濒危药用植物沙冬青内生真菌分离及其抑菌活性初步研究

为探明濒危药用植物沙冬青内生真菌资源的多样性及其抑菌活性特征,通过组织块法对内生真菌进行了分离,并选择小麦全蚀病菌、枸杞黑果病菌、番茄灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌、黄瓜立枯病菌5种植物病原真菌和枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌4种细菌作为指示菌,采用对峙法和改进的菌块法测定抑菌活性。结果显示,从沙冬青不同组织器官中分离出41株内生真菌,根部最多,其次为叶部,茎部最少,经形态学初步分类鉴定归于5个目,6个科,19个属;有31株菌对2种或多种指示菌有不同程度的抑制作用,占菌株总数的75.6%,15株内生真菌对1种或多种供试细菌指示菌具有不同程度的抑制作用,占分离菌株总数的36.6%,其中5株内生真菌分别对4种植物病原真菌指示菌具有明显的抑制作用,占菌株总数的12.2%,8株内生真菌对1种供试细菌指示菌有明显的抑制作用,占分离菌株总数的19.5%, 4株内生真菌菌株即对供试植物病原真菌指示菌又对供试细菌指示菌有明显抑制作用, 抑菌范围宽,属于青霉属、束丝菌属、茎叶核菌属。濒危药用植物沙冬青具有丰富的内生真菌资源,其开发和利用具有重要的生态学意义和经济价值。     

雷公藤内生真菌的抑菌活性研究

通过对雷公藤植物内生真菌进行分离,对内生真菌抑菌活性进行了研究。研究结果显示,从雷公藤不同器官中共分离出22株不同形态型的内生真菌,其广泛存在于植株的根、茎、叶中,其中植株枝中的分离数量高于根和叶。大多数内生真菌都具有抑菌活性,与菌丝体相比,内生真菌的发酵液提取物具有较强的抑菌活性。不同类型病源菌的比较结果表明,筛选的内生真菌对病源性真菌具有较好的抑制作用。     

栽培三七内生真菌优势种群分离鉴定

栽培三七为五加科人参属多年生草本药用植物,旨在从药用植物栽培三七中分离出能够产生与宿主植株相同或者相似的生物活性物质的内生真菌菌株。以栽培三七为材料,开展栽培三七内生真菌的分离、纯化,依据传统形态特征并结合真菌的ITS序列进行菌株鉴定。初步从栽培三七中共分离得到内生真菌24株,鉴定为12属（种）,栽培三七不同器官组织的内生真菌种类和数量差异较大,根和叶中最多,茎中较少。其中从叶片中分离出11株,6属;茎中分离出1株,1属;根中12株,5属。统计结果表明叶片中分离出的菌株优势种为普通青霉菌(Penicillium commune)、胶孢刺盘孢菌(Colletotrichum gloeosporioides),均占叶片菌株分离的27.28%;须根中分离出的菌株优势种为球毛壳菌(Chaetomidium arxii),占须根菌株分离的72.73%。栽培三七内生真菌具有丰富的生物多样性,实验结果为进一步探讨栽培三七内生真菌与生理活性物质之间的关系提供材料基础和实验参数。     

筒鞘蛇菰内生真菌的分离及拮抗菌筛选

为了考察筒鞘蛇菰（Balanophora harlandii Hook. f.）内生真菌的类群组成,寻找高活性的抗菌物质,用组织块分离法和杯碟法筛选出能产生高抑菌活性的蛇菰内生真菌菌株。从神农架野生筒鞘蛇菰不同组织内共分离、纯化得到49株内生真菌,对其中生长良好的28株内生真菌归属于半知菌亚门丝孢纲的2目2科7个属,分别是丝核菌属（Rhizoctonia）、曲霉属（Aspergillus）、青霉属（Penicillium）、地霉属（Geotrichum）、小孢霉属（Microsporum）、从梗孢属（Monilia）和粉孢属(Oidium)。这28株内生真菌对于3种供试靶标细菌表现不同的抑菌活性,其中SG47菌株的抑菌作用较强。这些内生真菌能够产生丰富的抑菌活性物质,极具从中寻找新型杀菌剂或药物先导化合物的潜力。     

蒲公英内生真菌分离纯化及其形态学鉴定

蒲公英是一种传统的植物同源医药和食品,具有良好的抗菌和消炎作用。蒲公英提取物含有各种具有抗菌活性的化合物,而内生真菌产生相同或相似的代谢物作为宿主植物,它可以打开抗菌化合物的开发和利用新的方式。药用植物蒲公英可以培养多种内生真菌。因此,以新鲜根、茎和叶,无昆虫的蒲公英为材料,对其内生真菌及形态学等方面进行了初步研究。结果表明,运用组织切块法,从蒲公英的植物组织中分离出14种内生真菌;采用平板划线法分离纯化蒲公英根、茎、叶培养的内生真菌;观察、分离和纯化内生真菌的形态学鉴定。     

产紫丁香苷内生真菌CJ7的鉴定及发酵条件研究

为高效利用刺五加内生真菌资源,推动紫丁香苷的生产,采用HPLC法,以紫丁香苷为对照,分析内生真菌CJ7的次生代谢产物;采用琼脂糖扩散法,对内生真菌CJ7进行抑菌活性分析,并采用单因素实验及正交实验法对内生真菌CJ7发酵条件进行优选;采用形态学观察及ITS序列分析法对内生真菌CJ7进行菌种鉴定。结果表明,在内生真菌CJ7发酵液中含有紫丁香苷。抑菌活性实验结果表明,内生真菌CJ7对10种致病菌均有较好的抑制作用,尤其对金黄色葡萄球菌抑菌效果较为明显。经优化,CJ7的最佳发酵工艺为培养基中葡萄糖质量浓度2.5%,牛肉膏质量浓度2.0%,初始pH 7.0,装液量40%,接种量2%,培养8天,摇床转数120 r/min,发酵温度28℃。经鉴定,内生真菌CJ7为产烟曲霉(Aspergillus fumigatus)。上述研究说明,内生真菌CJ7为紫丁香苷产生菌。研究结果可为采用微生物发酵法生产紫丁香苷提供参考。     

滇重楼(Paris polyphylla var. yunnanensis)中产皂苷内生真菌的分离及筛选

药用植物内生真菌在植物生长发育、抵御不良环境甚至繁育生殖过程中都扮演着重要的角色,尤其在宿主的次生代谢产生中具有十分重要的作用。内生真菌的代谢产物具有多种生理活性,部分内生真菌发酵液还可产生与宿主植物中相同的活性成分。鉴于此,本研究以传统药用植物滇重楼(P.polyphylla var.yunnanensis)为实验材料,通过组织分离法及分子测序鉴定法,共鉴定出18种内生真菌,并对这些真菌进行了物理发泡及薄层层析色谱法(TLC)实验,目的是筛选出能够产重楼皂苷的内生真菌。通过对菌丝菌液皂苷的提取,最终获得产皂苷类物质的菌株数共有3株,且皂苷类物质主要存在于内生真菌的发酵液中。     

合欢内生菌H8的分离、鉴定及其抗菌代谢物质研究

为了寻找结构新颖,高效的农用抗菌活性物质,以药用植物合欢叶为试验材料,分离筛选出一株内生细菌H8。采用对峙培养法与琼脂扩散法进行抑菌试验,结果表明:H8菌株、发酵液、无菌发酵液及其活性组分对苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌等6种供试植物病原菌均具有较强的抑菌活性,抑菌带宽度可达20.5~34.5 mm。经形态观察、生理生化试验和16S r DNA系统进化分析,鉴定其为死谷芽孢杆菌(Bacillus vallismortis)。采用液-液萃取、薄层层析及硅胶柱层析,对内生菌H8的代谢液提取分离,得6个组分,对抑菌活性高的2个组分硅烷化衍生后,经GC-MS检测,确定代谢液中有脂肪酸、芳香酸、环二肽等28种活性化合物。     

广藿香内生真菌次级代谢产物及抑菌活性

为了挖掘广藿香内生真菌潜在应用价值,有针对性地开发天然活性化合物。本研究采用组织培养法,对广藿香内生真菌进行分离纯化筛选优势菌株,根据菌株的形态学特征,结合真菌ITS的系统进化分析对其进行鉴定,采用多种柱色谱分离方法对广藿香内生真菌Fusarium solani sp. RW-R10的次级代谢产物进行分离纯化,运用NMR和MS等波谱方法鉴定化合物结构,对单体化合物进行抑菌活性测试。结果分离得到11个化合物,分别鉴定为(22E, 24R)-3β,5α-dihydroxyergosta-23-methyl-7,22-dien-6-one (1)、fusolanone A(2)、neo-N-methylsansalvamide (3)、fumitremorgin B (4)、mayolene-18 (5)、2-acetonyl-3-methyl-7-methoxy-naphtha-zarin (6)、javanicin (7)、(+)-solaninol (8)、L-meVal-ox-[D-mecys-L-mecys]-L-pha-Oac (9)、2,3-dihydro-5-hydroxy8...     

甘草产香内生真菌RP2的初步鉴定及挥发性成分分析

为了开发甘草内生真菌RP2次生代谢产物的资源,丰富挥发性香味成分的获取途径,以甘草内生真菌RP2为研究对象,采用形态学观察及ITS序列分析法对其进行菌种鉴定,通过气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对甘草内生真菌RP2挥发性成分进行分析。甘草内生真菌RP2经鉴定为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。在甘草内生真菌RP2发酵液中分离并鉴定出11种挥发性成分;在甘草内生真菌RP2菌丝体中分离并鉴定了6种挥发性成分。甘草内生真菌RP2挥发性成分中含有多种现有工业生产中广泛应用的挥发性香味成分,如2-苯基乙醇等。本研究对开发利用甘草内生真菌RP2具有重要意义。     

5种红树根际土壤真菌和内生真菌的分离及抑菌活性的研究

研究药用红树植物根际土壤真菌和内生真菌次级代谢产物的抑菌活性,旨在获得有良好抑菌活性的菌株,以期寻找新型抗菌物质。以6种敏感细菌为实验菌株,采用纸片扩散法,根据观察并测量抑菌圈直径大小结果,对其代谢产物抑菌活性研究分析。从桐花、秋茄、白莲、木榄、老鼠簕中共分离得到50株真菌,其中16株真菌次级代谢产物对至少1株实验菌株有抑菌活性,占总分离菌株的30.77%,且对金黄色葡萄球菌的拮抗率最高达32%。研究表明,HGC-M₃-A,HGC-L₃-A和HGC-QJ₁-A,HGC-M₃-A、HGC-L₃-A、HGC-QJ₁-A,HGC-TY₃-A的发酵粗体物分别对对大肠杆菌,藤黄微球菌,白葡萄球菌,枯草芽孢杆菌有很强的抑制作用。HGC-QJ₁-A、HGC-QY₂-A、HGC-MT₃-A、HGC-TY₃-A、HGC-LT₃-A和HGC-TT₂₂-A1对金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、白葡萄球菌和枯草芽孢杆菌均有很强的杀菌效果;HGC-L₃-A、HGC-TT_{22sub>-A1对白葡萄球菌的杀菌浓度均为25 mg/mL;HGC-MT3-A、HGC-TT22-A1对大肠杆菌的杀菌浓度分别低至为1.56 mg/mL和3.125 mg/mL。红树根际土壤真菌和内生真菌次级代谢产物中存在着丰富的天然活性物质,可为寻找新型抗菌物质提供资源。}     

药用植物滇黄精寄生真菌的分离与鉴定

为了解滇黄精寄生真菌及其优势居群,采集滇黄精种植区云南省丽江地区玉龙县和华坪县的样品,采用组织分离法、样品保湿法和三点接种法分别对滇黄精寄生真菌进行分离、培养和纯化。对纯化菌株进行传统形态学及分子生物学鉴定。玉龙县鲁甸乡采集到15株寄生真菌（1株青霉属Penicillium、12株尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum、1株木贼镰刀菌Fusarium equiseti、1株链格孢菌Alternaria alternata）,华坪县采集到22株滇黄精寄生真菌（12株黑绿木霉Trichoderma atroviride、9株芬芳镰刀菌Fusarium redolens、1株木贼镰刀菌Fusarium equiseti）。2个试验地所采集的滇黄精镰刀属真菌菌株占比较大,为优势寄生真菌,研究结果将为滇黄精病害防治提供理论依据。     

沙地云杉内生真菌拮抗菌株的筛选及鉴定

从194株沙地云杉内生真菌中筛选出对8种植物病原物具有拮抗效果的沙地云杉内生真菌。本研究初筛采用皿内对峙法筛选,复筛采用打孔法筛选。两种方法相结合筛选出了对8种植物病原真菌具有拮抗效果的沙地云杉内生真菌。初筛后具有25株沙地云杉内生真菌对8种植物病原真菌有抑制作用。复筛后具有4株沙地云杉内生真菌对8种植物病原真菌均有抑制效果。本研究通过以上两种筛选方法筛选出具有拮抗作用的沙地云杉内生真菌,为下一步深入研究代谢产物奠定了基础。     

拟康氏木霉和黑根霉混合发酵对苹果链格孢的防治

研究黑根霉和拟康氏木霉混合发酵液对苹果链格孢菌的生物防治效果,探索开发为新型绿色环保生物防治剂。对2种生防微生物进行形态学鉴定和ITS鉴定;生长速率法测定混合发酵液的抑菌活性;在烟台莱阳进行田间实验对发病较为严重的果园进行为期一年的多次灌根与喷施处理,测定其防治效果并测定其对苹果叶片SOD、POD等防御相关酶的活性。研究结果表明,黑根霉和拟康氏木霉混合发酵可显著提高对病原微生物链格孢菌的抑菌能力。平板抑菌实验结果表明,混合发酵液对链格孢菌的抑菌效果达到了66.73%,显著高于黑根霉和拟康氏木霉单独发酵液的51.23%、17.28%;田间实验发现,混合发酵液处理后苹果斑点落叶病发病率与对照组相比显著下降,相对防效达到42.46%;对其叶片防御酶测定结果表明,混合发酵液处理后,苹果叶片的防御酶SOD、POD、PAL活性均有50%以上的提高。黑根霉和拟康氏木霉混合发酵液对苹果链格孢菌具有显著的抑制作用,能有效防治苹果斑点落叶病,提高苹果抗病能力,为新型生防制剂的开发提供了参考。     

艾纳香内生真菌抗细菌和炭疽菌的活性研究

为获得丰富的艾纳香内生真菌资源,筛选出抗性生防菌株,用于活性次生代谢产物的发现,通过水琼脂法对海南产艾纳香进行内生真菌分离,通过ITS序列分析,对其进行鉴定和分析。采用滤纸片法评价内生真菌发酵产物对细菌的抑制活性,采用平板对峙培养法评价艾纳香内生真菌对植物炭疽菌的拮抗作用。本研究共分离鉴定出191株内生真菌,分属于27属,45种,其中优势菌属为Diaporthe、Paraphoma、Ectophoma、Penicillium、Talaromyces、Hypoxylon、Phomopsis、Colletotrichum和Fusarium。抗细菌活性结果显示,Clonostachys、Fusarium和Diapothe属活性较强。抗炭疽病菌试验显示,Talaromyces、Ectophoma和Penicillium属活性较强。本研究初步探讨了海南产艾纳香内生真菌种类的多样性,并首次对其进行了抗病原菌活性筛查,获得的活性菌株可作为微生物源菌剂开发的重要材料。     

青海高寒草地牧草拮抗内生细菌的筛选、鉴定及促生功能测定

以尖镰孢菌黄瓜专化型(Fusarium oxysporum f.sp.cucumerium)为指示菌从青海高寒草地牧草内生细菌中筛选拮抗菌株,结合形态学特征和16Sr DNA基因序列同源性分析鉴定,并进行促生功能测定。结果表明,供试的81株内生细菌中36株有拮抗作用,占供试菌株的44.0%,其中从根部分离的13株的抑菌率均在50.0%以上,菌株2018GH11对6属8种病原真菌的抑菌率均在50.0%以上,特别对孜然根腐病菌的抑菌率达67.6%,抑菌谱宽;根据形态学特征和16Sr DNA基因序列分析将其鉴定为暹罗芽孢杆菌Bacillus siamese;2018GH11具有固氮能力,无溶磷和产IAA能力;发酵菌剂2018GH11用量为0.50%时,黄瓜株高、茎粗、叶片数、鲜重及干重分别比对照增加了15.33%、39.40%、22.22%、215.99%和126.70%。该结果表明高寒草地牧草内生细菌2018GH11具有良好的防病促生作用,开发潜力巨大。     

Metschnikowia pulcherrima strain MACH1 outcompetes Botrytis cinerea, Alternaria alternata and Penicillium expansum in apples through iron depletion

A new strain of Metschnikowia pulcherrima (MACH1) was studied for its efficacy as a biocontrol agent against Botrytis cinerea, Penicillium expansum and Alternaria alternata on apples stored for 8 months at 1 °C. The results of two semi-commercial trials demonstrated the efficacy of the biocontrol strain MACH1. In order to understand the mechanism of action involved, the yeast strain was investigated for its competitive ability for iron against postharvest pathogens of apple. M. pulcherrima strain MACH1 was cultivated on PDA with different concentrations of iron (supplemented as FeCl₃) against A. alternata and B. cinerea. The yeast strain MACH1 produced a wider pigmented inhibition zone against both pathogens in low iron amendments while less inhibition was measured with increased iron concentrations. At the coloured inhibition zone, B. cinerea and A. alternata conidia did not germinate and mycelial degeneration was observed. In addition, a high reduction in infection by both pathogens was recorded in apples treated with M. pulcherrima strain MACH1 supplemented with low iron amendments compared to higher iron concentrations. The same experiments were carried out in vivo and in vitro against P. expansum. M. pulcherrima strain MACH1 amended with low iron concentration (5 μg mL⁻¹ FeCl₃), showing modest lesion diameter reduction and no effect on P. expansum under increased iron and without iron amendments. This study illustrated that iron depletion by the yeast strain MACH1 under low iron conditions could reduce the growth of some postharvest pathogens in vitro and in vivo. Although, iron depletion seems to be a primary mode of action against the postharvest pathogens studied, other mechanisms of action cannot be excluded in the biocontrol employed by M. pulcherrima strain MACH1.     

育苗温室辣根素消毒处理效果研究

辣根素是从十字花科植物中提取的一类次生代谢产物,是一种新型速效、高效和低毒农药.本研究选取北京大兴区、通州区的3个育苗专用日光温室开展试验,研究了辣根素药剂喷雾处理方式下日光温室消毒效果.通过对比消毒处理前后温室内环境、设施设备表面微生物的数量及种类,发现消毒处理后温室沉降平板真菌、细菌数量均显著降低;另外,棚膜及苗床...     

玉米大斑病生防菌的筛选、鉴定及应用研究

为了从生物途径探索有效控制大斑病在玉米生产带来的危害,本试验以玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)为目标菌株,采用对峙法和盆栽接种试验获取生防菌,并测定其盆栽防治效果。结果表明：从128株玉米内生细菌获得1株对玉米大斑病菌拮抗效果最佳的菌株,最长半径与最短半径比值为2.9。从玉米内部分离到的内生生防细菌YD7对大斑病菌具有较强拮抗效果。根据YD7菌株形态培养特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析结果鉴定为解淀粉芽孢杆菌。经过2次盆栽测定,YD7对玉米大斑病防治效果分别为78.2%和77.8%。综合表明,YD7防治玉米大斑病具有很好的开发前景。