土壤拮抗细菌的分离与筛选

为了获得高效广谱的原始拮抗细菌菌株用于油茶病害的防治,并探索其生物防治效果。从土样中分离到223株细菌,采用平板对峙培养法、发酵产物活性测定进行拮抗菌筛选。结果表明：以油茶炭疽病菌和根腐病菌为指示菌,通过平板对峙培养初步选出抑菌效果较好的菌株21株,其抑菌圈宽度在5.0~12.5 mm,占分离到的细菌总数的9.9%,其中菌株Z26抑菌效果最好;复筛表明21个菌株发酵液对供试6种植物病原菌有不同程度抑制作用,其中有8株对油茶炭疽病菌抑菌效果良好,有4株对油茶根腐病菌抑菌效果良好,其抑菌圈宽度≥10.0 mm,分别占被测菌的38.1%和19.0%,菌株Z26抑菌效果最好;发酵产物活性测定表明6个菌株的发酵液能完全抑制油茶炭疽病菌生长,效果明显,过滤液抑菌率为33.3%~58.3%,效果不明显,抑菌率超过50.0%的只有Z17、Z26 2个菌株。由此可知,菌株Z17和Z26对油茶病害有较好的抑菌效果,具有一定的生防潜力,可作为油茶病害的备选拮抗菌株开展深入研究。     

苹果腐烂病病原菌的鉴定及拮抗菌筛选

苹果腐烂病是造成华北地区苹果树主要病害之一,爆发时造成苹果树大面积死亡。为开展苹果腐烂病生物防治,本研究从山西阳泉市盂县苹果种植基地的感病植株采集组织样品,利用组织分离的手段获得目标菌株1个,编号为SX1408。采用分子生物学手段,以真菌ITS1和ITS4区通用引物扩增得到ITS区部分序列(Gen Bank登录号KR007599),经Blast和MEGA 5.0聚类分析后,将该菌株鉴定为苹果黑腐皮壳菌(Valsa mali Miyabe et Yamada)。进一步采用平板对峙培养法,从实验室保存的19株供试的生防放线菌中筛选出4株对SX1408有抑菌活性的拮抗菌,其中以BUAS13-3菌株的拮抗效果最佳,抑菌圈直径为2.80 cm,抑制率78%。研究结果将为苹果腐烂病菌的生物防治提供新的生防资源。     

柑橘绿霉病菌拮抗放线菌MY-5的筛选与鉴定

从广东省各地区水果园和蔬菜地采集土壤23份,采用稀释平板法分离获得放线菌212株。以柑橘绿霉病菌为目标菌,采用抑菌带测定法,筛选获得9株具有拮抗活性的菌株,其中菌株MY-5拮抗活性最强,抑菌带宽达18.67mm,同时对其它13种果蔬采后病害也有较强的拮抗作用。通过对菌株MY-5形态观察、培养特征、生理生化反应和16SrDNA鉴定,该菌株为链霉菌属吸水类群（Streptomyces hygroscopicus）。     

拮抗酵母添加方式对哈密瓜保鲜效果的研究

研究了拮抗酵母以不同载体和不同时间的添加方式对哈密瓜保鲜效果影响。研究表明,1.0%壳聚糖配制的1×10~8 CFU/mLWJ-1酵母悬液,处理哈密瓜能够显著(p<0.05)抑制哈密瓜果实发病率和病斑直径(6.8 mm)的扩展,显著提高WJ-1对M1的生防效力,显示了良好的应用前景;病原菌早于拮抗菌接种且间隔时间越长,拮抗菌对病害抑制效果就越差,甚至出现果实发病率高于对照,说明拮抗菌WJ-1对已经侵染哈密瓜果实软腐病致病菌M1基本没有杀死作用,初步推测空间竞争可能是拮抗菌WJ-1的主要抑菌机理之一。     

苹果轮纹病菌拮抗放线菌的筛选与鉴定

为了寻找防治苹果轮纹病的生防放线菌,该文采用平板对峙法、管碟法相结合的方法对供试菌株进行筛选,初筛数据表明,供试菌株对苹果轮纹病菌均有不同程度的抑制作用,其中S-20、Z-6、Z-8、Z-23、Z-42和5-1的抑菌率在50.0%以上,占试验总菌株的66.7%,其中5-1抑菌率达72.0%。管碟法进行发酵液拮抗活性测定,发现5-1抑菌带最宽,直径达24.9mm。效果最显著。为了加深对该菌株的了解,此文对其形态特征、培养特征及生理生化特征进行了测定,初步鉴定为链霉菌属（Streptomyces spp.）的白孢类群（Albosporus）。最后,抑菌谱试验表明,5-1不仅对苹果轮纹病菌有抑制作用,对其他多种病原真菌作用同样显著,抑菌谱广,有可能为开发新型生物农药提供可能。     

土壤放线菌K2的筛选、鉴定及其抑菌活性初探

筛选具有抑制植物病原菌活性的放线菌是农用抗生素开发的基础。通过平板对峙法筛选出8株拮抗放线菌菌株,采用生长速率法测定获得一株对植物病原菌有较好抑菌作用的菌株K2,并采用抑制菌丝生长速率法对其抑菌谱进行研究,以及进行菌种鉴定。生长速率法试验表明,放线菌菌株K2发酵液对10种供试植物病原菌菌丝生长均有不同程度的抑制作用,其中以对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)抑制效果最好,抑菌率可达57.38%。根据形态学特征、生理生化特征和基于16S rDNA序列比对,鉴定菌株K2属于链霉菌属(Streptomyces)的一个菌株。放线菌K2的代谢产物具有较广的抑菌谱,对植物病原菌的防治有很大的研究开发潜力。     

土壤放线菌X1的筛选及其抑菌活性初探

筛选具有抑菌活性的放线菌是开发农用活性抗生素的基础。本文采用生长速率法和孢子萌发法,测定了从土壤中分离出的6株拮抗放线菌的抑菌活性,并对抑菌活性较好的放线菌X1菌株进行初步研究。生长速率法试验表明,放线菌X1菌株发酵液对供试12种植物病原菌菌丝生长均有不同程度的抑制作用,发酵液对苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌和葡萄白腐病菌菌丝的抑制率均为100%。孢子萌发试验表明,放线菌X1菌株发酵液对黄瓜枯萎病菌孢子萌发的抑制率为100%。在浓度为1 mg/mL时,放线菌X1菌株发酵液乙酸乙酯萃取物对苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌和葡萄白腐病菌菌丝的抑菌率均大于90%。放线菌X1菌株抑菌谱较广,对植物病菌的防治有很大的研究开发潜力。     

苹果斑点落叶病研究

对北京地区苹果斑点落叶病研究得出,病原菌Alternaria mali Roberts强毒菌系是苹果斑点落叶病严重发生的主要原因.各果园病原菌强毒菌系发生率和致病性有差异.室内毒力测定和田间药剂防治试验结果表明,50%扑海因、70%代森锰锌、1.5%多抗霉素和10%宝丽安均有很好的抑菌效果.多抗霉素和宝丽安加入1%硼酸可以显著提高药效,并且硼酸本身对菌落生长有一定抑制作用.提出“重点保护春梢叶片,兼顾秋梢叶片”的防病原则.     

芽孢杆菌Pb-4菌株鉴定及其抑菌活性的研究

拮抗菌Pb-4是一株对多种植物病原菌有较强抑制作用的菌株。为了明确拮抗菌Pb-4的分类地位和抑菌机理,通过形态观察、生理生化特征和16S rRNA基因序列同源性比对及系统发育树分析,对Pb-4菌株进行鉴定。并采用平板对峙培养法测定Pb-4菌株的抑菌谱,显微观察其抑菌作用,采用硫酸铵沉淀和乙醚、苯提取得到抑菌活性物。通过加热处理,明确高温对Pb-4菌株抑菌活性的影响。结果表明,Pb-4菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌;Pb-4菌株对番茄枯萎病菌、黄瓜枯萎病菌、西瓜枯萎病菌、青椒枯萎病菌、辣椒疫霉病菌、苹果腐烂病菌均有抑制作用,其抑菌活性具有广谱性。该菌菌液能明显抑制枯萎病菌孢子的萌发,并对病菌菌丝有致畸作用;对番茄枯萎病菌的抑制生长率达93%,经100,121℃高温处理后的抑菌活性分别是未处理菌液的98.9%和80.1%。从菌液中提取的蛋白、酶、抗生素类活性物质对枯萎病菌的生长繁殖均有很强的抑制效果。为Pb-4菌株在病原菌防治中的广泛应用提供强有力的理论依据。     

警惕苹果上三种新的叶部病害

正近年来,苹果褐斑病、斑点落叶病发生仍然严重,尤其是褐斑病,造成落叶现象普遍。同时随着品种结构改变与栽培模式的变化,新的苹果叶部病害不断出现,给苹果产业带来威胁。苹果炭疽叶枯病炭疽叶枯病是近年来发生在嘎拉、金帅、秦冠等含金帅亲本苹果品种上的一种新的叶部病害,可造成叶片大量脱落。炭疽叶枯病发生初期,在叶片上产生明显的紫褐色圆斑,病斑扩大后边缘     

中国部分棉区棉花轮纹斑病病原菌“种”的初步鉴定

从中国棉花主产区部分地区采集棉轮纹斑病叶,分离获得17个致病链格孢(Alternaria spp.)菌株。根据链格孢菌菌体和孢子形态学观察结果,结合ITS序列测定和分析结果,明确A1等16个菌株为链格孢菌(Alternaria alternata),A3菌株为大孢链格孢菌(Alternaria macrospore)。     

聚六亚甲基双胍盐酸盐与氟环唑对苹果斑点落叶病菌的联合毒力

为明确聚六亚甲基双胍盐酸盐(Polyhexamethylene biguanidine hydrochloride, PHMB)与氟环唑(epoxiconazole)混配对苹果斑点落叶病菌(Alternaria alternata f. sp. mali)的联合作用类型及最佳配比。本研究采用菌丝生长速率法测定了聚六亚甲基双胍盐酸盐与氟环唑混配对苹果斑点落叶病菌的毒力。结果显示：聚六亚甲基双胍盐酸盐、氟环唑对苹果斑点落叶病菌的EC50分别为30.604、0.621 mg/L,二者以10:1、7:1、4:1、1:1、1:4、1:7、1:10这7个配比混合对苹果斑点落叶病菌的增效系数分别为1.41、1.55、1.59、1.57、1.09、1.12和1.14。氟环唑对苹果斑点落叶病菌的室内生物活性明显高于聚六亚甲基双胍盐酸盐。聚六亚甲基双胍盐酸盐与氟环唑以7:1、4:1、1:1这3个配比组合的增效系数均大于1.5,它们对苹果斑点落叶病菌均有增效作用。     

外源水杨酸诱导伽师瓜采后抗链格孢病害效果的研究

研究了离体条件下不同浓度的水杨酸(0、0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0 mmol/L)处理对链格孢菌菌丝生长和孢子萌发的影响,并以新疆伽师瓜为试材,在单因素试验的基础上,通过正交试验确定了外源水杨酸诱导控制伽师瓜链格孢病害的最佳处理条件。结果表明,离体条件下,低浓度(0.1~1.0 mmol/L)的水杨酸对链格孢菌的菌丝生长和孢子萌发均无显著的抑制作用;外源水杨酸诱导控制伽师瓜链格孢病害的最佳处理参数为:水杨酸浓度0.5 mmol/L,处理时间10 min,诱导间隔期48 h,该诱导处理可有效控制由链格孢菌侵染引起的伽师瓜采后黑斑病,病情指数达到最低。     

Molecular genetic characterisation of the Asc locus of tomato conferring resistance to the fungal pathogen Alternaria alternata f. sp. lycopersici

The Alternaria stem canker disease of tomato is caused by the fungal pathogen Alternaria alternata f. sp. lycopersici and its host-selective AAL-toxins. Resistance to the pathogen and insensitivity to the toxins are conferred by the Asc locus on chromosome 3L. Sensitivity to AAL-toxins is a relative character; the toxins inhibit development of all tested tomato tissues but susceptible cultivars are much more sensitive than resistant cultivars. In addition to tomato, some other plant and animal species are sensitive to the toxins as well. The likely mode of action of AAL-toxins is interference with sphingolipid biosynthesis by specific inhibition of ceramide synthase activity. To molecularly isolate Asc, transposon tagging and positional cloning strategies are applied. As a first step, transposon insertions and restriction fragment length polymorphism (RFLP) markers are identified in proximity of the Asc locus. Subsequently, the transposons are used to inactivate Asc by insertion mutagenesis, and the RFLP markers are used to identify yeast artificial chromosomes (YACs) with tomato DNA inserts. Once an Asc-insertion mutant and/or a YAC encompassing Asc has been obtained, physical isolation and characterisation of Asc will be conceivable. Elucidation of the molecular role of Asc will illuminate the specificity of host recognition by Alternaria alternata f. sp. lycopersici.Abbreviations AAL-toxin Alternaria alternata lycopersici-toxin - A. a. lycopersici Alternaria alternata f. sp. lycopersici - Asc Alternaria stem canker - HST host-selective toxin     

2株放线菌的抗菌活性及分类学地位

旨在对2株放线菌HD-103和HD-109的抗菌活性和发酵液稳定性进行比较分析,并明确2株菌的分类学地位。以13种植物病原真菌为靶标菌,利用琼脂柱法分析2株生防菌的抗菌谱;以尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporumf.sp.glycines)为指示菌,利用杯碟法检测2株生防菌发酵液的热稳定性、pH稳定性及紫外稳定性,并进行比较分析;在此基础上采用多相分类法对2株菌进行鉴定。研究结果显示：2株菌的抗真菌谱均较广,其中HD-103对禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearumf.sp.Glycines)的抑制效果最显著,抑菌圈直径达到23.7mm,HD-109对烟草赤星病菌(Alternariaalternate)抑制效果最好,抑菌圈直径达25.0mm;HD-103的抗菌活性物质较HD-109的活性物质更为稳定;分类学鉴定结果表明,菌株HD-103与HD-109为微白黄链霉菌(Streptomycesalbidoflavus)的2个菌株。菌株HD-103与HD-109能够抑制多种植物病原真菌,其发酵液具有较好的热稳定性和酸碱稳定性,具有开发为新型生物农药的潜力。     

甜瓜叶斑病病原鉴定及室内药剂筛选

【目的】明确近年来引起甘肃大棚甜瓜叶斑病的病原,为该病害的有效防治提供参考依据。【方法】本试验分别采用组织分离法、单孢分离法和生长速率法,对甜瓜叶斑病病原菌及其物学特性和室内药剂筛选进行了研究。【结果】将引起甜瓜叶斑病病原菌病原菌鉴定为多隔链格孢(Alternaira peponicola( Rabenhorst ) simmous)和瓜链格孢(Alternaria cucumerina(Ell.et Ev.)Elliott.)；这两种链格孢生长的最适温度为30℃、光照、适宜培养基分别为完全光照、甜瓜煎汁培养基和完全黑暗、PDA；室内药剂筛选发现不同药剂对不同病原菌抑菌率不同,其中10%苯醚甲环唑、40%氟硅唑、50%福美双、70%代森锰锌对多隔链格孢菌抑菌率均在84%以上,分别为96.66%、94.46%、90.82%、84.37%,其EC₅₀分别为17.89μg/mL、3.41μg/mL、44.27μg/mL、42.34μg/mL；50%醚菌酯、43%戊唑醇、40%腈菌唑对瓜链格孢抑菌作用较好,抑菌率均在85%以上,分别为98.20%、90.82%、85.43%,其EC₅₀分别为3.45μg/mL、21.35μg/mL、5.21μg/mL。【结论】研究结果为甜瓜叶斑病的有效防治提供了依据。     

冬枣贮藏期浆胞病病原分离与鉴定

在天津地区栽培的冬枣上发现冬枣贮藏期浆胞病真菌病害,从病果上分离出2种真菌菌株,回接后,发现病症与自然发病症状完全一致,而且从接种病果上又重新分离到了此病病原真菌,经鉴定和致病性测定,确认为链格孢菌(Alternaria alternata(Fr.)Keissl)和裸孢壳属(Emericella nidulans(Eid.)),其中裸孢壳属(Emericella nidulans(Eid.))在冬枣上还属国内外首次报道.     

金龟子绿僵菌对棉花枯萎病菌的拮抗作用研究

在实验室条件下,研究了虫生真菌金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)对棉花枯萎病菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporium f.sp.vasinfectum)的拮抗作用及其机制。对峙培养结果表明,金龟子绿僵菌的3个供试菌株对3株枯萎病菌均有抑制作用,其中以Ma55抑制效果最好。在培养基中加入Ma55不同浓度的孢子悬浮液,当浓度为3.25×106 cfu.mL-1时,5 d后,对3株枯萎病菌菌丝生长的抑制率均超过70%。Ma55液体振荡培养20 d获得的无菌发酵液对3个枯萎病菌菌株菌丝生长的抑制率分别达到59.86%、56.99%和57.09%,对它们的分生孢子产生及分生孢子萌发也都具有显著的抑制作用。显微镜观察未发现金龟子绿僵菌与棉花枯萎病菌菌丝间有重寄生现象。上述结果显示,金龟子绿僵菌对供试棉花枯萎病菌的拮抗机制主要是营养竞争、空间竞争及抗生作用。     

烟草赤星病菌拮抗链霉菌的多重筛选及发酵液理化性质

以烟草赤星病菌为靶标菌,利用活体对峙拮抗、发酵液抑菌活性和离体叶片防效测定相结合的方法,从土壤中分离得到的371株放线菌中,筛选到2株抑菌效果明显、抗菌谱广、效果稳定的拮抗放线菌菌株。拮抗菌发酵液的理化性质测定表明:两菌株发酵液对温度、紫外线、自然光、酸碱的稳定性及耐贮性和菌株遗传特性虽有一定差异,但均较为稳定,其中,菌株182-2显示出了良好的抑菌防病效果和优良的稳定性,有开发应用价值。     

冬瓜枯萎病菌核糖体rDNA ITS区的克隆与序列分析

采用镰刀菌核糖体基因转录间隔区(ITS)通用引物,PCR扩增冬瓜枯萎病菌核糖体基因ITS区,并对产物进行克隆和序列分析;利用Mega 4.1软件对序列及GeneBank中以葫芦科为寄主的镰刀菌不同专化型ITS序列进行聚类。冬瓜枯萎病菌ITS全长1 063 bp,其中包括18S rDNA一部分序列,5.8S rDNA,ITS1和ITS2全部序列及28S rD-NA部分序列。聚类结果将15个菌株ITS序列划分为2个类群,类群I包括4个菌株,分别为2个西瓜枯萎病菌株和2个甜瓜枯萎病菌株;类群II包括11个菌株,其中冬瓜枯萎病菌株就在该类群中,其余为甜瓜枯萎病菌株5个、西瓜枯萎病菌株3个、黄瓜枯萎病菌株、丝瓜枯萎病菌株和葫芦枯萎病菌株各1个。