庄河地区出口水产品微生物检验分析

对庄河地区2012—2017年60余家水产品加工企业的出口水产品进行了金黄色葡萄球菌、菌落总数、大肠杆菌/大肠菌群、沙门氏菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特氏菌、霍乱弧菌的检测,共检验鱼类制品146 775批,贝类制品3 786批。结果表明,鱼类制品和贝类制品的金黄色葡萄球菌、菌落总数、大肠杆菌/大肠菌群的检验合格率均较高分别为99.9%,99.8%,99.9%,99.9%和99.9%,99.6%,99.7%,99.9%;沙门氏菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特氏菌、霍乱弧菌均未检出。庄河地区出口水产品微生物检验情况令人满意。     

产耐热直接相关溶血素的副溶血性弧菌PCR检测及其表型分析

运用PCR技术成功建立了检测产耐热直接相关溶血素(TRH)的副溶血性弧菌的方法,并应用该方法从1株标准株和其他3种不同来源的37株副溶血性弧菌中的13株扩增出0.5 kb的trh基因特异性扩增带;产TRH的副溶血性弧菌中1株标准株,12株分离自腹泻病人排泄物或呕吐物,1株分离自水产动物养殖用水;并且产TRH与尿素酶阳性的副溶血性弧菌菌株之间的具有一一对应的关系,结果认定尿素酶阳性是产TRH的副溶血性弧菌菌株的表现型。     

副溶血性弧菌生长预测模型的建立与应用探讨

通过测定2株副溶血性弧菌4~40℃的生长曲线,研究它们的生长规律,运用预测食品微生物学的方法,分别对它们建立初级和二级预测模型。结果表明,副溶血性弧菌的生长曲线在低温阶段,适用线性回归方程拟合;在适温阶段,生长曲线都呈典型的S形,适合用Gompertz模型拟合。二级模型采用平方根方程的扩展式Ratkowsky3式拟合,根据二级预测模型,分别得出副溶血性弧菌的最低生长温度Tmin,最高生长温度Tmax和最适生长温度。模型验证表明,预测值和实测值的残差都在±0.05范围内,偏差因子和准确因子均在可接受范围内,模型是可靠的。最后,讨论了模型的应用前景。     

沿海地区副溶血弧菌的表型及其主要毒力基因分布特征

为了调查浙江沿海地区副溶血弧菌的分布及其携带毒力基因的特征,在舟山、象山、温州三地实地采样385份,包括海水、泥土和水产品等,共分离到副溶血弧菌菌株278份,其中27株为tdh基因阳性,阳性率为9.7%,trh与ureC基因的阳性率分别为22.3%与11.8%,提示浙江沿海地区广泛存在着致病性副溶血弧菌污染.将不同来源...     

上海地区虾源弧菌分离鉴定及分子分型研究

为了进一步了解上海市凡纳滨对虾主养区虾源弧菌的分布特征以及主要种属的分子基因型特征,为本地区虾的弧菌病的流行调查、防控治疗提供依据。本研究采用选择性培养基筛选和全自动细菌鉴定仪鉴定的方法,对不同时间,不同池塘的虾源弧菌进行分离鉴定,总共分离到52株不同来源的弧菌,其中30株副溶血弧菌(57.7%),9株拟态弧菌(17.3%),7株创伤弧菌(13.5%),4株溶藻弧菌(7.7%),1株霍乱弧菌(1.9%)以及1株河流弧菌(1.9%)。调查结果显示,上海地区虾源弧菌以副溶血弧菌为主。进而对30副溶血弧菌株副溶血弧菌进行分子分型研究,EIRC-PCR指纹图谱显示基因型存在多态性,每个分离株的基因扩增条带数介于4~8之间,大小都在250~4500 bp之间;聚类分析分为5个亚群,其中Ⅰ亚群15株(50%),Ⅱ亚群6株(20%),Ⅲ亚群6株(20%),Ⅳ亚群2株(6.7%),Ⅴ亚群(3.3%)。结果表明,上海地区虾源副溶血弧菌存在一种主要流行亚群,对生产中药物筛选及疫苗研制具有一定的参考价值。     

鱼肠道弧菌疫苗制备及免疫保护效果

本文比较了不同灭活剂及灭活条件对鱼肠道弧菌（Vibrio ichthyoenteri）的灭活效果,确定以0.4%（v/v）福尔马林溶液在25℃下处理30h作为疫苗的最佳灭活条件,用灭活的鱼肠道弧菌疫苗免疫大菱鲆并测定了该疫苗针对鱼肠道弧菌、溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）、副溶血弧菌（Vibrio prarhaemolyticus）、鳗弧菌（Vibrio anguillarium）等的免疫保护力,结果表明,采用注射免疫方式接种后,针对鱼肠道弧菌的免疫保护率达75%;溶藻弧菌免疫保护率为67.6%;鳗弧菌免疫保护率为50%;副溶血弧菌免疫保护率为57.2%;采用浸浴免疫方式接种后,疫苗针对鱼肠道弧菌、溶藻弧菌、鳗弧菌、副溶血弧菌的免疫保护力分别为25%、22.3％、11.1%、12.5%。     

夏天吃海鲜 八个致命细节要注意

1.海鲜煮不熟含有细菌海鲜中的病菌主要是副溶血性弧菌等,耐热性比较强,80℃以上才能杀灭。除了水中带来的细菌之外,海鲜中还可能存在寄生虫卵以及加工带来的病菌和病毒污染。一般来说,在沸水中煮4min～5min才能彻底杀菌。因此,在吃醉蟹、生海胆、酱油(油食品)腌海鲜之类不加热烹调的海鲜一定要慎重,吃生鱼片的时候也要保证鱼的新鲜和卫生。     

不同条件下副溶血弧菌对墨吉明对虾致病性研究

为研究墨吉明对虾的弧菌病防控措施,通过人工注射感染的方式,研究不同数量副溶血弧菌及在不同温度、盐度、pH、不同硝酸氮、亚硝酸氮和氨氮浓度条件下副溶血弧菌对墨吉明对虾的致病性的影响。结果表明：当人工感染副溶血弧菌数量为3.92×10⁶ CFU以上时,24 h内对虾累计死亡率100%,副溶血弧菌数量为3.92×10⁵ CFU时,24 h对虾累计死亡率为50%。温度为32℃时,对虾累计死亡率最高,在一定范围内,随着温度的升高对虾累计死亡率升高。在温度为(24±1)℃时,盐度为10‰时对虾的死亡率最高,盐度为30‰次之,盐度为20‰时最低;在温度为(24±1)℃,盐度为(22±1)‰时,对虾累计死亡率pH 9时最高,pH 7时次之,pH 8时最低;温度为(24±1)℃,盐度为(22±1)‰,硝酸氮浓度为30.0 mg/L时,对虾累计死亡率最高,浓度为20.0 mg/L时次之,浓度为10.0 mg/L时最低;亚硝酸氮浓度为10.0 mg/L时死亡率最高,5.0 mg/L时死亡率次之,1.0 mg/L时死亡率最低;氨氮浓度为1.5 mg/L时死亡率最高, 1.0 mg/L时死亡率次之,0.5 mg/L时死亡率最低。实验证实：当副溶血弧菌数量为3.92×10⁵ CFU以上和数量为3.92×10⁴ CFU爆发72 h之后,弧菌病难以控制;在26~32℃范围内,随着温度的升高对虾累计死亡率升高;盐度与pH对墨吉明对虾的致病性可能与噬菌体有关;硝酸氮对感染副溶血弧菌的墨吉明对虾有胁迫作用;一定范围内亚硝酸氮浓度(1.0~10.0 mg/L)、氨氮浓度(0.5~1.5 mg/L)越高,副溶血弧菌对墨吉明对虾的致病性的影响越强,对虾累计死亡率越高。该试验为墨吉明对虾的弧菌病防控提供了坚实的基础。     

中国对虾来源哈维氏弧菌鉴定及生物学分析

从患病中国对虾中分离到优势菌株,对其进行生理生化特性及分子生物学分析。TCBS培养基上菌落呈现绿色(以下称为TCBS-G), 通过形态学、生理生化分析,菌株TCBS-G为革兰氏阴性菌,短杆状,两端钝圆,有鞭毛；Biolog GIII分析表明,该菌株生长代谢利用情况与弧菌吻合,与哈维氏弧菌的相似系数为？。基于16S rRNA、gyrB、HSP60基因序列分析同源性,16S rRNA未将TCBS-G有效鉴定,gyrB、HSP60基因序列与哈维氏弧菌相聚类,聚合置信度可达99%。综合生物学及分子特征,判定TCBS-G为弧菌属(Vibrio pacini)的哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)。底物平板试验结果显示TCBS-G菌株胞外产物具有淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶和DNA酶活性；且能够扩增出哈氏弧菌溶血素基因的保守特异性片段。     

弧菌融合蛋白TDH-VVC-VMHA的表达及弧菌毒素双抗体夹心ELISA检测方法的建立

为提高食品中副溶血弧菌、创伤弧菌和拟态弧菌毒素初筛的速度与效率,建立了双抗体夹心ELISA检测方法。以融合蛋白TDH-VVC-VMHA包涵体为抗原免疫豚鼠,采用豚鼠抗融合蛋白免疫血清为包被抗体,辣根过氧化物酶（HRP）标记羊抗豚鼠IgG为标记抗体,应用棋盘滴定法确定ELISA的最适条件。结果表明,所建立的方法与副溶血弧菌、创伤弧菌、拟态弧菌的培养物上清有较明显的阳性反应,与绿脓杆菌、金黄色葡菌球菌、李氏杆菌、甲型副伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌等5种非弧菌属食物中毒菌培养物上清未见交叉反应,与溶藻弧菌、河流弧菌和麦氏弧菌等3种弧菌培养物上清也未见交叉反应。这说明,该方法可以用于食品中副溶血弧菌、创伤弧菌和拟态弧菌毒素的快速同步免疫学检测。     

五株食源性致病菌特异性卵黄抗体的研制

目的：确定制备用作食品添加剂的引起食品中毒常见的5种致病菌的高免卵黄抗体的技术参数。方法：以食品中常见的由该实验室分离和鉴定的沙门氏菌,金黄色葡萄球菌,溶血性链球菌,副溶血弧菌,变形杆菌五株地方性致病菌株的等量混合菌液用油佐剂乳化后免疫新开产的蛋鸡,收集高免蛋,利用水稀释法制备多克隆卵黄抗体,并用超滤法对其进行浓缩。结果：免疫后高免蛋收集的最佳时间为三免后第2~8周,水稀释法最佳稀释比例为1:6,pH值为5.2,通过超滤IgY浓度提高了6.48倍,IgY的纯度由原来的24.6%提高到42.3%。结论：通过上     

食品（水产品）中副溶血性弧菌的能力验证及分析

通过能力验证,能够提升试验人员水平,加强对淡水养殖中副溶血性弧菌污染防治指导。前处理方法按照组织方发放的参试指导书,后续检测依据GB 4789.7—2013定性法。结果表明,18-R696及18-T441均未检出。符合组织方要求,结果评价满意,已收到证书。     

对虾急性肝胰腺坏死病病原毒素基因在不同环境下表达差异研究

急性肝胰腺坏死病(AHPND)是由副溶血弧菌引起的对虾病害,给世界养虾业造成了严重的经济损失。本文旨在研究主要致病因子Pir毒素基因在不同环境因素处理下的表达差异,初步探究抑制Pir毒素基因表达的可能措施。应用荧光定量RT-PCR技术,采用比较CT值法检测致病菌中Pir毒素基因在不同温度和pH条件下的表达量。结果表明,试验分离株为引发对虾AHPND毒素蛋白Pir的致病株,在18℃、24℃、30℃和36℃条件下,Pir毒素基因的表达量随温度的增加而升高,在pH 7、pH 8和pH 9条件下,Pir毒素基因的表达量随pH的上升而降低,且pH因素对其表达量差别较大。研究结果为探究副溶血弧菌致病力强弱和环境因素的关系提供了基础数据,同时也为养殖生产中AHPND防控策略的制定提供了科学依据。     

地衣芽孢杆菌抗菌肽的纯化及抗菌特性分析

从地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）LY12发酵液中分离纯化抗菌肽,并得到抗菌肽抗菌特性。通过超滤、(DEAE-Sepharose FF离子交换层析、Sephadex G-15分子筛凝胶过滤层析、反向高效液相色谱（RT-HPLC）等方法纯化该抗菌肽。LC-ESI-MS质谱显示抗菌肽分子量为2750.785Da,同Tricine SDS-PAGE分析结果基本一致。体外抗菌试验结果显示,抗菌肽LYF12能够抑制丝状真菌、细菌的生长。对枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、大肠杆菌（Escherichia coli）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、藤黄微球菌（Micrococcus aureus）、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）、副溶血性弧菌（Vibrio parachaemolyticus）的最低抑菌浓度分别为9.8、19.8、20.7、7.2、9.6、10.2 和15.7μg/ml。抗菌肽显示出对革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌及真菌具有较好的抗菌效果。从地衣芽孢杆菌LY12分离的抗菌肽在食品防腐中具有潜在的应用价值。     

出口水产品中微生物污染调查分析及限量探讨

为了解出口水产品中微生物污染状况,并为制定微生物限量标准提供依据。采用GB/T 4789—2010的微生物检测方法,检测待出口水产品中菌落总数、大肠菌群、大肠杆菌、沙门氏菌及金黄色葡萄球菌,并与国内外微生物限量标准进行比较。结果显示,374份检测样品中均未检出大肠杆菌及沙门氏菌;金黄色葡萄球菌的总检出率为1.87%;菌落总数基本符合标准,达标比例分别为:鱼制品93.3%,冷冻鱼类96.36%,虾类100%,软体动物85%,饭食类88.89%;大肠菌群为主要污染菌,上述种类符合标准的比例分别为:58.53%,77.38%,72.73%,45%,100%。     

菌落聚合酶链反应检测支气管败血波氏杆菌

根据支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica) 鞭毛蛋白基因的上游序列设计1对引物Fla1和Fla2,采用菌落PCR方法扩增目的基因片段来检测支气管败血波氏杆菌。利用该方法成功的从8株支气管败血波氏杆菌中扩增出237 bp左右的特异性目的片段。特异性试验表明,该方法对大肠埃希菌、胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、猪链球菌和副猪嗜血杆菌均无交叉性反应。灵敏性试验表明,将单个菌落稀释105倍利用此菌落PCR仍能扩增到相应的目的片段。结果表明建立的菌落PCR方法对支气管败血波氏杆菌的检测敏感性高、特异性强,可用于Bb感染的诊断和流行病学调查。     

水产品加工方式对蛋白特性影响的研究进展

水产品加工是渔业生产的延续,也是渔业发展中必不可少的环节,能防止水产品发生腐败变质,从而延长水产品货架保存期的有效办法。水产品在加工过程中,蛋白质的二级结构、溶解度、Ca2+-ATPase活性等特性指标会发生变化,直接影响水产品的营养组成及品质。水产品的加工方式种类繁多,如何选择适当的加工方式是保证水产品品质的关键。介绍了水产品加工方式及其优缺点,并对加工过程中蛋白的特性变化进行了概述,旨在为水产品加工方式的运用及新型加工方式的创建提供参考。     

水产品中甲醛的残留及控制

甲醛是世界卫生组织宣布的一种强烈的致癌物质,在水产品中残留会对人体健康产生危害。综述了水产品中出现甲醛残留的原因,比较了甲醛的定性判定方法、定量检测方法以及样品前处理方法对甲醛测定结果的影响,提出了减少水产品中甲醛的本底含量、控制水产品养殖加工过程中的污染、杜绝水产品中甲醛的人为污染等3项措施来控制水产品中甲醛的残留。     

水产品中镇静剂残留检测技术研究进展

中国鲜活水产品市场增长迅猛,但产销地域差别明显,长距离运输需求显著。镇静剂能够抑制机体的新陈代谢,降低鲜活水产品应激反应,其被应用于水产品运输、繁育和手术等环节,以提高水产品的成活率。但是镇静剂在水产品中广泛使用而可能导致的残留问题已经引起了国内外研究人员的关注。本文对水产品中镇静剂残留检测技术研究进展进行了概述,以期为后续研究提供参考。对水产品中镇静剂的类型及使用规定进行了介绍,分析并总结了近10年来水产品中镇静剂类药物的检测研究进展。论述了水产品中镇静剂残留检测样品前处理方法、高效液相色谱检测方法、高效液相色谱串联质谱法和气相色谱串联质谱法进展,归纳了相关方法的优缺点,并对其发展做出展望。在目前研究的基础上,未来应在新型简单、高效样品前处理方法方面开展更深入的研究,为水产品质量安全监管提供技术支撑。     

虾皮加工原料减菌处理工艺研究

虾皮是以中国毛虾(Aectes chinensis)为原料,经干制加工而成的传统水产品。为了降低虾皮加工原料的微生物本底含量,研究并优化了新鲜中国毛虾二氧化氯消毒减菌处理工艺。结果表明,减菌处理工艺条件为新鲜中国毛虾用60 mg/L的稳态二氧化氯溶液消毒4～6 min。中国毛虾减菌处理后,菌落总数降低97.45%,减菌效果非常显著。原料减菌处理后加工成的虾皮,产品菌落总数含量下降58.68%,研究结果对降低虾皮产品微生物含量、提高质量品质具有良好的参考价值。