酯酶同功酶电泳技术检测杂交玉米种子纯度应注意的问题

<正>纯度是种子的重要质量指标,也是种子分级的主要依据,利用同功酶电泳法检测杂交玉米种子纯度,其稳定性和重演性好。室内同功酶电泳技术检测杂交玉米种子纯度,在室温的控制、药液的配置、样品的制备     

玉米单株幼芽DNA快速提取新方法

为了攻克利用DNA指纹技术进行玉米种子纯度鉴定中存在的技术难关,对玉米单株幼芽DNA快速提取方法进行了研究,结果表明：利用新方法提取DNA,不用液氮、不用研磨、不用离心、不用沉淀,不用SDS、不用CTAB、不用氯仿,并且提取的DNA不降解、完全可以满足利用SSR分子标记进行DNA指纹分析的需要。一个人提取100株幼芽(1个检测样品)DNA只需30min左右,1d可以提取2000株幼芽(20个检测样品)的。DNA,为DNA指纹技术在玉米种子纯度及真伪快速鉴定中的广泛应用解决了关键性技术难题。     

玉米种子DNA快速提取及纯度鉴定新方法

试验分别以玉米幼苗和干种子为材料，利用CTAB法对DNA提取程序进行了研究，建立了一种简单、快速的玉米DNA提取程序。该程序提取的DNA分子量大小与幼苗法相当，能够利用SSR引物进行扩增，可应用于玉米杂交种子纯度检测。     

沙门氏菌和金黄色葡萄球菌DNA提取方法的比较

采用水煮法、试剂盒法、改良CTAB法、DNA提取液法及TEX裂解液法提取沙门氏菌和金黄色葡萄球菌基因组DNA,比较5种方法提取的DNA品质,选取适用于农产品中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌多重PCR检测的DNA提取方法。结果表明,TEX裂解液法提取的DNA纯度高、操作简单、省时省力、成本低,提取的沙门氏菌基因组DNA纯度为1.88,质量浓度为412.6 ng/μL;金黄色葡萄球菌DNA纯度为1.84,质量浓度为366.7 ng/μL。以TEX裂解液法提取的基因组DNA为模板进行PCR扩增,电泳检测扩增产物有清晰的目的条带。     

基于超薄等电聚焦电泳技术的杂交水稻种子纯度鉴定

为评价超薄等电聚焦电泳技术鉴定杂交水稻种子纯度的准确性;分别利用超薄等电聚焦电泳技术和田间小区种植技术鉴定杂交水稻64S×G67F1种子纯度,比较两者的吻合程度。结果表明:用超薄等电聚焦电泳技术鉴定的种子纯度和大田种植鉴定的纯度完全吻合;说明超薄等电聚焦电泳技术鉴定杂交水稻种子纯度结果准确可靠。     

种子纯度和品种真实性鉴定中提取玉米DND方法的比较分析

本文通过比较和分析了SSR分子标记技术的三大类DNA提取方法CTAB法、SDS籽粒快速提取法、快速碱煮法，在种子纯度和品种真实性检验中的效果，发现鉴定玉米品种真实性和种子纯度最理想的DNA提取方法是CTAB小量提取DNA法，对于快速检测的理想DNA提取方法是快速碱煮法。     

一种快速提取小麦基因组DNA的改良CTAB方法

旨在寻求一种微量、快速提取小麦DNA的方法。以小麦幼叶为材料,用改良CTAB法、改良SDS法、沸水浴法提取小麦叶片总DNA,通过琼脂糖凝胶电泳法、紫外吸收法和PCR检测DNA完整性和纯度。改良CTAB法提取小麦基因组DNA质量和纯度高、无降解,每人每天可以轻松提取200个DNA样品,对转基因植株的PCR检测显示扩增目标条带清晰一致,无假阳性,试验结果理想。改良SDS法所提DNA纯度和浓度虽略不如改良CTAB法,但仍然符合实验要求。沸水浴法提取量少且杂质多,PCR无有效扩增,结果不理想。改良CTAB法提供了一种简便、快速微量小麦DNA提取方法,适用于PCR和其他分子生物学研究。     

黄山木兰叶片基因组DNA提取方法的比较研究

以珍贵渐危植物黄山木兰的嫩叶为材料,利用改良CTAB法、SDS法、高盐低p H法和Bio Teke试剂盒法提取基因组DNA,通过超微量紫外分光光度计检测、琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶消化和EST-SSR引物扩增法系统地检测DNA的质量及得率。结果表明,在DNA纯度和得率方面,改良CTAB法提取的DNA结果最佳,Bio Teke试剂盒法提取的DNA纯度较好但得率较低,SDS法和高盐低p H法提取的DNA有明显的蛋白质杂质、多糖及其他次生代谢物和RNA的污染;酶切消化结果中改良CTAB法和Bio Teke试剂盒法表现良好;EST-SSR引物扩增结果中唯有改良CTAB法提取的DNA扩增目的基因条带数目最多且清晰。综合分析,改良CTAB法是最适合黄山木兰叶片基因组DNA提取的方法。     

三种从马血中提取基因组DNA方法的比较研究

选择一种快速、简便、经济的从马血液中提取基因组DNA的方法。分别采用了常规酚—氯仿抽提法、简易酚—氯仿快速抽提法和V—gene Biotechnology Limited试剂盒三种方法从马血中提取DNA,并利用琼脂糖凝胶电泳技术和紫外分光光度计,比较各方法提出DNA的浓度和纯度,且利用PCR扩增技术检测DNA的实用性。结果表明,常规酚—氯仿抽提法适合从马血中大量提取DNA。     

杂交玉米鲁原单14号及其亲本自交系种子的真实性鉴定和纯度测定技术的研究

鲁原单14号是我省的主要玉米品种之一,用常规的蛋白质电泳技术检测纯度时因其杂交种电泳图谱为偏母本型,不易鉴定.而采用改进的酯酶同工酶电泳技术则可有效的进行鉴别,经田间种植符合度实验,证明该技术不仅准确度高而且检验周期短,是室内检验的可靠方法.     

胡萝卜肉质根线粒体DNA提取方法研究

本研究以胡萝卜根为材料,通过高盐差速离心和蔗糖沉淀差速离心两种方法提取线粒体DNA。通过改变缓冲液、使用DNaseⅠ处理得到了无核DNA污染的线粒体。用SDS和蛋白酶K裂解线粒体,经酚:氯仿:异戊醇抽提除去蛋白,并用RNaseA消化从而得到单纯线粒体DNA。本实验还特别设计了叶绿体特异性引物检测线粒体DNA纯度。结果表明:利用优化后的蔗糖沉淀差速离心法提取胡萝卜线粒体DNA,所得线粒体DNA纯度高、产量高,每克肉质根能够得到27.60μg线粒体DNA。     

转基因玉米深加工产品中DNA提取方法的研究

对转基因玉米深加工产品中DNA的提取技术进行了研究。首先,通过经典CTAB法、CTAB初步改良法、CTAB有效改良法和煮沸法等4种方法提取了玉米片和爆米花中的DNA;其次,用琼脂糖电泳检测法将DNA进行了分离;再次,用紫外可见分光光度法检测出4种方法提取的DNA的纯度。结果表明,4种方法中的CTAB有效改良法提取DNA的完整性、纯度更好。     

板栗基因组DNA不同提取方法的比较

板栗组织中富含多酚类、糖类以及单宁类等次生代谢物质,因而难以提取比较高质量的DNA分子。本实验利用三种不同提取方法,分别是改良CTAB法、CTAB-乙醚萃取法、简易法提取板栗不同部位的基因组DNA。纯化的DNA分别经过核酸蛋白分析仪、电泳以及PCR技术检测,表明改良CTAB法和CTAB-乙醚萃取法都适用于板栗嫩叶、成熟叶片及韧皮部组织DNA的提取,提取的DNA纯度较为理想,能够满足后续分子生物学的要求。     

巴西橡胶树红根病菌DNA提取有效方法比较

旨在筛选适用于橡胶树红根病菌DNA提取的有效方法并评价其效果。利用CTAB改良法、氯化苄改良法、SDS改良法等3种方法提取橡胶树红根病菌菌丝体DNA,并通过紫外吸收光谱和琼脂糖凝胶电泳对DNA样品进行检测,比较提取DNA的产量、质量;再选用提取效果最好的方法提取5个时间段（4、6、8、10、12天）的菌丝DNA并进行ITS-PCR检测。CTAB改良法提取的样品DNA纯度最好,产率最高,OD260/OD280为1.82~1.84,浓度可达280 μg/mL;培养4~6天的菌丝提取的DNA质量最高,适合PCR检测需要。CTAB改良法是一种适用于橡胶树红根病菌DNA提取的理想方法。     

一种主要果菜类蔬菜杂种纯度检测的DNA快速提取方法

本研究提出一种快速提取番茄、茄子、黄瓜DNA的新方法,旨在解决常规蔬菜进行杂种纯度检测时提取DNA特别耗时费力这一难点。实验结果表明,用该方法提取DNA,操作简单、快速、高效、耗费低,不使用高毒试剂,对操作者身体危害很小。同时,电泳检测结果也表明,该方法获得的DNA的质量完全能满足PCR反应的需求,用该种方法获得的DNA可以用于主要果菜类蔬菜杂种纯度检测工作,并且以此可以大大提高主要果菜类蔬菜种子杂种纯度检测工作的效率。     

胡萝卜叶片线粒体DNA提取方法研究

本实验以胡萝卜叶片为材料,通过高盐差速离心和蔗糖沉淀差速离心两种方法提取线粒体DNA。通过改变分离和沉淀线粒体离心力大小、使用DNaseⅠ处理得到了无核DNA污染的线粒体。用SDS和蛋白酶K 裂解线粒体,经酚/氯仿/异戊醇抽提除去蛋白,并用RNase A 消化从而得到单纯线粒体DNA。本实验还特别设计了叶绿体特异性引物检测线粒体DNA纯度。结果表明：利用优化后的蔗糖沉淀差速离心法提取胡萝卜线粒体DNA,不仅操作简单,而且所得线粒体DNA纯度高、产量高,每克叶片能够得到34.46 μg 线粒体DNA。     

酯酶同工酶等电聚焦电泳在玉米姊妹系杂交种纯度鉴定中的应用

酯酶同工酶等电聚焦电泳技术1999年引入我县种子公司化验室,并应用于玉米单交种和姊妹系杂交种的纯度检测中.经过3年的室内玉米品种纯度鉴定和田间小区种植鉴定对比,证明该方法不但在单交种纯度鉴定上与其他电泳方法具有同样的技术效果,而且在农大3138、唐抗5、承8453等姊妹系玉米杂交种纯度检测上具有独特的技术优势.室内检测鉴定结果较田间小区种植鉴定结果偏低0.9%～2.1%,用 y=4.26+0.963 4X回归方程推算,其结果与田间小区种植鉴定结果相近似.     

金龟甲基因组DNA提取方法比较研究

摘 要：为了筛选适宜金龟甲RAPD-PCR的基因组DNA提取方法,于2009年在青岛农业大学实验室内,分别采用改良的SDS法、平衡酚法、裂解液法和CTAB法提取棕色鳃金龟(Holotrichia titanis Reitter)的基因组DNA,通过DNA沉淀性状观察、产量和质量分析,以及随机引物PCR (RAPD-PCR)比较,筛选最优的金龟甲基因组DNA提取方法。研究结果表明,改良的SDS法提取的基因组DNA产量较高,但纯度较低,并且降解严重,RAPD-PCR扩增谱带弥散较严重;裂解液法提取的基因组DNA纯度较高,降解程度较低,但产量最低,RAPD-PCR扩增谱带弥散较严重,并且存在非特异扩增现象;CTAB法提取的基因组DNA不仅产量和纯度较低,降解严重,而且RAPD-PCR扩增结果不稳定,具非特异扩增现象;平衡酚法提取的基因组DNA产量和纯度高,降解轻微,RAPD-PCR扩增结果稳定,扩增谱带弥散轻微。因此,在上述4种方法中,平衡酚法是最适合PAPD-PCR的金龟甲基因组DNA提取方法,裂解液法和改良的SDS法次之,CTAB法最差。     

水溶蛋白电泳鉴定杂交油葵种子纯度的研究

通过对杂交油葵种子水溶蛋白的研究，建立一种常规电泳技术对杂交油葵种子纯度进行鉴定。该技术具有以下特点：①蛋白提取用整粒种子粉碎，不需脱脂，样品提取时间短；②电泳技术选用国内生产的仪器和试剂，成本低廉，操作简单、快速；③不同杂交油葵品种水溶蛋白谱带表现丰富的多态性；④参试材料鉴定率为100％；⑤此电泳技术适用于检测任务重、所需时间紧的种子企业检验室开展工作。     

两系杂交水稻品种真实性和种子纯度的检测方法及评价

分别利用超薄等电聚焦电泳技术和田间小区种植技术鉴定杂交水稻种子纯度,比较两者的成本、速度和吻合程度。结果表明,用超薄等电聚焦电泳技术鉴定的种子纯度和大田种植鉴定的纯度完全吻合,而成本更低,速度更快,值得推广应用。