水稻抗白叶枯病基因Xa23的PCR分子标记定位及辅助选择

用Xa23的近等基因系CBB23及其感病轮回亲本JG30构建了包含2562个单株的F2作图群体.通过分析571个感病单株,找到2个新的与Xa23基因连锁的SSR标记RM187和RM206,它们与Xa23之间的遗传图距分别为7.1 cM和1.9 cM.通过筛选1200个RAPD引物,获得2个与Xa23基因连锁的RAPD标记RpdH5和RpdS1184,与Xa23之间的遗传图距分别为7.0 cM和7.6 cM     

小麦合成种M53抗白粉病基因的RAPD和SSR标记

运用RAPD和SSR技术，采用分离群体分组分析法(BSA)进行了小麦合成种M53抗白粉病基因连锁的分子标记研究。结果表明，M53的抗白粉病基因由显性单基因控制，RAPD标记OPL09-1700与抗病基因连锁，遗传距离为16.8cM。SSR标记Xgwm205也与抗白粉病基因连锁，遗传距离为9.3cM，通过SSR标记将该基因定位于5DS，标记与基因间的排列顺序     

谷子抗除草剂“拿捕净”基因的AFLP标记

对由一对显性核基因(Srf)控制的谷子抗除草剂拿捕净(Sethoxydim)种质抗性进行了分子标记的研究.通过采用F2代群分法,在谷子F2代抗感池间随机筛选了330对AFLP引物,找到了与谷子抗除草剂基因连锁的两个AFLP标记AP1284(M55/15)和AP2350(M55/14).它们位于抗除草剂基因的一侧,与该基因的遗传图距分别为6.3 cM和2.9 cM.二者间的遗传     

绿豆遗传连锁图谱的整合

利用绿豆及其近缘种的701对SSR引物,对现有绿豆遗传连锁图谱进行补充,结果在高感豆象绿豆栽培种Berken和高抗豆象绿豆野生种ACC41两亲本间筛选到多态性SSR引物104对。群体分析后,结合其他分子数据,使用作图软件Mapmaker/Exp 3.0b,获得一张含有179个遗传标记和12个连锁群,总长1831.8cM、平均图距10.2cM的新遗传连锁图谱,包括97个SSR标记,91个来自绿豆近缘种;RFLP标记76个;RAPD标记4个;STS标记2个。对32个绿豆、小豆共用SSR标记在遗传连锁图谱的分布分析发现,二个基因组间有一定程度的同源性,共用标记在连锁群上的排列顺序基本上一致,只有部分标记显示绿豆和小豆基因组在进化过程中发生了染色体重排;利用新图谱对ACC41的抗绿豆象主效基因重新定位,仍定位于I(9)连锁群,与其相邻分子标记的距离均小于8cM,其中与右翼SSR标记C220的距离约2.7cM。与原图谱比较,新定位的抗性基因与其相邻标记的连锁更加紧密。     

鉴定与棉花CMS—D8的育性恢复基因连锁的分子标记

鉴定与胞质雄性不育(CMS)D8系统的恢复基因紧密连锁的分子标记能促进杂种棉花亲本材料的培育。本文旨在培育与两个独立的显性恢复基因Rf1和Rf2紧密连锁的分子标记。Rf1来源于从G．harknessii Brandegee(D2染色体组)转育的D2恢复系，Rf2来源于D8恢复系。应用混合分离分析法鉴定与恢复基因连锁的随机扩增多态DNA(RAPD)标记。应用3个测交组合构建与标记相关的Rf2图谱，使用2个测交组合构建与标记相关的Rf1图谱。     

烟草PVY抗性的遗传分析与分子标记筛选

本文以抗马铃薯Y病毒(简称PVY)的烟草品种RY5,感病品种Coker176为亲本,构建F1、正反交F2和正反交BC1群体,苗期摩擦接种PVY的抗性遗传分析结果表明,接种后第21d群体PVY抗性数据符合孟德尔单基因隐性质量性状的遗传模型。接种后第28d群体PVY抗性数据偏离孟德尔单基因隐性质量性状的遗传模型。提取F2代群体中抗病和感病单株DNA,从多条RAPD引物和一对SCAR引物中,筛选出两个紧密连锁的分子标记。RAPD标记O12V3695与RY5的抗病基因对应的显性等位基因位点(Va)间的遗传距离为2.10cM,而SCAR标记与Va间的遗传距离为2.52cM,这两个分子标记可用于抗PVY抗性育种。     

玉米S组CMS育性恢复基因的分子标记定位

以[Mo17(rf_3rf_3)CMS-唐徐×HZ_1(Rf_3Rf_3)N]×Mo17(rf_3rf_3)N回交群体作为基因定位群体。采用RFLP和RAPD分子标记技术,定位了Rf_3/rf_3基因。RFLP分析表明,Rf_3/rf_3基因位于第二染色体长臂上的UMC36A和UMC49分子标记之间,其遗传距离分别为12.7cM和4.8cM。采用BSA法,筛选了340个10mer随机引物,找到与Rf_3基因紧密连锁的分子标记RAPD Eo8-1.2,将Rf_3/rf_3基因的标记距离缩小到2.7cM,为Rf_3/rf_3基因辅助选择提供了有价值的分子标记。     

基于AFLP和SSR标记的高粱分子遗传连锁图构建

以茎秆糖份含量高的高粱自交系1095和低糖高粱自交系N3杂交获得的F2分离群体(205个个体)为材料,采用AFLP(amplified fragment length polymorphism)和SSR(simple sequence repeat)两种分子标记,构建了包含273个(232AFLP,41 SSR)标记,覆盖基因组长度为978.1cM的高粱分子标记连锁遗传图.以SSR标记为锚标记,19个连锁群中,18个连锁群各自被归并于高粱的10个连锁群(A-J)中.该连锁图平均图距和最大图距分别为3.6 cM和19.4 cM,未出现大的空隙(gap＞25 cM),归并后的10个连锁群(A-J)分别对应于高粱染色体SBI-01、SBI-02、SBI-03、SBI-04、SBI-07、SBI-09、SBI-10、SBI-08、SBI-06、SBI-05.     

Evaluation of Restorability of Two Fertility Restorer Genes in the Rice Chromosome Single Segment Substitution Lines (SSSLs)

由华南农业大学选育的水稻单片段代换系S15对于野败型(WA)和矮败型(DA)细胞质雄性不育系均具有较强的恢复性。以野败型不育系博白A和矮败型不育系协青早A为母本, 单片段代换系S15为父本杂交, 采用分子标记辅助选择和连续回交的方法构建了两个BC₃F₂群体。利用与第1、第10染色体上恢复基因Rf3和Rf4两侧紧密连锁的SSR标记, 从这2个BC₃F₂群体中筛选携带基因型Rf3Rf3/rf4rf4和rf3rf3/Rf4Rf4的单株, 观察这些单株花粉和小穗育性, 并利用202个多态性SSR标记分析这些单株的遗传背景, 结果表明: (1)在同一细胞核背景下(S15), DA型细胞质的可恢复性好于WA型细胞质, 单片段代换系S15中的恢复基因Rf4的恢复力大于恢复基因Rf3的恢复力。(2)单片段代换系S15中的恢复基因对于WA型不育系博白A和DA型不育系协青早A表现出质量-数量性状的遗传。在单片段代换系S15中, 除了主效恢复基因Rf3和Rf4外, 微效基因或者修饰基因也表现出对于博白A和协青早A的恢复性作用, 而且效应较大。(3)在构建的2个BC₃F₂群体中, 携带基因型Rf3Rf3/rf4rf4和rf3rf3/Rf4Rf4单株的遗传背景片段数平均为1.0, 对应于恢复基因Rf3和Rf4座位的代换片段平均长度分别为12.9 cM和18.4 cM。     

“薄皮”ד垂枝”板栗RAPD遗传连锁图构建

使用20组共400条RAPD随机引物,在"薄皮"和"垂枝"两个板栗亲本无性系及其5个杂交后代进行筛选,共有187条引物获得了清晰、重复性好的多态性条带,占供试引物的46.75%.应用筛选出的多态性引物在两亲本及其60个杂交后代中进行扩增,获得的多态性条带在后代中的分离比用卡方测验(α=0.05)分析,结果共有143个标记符合1:1测交分离比,其中来源于母本"薄皮"板栗的有88个,来源于父本"垂枝"的有55个.采用作图软件Mapmaker和回交群体模型分别对符合测交分离比的标记进行亲本特异的标记分群和连锁分析,设定LOD值为3和最大重组值0为0.50作为可信统计度与最大连锁标记数量之间的最佳组合,其中母本的标记定位了10个连锁组,父本的标记定位了7个连锁组.母本"薄皮'板栗遗传连锁图共包含88个标记,覆盖了板栗基因组总长约823.1 cM(Kosambi,以下同),占基因组的66.7%;父本"垂枝"板栗遗传连锁图共包含55个标记,覆盖了板栗基因组总长约720.8 cM,占基因组的41.7%.母本"薄皮"板栗遗传连锁图上标记间的遗传距离为1.6～26.5 cM,平均9.4 cM,连锁组的大小从15.5 cM到166.3 cM,平均为82.3 cM;父本"垂枝"板栗遗传连锁图上标记间的遗传距离为2.1～39.9 cM,平均13.1 cM,连锁组的大小从53.5 cM到139.6 cM,平均为103.0 cM.     

甜菜细胞质雄性不育系与其保持系线粒体DNA的RAPD分析

本文对甜菜线粒体DNA的提取方法进行了改进,在不需密度梯度离心条件下即可获得高纯度的DNA。优化了甜菜线粒体的RAPD的反应条件,对细胞质雄性不育甜菜的不育系及其保持系的线粒体DNA(mtDNA)进行了RAPD(随机扩增多态DNA,randomly amplified polymorphic DNA)分析,结果表明：甜菜细胞质雄性不育系和保持系线粒体DNA之间存在丰富的多态性。     

刺五加成熟种子的愈伤组织诱导及其RAPD分析

以刺五加的成熟种子为材料，通过离体培养诱导产生愈伤组织，利用RAPD分子标记方法，在DNA水平上分析无菌苗和愈伤组织的遗传变异。10个10碱基引物中筛选出4个引物，对它们的PCR扩增结果进行了分析。结果表明刺五加愈伤组织与无菌苗相比出现了DNA水平的变异。     

大白菜胞质雄性不育线粒体基因特异分子RAPD标记及克隆

用随机引物对大白菜细胞质雄性不育系及其保持系线粒体DNA的RAPD分析,在不育系与保持系的线粒体基因组间存在明显的差异,用引物S259在不育系中扩增并克隆得到特异片断(mt)S259~600bp,序列分析表明该片断与油菜线粒体基因NADH脱氢酶第四亚基序列有部分相似性,片段与雄性不育的关系还需进一步研究。     

Morphological traits and high resolution RAPD markers for the identification of the main strawberry varieties cultivated in Argentina

Eight genotypes of the main Fragaria×ananassa cultivars grown in Argentina were analysed using the random amplified polymorphic DNA (RAPD) technique combined with electrophoresis in polyacrylamide gels. The high resolution of this procedure allowed the detection, with only 13 random primers, of 37 genotype‐specific bands that can be used as markers for verifying the identity of cultivars. By using this approach, three different accessions of the cultivar ‘Pájaro’ exhibited differences in amplification profiles, confirming the need for DNA analysis to prevent misidentification of cultivars. In addition, RAPD bands and morphological traits were used to assess genetic relatedness among cultivars. Comparison of both dendrograms revealed that there is no correlation between the clustering obtained with molecular and morphological characters.     

RAPD Molecular Markers and Its Applications in Life Science

A DNA polymorphison assay, random amplified polymorphic DNA (RAPD), was developed in 1990 based on amplification by the polymerase chain reaction (PCR) of random DNA segments and single primers of arbitrary uncleotide sequnce. The major advantage of this assay, contrasting with the restriction fragment length polymorphism (RFLP), is that there is no requirement for any specific sequence information on the target genome, as well as rapidity and simplicity.It has been widespread applied in life science researches such as the creation of high density genetic mapping, molecular phylogenetic study and gene location.     

甜菜细胞质雄性不育系及保持系叶绿体DNA的RAPD分析

对细胞质雄性不育甜菜的不育系及其保持系的叶绿体DNA(ctDNA)进行了RAPD分析,结果表明：在所选的70个引物中,甜菜细胞质雄性不育系和保持系叶绿体DNA之间不存在差异性。与此同时,对叶绿体DNA的提取方法进行了改进,在不需密度梯度离心条件下即可获得高纯度的DNA;优化了甜菜叶绿体的RAPD的反应条件。     

RAPD variability in rice (Oryza sativa L.) plants derived from desiccation-tolerant calli

Genetic modification from selfed progenies of 18 rice (Oryza sativa L.) plants regenerated from callus tissues which survived desiccation, were investigated at the DNA level using the random amplified polymorphic DNA (RAPD) method. Twelve 10-mer random primers were used to amplify DNA of progenies from the regenerated plants, and a total of 228 PCR products and 1780 DNA fragments were obtained by primers, generating between four to thirteen major bands. The size of the amplified fragments ranged from 0.2 to 2.55 kb. The results showed that 10 out of 12 primers produced polymorphic bands, two primers (RA31 and RA185) showed no polymorphism among plants tested. A dendrogram of the genetic distance was constructed based on their polymorphism, demonstrating that somaclonal variation exists in rice plants regenerated from callus which survived the desiccation treatment. Part of this variation can be useful in rice breeding. This revised version was published online in August 2006 with corrections to the Cover Date.     

苏丹草RAPD反应条件的优化与应用

为研究不同因素对苏丹草随机扩增多态性DNA（RAPD）反应体系的影响，建立并优化反应体系；再利用优化体系绘制了DNA指纹图谱以区分两个高丹草品种。提取苏丹草的基因组DNA，分别设置Mg2+浓度为1.0 mmol/L、1.5 mmol/L、2.0 mmol/L、2.5 mmol/L、3.0 mmol/L；退火温度为34℃、35℃、36℃、37℃、38℃；Taq酶含量为0.6U、0.8U、1.0U、1.2U、1.4U进行PCR扩增。结果表明：Mg2+2.0mmol/L，退火温度36度，Tap酶活性值1.2U是进行苏丹草RAPD分析的最优反应条件。利用最优反应条件绘制了皖草2号和皖草3号的DNA指纹图谱，在该图谱中有A、B两条特征带，可以区分皖草2号和皖草3号。     

An extended genetic map of rye (Secale cereale L.)

A genetic linkage map of rye consisting of 92 markers was constructed by using isozyme and molecular marker techniques. For this purpose an F₂ population of 137 individuals was established on which RFLP studies with homologous and heterologous probes were performed. After establishing a reliable polymerase chain reaction (PCR) protocol, 280 random primers were screened for polymorphisms and 17 random amplified polymorphic DNA (RAPD) loci were mapped. The digestion of the template DNA prior to PCR increased the degree of polymorphism. Previously published markers could also be integrated into this map by using the JoinMap computer program. The resulting linkage map comprises a total of 127 markers and spans a distance of about 760 cM.     

目标起始密码子多态性(SCoT):一种基于翻译起始位点的目的基因标记新技术

随着功能基因组学的发展,分子标记领域已开始从传统的随机或匿名性分子标记转向目的基因标记和功能性标记.目标起始密码子多态性(start codon targeted polymorphism,SCOT)标记是一种基于翻译起始位点的目的基因标记新技术,具有操作简单、重复性好等特点,根据ATG翻译起始位点侧翼保守序列来设计单引物,扩增产生偏向候选功能基因区显性多态性标记,适合不同层次实验室的不同领域的广泛应用,SCoT标记已开始在水稻和花生上得到运用.本文旨在介绍给研究者一种可以作为传统的RAPD、ISSR标记有效补充的目的基因标记新技术,希望其广泛的应用于生物多样性分析、遗传图谱构建、重要性状标记等方面.