利用SSR荧光标记鉴定玉米杂交种纯度的研究

玉米种子作为我国种业的主导产品,种子质量直接影响着玉米生产的产量和质量。为有效开展玉米种子纯度鉴定研究,选用甘肃推广的5份玉米杂交种,采用15个单株混合取样提取DNA的方法,用4种荧光标记的20对SSR核心引物,筛选出了7对引物,分别为bnlg439w1、umc1705w1、umc2007y4、umc1506k12、bnlg2291k4、phi080k15、umc2015k3。纯度鉴定研究结果在96.88%~98.44%之间,达到了国家规定的96%的玉米杂交种纯度标准。为快速鉴定玉米杂交种纯度提供了参考,为逐步完善玉米纯度鉴定方法奠定了基础。     

利用SSR分子标记鉴定玉米杂交种‘吉祥1号’纯度

纯度是种子质量的重要指标。‘吉祥1号’玉米杂交种是在甘肃省选育并大面积栽培的主推玉米品种。为鉴定该品种的纯度,本研究开展了‘吉祥1号’纯度鉴定SSR标记方法研究。通过比较快速提取法和改良CTAB法2种DNA提取方法在SSR分子标记纯度鉴定中的应用,结果表明:2种方法提取的DNA均适用于SSR分子标记纯度检测,但快速提取法具有简单、快速的特点,更适用于分子标记纯度鉴定。从20对SSR引物中筛选出2个标记bnlg2291k4和bnlg2305k4,用于‘吉祥1号’品种的纯度鉴定,2个标记均能明显的区分亲本和杂交种。在‘吉祥1号’杂交种中人为混入双亲,采用本研究确定的方法可准确鉴定出混入的自交系。     

玉米杂交种新科891及其亲本SSR指纹图谱的构建

利用SSR分子标记技术,构建杂交种新科891及其亲本的指纹图谱。结果表明:从56对均匀分布在玉米10条染色体上的SSR引物中筛选出7对条带清晰、多态性及重复性好的引物,分别是:bnlg439w1、umc2007y4、umc2015k3、bnlg2291k4、umc1705w1、bnlg1702k1以及phi0801k15。这7对引物共检测出23个等位基因,每对引物可以检测到2～4个,平均3.29个。将这7对引物扩增的杂交种新科891及其亲本的条带数字化,计算出现与其相同数字指纹图谱的概率均为1.19×10-7,概率极低,所构建的指纹图谱是特有的,因此,用这7对引物鉴定杂交种新科891的真实性和纯度是可行的、结果是可信的。     

利用SSR标记技术鉴定玉米品种真实性的研究

从20对SSR基本引物中筛选出核心引物,并对辽宁省主推玉米品种进行真实性研究。利用SSR标记技术,选取均匀覆盖玉米染色体组的20对SSR引物对玉米品种进行PCR扩增分析。依据带型清晰与否、稳定性等筛选出14对核心引物用于辽宁省主推玉米品种的真实性鉴定,其中以引物bnlg161k8的多态性最好,且仅采用bnlg161k8、bnlg2305k4及umc1705w1三对引物即可以对实验中所选玉米品种进行真实性鉴定。bnlg161k8、bnlg2305k4及umc1705w1这三对引物可作为玉米品种真实性鉴定的首选引物,既节约成本,又提高效率。     

SSR标记对宁单11种子纯度的鉴定

采用SSR分子标记方法,选用24对引物,以杂交玉米宁单11杂交种子及其父母本为实验材料,对宁单11种子纯度进行鉴定。通过带型分析,筛选出在杂交种中呈现清晰且双亲互补带型的特异性引物,并依据特异性引物的筛选标记结果对抽样批次的宁单11种子样本进行纯度鉴定。结果表明:phi034、phi080、umc1638、bnlg439、bnlg1792五对SSR引物可用于玉米杂交种宁单11种子纯度鉴定。     

利用芯片毛细管电泳检测技术鉴定玉米种子纯度的研究

选用玉米杂交种先玉335、郑单958及其亲本自交系PH6WC、PH4CV、郑58和昌7-2作为试验材料,采用SSR检测技术结合芯片毛细管电泳检测技术,筛选出适用于鉴定先玉335和郑单958种子纯度的特异引物umc2105、bnlg2291、bnlg161。     

玉米杂交种北青340及亲本指纹图谱构建

为构建玉米杂交种北青340及其亲本的指纹图谱,以40对玉米核心引物,通过SSR分子标记技术对北青340进行分析,从中筛选出7对条带清晰、重复性好的引物(umc 1147 y 4、bnlg 1671 y 17、umc 1999 y 3、phi 299852 y 2、umc 1936 k 4、umc 2163 w 3、bn...     

6个玉米杂交种种子纯度的SSR鉴定

玉米杂交种纯度是影响玉米产业发展的重要因素之一,建立快速、准确可靠的纯度检测技术是控制杂交种纯度的有效措施。从30对SSR引物中筛选出6对表现为双亲互补型的引物,建立了6份杂交种纯度鉴定的SSR体系。Umc1002、bnlg1112、bnlg238、Umc1153、phi072、bnlg240可分别用于玉米杂交种农大108、浚单20、郑单958、莱农14、莱农15和鲁玉16的纯度检测。双亲互补型等位变异基因频率在0.028～0.072之间,可较准确地检出样品中的自交株和大部分异型株。SSR鉴定玉米杂交种纯度结果略低于幼苗鉴定,但二者差异不显著,相关系数为r=0.8434。本试验建立的SSR技术体系可用于6个玉米杂交种纯度的快速检测。     

玉米杂交种泛玉398及其亲本指纹图谱构建

为构建玉米杂交种泛玉398及其亲本的指纹图谱，利用40对玉米核心引物，通过简单序列重复长度多态性(SSR)分子标记技术进行分析。结果表明，筛选出6对亲本条带互补、清晰稳定的引物，分别是bnlg439w1、umc2015k3、umc1705w1、bnlg291k4、umc1147y4、bnlg1671y17，并将所构建指纹图谱数字化，分别用“0”和“1”表示，计算得到出现相同指纹图谱的概率为5.96×10^-8。这6对引物所构建指纹图谱可以用于玉米杂交种泛玉398及其亲本的真实性鉴定。     

西瓜新品种‘抗病948’和‘申抗988’杂交种纯度及其遗传特异性的SSR标记鉴定

本研究以西瓜杂交新品种‘抗病948’和‘申抗988’及其亲本种质为试验材料,采用SSR分子标记检测技术对其种子纯度及遗传特异性进行了鉴定研究。从38对SSR引物中筛选得到2对特异性引物(引物BVWS00209和BVWS00233)可以鉴定出‘抗病948’和‘申抗988’杂交种的纯度,结果表明:‘抗病948’与‘申抗988’的种子纯度分别为97%和98%。SSR标记鉴定结果与‘抗病948’和‘申抗988’的大田植物学形态特征鉴定结果符合率高达99%以上,并通过分析比较各亲本种质的SSR引物的多态性表现,构建出‘抗病948’和‘申抗988’亲本的DNA指纹图谱。本研究可为开展‘抗病948’和‘申抗988’西瓜新品种的杂交种纯度室内快速检测提供技术支撑。     

一个新的抗玉米矮花叶病基因的发现及初步定位

由SCMV引起的矮花叶病是我国的主要玉米病害之一, 鉴定和发掘新的抗病基因对于玉米抗病遗传育种具有重要意义。以抗病自交系海9-21和感病自交系掖478杂交的一个BC₂F₃群体为试验材料, 通过人工接种矮花叶病毒进行抗病性鉴定, 发现该分离群体中抗病植株与感病植株数符合1∶3的分离比例, 推测其抗病基因是由1对隐性基因控制。抗感池和SSR标记连锁分析表明, 存在一个新的玉米矮花叶病隐性抗病基因(或等位基因), 将该基因命名为scm3。scm3基因来源于抗病玉米自交系海9-21, 位于第3染色体短臂3.04~3.05区域, 在SSR标记umc1965和bnlg420之间, 遗传距离分别为45.7 cM和6.5 cM。连锁的标记还有umc1307、umc2265、bnlg2241和umc2166, 它们与scm3之间的遗传距离分别是8.3、13.3、15.5和19.7 cM, 这些SSR标记与scm3基因在染色体上的排列顺序为umc1965—scm3—bnlg420—umc1307—umc2265—bnlg2241—umc2166。     

基于SSR标记的5个西瓜新品种纯度鉴定及特异性分析的研究

为建立西瓜杂交种品种纯度的快速、准确、高效鉴定体系,利用SSR分子标记,对5个西瓜新品种纯度进行鉴定,并构建亲本的分子指纹图谱。以上海市农业科学院育成的5个西瓜新品种‘申选958’、‘双色冰淇淋’、‘黄晶’、‘圣女红2号’与‘圣女红3号’及其亲本的种子为试材,采用CTAB法从发芽种子的根尖中提取DNA。根据杂交种带型双亲互补的原则,利用SSR标记进行杂交种纯度及特异性鉴定研究。从28对SSR核心引物中筛选出5对特异性引物(引物BVWS00106、BVWS00209、BVWS0036、BVWS01734、BVWS00826),鉴定到这5个新品种的杂交种纯度均达到98%,并与各品种的大田植物学形态特征鉴定结果相比较,符合率高达98%以上。分析比较各亲本材料的SSR引物的多态性表现,构建了9份亲本材料的DNA指纹图谱。研究为西瓜杂交品种纯度快速检测和品种权保护提供了理论依据与技术支撑。     

应用SSR标记鉴定甜瓜新品种纯度与真实性研究

本研究以甜瓜杂交新品种‘西州密25号’和‘西州密17号’及其亲本种质为试验材料,利用SSR(simple sequence repeats)分子标记检测技术,并结合大田传统鉴定方法对其种子纯度及真实性进行了分析研究。结果表明,从18对SSR引物中筛选得到多对特异性引物可以鉴定出‘西州密25号’与‘西州密17号’杂交种的纯度。‘西州密25号’三批种子纯度分别为98.42%、99.41%、99.38%;‘西州密17号’的种子纯度为99.22%。SSR分子标记鉴定结果与‘西州密25号’和‘西州密17号’的大田植物学形态特征鉴定结果符合率高达99%以上。SSR分子标记方法可以准确鉴定出杂交种纯度及真实性,且大大缩短鉴定周期,可为开展‘西州密25号’和‘西州密17号’甜瓜新品种的杂交种纯度室内鉴定快速检测提供技术支撑。     

甘蓝型油菜 ‘西农18’ 种子纯度的SSR鉴定

为了建立有效的SSR分子标记方法鉴定甘蓝型油菜‘西农18’品种纯度,以提高‘西农18’大田制种纯度提供分子辅助工具.以甘蓝型油菜杂交种‘西农18’及其父母本为材料,利用SSR分子标记方法对材料进行差异性分析.结果表明,在200对SSR引物中,发现引物BRAS023在杂交种和父母本之间存在显著差异且条带清晰可辨,差异性以杂交种带有父母本的特异带型存在.利用该引物对150株杂交种进行纯度鉴定,结果为86%,与大田杂交种纯度鉴定结果89%相比,SSR标记与大田种植鉴定结果基本一致.这个结果证明,引物BRAS023可用于‘西农18’的纯度鉴定.     

SSR标记对甜瓜杂交种‘玉贵人’纯度的鉴定

为了精准快速地筛选出鉴定甜瓜杂交种纯度的SSR引物,本研究利用18对甜瓜SSR核心引物对甜瓜杂交种‘玉贵人’及其亲本进行引物筛选和种子纯度鉴定。结果筛选出2对引物(CmS57和CmS59)在子代中兼具双亲条带并且在亲本间具有多态性,且条带清晰,间隔明显,并利用这2对引物在杂交群体中进行验证,纯度鉴定结果为97.8%和100.0%;SSR分子标记的鉴定结果与田间调查结果的误差为1.1%。表明本研究筛选出的引物CmS57和CmS59能够作为特异引物对甜瓜杂交种‘玉贵人’进行种子纯度检测,也说明应用SSR分子标记技术对甜瓜种子的纯度鉴定是可行的。     

利用SSR标记鉴定杂交粳稻‘花优14’种子纯度

本研究以杂交粳稻‘花优14’及其亲本为材料,利用SSR分子标记技术,对其多态性进行了引物筛选和种子纯度鉴定研究。从48对广泛分布在水稻12条染色体上的候选SSR分子标记中,筛选得到6对引物,在‘花优14’和其双亲之间表现为稳定的共显性且能将杂交种及其亲本完全区分,利用这些引物对‘花优14’种子进行分子纯度鉴定,并将鉴定结果与田间小区种植纯度鉴定结果相比较,结果显示两者鉴定结果基本一致。因此,最终确定了多态性位点最多且特异性差异最显著的RM274和RM1195标记组合作为核心引物,建立了一套更为快速、有效地鉴定杂交粳稻‘花优14’种子纯度的技术方法。     

白菜类蔬菜种子纯度SSR分子标记鉴定

种子纯度是种子质量的核心指标,是保障优良品种增产的关键因素。为了鉴定白菜种子纯度,本研究利用72对SSR分子标记检测种子纯度并结合田间植株形态观察,鉴定了5个白菜类优势品种的种子纯度,分别是‘珍绿6号’‘、津夏3号’‘、津研快绿1号’‘、速俊228’‘、速俊316’。结果表明,从72对SSR引物中筛选出5对具有多态性的引物,能够将父母本与杂交种区分开。试验中SSR分子鉴定结果虽略低于田间形态学鉴定结果,但利用统计学进行显著性分析,发现两者间无显著性差异。说明SSR分子标记可以用于白菜种子纯度的鉴定并通过本研究建立了一套准确、有效的品种纯度鉴定体系。     

应用DNA速提法和SSR标记技术高效鉴定甜瓜种子纯度

为建立甜瓜杂交种纯度快速鉴定的方法,以杂交新品种‘川蜜脆玉’及其亲本为试验材料,利用改良的胚根DNA速提法和SSR (Simple sequence repeats)分子标记技术检测种子纯度及真实性,并结合大田的形态学鉴定结果进行验证。结果表明,在18对SSR引物中,有7对引物在‘川蜜脆玉’F1代及父母本中呈现多态性。其中SSR00398与MU4104-1引物特异性好、条带清晰、父母本条带间隔明显,作为纯度鉴定的引物,鉴定纯度为98.1%,与田间鉴定结合符合率在99%以上,说明这2对引物能够作为‘川蜜脆玉’杂交种纯度鉴定的特异引物进行纯度检测。新方法的建立大大缩短了甜瓜杂交种的鉴定周期,提高鉴定效率,为甜瓜新品种的杂交种快速鉴定提供重要技术支撑。     

冬瓜杂种种子纯度鉴定的SSR分析

种子纯度是种子质量的核心指标,目前冬瓜、节瓜杂种优势已被广泛地应用于生产。探索出一种快速、准确的冬瓜、节瓜品种纯度鉴定方法是确保种子质量的技术保证,也是品种纯度检测实现商业化的前提。本研究以‘绿优’冬瓜和‘梅花8号’节瓜及其各自亲本为试验材料,利用SSR分子标记技术对亲本及杂种之间的多态性进行分析。结果显示,从200对SSR引物中筛选出2对多态性引物scaffold4775和scaffold5674,用于‘绿优’冬瓜和‘梅花8号’节瓜杂种种子纯度的鉴定。其扩增片段电泳条带清晰可辨,杂交种中呈现双亲的互补带型,SSR标记表现出稳定的显性和共显性,能将‘绿优’冬瓜和‘梅花8号’节瓜与其父母本区分开来。分子检测平均纯度均为98%,田间纯度鉴定分别为98%和99%,结果基本一致,表明引物scaffold4775和scaffold5674可用于‘绿优’冬瓜和‘梅花8号’节瓜的纯度鉴定。SSR分子标记呈现出经济快速、准确等特点,在冬瓜、节瓜品种纯度鉴定上其应用前景十分广泛。     

黄瓜‘浙秀1号’种子纯度的SSR鉴定

种子纯度在种子生产中的重要性日益提升,分子标记技术因其具有高效、稳定、可靠等优点越来越多地被应用到种子纯度鉴定中。本研究利用SSR分子标记技术对黄瓜杂交品系‘浙秀1号’及其两亲本之间的多态性进行了引物筛选和种子纯度鉴定研究。结果表明,在699对供选SSR引物中,有3对引物分别在‘浙秀1号’杂交种和其双亲之间表现为稳定的共显性,杂交种带型为双亲的互补带型,适合于杂交种纯度鉴定。经田间试验验证,引物稳定性良好,且与田间鉴定结果非常接近,可用于‘浙秀1号’杂交种种子纯度的鉴定,显示出SSR标记技术在黄瓜杂交种子纯度的室内快速检测中有广泛应用前景。