苎麻悬浮细胞原生质体培养再生植株

苎麻品种浏阳大叶绿的子叶在含有２，４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ、ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ的ＭＳＢ固体培养基上，形成愈伤组织。愈伤组织经３￣４次继代培养后作液体振荡培养，产生悬浮细胞系。从悬浮系分离的原生质体，只有以海藻酸钠包埋方式培养在ＫＭ８Ｐ培养基中，５０天左右才能形成肉眼可见的小愈伤组织。该愈伤组织在附加２，４－Ｄ０．２ｍｇ／Ｌ、６－ＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ的ＭＳＢ生长培养基上增殖，然后转入附加６－ＢＡ２．０ｍｇ     

甘薯（Ipomoea batatas（L.）Lam.）及其近缘野生种原生质体的…

对甘薯品种高系１４号及其近缘野生种Ｉ．ｔｒｉｌｏｂａＬ．和Ｉ．ｌａｃｕｎｏｓａＬ．进行原生质体植株再生研究。从离体培养植株的叶柄分离出原生质体，将其培养在含有０．００５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ和０．５ｍｇ／Ｌ激动素（ＫＴ）的ＭＳ培养基中，从原生质体获得了高频率的愈伤组织。培养８－１２周后，将直径达２－３ｍｍ的小愈伤组织转移到添加０．０５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ的ＭＳ培养基上，转移３－６周后，将愈伤组织进一步转     

甘薯和Ipomoea lacunosa的种间体细胞杂种植株再生及鉴定

用ＰＥＧ融合法融合甘薯品种高系１４号和近缘野生种Ｉｐｏｍｏｅａ ｌａｃｕｎｏｓａ的原生质体，将融合原生质体培养在含有０．０５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ和０．５ｍｇ／Ｌ ＫＴ的ＭＳ培养基上，愈伤组织迅速增殖。将其中的７０个愈伤组织培养在添加３．０ｍｇ／Ｌ ＢＡＰ的ＭＳ培养基上，并进一步培养在ＭＳ基本培养基上，获得９株再生植株。过氧化物酶同工酶、酯酶同工酶和ＲＡＰＤ分析表明，其中２株再生植株（ＫＬ１和ＫＬ３）     

切花月季萨曼沙组织培养微繁的研究

以切花月季萨曼沙为外植体，成功地建立了该品种无性繁殖系和高效的培养体系，在ＭＳ＋ＢＡ２ｍｇ／Ｌ和ＭＳ＋ＢＡ２ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ培养基上芽的诱导率均在８０％以上；在１／２ＭＳ＋ＩＡＡ１ｍｇ／Ｌ、１／２ＭＳ＋ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ及１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ的培养基上，根的诱导率在８０％以上；生根试管苗经高湿度荫棚过渡锻炼后移栽成活率达９５％以上     

大蒜茎尖脱毒技术及组织培养研究

采用山西栽培的５个地方名蒜茎尖离体培养，获得了无病毒蒜种。结果表明，茎尖大小为０．２￣０．５ｍｍ，不定芽增殖培养基以Ｂ５或ＭＳ４，附加１￣２ｍｇ／Ｌ细胞分裂素和０．０１￣０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ，效果最佳。根系诱导在原培养基中加入０．２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ，出根率可达９０％以上。成苗后于１２月份移栽到节能日光温室，成活率达９０％以上。经对脱毒苗形态观察和染色体检测，没有发生异常变化。植株生长健壮，遗传性稳     

掌叶半夏细胞悬浮培养及单细胞培养再生植株

掌叶半夏成熟胚在含２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ，ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上可诱导形成颗粒状胚性愈伤组织。用附加２，４－Ｄ ２．０ｍｇ／Ｌ，ＢＡ０．１ ｍｇ／Ｌ，ＣＨ３００ｍｇ／Ｌ的ＭＳ液体培养基对胚性愈伤组织进行悬浮振荡培养，经３￣４次继代培养即可得到悬浮的单细胞，其细胞多为圆形或椭圆形，具有较强的分裂能力。经测定，悬浮培养过程中细胞生长曲线呈“Ｓ”型，培养２０天时细胞数量和鲜重达到最大值；随着     

西瓜再生系统的建立

以京欣一号、查理斯顿、巨人、井神小西瓜、黑崩筋５个品种苗龄６ｄ的子叶为外植体，建立了西瓜无性繁殖系和高效的培养体系，在ＭＳ＋ＢＡ５ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ培养基上，芽诱导率为４６．６－９４％，转接到附加ＫＴ０．２ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上进行再生芽的伸长培养后，在ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ的根诱导培养基上的诱导率达９６．２％     

决明原生质体的分离与培养研究

用决明（ＣａｓｉａｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａＬ．）子叶和下胚轴为材料,游离和培养原生质体。结果表明,１５日龄无菌苗的子叶和下胚轴比较适于游离原生质体,每１ｇ材料的原生质体产量高达１．６×１０４个;ＰｅｃｔｏｌｙａｓｅＹ－２３是分离原生质体所必需的;用含２,４－Ｄ０．４ｍｇ／Ｌ（以下单位同）,ＮＡＡ１．０与ＫＴ０．１的ＫＭ８Ｐ漂浮培养利于原生质体的分裂。培养４ｄ后,原生质体开始分裂,１５ｄ后其植板率约为１９．２％,３０ｄ形成了细胞团或小愈伤组织。增殖愈伤组织在分化培养基上培养,可分化出芽。芽在生根培养基上培养１４ｄ生根,从而再生决明小植株。     

药用作物掌叶半夏组织培养及药物成份分析

药用作物掌叶半夏（ＰｉｎｅｌｌｉａｐｅｄａｔｉｓｅｃｔａＳｃｈｏｔｔ）的种子在附加２，４－Ｄ０．５－６．０ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ的ＭＳ或Ｂ５培养基上均能诱导出大量愈伤组织，但２，４－Ｄ的浓度变化对愈伤组织的形成和生长无明显影响，且无分化现象。愈伤组织生长快，分散性好，适于悬浮培养。种子在附加ＮＡＡ０．１－４．０ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上均能形成愈伤组织并分化出根和芽，随ＮＡＡ     

大蒜发芽叶培养体细胞胚发生

将大蒜发芽叶培养于ＭＳ（１／２ＮＨ４ＮＯ３＿＋２，４－Ｄ２ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ上，形成愈伤组织。愈伤组织继代后，转移到ＭＳ（ＫＮＯ３２５２５ｍｇ／Ｌ＋（ＮＨ４）２ＳＯ４１６５０ｍｇ／Ｌ，无ＮＨ４ＮＯ３）＋ＫＴ２ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ４ｍｇ／Ｌ＋Ａｄｅｎｉｎｅ２ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．０１ｍｇ／Ｌ培养基上，２５天后，形成体细胞胚并能再生植株。其中，胚状体发生的必要条件是ＮＯ３／ＮＨ＾＋４＞１，ＫＴ／     

苹果原生质体培养再生愈伤组织

以苹果试管苗叶片为原生质体分离材料,对影响原生质体分离和培养的因素进行了研究。结果表明适合叶片酶解的酶液组成是Cellulase-Onzuka R-10 0.8% + Pectinase 0.5% + PVP 1% + 甘露醇 0.65 mol/L + MES0.1%;以改良MT + BA 1.0 mg/L + 2,4-D 0.2 mg/L + 甘露醇0.65 mol/L + Vc 5.0 mg/L + Glu 500 mg/L + CH 100 mg/L + ME 500 mg/L + Arg 50 mg/L为培养基对原生质体进行培养,固液双层培养效果较好,最适培养密度为1×105 (个/ml),培养1-2 d原生质体变形,3-4 d第一次分裂,2 w分裂3-5次。平邑甜茶原生质体一个月后形成微细胞团,两个半月形成肉眼可见的微愈伤组织。鲁加5号和M7均只形成7-10个细胞的细胞团,嘎拉未见细胞分裂。     

Plant regeneration from protoplasts of Iris germanica L.

Summary Protoplasts were isolated enzymatically from suspension cultures derived from embryogenic calli induced by leaf base culture of Iris germanica. In protoplast culture, the effects of glucose concentration, different sugars and combinations of 2,4-D and KIN on protoplast division and colony formation were examined. N6 medium supplemented with 0.1–1 mg/l 2,4-D, 1 mg/l KIN, 200mg/l casein hydrolysate, 250 mg/l proline, 0.2 M glucose and 20 g/l agarose was suitable for protoplast division and colony formation. When colonies formed were transferred onto hormone-free MS medium, many plantlets were regenerated through somatic embryogenesis. Thus, we could establish a plant regeneration system from protoplasts of I. germanica.Contribution from the Laboratory of Plant Breeding, Faculty of Agriculture, Miyazaki University, Japan, No. 95.     

烟草云85叶肉原生质体培养再生植株及影响因素的研究

以烟草云85无菌苗为材料，成功地将烟草叶肉原生质体培养出再生植株。并同时就烟草叶肉原生质体的酶解条件、基本培养基及培养基中的激素组成等因素对植株再生的影响进行了研究和探索。     

棉花叶肉原生质体分离及目标基因瞬时表达体系的建立

以棉花幼嫩子叶为外植体材料,分析影响棉花叶肉原生质体分离及目标基因转化的主要因素,以棉花叶肉原生质体为受体,建立稳定、高效的目标基因瞬时表达与鉴定体系。技术体系包括,选择自然生长12 d的棉花幼嫩子叶为外植体材料,混合1.5%纤维素酶、0.4%离析酶、0.5 mol L^–1甘露醇、20 mmol L^–1 KCl、20 mmol L^–1 MES、0.1 mol L^–1 CaCl₂和1.0 g L^–1 BSA等酶液,在28℃黑暗条件下振荡酶解8 h,可游离出浓度达1.0×10⁶ m L^–1以上的纯净棉花叶肉原生质体。利用该方法将棉花锌指蛋白基因GhZFP2整合到pJIT166-GFP质粒载体,构建了GhZFP2:GFP融合载体,采用40% PEG(4000)介导转化,获得高转化率的棉花叶肉原生质体。对目标基因瞬时表达产物检测表明,GhZFP2蛋白清晰定位在细胞核上。     

洋葱愈伤原生质体分离和纯化研究

建立高效原生质体分离和植株再生体系是进行体细胞杂交的基础性工作。以洋葱多次继代的愈伤组织为研究试材,对原生质体分离纯化技术进行研究。结果表明：2.0%纤维素酶Onozuka R-10+0.1%果胶酶Y-23+0.5%离析酶 R-10+0.60 mol/L甘露醇+CPW+0.1% MES的酶液,酶解6 h,洋葱原生质体分离效果最好。纯化时,适当降低离心力的短时间离心有利于原生质体纯化过程中产量和活力的保持,以600 r/min离心5 min效果为好。     

花生原生质体分离与培养

以花生品种花育20为材料,探讨不同的酶液浓度、酶解时间及渗透压对花生原生质体分离的影响。结果表明:原生质体分离的适宜酶液配比是2%纤维素酶（Cellulase Onozuka RS）、0.2%果胶酶(Pectolyase Y-23),甘露醇渗透压调节剂的浓度为0.7 mol/L,暗处理10 h,叶片原生质体产量为4.86×105/ml,存活率75.6％,愈伤组织原生质体产量为4.97×105/ml,存活率75.4％。将分离的原生质体培养在添加1mg/LNAA和4mg/LBAP的改良MS液体培养基中。培养约2～3d后,细胞开始分裂。然后部分细胞继续分裂,并形成细胞团。培养5～6周后,将培养物转移到添加2mg/L2,4-D和3mg/LBAP的MS液体培养基（pH 5.8）中进行培养。7～8周后,将形成的直径为1～2mm的小愈伤组织转移到添加1mg/LNAA和5mg/LBAP的MS固体培养基上培养,小愈伤组织迅速生长。转移3～4周后,愈伤组织长至7～9mm。     

陆地棉原生质体培养与植株再生

以陆地棉品种“珂字２０１”为材料,比较了ＩＡＡ＋ＫＴ和２,４－Ｄ＋ＫＴ在愈伤诱导和悬浮培养中的效应,结果表明：愈伤组织诱导中,ＩＡＡ和２,４－Ｄ表现为正效应,且２,４－Ｄ的效应强于ＩＡＡ;ＫＴ表现为负效应;胚性愈人务悬浮培养中;３种激素都表现出负效应。以胚性细胞悬浮系了原生质体的分离和培养试验,分离原生质体的最佳酶组合为纤维素酶３％＋果胶酶１．５％,原生质体培养的最佳激素为ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋Ｋ     

提高马铃薯原生质体细胞分裂频率的研究

为了提高马铃薯原生质体培养时的细胞分裂频率, 对原生质体游离、 纯化, 培养过程中 的几个重要环节进行了研究。 结果表明： 以蔗糖作为渗透压调节剂游离原生质体时, 原 生质体的损伤小、 活力好、 分裂频率高、 原生质体自发融合频率低; 采用看护培养时, 在同一属内, 马铃薯物种的异同, 饲养层愈伤组织与培养细胞的     

大麦原生质体培养再生胚性愈伤组织和白化苗

从来自春大麦品种“如车”成熟胚的愈伤组织中,挑选出适于悬浮培养的松脆型胚性愈伤组织,在短期内建立胚性细胞悬浮系。此系酶解后分离出的原生质体在修改的MS培养基上能够持续分裂形成愈伤组织。将其直接转至分化培养基上获得结构紧密的胚性愈伤组织并再生白化苗.     

冬枣花药愈伤组织的诱导及原生质体分离

【研究目的】研究冬枣花药愈伤组织的诱导,悬浮系的建立和培养及愈伤悬浮系原生质体的分离。【方法】以冬枣花药为试材,通过选择愈伤诱导培养基和原生质体分离所用酶的浓度找到最佳诱导和分离条件。【结论】使用1/2MS基本培养基附加TDZ0.2mg/L、NAA0.5 mg/L和 PVP2.0g/L,对诱导冬枣花药愈伤组织有较好效果;愈伤组织增殖采用培养基1/2MS+TDZ0.4 mg/L +NAA0.2 mg/L;悬浮细胞系培养采用1/2MS+TDZ0.4 mg/L +NAA0.2mg/L液体培养基;冬枣花药愈伤组织悬浮系原生质体分离时以0.6M甘露醇+0.1%MES+20~25 g/L纤维素酶,酶解时间为16h时得到的原生质体产量和活力较高。