烟草Nt14-3-3-like C基因的克隆与功能分析

烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus,TMV）寄主范围广泛、传染性极强,严重影响作物的产量和品质。实验室前期在不同耐受 TMV侵染的烟草品种中筛选出1个表达显著差异的蛋白14-3-3-like C,在此基础上,对Nt14-3-3-like C基因进行了克隆、生物信息学分析和亚细胞定位;通过农杆菌介导遗传转化,获取转基因植株;通过qPCR对转基因植株中TMV侵染响应相关基因的表达进行分析。结果显示,14-3-3-like C蛋白序列长度为780bp,编码260个氨基酸,具有14-3-3蛋白的典型沟槽结构,但没有跨膜结构和信号肽;定位于细胞核和细胞膜;转基因材料的qPCR分析发现,在Nt14-3-3-like C基因抑制的植株中,病原防卫和光合途径相关的基因表达显著下降,表明Nt14-3-3-like C可能通过抑制病原防卫和光合途径相关基因表达参与TMV对烟草的侵染。     

荧光假单胞菌CZ可以研发成防治病毒病害的生物制剂

正荧光假单胞菌能分泌包括碱性磷酸酶在内的抗病毒蛋白抑制烟草花叶病毒(TMV)侵染。近日,中国农科院烟草所等单位研究人员利用抗生素利福平逐级诱导获得抗药性标记菌株CZrif,生测结果显示,野生型和抗药型菌株的发酵上清和粗蛋白液对TMV的体外钝化效果均大于90%,无显著差异。     

作物病虫害分类介绍及其防治图谱——烟草环斑病毒病及其防治图谱

正烟草环斑病毒病广泛分布于世界各烟区,其流行危害程度仅次于烟草普通花叶病毒病,近年来在我国多为局部小面积烟田造成危害,可造成烟草种子量减少,使病株烟草种子发芽率降至34%以下。发病原因:引发烟草环斑病毒病的病原为烟草环斑病毒(图1,Tobacco ring spot virus,简称TRSV),其圆球状的病毒粒体直径在29nm左右,单链RNA核酸。钝化温度60℃,稀释限点10000倍,室温下可外存活期4天左右,-18℃条件下侵染力可保持22     

裂褶菌蛋白粗提液抗植物病毒活性初探

摘要：以裂褶菌蛋为研究对象,用硫酸铵沉淀其蛋白,制成蛋白粗提液,研究其诱导烟草对烟草花叶病毒（TMV）的抗性,和体外钝化烟草花叶病毒（TMV）的防治效果;结果表明：当蛋白浓度达到100μg/mL时,诱导烟草抗TMV的效果较好,侵染枯斑抑制率可达74.11%±3.7%,对TMV的体外钝化作用的枯斑抑制率为70.05%±1.25%,表明裂褶菌蛋白粗提液通过诱导抗病性和对TMV的体外钝化作用达到了控制TMV的作用;裂褶菌蛋白粗提液对辣椒病病毒（CMV）具有很好控制作用,用100μg/mL的裂褶菌蛋白粗提液处理辣椒植株后,其对CMV的平均防效为66.46%。     

防御信号途径在B型烟粉虱取食烟草诱导抗蚜防御中的作用

B型烟粉虱取食能够诱导烟草产生对烟蚜的抗性反应,为了明确水杨酸和茉莉酸防御信号途径与烟粉虱诱导抗蚜防御之间的关系,采用生化分析、实时定量PCR、蚜虫生物活性测定等方法比较了烟粉虱若虫取食对烟草水杨酸、茉莉酸含量、通路下游防御基因表达水平的影响及外源水杨酸、茉莉酸对烟蚜生长发育的影响。结果显示：烟粉虱侵染能够显著激活水杨酸防御途径,在取食15天后,水杨酸水平较对照升高1.40倍,水杨酸下游防御基因PR-1a及PR-2a分别较对照升高3.22和0.74倍;然而烟粉虱侵染后烟草叶片茉莉酸含量与对照相比无显著变化,JA下游防御基因PI-II和TPI的转录水平分别较对照降低73.91%和56.73%。生测结果显示,外源施用水杨酸对烟蚜的存活率和相对平均生长率具有显著不利影响。烟草叶片施用1 mmol/L水杨酸后,蚜虫的存活率及相对生长率分别较对照降低43.2%和11.54%;然而喷施茉莉酸甲酯对蚜虫的生长发育无不利影响。上述结果表明,水杨酸介导的防御应答在B型烟粉虱取食诱导烟草的抗蚜防御中起重要作用。     

毛头鬼伞多糖抗烟草花叶病毒（TMV）活性研究初报

【目的】为探讨毛头鬼伞多糖（Coprinus comatus）的生物活性,对毛头鬼伞多糖抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)活性进行测定,明确活性部位,为进一步分离纯化提供理论依据。【方法】从毛头鬼伞子实体和菌丝体提取多糖,并初步纯化,采用半叶法和叶碟法对抗病毒活性进行测定。【结果】毛头鬼伞多糖对TMV具有较强的体外抑制和抗病毒侵染作用,对TMV具有明显的体内抑制复制效果;在TMV接种前施用可以显著降低TMV侵染能力。【结论】毛头鬼伞多糖具有较好的抗TMV活性,为其进一步开发利用提供理论依据。     

广东省烟草主栽品种对病毒病抗性均不强

正为测定广东省7个烟草主栽品种对TMV和CMV的抗性情况,中山出入境检验检疫局、华南农业大学农学院研究人员采用TMV侵染的普通烟叶系列稀释液(CK、1∶10、1∶100、1∶1000、1∶10000、1∶100000)作浓度梯度,选用K326作中感品种对照,机械摩擦接种法接种7个烟草品种(K326、云烟87、RG17、9601、9032、MSK326、MS96-7)。同时,对不同烟草品种选用     

植物提取物对烟草普通花叶病毒的抑制作用

为明确美洲商陆和绞股蓝提取物对烟草普通花叶病毒(TMV)的抑制效果,探索防治烟草病毒病防治的新思路,以期为开发植物源提取物防治烟草普通花叶病毒病提供理论依据,采用半枯叶法和大田直接喷施的方法,测定美洲商陆和绞股蓝的提取物对TMV的抑制作用和对大田TMV植株发病情况的影响,分析以上2种植物提取物对TMV的防治效果。半枯叶法的结果表明:化学防病毒药剂在25~200μg/m L浓度时均表现较好的抑制效果,其抑制率均在80%以上,与TMV不同混合时间后接种其抑制率在90%以上;美洲商陆和绞股蓝不同粗提物对TMV抑制率效果表现为甲醇提取物苯提取物石油醚提取物,美洲商陆对TMV抑制率显著高于绞股蓝,用200μg/m L浓度与TMV混合后,混合时间越长其对TMV抑制率越高;对大田烟草TMV防治效果表现为:复配制剂美洲商陆绞股蓝,且高浓度效果优于低浓度,同时,缓解了感病植株烟草农艺性状各项指标。结果表明这2种植物源提取物对TMV抑制作用显著,是防治烟草普通花叶病毒病较为理想的植物源药剂。     

海藻酸对烟草花叶病毒的抑制作用研究

为分析海藻酸对烟草花叶病毒的抑制机理,研究海藻酸对烟草花叶病毒的体外钝化和对烟草系统抗性的诱导效果。结果发现,叶面喷施海藻酸后,枯斑抑制率可达到66.67%,复制增殖抑制率可达到34.67%,烟草N基因表达水平增加2.67倍,过氧化物酶活性增加3.46倍,超氧化物歧化酶活性增加1.43倍,认为海藻酸可能通过增强烟草抗病和抗氧化能力,抑制烟草花叶病病毒在烟草中的增殖。     

不同消毒剂对烟草黑胫病菌的抑制作用

漂浮育苗是一项较先进的育苗技术,对育苗盘、池膜、剪叶器具和操作的严格消毒是培育无病壮苗的关键环节。为烟叶生产上更合理地选用消毒剂,以甲霜灵为对照药剂,分析了几种常用消毒剂对烟草黑胫病菌菌丝生长和孢子囊产生的抑制作用,结果表明大多数漂浮育苗消毒药剂适宜浓度对烟草黑胫病菌都有一定的抑制作用,包括硫酸铜、美国消毒剂、0.6%菌毒净、7%有效氯次氯酸钠、24%毒消、40%育宝、10%二氧化氯和磷酸三钠,消毒药剂高锰酸钾与30%有效氯漂白粉对烟草黑胫病菌菌丝和孢子囊均无抑制作用。     

烟草对花叶病毒诱导抗性及其遗传传递效应的研究

采用化学诱导的方法进行烟草对花叶病毒的诱导抗性的试验研究。发现用Ｓ３０和Ｌ１两种诱抗剂均能在烤烟，白肋烟和心叶烟上诱导出对ＴＭＶ的抗性。诱抗效应达１９．１％－３５．６％。此外，诱抗后心叶烟，白肋烟还表现出枯斑反应提前和枯斑缩小等抗性增强反应。将诱抗材料子代接种ＴＭＶ，证明有诱抗性传递现象，其传递效应为２５．２％－４２．６％。经连续三代用Ｌ１诱抗剂在同一烤烟品种（Ｇ１４０）的苗期和花期分别诱导，其子     

不同生物炭浸提液对水稻发芽及幼苗发育的影响

使用不同生物炭浸提液对水稻种子进行培养,研究生物炭种类对水稻萌发和幼苗发育的潜在影响。3 种生物炭为竹炭、烟杆炭和稻杆炭,生物炭浸提液梯度为原液（1:5）、10 倍稀释液和50 倍稀释液,处理培养后观察水稻种子发芽率和幼苗生长情况。烟杆炭原液处理培养后第3 天水稻种子发芽率只有8.7%,远低于对照的43.3%,芽根长度、干鲜重等指标也均显著低于对照（p<0.05）。所有低浓度的生物炭浸提液对水稻萌发具有一定促进作用。竹炭10 倍浸提稀释液的发芽率比对照高9.3%,烟杆炭和稻杆炭50 倍浸提稀释液的发芽率比对照高11.3%,但芽根长度、干鲜重等指标大部分与对照无显著差异。本结果初步证明高浓度烟杆炭对水稻生长具有抑制作用,而适当的生物炭用量则有益于水稻生长。     

烟草内生细菌YN2014042对烟草、玉米的定殖和促生作用研究

为了开发利用烟草内生解淀粉芽孢杆菌YN2014042(YN42),对其在植物上的定殖和促生作用进行了研究。用自然转化法将携带绿色荧光蛋白基因的质粒pHAPII成功导入YN42细胞中,获得质粒稳定遗传和对烟草黑胫病菌、玉米穗腐病禾谷镰刀菌等13种病原真菌的拮抗能力与野生型YN42相同的GFP标记菌株YN42-GFP。用1.00×10⁷ CFU/g的YN42-GFP分别浇灌烟草和玉米幼苗,在第50天时烟草根、茎和叶组织中仍回收到1.89×10⁶ CFU/g、1.07×10⁴ CFU/g和0.93×10³ CFU/g的菌落;到第25天时玉米叶片中可回收到6.67×10³ CFU/g的菌落;说明YN42在来源寄主和非来源寄主植物中都能稳定地定殖。将YN42添加到烟草育苗基质中制成微生物功能基质,与普通基质对比,1.00×10⁷ CFU/g的菌株基质上的45天烟苗型高、地上部鲜重分别增长450.58%、756.52%;对玉米灌根30天处理,YN42处理的玉米苗型高和地上部鲜重分别增加19.37%和61.42%。研究结果表明YN42对多种病原菌有抑制作用,能在烟草和玉米上稳定定殖,对烟草和玉米的促生作用显著,在农业上具有良好的应用前景。     

喷施微肥对定位施肥烟株成熟期生理代谢的影响

为探究叶面喷施微肥对烟叶成熟的影响,提高烟叶适烤性,以‘翠碧一号’为试验材料,在连续10年纯化肥定位施肥烟田,于烟株打顶后10、20天时喷施不同中微量元素,测定其对烟叶生理代谢的影响。叶面喷施不同中微量元素后,叶绿素a、叶绿素b和叶绿素总量均有较明显上升,叶片光合速率、蒸腾速率和气孔导度明显提高,荧光参数中Fo和Fo/Fm显著下降,Fm、Fv、Fv/Fm和Fv/Fo显著上升;硝酸还原酶活性显著提升;细胞膜相对透性显著降低;过氧化氢酶和超氧化物歧化酶均能保持较高的活性,而丙二醛含量显著下降。表明在长期纯施化肥烟田的烤烟生长后期喷施中微量元素有利于提高细胞膜结构稳定性,减轻膜脂过氧化程度,维持光合结构的稳定性,减少叶绿体色素的降解,提高光能转化效率,减缓活性氧伤害。喷施微肥有利于提高烟叶光合作用能力,缓解烟株叶片伤害与衰老,提高上部烟叶的适烤性。     

芽孢杆菌Bam22对油菜根肿病的防治效果研究

由芸薹根肿菌(Plasmodiophora brassicae)侵染引起的根肿病是限制油菜生产的主要病害之一,苗期即可发病,目前该病害的主要防治措施有选用抗病品种和使用化学药剂,但农药残留问题日益突出,故提出采用生物防治的策略防控油菜根肿病。笔者采用拌种与苗期灌根的方式研究了芽孢杆菌(Bacillus Bam22)对油菜根肿病的田间防治效果,苗期调查结果表明芽孢杆菌Bam22拌种处理(T1)和芽孢杆菌Bam22+高岭土拌种处理(T2)较清水对照(CK)的发病率降低了3.4%~20%,防效达44%~52%;T1、T2与药剂对照氰霜唑拌种处理(T3)的株高和发病率无明显差异,但防效提高20%~40%。花期调查结果表明T1和T2处理较清水对照(CK)的发病率降低了10%~13%,防效介于28%~51%;T1、T2处理较药剂对照(T3)的发病率降低了6.67%~10%,防治效果提高了5%~22%,单株产量增加了23.97%~34.29%。以上研究结果表明,采用芽孢杆菌Bam22拌种结合苗期灌根,能够有效降低油菜苗期和花期根肿病的发病率,显著降低油菜的产量损失率。芽孢杆菌Bam22对油菜根肿病有较好的控制效果,具有开发成为生物农药的潜力。     

生物质炭替代草炭对漂浮育苗烟苗生长的影响

研究不同来源生物质炭替代烤烟漂浮育苗基质草炭对烟苗生长的影响。结果表明,50%玉米秸秆炭替代草炭后,烟苗各时期生长较好,出苗率、成苗率分别达91.4%、97.5%,显著高于其它处理；茎高、茎围、各部分生物量以及根冠比均处于较高水平。相比较而言,70%烟杆炭替代草炭处理烟苗生长有延滞现象,各指标明显低于其它处理。综上所述,玉米秸秆炭在替代草炭成为烟草漂浮育苗基质方面更具潜力,烟杆炭对烟苗生长的促进作用弱于玉米秸秆炭,甚至出现生长延滞现象。     

磷酸钠对粉红单端孢的离体抑菌作用研究

以引起果蔬采后病害的重要病原物粉红单端孢(Trichothecium roseum)为研究对象,探究离体条件下不同浓度磷酸钠对T. roseum菌丝生长和孢子萌发的抑制作用及其初步机理。结果表明,不同浓度磷酸钠处理均可抑制T. roseum菌丝生长和孢子萌发,且随着处理浓度的增加,抑制效果增强。此外,2.0 mg/mL磷酸钠处理降低了T. roseum胞外相对电导率,提高了胞外丙二醛和可溶性蛋白含量,降低了胞外可溶性糖含量。扫描电镜结果显示,2.0 mg/mL磷酸钠处理的孢子表面粗糙且发生皱缩。因此,离体条件下磷酸钠能够抑制T. roseum生长,其抑菌机理与细胞膜结构的破坏有关。     

落葵提取液抑制普通烟草花叶病毒病的生理效应研究

研究了落葵提取液对烟草普通花叶病毒病(TMV)的防效,结果表明,不论在烟株接种毒液前或后,用落葵提取液处理烟株的叶片与只接种毒液的相比,叶片MDA含量、O2-.产生速率及膜透性明显降低;抗氧化物酶SOD,CAT和POD前6 d活性增强后下降;Lox和PPO活性始终高于健康或接毒液的烟株(CK);PAL活性是先升高后短时间下降,随后又升高。先用落葵提取液再接种毒液处理的烟株对TMV的抑制作用优于先接种毒液再用落葵提取液处理,落葵对TMV的预防具有积极效果。     

蒙古栎枯叶水浸提液对二月兰的化感作用

为探究蒙古栎(Quercus mongolica)林下植被稀少的状况是否为枯叶产生的化感作用,以蒙古栎枯叶为供试材料,二月兰为受体材料,采用培养皿滤纸法研究不同浓度蒙古栎枯叶水浸提液对二月兰种子萌发及幼苗生长的影响。分别采用0.00、0.02、0.04、0.06、0.08和0.10 g/mL浓度的蒙古栎枯叶水浸提液培养二月兰种子,测定发芽率、发芽势、发芽指数、根长及苗长,计算化感综合指数。结果表明,二月兰种子发芽率、发芽势、发芽指数和根长的化感效应指数均为负值,表现为抑制作用,且具有明显的浓度效应。对二月兰苗长的化感效应为“低促高抑”的双浓度效应,在浓度<0.04 g/mL时对幼苗苗长生长有促进作用,当水浸提液浓度≥0.04 g/mL时,对苗长的生长产生抑制作用,且随着浓度的增加,化感作用不断增强,浓度为0.10 g/mL时,根长、苗长的化感指数均为-1,种子仅处于发芽初始状态。反映出蒙古栎枯叶的水浸提液对二月兰具有较强的化感抑制作用。