甜瓜松散型胚性愈伤组织诱导

为建立甜瓜松散胚性愈伤组织再生体系，给分子标记辅助育种、转基因育种、诱变育种等新型的育种技术提供优质材料，以甜瓜成熟叶片为外植体，调节培养基中激素、蔗糖浓度以及愈伤组织继代次数诱导甜瓜松散型胚性愈伤组织。结果表明，在2,4-D的作用下叶片能诱导出愈伤组织，在MS+0.1 mg/L 6-BA+2.0 mg/L 2,4-D+20 g/L蔗糖的培养基上，可以获得结构松散、质地较软呈黄绿色的愈伤组织；诱导松散型愈伤组织最佳培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D+30 g/L蔗糖，经过3次继代后可以获得生长速度较快，结构松散、质地较硬呈黄绿色的松散型愈伤组织；在MS+0.25 mg/L 6-BA+0.25 mg/L 2,4-D+40 g/L蔗糖的培养基上愈伤组织胚性化最好，继代5次，可获得结构松散、质地较硬，生长速度较快的松散型胚性愈伤组织。     

杜仲愈伤组织诱导及胚性愈伤组织的判别

为探索杜仲胚性愈伤组织诱导的条件,建立杜仲体细胞胚胎发生初步体系,以杜仲幼嫩叶片和未成熟合子胚为外植体、MS为基本培养基,探究外源激素配比、未成熟合子胚发育阶段与基因型对愈伤组织诱导的影响,并从形态学和细胞学对愈伤组织进行胚性的判断。试验结果表明：4种不同激素配比的培养基诱导出的叶片愈伤组织在形态上具有差异,MS+ 2,4-D 2 mg/L+ 6-BA 1 mg/L和MS+ 2,4-D 2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L有利于叶片胚性愈伤组织诱导;在培养基MS+ 2,4-D 2 mg/L+ 6-BA 1 mg/L上,以未成熟合子胚为外植体诱导出4种类型愈伤组织,其中圆球形和颗粒型突起的愈伤组织具有胚性;未成熟合子胚采集时间对愈伤组织诱导率具有显著差异,6月14日采集的外植体愈伤诱导率最高,不同基因型差异不显著。     

糯玉米的成熟胚培养

以糯玉米成熟胚为外植体作离体培养,研究在培养基中添加植物激素,硝酸银及有机物等对玉米愈伤组织的诱导和胚性愈伤继代生长的影响。结果表明：在诱导培养阶段,N6+6-BA 0.2mg/L+2,4-D 2mg/L的培养基诱导率最高,愈伤质量好;在继代培养阶段,MS+6-BA 0.2mg/L+2,4-D 2mg/L +AgNO310mg/L或CW (Coconut Water) 10%的培养基可改善胚性愈伤的质量。     

火龙果花药培养诱导胚性愈伤组织及遗传稳定性

成年态火龙果茎段诱导的愈伤组织再分化较困难,进而影响到遗传转化效率。以红皮紫红肉的"紫红龙"火龙果花药为外植体,研究了小孢子不同发育时期、低温预处理时间、不同植物生长调节剂及浓度配比对花药诱导胚性愈伤组织的影响。结果表明,小孢子发育处于单核初期至单核靠边期的花药,其愈伤组织诱导率最高可达23.9%,但未能诱导出胚状体;而4℃低温预处理48 h,愈伤组织的诱导率可达32.8%;最适花药愈伤组织诱导的培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D+60 g/L蔗糖,诱导率为37.4%,胚性愈伤组织为黄绿色、致密状,外表有颗粒状突起。愈伤组织增殖培养基以MS+0.4 mg/L TDZ+0.8 mg/L KT效果较好,增殖系数达9.1倍以上。愈伤组织再分化培养基为MS+0.4 mg/L TDZ+0.5 mg/L 2,4-D+0.6 mg/L NAA时,愈伤组织再分化率达36.7%。通过火龙果花药诱导出愈伤组织,增殖获得大量胚性愈伤组织,再分化形成不定芽,经SRAP分子标记检测遗传性一致,能为火龙果基因工程育种和种苗快速繁育提供新的途径。     

豆瓣绿胚性愈伤悬浮培养条件优化及体细胞胚发生

本研究以豆瓣绿无菌苗叶片为外植体诱导获得质地疏松、稳定性高的颗粒状胚性愈伤组织,开展胚性细胞悬浮培养研究。结果表明:豆瓣绿胚性愈伤组织最适继代培养基为MS+0.6%琼脂+3%蔗糖+2,4 D1.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,继代间隔14 d;体细胞悬浮最佳培养基为MS+3%蔗糖+NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,继代间隔7 d;体细胞悬浮最佳碳源为蔗糖,蔗糖最佳浓度为30 g/L;体细胞悬浮摇床最佳转速为110 r/min。本研究考察激素种类、激素浓度、碳源种类、糖浓度、摇床转速对体细胞胚悬浮体系的影响,并采用解剖镜进行形态学观察,为后期研究体细胞胚胎形态结构提供基础数据。     

荚用菜豆松散型胚性愈伤组织保持体系的诱导方法

本研究旨在为诱导再生成苗提供基础材料,为进一步开展荚用菜豆育种相关研究奠定基础。以荚用菜豆无性细胞（茎、叶、子叶等器官）为试验材料,通过筛选植物激素及其最佳组合,获得了以细胞质浓密的圆球形细胞为主体的松散型愈伤组织细胞团。最终筛选出诱导无性细胞产生普通愈伤组织的“诱导培养基Ⅰ号”：MS +2,4-D 1 mg/L+蔗糖30 g/L。进一步研究获得了“诱导培养基Ⅱ号”：MS + 6-BA 0.25 mg/L + 2,4-D 0.5 mg/L+ AgNO₃ 10 mg/L。此培养基可以诱导和保持松散型胚性愈伤组织。本研究筛选出可以将无性细胞诱导为松散型胚性细胞团,并且维持胚性细胞继续增殖的系列培养基,解决了诱导过程中愈伤组织褐化问题,创建了一套诱导荚用菜豆松散型胚性愈伤组织的新方法。     

西部沙樱枝条愈伤组织诱导、增殖及分化培养

以西部沙樱一年生枝条为材料,研究不同激素配比条件下外植体愈伤组织的诱导、增殖及分化诱导。结果表明:西部沙樱茎段在2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+3%蔗糖+0.6%琼脂(pH 5.75)的MS培养基上可诱导出愈伤组织;愈伤组织增殖的最佳培养基为MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+3%蔗糖+0.6%琼脂(pH 5.75);愈伤组织分化的最佳培养基为MS+NAA 0.3 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+3%蔗糖+0.6%琼脂(pH 5.75),经分化可获得无性系芽,继而产生丛生苗。西部沙樱愈伤诱导及分化的成功为西部沙樱资源的保护、开发和利用提供了理论依据和技术保障。     

不同外源激素对油棕愈伤组织诱导的影响

以油棕幼胚为外植体,以N6培养基上添加不同浓度的生长素与细胞分裂素进行愈伤组织诱导研究。结果表明,无激素的培养基上不能诱导出愈伤组织,单独加入2,4-D、IAAIBA、6-BA中N6+2,4-D110mg/L的浓度愈伤组织形成率最高,为83.75%,诱导过程中褐化现象少。N6+2,4-D110mg/L+PVP5g/L+蔗糖6%+AC0.3%培养基促进愈伤组织的诱导和生长,适合进一步继代培养。     

紫花苜蓿愈伤组织诱导和分化研究

以紫花苜蓿SANDITI无菌苗下胚轴、茎、叶3种不同外植体,在附加不同激素浓度的MS培养基上诱导愈伤组织。结果表明,SANDIT最佳外植体为下胚轴,最佳下胚轴愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5mg/L。15 d继代1次,或适当降低2,4-D浓度,提高6-BA或KT浓度,可以降低愈伤组织褐化率。愈伤组织在6-BA0.5 mg/L,NAA 0.1 mg/L,GA31.0 mg/L,YE 250 mg/L,CH 250 mg/L的MS培养基上,可获得较高的分化率。     

不同诱导条件对尾巨桉愈伤组织及体胚诱导的影响

本研究以尾巨桉无性系(32-29)无菌苗茎段作为外植体,进行组织培养及植株再生研究,通过优化不同浓度的植物生长调节剂组合以及LM、1/2LM以及MS不同培养基和不同浓度蔗糖溶液、不同温度的预处理,探讨尾巨桉胚性愈伤组织诱导的适宜培养基和培养条件。结果表明,在添加了1.5 mg/L 2,4-D与1.0 mg/L6-BA的改良1/2LM培养基上,茎段外植体培养6 d后愈伤组织诱导率达96%以上。将愈伤组织接种在0.01 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA激素组合的培养基中体胚诱导率最高可达到19.5%。本研究为尾巨桉胚状体诱导及植株再生提供了借鉴与参考。     

宁夏主栽水稻品种高频再生体系的建立

通过对宁夏多个主栽水稻品种愈伤组织的培养,结果表明,诱导水稻愈伤组织的最适培养基是:N6+2mg/L 2,4-D+0.5/L水解酪蛋白+0.5g/L L-脯氨酸+8g/L琼脂+30g/L蔗糖;水稻愈伤组织最适分化培养基是:MS+2mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA;水稻的最适生根培养基为:MS+0.5mg/L NAA.筛选出了诱导愈伤组织和愈伤组织分化的最适激素浓度配比和最适分化条件.     

珍稀濒危植物银鹊树胚性细胞悬浮系的建立和植株再生

以银鹊树未成熟种子为试材,对银鹊树胚性愈伤组织诱导和胚性细胞悬浮培养的最佳培养条件进行研究,初步建立了银鹊树胚性细胞悬浮系与植株再生体系。将银鹊树未成熟种子子叶胚接种在添加1.0 mg/L 2,4-D、0.5 g/L活性炭的MS基本培养基上,诱导胚性愈伤组织。将诱导得到的胚性愈伤组织置于添加0.2 mg/L 6-BA、0.05 mg/L NAA和3 g/L蔗糖的MS液体培养基上振荡培养,由此建立了增殖速度快、分散程度好、稳定性较强的胚性细胞悬浮体系。将悬浮培养获得的子叶胚转到不含任何植物生长调节物质的MS固体培养基中,可以长成正常植株。     

高羊茅高效组织培养再生体系的建立

植物分子育种与基因功能鉴定是建立在高效的组织培养再生体系基础上的。本研究以高羊茅(Festuca arundinacea Schreb)为材料,探讨了不同外植体状态、基本培养基类型、外源激素组合与固化剂种类与浓度对愈伤组织诱导的影响,并进行了愈伤组织分化长芽与生根研究。结果表明:愈伤组织诱导过程中,离体成熟胚比完整种子作外植体愈伤组织出现早、质量优、诱导率高;基本培养基的选择上以N6诱导率最高,MS最低;激素组合研究中高羊茅三个品种(SAFari, FirewarⅡ, Barleduc)在无6-BA培养基中,生长激素选择上都是2,4-D优于IAA,2~2.5 mg/L 2,4-D在三个品种中诱导率都在50%以上,而在添加0.5 mg/L 6-BA时诱导率都偏低;固化剂选择上则以Phytagel与Agarose二都最优,Phytagel固化剂最佳诱导浓度为2~4 g/L。分化长芽最佳培养基为MS+0.1 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+20 mg/L AgNO3+2%蔗糖+0.6%琼脂,生根壮苗最佳培养基为1/2MS+0.5 mg/L NAA+3%蔗糖+0.3%Phytagel。本研究为高羊茅的高效转基因体系建立与CRISPR基因功能研究提供准备。     

通过多种培养基优化长白落叶松体细胞胚再生

为建立稳定高效的落叶松体细胞胚再生体系,本研究以长白落叶松未成熟合子胚作为外植体材料,选择生长良好的胚性愈伤组织,依次通过液体培养基A,半固体培养基B,固体培养基C三种成熟培养基诱导体细胞胚形成。其中,愈伤诱导培养基为S培养基+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+KT 0.3 mg/L,蔗糖20 g/L,琼脂3 g/L;继代培养基为S培养基+2,4-D 0.15 mg/L+6-BA 0.05 mg/L+KT 0.05 mg/L,蔗糖30 g/L,琼脂6 g/L;成熟培养基A为S培养基+PEG-4000 100 g/L+ABA 15 mg/L+Ag NO310 mg/L,蔗糖45 g/L的液体培养基;成熟培养基B和C分别为添加了2 g/L和10 g/L琼脂的成熟培养基A。该方法体胚成熟时间为32 d左右,同步率为78.0%,正常形态体胚比例为83.0%。正常形态体胚形成效率可达223.0个/g胚性愈伤,体细胞胚萌发率可达47.2%。相较于单一成熟培养基,缩短成熟时间,使体胚生成更同步,并提高了体胚产量和质量。为落叶松体胚再生的商业化提供了途径,为大规模化育种繁殖、生理生化研究和转基因改良带来极大的方便,具有较大实际应用价值。     

宁夏枣树花药离体培养再生体系的建立

采用宁夏3个特色枣树品种的花药为外植体,探索MS培养基中不同激素、激素的不同浓度配比对愈伤组织诱导、不定芽分化的影响,建立其愈伤组织诱导及不定芽再生体系。结果表明,细胞分裂素6-BA对宁夏枣树胚性愈伤组织诱导起重要作用,AgNO3对愈伤组织分化不定芽影响显著。经过正交试验分析得出,最佳诱导培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+2,4-D1.0 mg/L+IBA 0.4 mg/L;最佳分化培养基是：MS+6-BA 1.5 mg/L +IBA 0.6 mg/L +AgNO3 0.5 mg/L。在最佳诱导培养基中灵武长枣诱导率最高,达89.0%,在最佳分化培养基中同心圆枣分化率最高,达88.0%。     

半夏悬浮培养细胞分化形成人工种胚的同步化条件

为获得同步化的人工种胚,以半夏疏松愈伤组织为试验材料,采用悬浮培养的方法,探讨温度、咖啡因、蔗糖浓度对半夏悬浮培养细胞分化形成人工种胚的同步化作用,为半夏人工种子制作提供同步化种胚。结果表明:以MS为基本培养基,添加1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L sucrose+300 mg/L CH进行悬浮培养,温度为8℃,处理12h,恢复36h,同步化效果最好,细胞分裂指数为13.86%;咖啡因浓度为2.00 mmol/L,处理2 h,恢复48 h,效果较好,细胞分裂指数为9.42%;蔗糖浓度为40 g/L,处理5 d,恢复4 d,效果一般,细胞分裂指数为5.33%。分别先后继代3次于MS+1.0 mg/L IBA+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L sucrose+300 mg/L CH进行膨大培养及MS+0.1 mg/L IBA+0.5 mg/L 6-BA+10 g/L sucrose+300 mg/L CH进行分化培养。温度处理组微细胞团为42.33个,种胚分化率为71.11%;咖啡因处理组微细胞团为34.33个,种胚分化率为55.56%;蔗糖处理组微细胞团为40个,种胚分化率为57.78%。因此,半夏悬浮培养细胞同步化形成人工种胚的适宜条件为:MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L sucrose+300 mg/L CH,8℃处理12 h,恢复36 h,再转接进膨大及分化培养基继续培养。本研究为半夏人工种子生产提供技术参考。     

4个新品种玉簪愈伤组织的诱导及组培扩繁研究

为建立4个玉簪新品种的组培再生体系,以MS为基本培养基,添加不同质量浓度6-BA和2,4-D,研究其外植体组培苗的愈伤组织诱导以及继代扩繁的最适生长培养基。愈伤组织的诱导中,高浓度的6-BA(≥3.0mg/L)与低浓度的2,4-D(≤0.1mg/L)配比有利于愈伤组织的生成。MS+1.0mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+35g/L蔗糖+12g/L琼脂的培养基可以使HostaBigDaddy（编号H1）和‘金鹰’（编号H2）的增殖倍数分别达2.54和2.78,而MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+30g/L蔗糖+11g/L琼脂可以使‘小黄金叶’（编号H6）的增殖倍数达3.01,而最适宜H15增殖的培养基则是MS+3.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+30g/L蔗糖+12g/L琼脂。研究结果为4个新品种玉簪愈伤组织的诱导及组培扩繁研究提供了有利数据依据,在此方法下愈伤组织诱导率最大,并且扩繁增殖倍数最大。     

‘凤丹’牡丹胚芽愈伤诱导及不定芽的分化

为提高‘凤丹’牡丹胚芽愈伤组织的诱导率及不定芽的分化效率,本研究以‘凤丹’牡丹种子为试验材料,对种胚愈伤诱导及不定芽分化的培养基配方进行添加与不添加2,4-D的对比试验。结果显示,诱导胚愈伤的最佳培养基为MS+1.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA,诱导率达33.33%;诱导不定芽分化的最佳培养基为MS+0.2 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA,诱导率达65.33%,表明在没有2,4-D添加的培养基中能获得更高的‘凤丹’牡丹胚芽愈伤诱导率及更多的不定芽。本研究结果可为‘凤丹’牡丹的组培和快繁技术提供一定的技术指导。     

油梨愈伤组织诱导及分化研究

摘要：[目的]研究不同激素及外植体类型对‘哈斯’油梨（Persea Americana Mill.cv.Hass）愈伤组织诱导及分化的影响,筛选最佳诱导条件和外植体。[方法]通过间接器官发生途径。主要探讨（1）单一激素萘乙酸（1-Naphthylacetic acid,NAA）、2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-dichlorophenoxy acetic acid,2,4-D）;6-苄氨基腺嘌呤（6-Benzylaminopurine,6-BA）分别与2,4-D和NAA 结合时对‘哈斯’油梨叶片愈伤组织的诱导效应。（2）不同外植体（叶片、叶柄、茎尖、茎段）在相同条件下（基本培养基：MS+1 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+0.1NAA mg/L）的愈伤组织诱导效应。（3）单一激素 6-BA（或与NAA结合）对油梨愈伤组织芽分化的效应。[结果]结果表明：以MS为基本培养基,（1）添加1.0 mg/L 2,4-D/NAA,其诱导效果最佳,诱导率分别为45.3%和20.2%;但NAA诱导的愈伤质地较佳。（2）1 mg/L NAA与1.0 mg/L 6-BA结合,诱导效果较好,其诱导率最高可达84%。（3）诱导愈伤组织的最适外植体为茎段,其诱导率≥72.8%。叶柄次之,叶片和茎尖较差。[结论]综上,不同激素种类及其浓度和外植体类型对‘哈斯’油梨愈伤组织诱导影响显著。最佳诱导培养基为MS+1.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂。愈伤组织诱导最佳外植体为茎段,但诱导形成的愈伤组织难以分化出芽。     

龙芽楤木愈伤组织诱导及胚状体发生初探

以楤木幼茎及根为试材,添加不同种类和浓度的激素,进行愈伤组织诱导、胚状体发生及幼苗分化。结果显示,幼茎在MS+2,4-D1.0mg/L培养基上愈伤组织诱导率最高。愈伤组织在MS+BA1.0 mg/L + NAA0.04 mg/L培养基上胚状体形成最多,幼苗分化率达92.5%,并能保持旺盛的再生能力。