态性较好。     

自制冰冻切片包埋剂在紫花地丁种子RNA提取中的应用

[目的]通过比较使用自制包埋剂和合成胶水包埋紫花地丁种子提取RNA的效果,证明提取紫花地丁种子RNA时,使用自制包埋剂能获得高质量的RNA。[方法]用自制包埋剂和合成胶水分别包埋紫花地丁种子,冰冻切片机切片破碎种子,提取RNA,通过RNA浓度、纯度及完整性的检测,比较2种方法提取RNA的效果。[结果]自制包埋剂组和合成胶水组提取的RNA浓度分别为3.42和1.04μg/μl;1.0%琼脂糖凝胶电泳显示2组RNA都可见2条明显的条带,28S rRNA与18S rRNA条带亮度之比大于1,但合成胶水组有较为明显的拖带。[结论]该试验结果显示,自制包埋剂包埋紫花地丁种子进行切片破碎,完全能满足提取RNA的需要,是一种成本低、效果好、操作简便、具有实用价值的方法。     

改良热酚法快速提取棉花不同组织RNA

[目的]以改良热酚法快速提取棉花不同组织的RNA。[方法]以陆地棉(Gossypium hirsutum L.)新陆早26为材料,在冷酚法的基础上对RNA的提取方法进行改进。[结果]利用改良热酚法获得的RNA不仅完整性极好、浓度高且无多糖多酚污染,可用于cDNA末端快速扩增(RACE)、Northern Bloting、基因芯片分析及转录组分析等研究。[结论]该方法不但适用于提取棉花叶片总RNA,而且在根、花冠、花药、发育的纤维中均能获得高质量的RNA,同时节约成本,操作简便,对环境污染小。     

油梨果肉DNA提取方法的比较

为了获取高质量的油梨果肉DNA,以油梨果肉为试材,比较改良SDS法、改良CTAB法和试剂盒法对油梨果肉DNA的提取效果。结果表明:上述3种方法均可从油梨果肉中提取DNA,但改良SDS法与改良CTAB法所获得的DNA浓度都在600μg/m L以上,纯度(OD260nm/OD280nm)均在1.8左右,纯度高且完整性较好,可用于未来分子标记分析。     

药用植物白术DNA提取方法的研究

为从白术叶片中提取高质量的基因组DNA，在传统CTAB法的基础上，采取先破碎细胞，将存在于细胞质中影响DNA提取质量的多酚等次生代谢物质去除后再裂解细胞核，经分离纯化，提取的DNA通过A260／A280比值测定，琼脂糖凝胶电泳和ISSR-PCR扩增检测，结果表明改良CTAB法提取的DNA纯度高，可作为ISSR分子标记的模板及用于后续分子生物学的研究。     

信号芋螺基因组DNA提取方法的优化

高质量的基因组DNA的获取是芋螺毒素基因克隆及基因组文库构建的关键。笔者采用4种方法提取信号芋螺（Conus litteratus)的不同组织器官的DNA，并综合比较了各组DNA的浓度和纯度、DNA片段的大小和完整性。结果表明，由改良的DNA快速提取试剂盒法提取的DNA纯度和浓度较好；4种组织器官中，腹足纯度较高，是更合适的提取组织；肝胰脏和毒管获取的DNA产率最高，但片段完整性差，污染严重；PCR反应获得了跟预期大小一致的特异扩增产物。因此，信号芋螺基因组DNA的提取最佳方法为改良的DNA快速提取试剂盒法，提取部位为腹足组织，可以获得高质量的基因组DNA，且符合后续实验要求。     

大豆种子DNA快速提取方法的改良及应用

高质量的DNA是进行基因克隆等分子生物学试验的前提条件。因大豆种子中蛋白质和油脂含量丰富,利用传统方法提取DNA质量很难达到试验要求。研究在SDS提取液的基础上,通过添加表面活性剂NP-40和Tween-20,优化出一种适合于大豆种子DNA快速提取的方法。优化后的SDS方法提取的DNA质量较高,OD260/OD280在1.809～1.916之间,无蛋白质和RNA污染。对该方法提取的DNA进行了基因克隆和分子标记的试验验证,结果表明,它们能够用于大豆基因克隆、分子标记。     

热带果树基因组DNA提取方法的改良及Southern blot分析

以香蕉、番木瓜、龙眼为代表材料,建立一套适合热带果树基因组DNA提取的方法——改良CTAB法。将提取各基因组DNA经限制性内切酶完全消化后,分别以香蕉内源乙烯受体基因（AF113748）、番木瓜八氢番茄红素脱氢酶基因PDS（DQ779922）、龙眼开花相关基因LEAFY（ADQ160214）为探针进行Southern blot杂交,3种植物的基因组DNA适宜上样量的60μg,杂交条带清晰,背景弱,说明采用改良CTAB法,能保证基因组DNA提取的浓度和纯度,符合Southern blot的要求。