利用分子标记检测霍山石斛不同继代次数试管苗的遗传稳定性

分别以霍山石斛成熟种子、茎段和愈伤组织为试管苗的初始材料进行继代培养,利用RAPD、ISSR以及DALP3种分子标记方法对不同继代次数（1-4代）的霍山石斛试管苗进行分析,结果表明：以成熟种子和茎段为材料的继代培养,其试管苗后代在所检测的范围内未探查到变异,具有较高的遗传稳定性。以愈伤组织为材料的继代培养,其试管苗后代从第4代开始,部分引物带型发生变化,但变化甚微,仅是带型强弱的改变。以愈伤组织为材料的继代培养物种内存在一定的变异,但在4代以内仍可稳定遗传。3种继代方式比较之下,以成熟种子和茎段为材料的继代培养是更能稳定遗传的组培快繁方式。     

‘黑珍珠’番茄植株再生体系的研究

为了研究‘黑珍珠’番茄植株再生,以‘黑珍珠’番茄幼嫩叶片为外植体诱导愈伤组织,通过愈伤组织诱导培养、愈伤组织分化培养、不定芽增殖培养、生根培养和试管苗移栽,建立高效快速的‘黑珍珠’番茄再生体系。结果表明：最适宜的诱导叶片愈伤组织的培养基为MS+ 1.0 mg/L 6-BA+ 0.1 mg/L NAA,叶片外植体愈伤组织诱导率最高可达98.2%;诱导出的愈伤组织在MS+ 1.5 mg/L 6-BA+ 0.2 mg/L IBA培养基上能很好的分化出不定芽;MS+4.0 mg/L KT+ 0.01 mg/L IBA 培养基可实现不定芽芽增殖;最适宜的生根培养基为1/2MS+ (0.05~0.08) mg/L NAA,试管苗移栽成活率达92%。     

洋葱通用型愈伤组织诱导的建立

为研究洋葱愈伤诱导体系建立问题,对洋葱种子幼苗、鳞茎盘、幼嫩花序不同组织进行愈伤诱导,同时对愈伤组织进行继代培养和发芽诱导筛选。结果表明,12份洋葱种子材料未诱导出愈伤组织,12份洋葱球的鳞茎盘只有‘早春黄3号（不育系）’诱导出愈伤组织;22份洋葱花序在黑暗条件进行愈伤诱导,诱导率为100%,说明洋葱不同组织对愈伤的诱导发生存在差异,洋葱幼嫩花序培养基诱导率100%,说明洋葱最佳诱导愈伤的组织为幼嫩花序。对不同材料愈伤进行继代培养,‘早春黄3号（不育系）’和‘黄金大玉葱’愈伤生长最快;利用液体培养基进行继代培养,能够快速、高效扩繁愈伤组织。选用27份不同梯度组合的培养基对愈伤组织进行出苗诱导,在光照条件下,开始会有绿色组织形成,全部诱导出根,均未诱导出苗。石蜡切片观察外植体诱导愈伤和继代培养愈伤无差异,再生培养基诱导后有根形态形成。说明不同成分的培养基诱导洋葱愈伤组织,其内部促进生根的激素增加,导致根的诱导发生。通用型洋葱愈伤组织的诱导形成,为不同基因型的洋葱诱导出苗、生根奠定材料基础,对洋葱基因编辑等技术应用具有促进作用。     

‘苏帅’苹果表观遗传变异分析

[目的]为探索杂交品种‘苏帅’表观优良性状遗传的生理机制。[方法]以杂交品种‘苏帅’和父本‘金冠’、母本‘印度’为材料, 通过分析 ‘苏帅’和‘金冠’、‘印度’等苹果品种的节间数、节间长度以及叶片内源激素、果实可溶性固形物、可滴定酸、叶绿素的含量; 采用石蜡切片法、扫描电镜等方法比较其叶片结构, 测定了叶片光合气体交换参数。[结果]结果表明, ‘金冠’和‘印度’的节间长度显著大于‘苏帅’苹果的节间长度,‘苏帅’苹果叶片叶绿素相对含量显著高于‘金冠’和‘印度’; 果实可溶性固形物含量与‘金冠’虽然没有显著性差异, 但可滴定酸的含量明显高于‘金冠’苹果; ‘苏帅’苹果内源激素脱落酸(ABA)、赤霉素(GA)、吲哚－3－乙酸(IAA)、玉米素核苷(ZR)与‘金冠’和‘印度’相比均呈显著差异。‘苏帅’苹果叶片下表皮气孔长度大于‘印度’, 且差异极显著,但小于‘金冠’,气孔宽度显著宽于‘印度’,与‘金冠’苹果没有明显差异, ‘苏帅’苹果气孔密度极显著小于‘金冠’和‘印度’;‘金冠’和‘印度’栅栏细胞组织排列较紧密, 栅栏组织和海绵组织分界限明显,而‘苏帅’苹果的栅栏组织细胞排列相对杂乱,细胞大小也不一致, 与海绵组织界限不明显; ‘苏帅’苹果叶片、上下表皮、栅栏组织及海绵组织厚度显著高于‘金冠’和‘印度’,栅栏组织和海绵组织比值也显著高于‘金冠’和‘印度’。[结论] ‘苏帅’苹果与父母本相比表现出节间短、叶片变厚、光合作用增强等性状多样性, 为苹果生产提供了新品种,也为苹果新品种的培育提供了珍贵的种质资源。     

植物生长调节剂对大岩桐离体培养的影响

以大岩桐（Sinningina speciosa）无菌试管苗为试材,进行了叶片愈伤组织诱导培养、试管苗继代增殖培养和试管苗生根培养的对比实验,以求筛选出离体培养的最佳植物生长调节剂组合及其配比。结果表明：叶片愈伤组织诱导培养基以MS＋BA1.0mg/L＋2.4-D0.1mg/L最有利于愈伤组织生成,而MS＋BA1.0mg/L＋NAA0.1mg/L最有利于不定芽生成;试管苗继代增殖最佳组合为：MS＋BA2.0mg/L＋NAA0.5mg/L;生根培养最佳配比为：1/2MS＋NAA1.0mg/L＋IBA0.5mg/L。     

苹果茎尖组培苗继代保存多年后繁殖特性研究

为解决种质离体保存的适宜年限等实用性问题,需了解多年继代保存的组培苗繁殖能力有无变化。本试验对继代保存不同年限的 ‘金冠’、‘乔纳金’和‘嘎拉’、‘富士’茎尖组培苗进行继代增殖能力、不定根诱导和离体叶片不定芽再生能力的研究。结果表明：外植体接种初期4年以内,即继代次数为24或40代时,‘富士’、‘金冠’、‘乔纳金’的新梢增殖能力较低,‘嘠拉’生根率较低,‘金冠’、‘富士’、‘嘠拉’离体叶片再生率较低,随着培养时间延长,继代次数增加,以上品种的继代增殖效率、生根能力及离体叶片再生能力均稳定在较高水平。长期继代保存的苹果品种茎尖组培苗（‘富士’已保存25年,‘金冠’、‘乔纳金’19年,‘嘠拉’10年）仍保持其器官再生能力。     

茶树愈伤组织继代培养与体细胞胚发生

利用添加不同种类,浓度的１／２ＭＳ修改培养基、Ｂ５培养基交叉培养茶树（ＣａｍｅｌｌｉａｓｉｎｅｎｓｉｓＬ．）愈伤组织,有利于延长愈伤组织继代培养时间,并维持胚性愈伤组织高的体细胞胚分化能力,不同品种的胚性愈伤组织体细胞胚分化率存在明显差异,试管苗茎胚性愈伤组织分化率高于大田栽培的成龄茶树叶柄胚性愈伤组织。胚性愈伤组织随着继代培养时间的延长,体细胞胚分化率随之有所下降,胚性愈伤组织在继代培养过程中,     

植物生长调节剂对苹果组培苗延缓生长保存的效应

以富士、乔纳金、金矮生、嘎拉组培苗为试材,在继代培养基中加入不同浓度的比久、矮壮素、多效唑及脱落酸,研究了植物生长延缓剂和生长抑制剂对苹果组培苗延缓生长种质保存的效应。结果表明：比久、矮壮素均有明显抑制苹果组培苗生长的作用,且茎尖存活率高,试管苗生长状况较好,转入常规继代培养基当代即可恢复生长,可用于苹果种质资源的离体保存,比久适宜的浓度为80mg/L,矮壮素为75mg/L左右;多效唑处理虽能明显抑制苹果试管苗生长,但易使有些品种试管苗玻璃化,可选择性应用;脱落酸作用过于剧烈,绝大部分处理苗死亡,不宜在苹果种质保存中使用。     

‘乐都紫皮大蒜’多倍体的诱导与鉴定

‘乐都紫皮大蒜’因其风味独特并具有高含量的碳水化合物,市场价值和开发利用前景广阔。利用多倍体诱导技术,可促进优良大蒜种质的创制。本研究通过秋水仙素浸泡‘乐都紫皮大蒜’的愈伤组织进行四倍体诱导,并利用流式细胞仪及农艺性状测定等方法进行鉴定。结果表明:在含有0.5 mg/L6-BA+1.5 mg/L2,4-D的B5培养基上培养大蒜愈伤组织的诱导率最高,愈伤组织长势最佳。以0.2%的秋水仙素浸渍4 h,愈伤组织的四倍体细胞诱导率最高,达39.42%。在此条件下,处理愈伤组织后诱导再生试管苗,愈伤组织存活率为54.44%,多倍体再生植株的诱导率为28.89%。与二倍体植株相比,四倍体试管苗的株高、叶长、叶宽、假茎长显著增加了183.44%、181.18%、133.33%和58.33%。本研究为培育大蒜新种质提供了技术方法与科学依据。     

3种豆科牧草愈伤组织继代培养抗褐化的研究

为解决3种豆科牧草愈伤组织继代培养中的褐化问题,以‘新牧4号’紫花苜蓿、普通红豆草和‘海法’三叶草愈伤组织为材料,探讨不同防褐化措施在3种豆科牧草愈伤继代培养过程中抗褐化效果的影响。结果表明,在苜蓿和红豆草愈伤组织的继代培养中,对愈伤组织褐化抑制效果较好的是AgNO_3,浓度为0.02 g/L时,褐化率分别为13%、15%,愈伤组织褐化程度强弱依次是PVP柠檬酸AgNO_3;在三叶草愈伤组织的继代培养中,对愈伤组织褐化抑制效果较好的是AgNO_3,浓度为0.015 g/L时,褐化率为32%,愈伤组织褐化程度强弱依次是柠檬酸PVPAgNO_3。一定浓度的AgNO_3不仅能有效控制褐化,还在一定程度上促进了愈伤组织的生长。     

三种豆科牧草愈伤组织继代培养中抗褐化的研究

为解决3 种豆科牧草愈伤组织继代培养中的褐化问题，以‘新牧4 号’紫花苜蓿、普通红豆草和‘海法’三叶草愈伤组织为材料，探讨不同防褐化措施在3 种豆科牧草愈伤继代培养过程中抗褐化效果的影响。结果表明，在苜蓿和红豆草愈伤组织的继代培养中，对愈伤组织褐化抑制效果较好的是AgNO3，浓度为0.02 g/L 时，褐化率分别为13%、15%，愈伤组织褐化程度强弱依次是PVP＞柠檬酸＞AgNO3；在三叶草愈伤组织的继代培养中，对愈伤组织褐化抑制效果较好的是AgNO3，浓度为0.015 g/L时，褐化率为32%，愈伤组织褐化程度强弱依次是柠檬酸＞PVP＞AgNO3。一定浓度的AgNO3不仅能有效控制褐化，还在一定程度上促进了愈伤组织的生长。     

防风(Saposhnikovia divaricata)组织培养中的玻璃化现象研究

以防风茎段为外植体,建立了组织培养再生体系,对防风试管苗玻璃化现象进行了研究。结果表明,与正常苗相比,玻璃化苗形态异常,组织含水量升高,叶绿素含量显著降低,酸性过氧化物同工酶活性减弱。6-BA浓度超过2.0mg/L、光照低于2000lx、培养瓶内湿度大都极易导致防风试管苗的玻璃化,减少愈伤继代次数,增加培养基内琼脂和蔗糖浓度,可以降低玻璃化率。轻中度的玻璃化苗通过改变培养环境可以恢复正常。优化的防风再生体系为:以嫩茎段为外植体,继代3次左右的愈伤组织诱导出芽,芽继代增殖时,6-BA浓度采用1.0mg/L和0.5mg/L交替使用,培养光照3000~4000lx。     

菊花‘金不凋’再生及遗传转化体系的构建

‘金不凋’属于典型的日中性菊花,可作为日中性菊花开花分子机理的理想研究材料,目前尚未建立‘金不凋’的再生及遗传转化体系。本研究以‘金不凋’叶片为外植体,分别对影响再生及转化体系的主要因素进行试验。结果表明‘:金不凋’叶盘愈伤组织的不定芽分化最佳培养基为MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L,不定芽分化率为90.0%,平均再生不定芽数达5.5556个;相关性分析表明褐化率与愈伤诱导率以及平均再生愈伤组织数之间存在显著的负相关关系;试管苗最佳生根培养基为MS,生根率为100%。在‘金不凋’再生体系建立的基础上,初步建立了其遗传转化体系:‘金不凋’叶盘经过24 h预培养,在菌液浓度OD600=0.6的农杆菌中侵染10 min,共培养2 d,延迟培养5 d,叶片不定芽分化潮霉素临界浓度为2 mg/L,生根筛选潮霉素临界浓度为5 mg/L时,转化效率最高。通过潮霉素抗性筛选和PCR鉴定,获得3株PCR阳性菊花苗,转基因阳性苗频率为2.5%,本研究为‘金不凋’的基因工程育种提供了技术基础。     

‘洛阳红’牡丹组织培养快速繁殖技术研究

以‘洛阳红’牡丹组培苗为试材,探讨了不同基本培养基、激素配比、培养条件、抗褐化物质对‘洛阳红’牡丹继代苗增殖生长、生根及褐化的影响。结果表明：DKW基本培养基适宜‘洛阳红’牡丹继代增殖;培养基中附加2.0～3.0mg/L BA与0.5mg/L IAA或0.05mg/L NAA配比有利于继代苗分化、生长,而附加玉米素ZT效果不佳;20～25℃对‘洛阳红’继代苗增殖影响不大,30℃下试管苗很快老化、枯死,不宜采用;1/2MS附加0.2mg/L NAA或2.0mg/L IAA与2.0mg/L IBA配比可促进‘洛阳红’牡丹试管苗不定根诱导;继代和生根培养基中附加0.5g/L PVP可有效减轻‘洛阳红’牡丹组培苗褐变,促进继代苗分化、生长,但对生根没有明显影响。     

不同浓度NAA/6BA配比对不同品种甘薯茎尖培养特性的影响

为明确不同品种甘薯茎尖培养的最佳NAA/6BA配比,设置0.1 mg/L/2.5 mg/L、0.2 mg/L/2.5 mg/L、0.2 mg/L/1.0 mg/L 3组NAA/6BA浓度配比处理,观测不同浓度激素处理对‘北京553’、‘红香蕉’、‘苏薯8号’、‘烟薯25’、‘安吉芋’、‘济徐23’、‘渝紫7号’、‘商薯19’茎尖培养成苗率、愈伤组织直径、不定根数目、叶片数和植株高度的影响,同时调查不同品种试管苗的移栽成活率。结果表明,‘红香蕉’、‘济徐23’、‘渝紫7号’、‘商薯19’在0.1 mg/L/2.5 mg/L的处理下培养效率最高;‘安吉芋’在0.2 mg/L/2.5 mg/L的处理下培养效率最高;‘苏薯8号’、‘北京553’、‘烟薯25’在0.2 mg/L/1.0 mg/L的处理下培养效率最高。因此,在甘薯茎尖培养过程中,不同甘薯品种适宜的NAA/6BA配比存在显著差异,在实际生产中应根据品种特性来进行调整激素的用量和比例。     

茅苍术试管苗继代培养的ISSR及MSAP分析

为探究茅苍术试管苗在长期继代培养中的遗传稳定性与DNA甲基化变化,保证工厂化生产种苗品质。以茅苍术幼嫩顶芽为初始材料,建立高效离体快繁体系进行长期继代培养,并运用ISSR、MSAP分子标记技术对不同继代次数的试管苗进行分析试验。结果显示不同继代次数的10个样本遗传多样性较低,具有遗传稳定性较高。其中,第1代与第10代样本之间遗传相似系数最低,亲缘关系较远;从继代第4代开始,不同引物扩增图谱条带在个别位点发生变化,且随着继代次数增加变化愈明显。经过长期继代培养后,茅苍术试管苗的甲基化水平有所下降,去甲基化模式和甲基化模式并存,但以去甲基化模式为主。长期继代培养后出现变异现象可能是培养条件、培养时间的不同导致基因被重新活化和表达或抑制、去甲基化模式高于甲基化模式造成的。本研究结果为茅苍术种质资源保存和工厂化生产提供了一定的理论依据。     

薄壳山核桃愈伤组织诱导的优化

本研究以薄壳山核桃品种苗‘波尼’幼嫩叶片为外植体,设置不同消毒方法、不同蔗糖浓度、不同褐化抑制剂及不同植物生长调节剂浓度及配比,研究其对叶片诱导愈伤组织形成的影响。结果表明,不同消毒方法对薄壳山核桃叶片愈伤组织形成影响显著,以0.1%HgCl_2消毒2 min效果最好,污染率为15.6%,且愈伤组织生长状态最好;不同蔗糖浓度对叶片愈伤组织形成的影响以30 g/L效果好,愈伤诱导率达75.6%;不同褐化抑制剂对叶片愈伤组织影响较小,其中以0.2 g/L PVP效果最好,不仅褐化率低且愈伤诱导率高;不同植物生长调节剂浓度及配比对薄壳山核桃叶片愈伤组织形成影响显著,以4/5MS+0.75 mg/L TDZ+0.5 mg/L6-BA+0.5 mg/L NAA培养基与改良DKW+0.4 mg/L TDZ+0.4 mg/L IBA培养基诱导效果最好,研究发现低浓度的TDZ (0.2～0.4 mg/L)促进愈伤组织形成,高浓度的TDZ (0.8～2.0 mg/L)抑制愈伤组织形成。本研究可筛选出诱导叶片愈伤组织的最佳方法,为后期愈伤组织诱导不定芽提供科学依据。     

红掌“火焰”、“阿拉巴马”组培快繁及再生方式的研究

以红掌‘火焰’、‘阿拉巴马’的叶基、叶片及叶柄作为外植体,探讨其愈伤组织的诱导及分化,揭示其再生方式,实现组培快繁。采用常规组织培养的方法,设定不同的激素组合,通过不同外植体诱导分化途径的调查分析,探讨其再生方式。结果表明,不同外植体愈伤组织的诱导率,‘火焰’为叶柄＞叶基＞叶片,‘阿拉巴马’为叶基＞叶柄＞叶片。‘火焰’、‘阿拉巴马’嫩梢的再生方式既有器官再生又有体胚再生,在6-BA1.0 mg/L的培养条件下,‘火焰’器官再生率最高比例达到91%,体胚再生率为54%,2种方式均有比例为50%;‘阿拉巴马’器官再生率最高比例为62%,体胚再生率为57%,2种方式均有比例为57.1%。‘火焰’胚性愈伤组织在6-BA 0.5和1.0 mg/L的培养基中的萌发率,分别为55%和46%,‘阿拉巴马’分别为71%和66%。‘火焰’、‘阿拉巴马’2个品种、3类外植体再生方式研究发现其既有器官再生又有体胚再生,前期是以器官再生为主,后期以体胚再生为主。     

影响籼稻成熟胚愈伤组织植株再生频率的几个因素

以优良籼稻品种的成熟胚为材料,探讨不同浓度ABA、愈伤组织继代次数、培养时间以及干燥处理等因素对籼稻成熟胚愈伤组织再生能力的影响。结果表明：（1）在分化培养基上添加3.0～5.0 mg/L ABA对促进胚性愈伤组织的形成及胚状体发生,提高植株再生能力有显著作用。（2）继代3次、培养20～30 d的成熟胚愈伤组织,质量较好,分     

花生上胚轴愈伤组织诱导体系的建立与优化

本研究旨在筛选适宜花生上胚轴愈伤组织诱导的最佳培养基,建立并优化花生上胚轴愈伤组织诱导体系。实验选用不同类型的花生品种,以上胚轴为外植体,在添加有3~6 mg/L Pic和5~10 mg/L 2,4-D的MS-B5诱导培养基上对上胚轴愈伤组织诱导。比较不同预培养时间的愈伤组织诱导差异,不同基因型诱导差异以及不同激素配比诱导差异,结果表明,预培养0天的珍珠豆型花生‘白沙1016’诱导率最高,确定MS+B5+Pic 3 mg/L为最适宜诱导培养基,MS+Pic 3 mg/L+Gln 1 g/L为继代培养基。该体系适宜本试验中多数花生品种的愈伤诱导,并可进行多次继代培养得到重复性体胚发生培养物。