GlyCAM-1在自然发情绵羊子宫中的表达研究

旨在研究GlyCAM-1 在绵羊自然发情子宫组织中的表达变化,以期为周期发情绵羊子宫中GlyCAM-1 的表达受孕酮诱导调控的推测提供支持。运用实时荧光定量PCR和免疫印迹法对绵羊自然 发情后子宫第10、12、14、16 和18 天GlyCAM-1 mRNA和蛋白表达变化进行检测。实时荧光定量PCR结果显示：在绵羊发情后的第10~18 天之间,子宫组织中GlyCAM-1 的表达呈现先下降再上升的趋势,发情后的第10 天GlyCAM-1 在转录水平表达出现峰值,并且显著的高于另外4 个时段(P<0.05),第12 天GlyCAM-1 mRNA水平显著下降(P<0.05),第14~16 天的表达量保持相对恒定,第18 天GlyCAM-1 mRNA水平再次显著升高(P<0.05),但仍低于第10 天水平(P<0.05)。Western Blotting 检测结果显示：绵羊在自然发情后的第10~18 天,子宫内膜上的GlyCAM-1 蛋白表达量的变化亦呈现出先下降后上升的趋势,与其他4 个时间点相比第10 天的蛋白表达量达到峰值(P<0.05),第12~16 天GlyCAM-1 的蛋白表达量没有显著变化(P>0.05),GlyCAM-1 的蛋白表达量在第18 天显著升高(P<0.05)。GlyCAM-1 在转录与翻译水平的表达变化一致,呈现先下降后上升的趋势。该结果为周期发情绵羊子宫中GlyCAM-1 的表达可能受 孕酮诱导调控的推测提供支持。     

β-catenin在人工诱导发情绵羊子宫的表达研究

为探讨β-catenin在人工诱导发情绵羊子宫组织中的表达情况,本试验采用实时荧光定量PCR与半定量PCR检测绵羊发情后第10、12、14、16、18天子宫组织中β-catenin mRNA的表达情况。实时荧光定量PCR与半定量PCR结果显示:2种检测方法均能检测出不同时期的绵羊子宫中β-catenin mRNA表达,其中绵羊发情后第10天β-catenin mRNA的相对表达量最大,显著高于其他4个时间点(P0.05),第12天相对表达量显著降低(P0.05),之后相对保持恒定,到第18天又显著升高(P0.05)。结果表明:实时荧光定量PCR与半定量PCR均可用于检测绵羊子宫组织中β-catenin mRNA的相对表达量;在绵羊发情后第10~18天,β-catenin在子宫中的呈现先减少后增加的波动变化趋势。     

Glu-1位点等位变异及表达量对麦谷蛋白聚合体粒度分布的影响

选用我国春播麦区23份(试验I)和北部冬麦区21份(试验II)品种(系),研究了Glu-1位点等位变异及其亚基表达量对谷蛋白聚合体粒度分布的影响。结果表明,Glu-1位点等位变异及其亚基表达量显著影响谷蛋白聚合体的粒度分布,且影响程度受蛋白质含量,尤其是高分子量谷蛋白总量水平的影响。在高分子量谷蛋白总量较低时(试验I),Glu-B1和Glu-D1位点对不溶性谷蛋白大聚体含量(UPP)及其占聚合体蛋白总量的百分比(%UPP)的加性效应都达1%显著水平;Glu-B1和Glu-D1位点单个亚基对两者的贡献分别为7^OE+8^* >7+9 >17+18 >7+8和5+10 >2+12,具有5+10亚基组合的%UPP显著高于具有2+12的亚基组合。高分子量谷蛋白的亚基表达量与UPP含量呈高度正相关,相关系数为0.79~0.93(P < 0.01)。而在高分子量谷蛋白总量较高时(试验II),仅Glu-D1位点对%UPP的加性效应达5%显著水平,5+10亚基对%UPP的贡献显著高于2+12和4+12;亚基组合间的聚合体粒度分布无显著差异。高分子量谷蛋白的亚基表达量与UPP含量的相关系数为0.42~0.86(P < 0.05或0.01)。结合高分子量谷蛋白表达量和优质亚基进行选择,能有效提高不溶性谷蛋白大聚体的含量和相对比例,有利于面筋强度和加工品质的进一步提高。     

自制有机碘栓对獭兔子宫内膜炎治疗研究

研究自制有机碘栓对獭兔子宫内膜炎治疗效果。通过子宫灌注致病性大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌、沙门氏菌、蜡状芽孢杆菌等混合菌液,复制獭兔子宫内膜炎病理模型。分别于1天,3天,5天按0.01g/kg体重(按有效碘计算)子宫投放有机碘栓进行治疗,观察其用药前后的临床症状、子宫形态、子宫内膜病理学变化,并测定血清SOD,MDA,GSH-Px等生化指标。投药后第4天阴门肿胀及阴道充血逐渐消退,子宫分泌物逐渐减少;子宫颈和子宫角轻微肿胀,宫腔内有少量透明分泌物;子宫内膜较完整,上皮细胞结构基本正常。治疗组在第4天血清SOD和GSH-Px活力均高于病理对照组,差异显著(P0.05);第6天血清SOD活力高于病理对照组,差异显著(P0.05),而血清GSH-Px活力高于病理对照组,差异极显著(P0.01),血清MDA含量低于病理对照组,差异极显著(P0.01)。有机碘栓可有效治疗獭兔子宫内膜炎。     

食欲素A对绵羊卵巢颗粒细胞P-AMPK与P-ERK信号通路的影响

为研究食欲素A对绵羊卵巢能量代谢及生长发育的调节作用,在体外培养黄体化颗粒细胞,用浓度为0.05,0.10μg/m L的食欲素A刺激细胞后,分别于0,2,6,12,24 h提取细胞总蛋白,采用Western Blot法对P-AMPK及P-ERK的表达量进行检测。结果显示,食欲素A刺激细胞2 h,0.05,0.10μg/m L剂量组的P-AMPK表达量与对照组相比均极显著提高(P0.01),食欲素A刺激细胞6 h,0.05,0.10μg/m L剂量组P-AMPK的表达量均达到最高值(P0.01),且0.10μg/m L剂量组表达量明显高于0.05μg/m L剂量组;食欲素A刺激细胞2 h,0.05,0.10μg/m L剂量组的P-ERK表达量与对照组相比均极显著提高(P0.01),食欲素A刺激细胞24 h,0.10μg/m L剂量组的P-ERK表达量极显著高于平台期(6~12 h)(P0.01)并达到最高值。表明食欲素A通过P-AMPK和P-ERK途径参与黄体能量代谢及生长发育的调节,从而进一步参与生殖机能的调控。     

Smad2在附植后早期绵羊子宫内膜和滋养层的分布

Smad2是TGFβ超家族蛋白的胞质内信号转导分子,以往的研究证实Smad2的mRNA表达和定位于大鼠、小鼠子宫。本项研究的目的是用免疫组织化学方法检测Smad2蛋白在附植早期（妊娠32天）绵羊子宫内膜的分布。选山西省太谷县本地绵羊,于秋季交配后32天（32 day post coitus, dpc）,解剖取材子宫和胎衣组织,制作石蜡切片,用免疫组织化学方法检测了Smad2蛋白在子宫内膜的分布。结果显示Smad2蛋白定位于子宫腔上皮、腺上皮和上皮下方的基质中;胚胎附植处Smad2高表达,胎衣滋养层组织也呈现Smad2强阳性表达。结论：Smad2表达于附植早期绵羊子宫内膜和滋养层,可能参与子宫内膜和附植后胚胎发育的调节。     

黄芩苷抗热应激小鼠输卵管氧化损伤的研究

为降低热应激引起的动物机体活性氧(ROS)增加,减少组织氧化损伤和细胞过度凋亡。利用小鼠模型研究热应激对输卵管组织和细胞的损伤作用以及黄芩苷(Bai)对损伤的保护作用。将小鼠分为对照(Ⅰ)组;Bai(Ⅱ)组;热应激(Ⅲ)组和热应激加Bai(Ⅳ)组。用试剂盒检测组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活力;用Western Blot检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、苯醌氧化还原酶(NQO1)和血红素氧合酶-l(HO-1)蛋白表达;用免疫组化方法检测凋亡因子Apaf-1和Caspase-9蛋白表达。结果显示,与对照组相比热应激后小鼠输卵管组织MDA含量显著增加(P0.05),CAT和GSH-Px活力显著降低;同时,Nrf2、Keap1蛋白表达量显著升高(P0.05),凋亡因子Apaf-1和Caspase-9蛋白表达明显增加。注射黄芩苷后可显著(P0.05)降低小鼠输卵管组织MDA含量和Nrf2和Keap1蛋白表达量,降低凋亡因子Apaf-1和Caspase-9蛋白表达,并且显著增加(P0.05)SOD、CAT和GSH-Px活力。结果表明,黄芩苷能降低热应激小鼠输卵管组织的氧化损伤和细胞凋亡,其机制可能与激活抗氧化信号通路Keap1-Nrf2/ARE有关。     

山羊FGF9基因克隆及其在成肌细胞分化中的表达模式研究

旨在克隆山羊FGF9基因序列并对其进行生物信息学分析,阐明FGF9基因组织表达特性及其在成肌细胞分化过程中的表达差异。试验动物为简州大耳羊,利用RT-PCR技术克隆FGF9基因序列,再用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测FGF9在山羊各组织中的表达特性及其在成肌细胞不同分化阶段的表达情况。结果显示,克隆得到山羊FGF9基因序列818 bp,其中ORF区627 bp,编码208个氨基酸,其CDS区核苷酸序列与牛和绵羊有99%的同源性。FGF9蛋白具有1个跨膜结构域和1个FGF家族同源性结构域,为不稳定亲水蛋白。FGF9基因在山羊各组织中均有表达,在肾脏中表达水平最高,极显著高于其他组织(P0.01)。FGF9基因在诱导分化第2天表达水平显著高于分化前(P0.05),且在第4天达到极显著水平(P0.01)。推测其可作为调控山羊成肌细胞分化的候选基因。为进一步探究FGF9基因在山羊肌肉生长中的作用提供理论依据。     

绵羊胚胎移植技术关键步骤优化

绵羊胚胎移植技术是一项多技术集成的生物工程技术,主要包含了供体体况评分、FSH超数排卵技术、同期发情技术、冲胚管放置位置和气球大小、子宫角打孔等关键技术环节。本试验对以上各环节影响因素开展相关研究,结果显示:供体的体况评分在2.5～3.0区间时,超数排卵效果较4.0分以上好,且差异显著(P 0.05);冲胚管气球放置在子宫角大弯前段获胚数优于子宫角大湾段,且差异明显(P 0.05);使用子宫角打孔器(专利号:ZL 2015 2 0272750.4)打孔,与传统回形针打孔的出血率相比差异极显著(P 0.01),两组之间受体的受胎率差异显著(P 0.05)。     

小麦高分子量谷蛋白12亚基基因mRNA的定量分析

利用RT-PCR的方法研究小麦籽粒灌浆期高分子量谷蛋白12亚基基因mRNA的表达水平。东农7742的12亚基在开花后第6天出现mRNA的表达，花后14d表达量最高。新克旱9的12亚基mRNA的表达出现在开花后第10天，第18天表达量达最高。在籽粒灌浆的各个时期，东农7742的12亚基基因的mRNA的表达量均明显高于新克旱9。     

家蚕核型多角体病毒对家蚕酚氧化酶活性及其基因表达的影响

为明确家蚕核型多角体病毒(BmNPV)感染对家蚕血淋巴酚氧化酶活性及其基因表达的影响,以5龄起蚕为实验材料,经口添食BmNPV,采用实时荧光定量PCR的方法检测了血淋巴酚氧化酶原基因PPO1和PPO2的表达情况,同时测定了酚氧化酶的活性。结果表明,PPO1和PPO2基因均是在添食BmNPV后6 h和9 h出现上调表达,但相对表达量有一定差异;另外,酚氧化酶活性在添食BmNPV后6 h和9 h显著高于对照组,而在24 h急剧下降,显著低于对照组。酚氧化酶作为一类体液免疫因子,很可能参与了家蚕对抗BmNPV侵染的免疫防御反应。     

春、夏季杭州湾口门区鱼类资源数量与多样性的时空分布特征

为研究不同季节杭州湾口门区鱼类资源数量分布及多样性时空变化,利用扫海面积法、Shannon-wiener多样性指数(H')和Spearman相关性分析等方法对该片水域鱼类种类数、资源密度和多样性的时空分布特征进行分析。结果显示春、夏季杭州湾口门区共捕获22种鱼类,春季12种,夏季20种,种类数更替具有统计学差异(Q=5.333, P=0.021<0.05)。春季鱼类的质量密度为17.80 kg/km²,尾数密度为2.32×10³ ind./km²,夏季鱼类的质量密度为234.35 kg/km²,尾数密度为21.64×10³ ind./km²。春、夏季鱼类资源的密度也具有显著性差异。春季鱼类质量H'平均值为0.98±0.43,尾数H'平均值为1.28±0.50,夏季鱼类质量H'平均值为1.17±0.45,尾数H'平均值为1.16±0.38。Spearman相关性分析表明,春季鱼类尾数H'与种类数(P=0.000<0.05, R=0.912)及个体密度(P=0.011<0.05, R=0.758)均呈显著相关性,夏季鱼类质量H'(P=0.033<0.05, R=0.673)和尾数H'(P=0.009<0.05, R=0.772)均只与种类数显著相关。研究表明,春、夏季杭州湾口门区鱼类资源数量分布与海洋性鱼类的洄游习性有关,多样性的空间分布受长江口冲淡水影响。     

珠三角地区密养淡水鱼塘水体叶绿素a及水环境动态研究

于2012年5月—12月调查了珠三角地区主养笋壳鱼(Oxyeleotris marmoratus)、草鱼 (Ctenopharyngodon idellus)、加州鲈(Micropterus salmoides)和乌鳢(Channa argus)四个品种池塘水体中的叶绿素a(Chl a)含量和水环境因子动态变化。通过方差分析和多重比较方法研究池塘间水质因子的差异,使用逐步回归方法分析池塘中Chl a含量变化的影响因子,使用自组织神经网络(SOM)分析方法探讨池塘水质状况。研究结果显示：池塘水体TN、TP和化学耗氧量(Chemical Oxygen Demand,COD_Mn)变化范围分别为1.52~22.76 mg/L、0.20~4.82 mg/L和3.71~50.76 mg/L,呈现出严重富营养化和有机污染状况;池塘间Chl a含量差异显著（P<0.05）,从高到低顺序为：草鱼（均值）>乌鳢>加州鲈>笋壳鱼,各池塘Chl a含量的影响因子差异较大;乌鳢池塘中盐度（Sal）、电导率(Cond)、总可溶性固体(TDS)、TP、PO₄^3--P、TN、NO₃^--N和COD_Mn等因子显著高于其他品种(P<0.05);整个采样期池塘水质状况可分为5大类,并呈现出一定的时序和空间特征,池塘水质优劣顺序为笋壳鱼>加州鲈>草鱼>乌鳢。     

灵昆鸡VLDLR和CTSD基因多态性与产蛋性状的相关性研究

为了研究极低密度脂蛋白受体(VLDLR)和溶酶体组织蛋白酶(CTSD)的单核苷酸多态性(SNPs),寻找与灵昆鸡产蛋性状相关的候选分子标记,以276只灵昆鸡母鸡为研究对象,采用直接测序法,检测VLDLR和CTSD基因在灵昆鸡中的SNPs,并分析各多态位点不同基因型与11个产蛋性状的相关性。结果表明:VLDLR基因存在1个突变位点C13444T,该位点不同基因型与哈氏单位、蛋黄重及蛋黄比例呈显著相关(P0.05),在哈氏单位性状中,ZTW型为优势基因型,在蛋黄重及蛋黄比例性状中,ZCW型为优势基因型;CTSD基因有5个突变位点,其中,T2614C对蛋白高度和哈氏单位有显著影响(P0.05),C9445T、C9475T对500日龄产蛋量和蛋重显著相关(P0.05),C9457T对蛋重有显著影响(P0.05),T11028C位点对蛋白高度有显著影响(P0.05)。C13444T、C9457T、T11028C位点偏离Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05),其他9个位点均处Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05)。结果提示:VLDLR和CTSD基因多态性可能与产蛋性状有关,可尝试作为灵昆鸡产蛋性状分子标记的候选基因,为以后的选育工作提供理论依据。     

蝉蜕诱导对球孢白僵菌生物学特性及其毒力影响的研究

利用改良蝉蜕诱导培养基对球孢白僵菌进行诱导,以无蝉蜕PDA培养基作为对照,目的是比较蝉蜕诱导后球孢白僵菌菌株的生长速率、产孢量、孢子萌发率等多个生物学指标,及二者对3龄亚洲玉米螟幼虫的毒力。经蝉蜕诱导的球孢白僵菌菌株的产孢量、孢子萌发率以及对玉米螟幼虫毒力都高于对照组,且差异显著,对玉米螟幼虫毒力处理组LT₅₀为4.73天,对照组需要6.97天。同时经蝉蜕诱导过的菌株开始产孢时间和胞外蛋白酶活性都优于对照组,胞外蛋白酶活性的变化范围是1.497×10^-2~3.538×10^-2 IU/mL,但经诱导菌株的生长速率低于处理组。鉴于球孢白僵菌菌株经蝉蜕诱导后,其产孢量和孢子萌发率增加,并且能够增强对玉米螟幼虫毒力,可利用其进行球孢白僵菌菌种保存和改良。

     

益生乳酸菌Lactobacillus plantarum P-8在规模化养殖中对肉鸡生产性能和鸡肉中盐酸林可霉素残留的影响

以益生乳酸菌植物乳杆菌P-8饲喂肉鸡,研究其在规模化养殖中对肉鸡生产性能、粪便p H及吲哚和粪臭素含量、抗生素盐酸林可霉素残留的影响。选择18万只1日龄AA肉鸡为研究对象,随机平均分为3组,对照组为基础日粮+盐酸林可霉素(3 g/t);试验组1为基础日粮+植物乳杆菌P-8+盐酸林可霉素(3 g/t);试验组2为基础日粮+植物乳杆菌P-8+盐酸林可霉素(1.5 g/t)。试验结果表明:试验组肉鸡成活率、出栏重和饮水量显著高于对照组(P0.05),料重比显著低于对照组(P0.05),试验组间无显著差异(P0.05);试验组肉鸡粪便p H、吲哚和粪臭素含量显著低于对照组(P0.05),试验组间无显著差异(P0.05);试验组鸡肉中的盐酸林可霉素含量显著低于对照组(P0.01),试验组间无显著差异(P0.05)。由此表明,植物乳杆菌P-8在大规模肉鸡养殖过程中具有减少抗生素用量、改善肉鸡生长性能和养殖环境等特点,有利于肉鸡养殖业的持续健康发展,在健康养殖领域具有广阔的应用前景。     

4种寄主对光肩星天牛成虫解毒酶活性影响

为明确光肩星天牛寄主范围扩大的生理生化机制,给该虫制定可持续的控制措施,采用生理生化的研究方法,测定了取食复叶槭、白桦、胡杨和白蜡的光肩星天牛成虫体内5种解毒酶的活性。结果表明：复叶槭和白桦上取食后的天牛成虫羧酸酯酶显著高于在胡杨和白蜡上取食后的天牛成虫(P<0.05),白桦上取食后的天牛成虫谷胱甘肽S-转移酶活性最高,显著高于复叶槭、胡杨和白蜡上取食的天牛(P<0.05)。在复叶槭上取食后的天牛成虫碱性磷酸酯酶活性最高,显著高于在胡杨和白蜡上取食物的天牛,(P<0.05)。说明寄主树种对光肩星天牛成虫体内的羧酸酯酶、谷胱甘肽S-转移酶和碱性酶活性有明显影响。在4种寄主上取食的天牛成虫类酸性磷酸酯酶活性差异均不显著(P>0.05）,多酚氧化酶也得到了类似结果。说明寄主树种对天牛体内酸性磷酸酯酶和多酚氧化酶活性影响不大。     

秦岭北坡太白红杉不同时间尺度上的径向生长特征及其与环境因子的关系

为了探究秦岭太白红杉(Larix chinensis)径向生长在不同时间尺度上的特征及其与立地环境因子的关系。利用树木年代学及样方调查法,在4个不同时间尺度（1、2、5、10年）4个样地内进行探究。结果表明：（1）随着时间尺度的增加,其径向增长量随树龄增加呈先增加后减小的趋势。（2）单因素方差分析表明,样地1和样地3径向生长差异不显著(P=0.810),样地2和样地4径向生长差异不显著(P=0.369),其他各样地间径向生长量差异极显著(P=0.000)。（3）逐步回归法分析表明：在1年的时间尺度上土壤厚度对太白红杉径向生长呈正相关;2年时间尺度上坡度和坡位对其径向生长呈负相关;5年和10年的时间尺度上岩石裸露度对太白红杉径向生长呈正相关,坡度对其径向生长呈负相关;海拔在4个时间尺度上对其径向生长无显著相关性。试验在研究时间尺度上太白红杉径向生长特征以及人工对其的栽培、抚育提供了一定的依据。     

油菜B-box型锌指蛋白基因BnSTO的克隆和表达

B-box型锌指蛋白参与植物多种生长发育和非生物逆境胁迫响应过程。笔者通过RT-PCR克隆得到甘蓝型油菜2个B-box型锌指蛋白基因Bn STO-1和Bn STO-2。Bn STO-1的ORF长度为723 bp,推测编码240个氨基酸,定位于A8染色体。Bn STO-2的ORF长度为726 bp,推测编码241个氨基酸,定位于C8染色体。2个基因均由3个外显子和2个内含子构成,在氨基酸水平上的相似性达到了96.68%。系统进化分析表明Bn STO与拟南芥At STO的亲缘关系较近,同源性较高。荧光实时定量PCR结果表明Bn STO在检测的各个组织中均有表达,其中叶和蕾中的表达量最高;高盐、干旱和高温能显著诱导Bn STO-1和Bn STO-2的表达,但出现峰值的时间不同,推测2个基因均可能参与了油菜的非生物逆境胁迫响应。