Dazl基因在绵羊不同发育期睾丸组织中的表达与细胞定位

类无精症缺失基因(deleted in azoospermia-like gene,Dazl)在雄性动物生殖细胞分化过程中起重要调控作用,但对于不同物种或处于不同发育阶段的同一物种而言,其调控机制存在差异。为了探讨Dazl在绵羊(Ovis aries)不同发育期睾丸组织中的表达、定位及调控作用,本实验选取0、2、5、12和24月龄健康的绵羊15只,每组3只,采取睾丸、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和肌肉组织。运用实时荧光定量PCR(quantitative Real time PCR,q RT-PCR)检测了0、2、5、12和24月龄绵羊睾丸组织及12月龄绵羊的不同体组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和肌肉)中Dazl m RNA的表达量,利用Western blot技术对Dazl基因编码蛋白的表达量进行检测,并采用免疫组织化学染色方法检测Dazl蛋白的阳性信号在不同月龄睾丸组织中的分布情况。结果显示,对于不同月龄睾丸组织,从m RNA和蛋白水平均检测到了Dazl基因的表达,并且二者的趋势基本相似。在0、2和5月龄睾丸中Dazl m RNA及蛋白表达量较低,12月龄中表达量较高且极显著高于0、2和5月龄(P0.01),而在24月龄中Dazl m RNA及蛋白的表达量均出现不同程度的下调现象。12月龄绵羊各组织的q RT-PCR检测结果显示,Dazl m RNA只在睾丸组织中高表达,在心脏中表达量很低,而在其他组织中不表达。免疫组织化学染色结果显示,Dazl蛋白在初情期前(0、2和5月龄)定位于睾丸间质细胞,而在12和24月龄定位于睾丸间质细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞。研究结果表明,Dazl基因在性成熟前公羊的睾丸间质细胞及成年羊的睾丸间质细胞、精母细胞和精细胞中表达,并且在他们的增殖过程中起调控作用。由此推测,在绵羊睾丸发育过程中,Dazl基因可能通过直接作用(调控精母细胞的成熟分裂)和间接作用(调控睾丸间质细胞的增殖)共同调控精子发生。本研究为进一步研究Dazl基因在雄性动物精子发生过程中的调控机制提供了科学依据和参考。     

CDK1和CyclinB1在不同月龄绵羊睾丸中的表达与定位

哺乳动物精母细胞减数分裂至成熟受蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK1)和细胞周期蛋白B(CyclinB1)形成的复合物细胞促分裂因子(maturation promoting factor,MPF)控制.本实验选取0、2、6、12和24月龄绵羊(Ovis aires)睾丸组织,探究了不同月龄绵羊睾丸中CDK1和CyclinB1表达与定位情况.通过qRT-PCR方法检测了CDK1和CyclinB1在不同月龄绵羊睾丸中mRNA表达情况,并利用免疫组织化学染色技术对睾丸组织中CDK1和CyclinB1蛋白定位.结果表明,绵羊睾丸中CDK1和CyclinB1 mRNA表达量随月龄的增加呈现先下降后上升的趋势.CDK1和CyclinB1蛋白在细胞中主要定位于精原细胞、初级精母细胞和次级精母细胞.各发育期CDK1蛋白表达量均低于CyclinB1蛋白的表达量,其中CDK1蛋白在整个细胞周期中表达量极少且相对稳定,CyclinB1蛋白在各发育期表达量不同.说明CDK1和CyclinB1 mRNA和蛋白质在不同月龄绵羊睾丸中的表达量存在一定差异,可能对绵羊睾丸发育有一定的调节作用.     

天祝白牦牛HSP60基因的克隆及其在下丘脑-垂体-睾丸中的表达定位研究

热休克蛋白60(HSP60)不仅在细胞保护方面发挥作用,也参与雄性动物生殖生理的调控。为研究HSP60基因序列特性及其在天祝白牦牛下丘脑-垂体-睾丸轴(HPT-axis)上的表达情况,探寻其在白牦牛睾丸发育、精子发生过程中的作用机制,本研究采用RT-PCR和RACE技术获得白牦牛HSP60基因全长cDNA序列,采用生物信息学方法分析HSP60蛋白的理化性质、结构及不同物种之间的同源性等,并利用qPCR、Western blotting、免疫组化法分析HSP60在白牦牛下丘脑-垂体-睾丸轴中的表达及定位。结果表明,白牦牛HSP60基因cDNA全长为2 300 bp,开放阅读框为1 722 bp,编码572个氨基酸;其理论分子量为60.977k Da、等电点为5.69,编码的蛋白为非跨膜可溶性蛋白。氨基酸序列比对结果显示,白牦牛HSP60氨基酸序列与牛、瘤牛、绵羊、藏羚羊、骆驼、白犀牛、兔和黑猩猩的氨基酸序列同源性高、进化水平相近。HSP60基因及蛋白在白牦牛的下丘脑、垂体及睾丸组织中均有表达,其中下丘脑及垂体组织表达量显著高于睾丸,下丘脑和垂体之间差异不显著。免疫组化结果显示,HSP60蛋白定位表达于白牦牛下丘脑组织的室旁核大细胞、室旁核小细胞和神经角演网、垂体组织的腺细胞、睾丸组织的精原细胞、精母细胞、支持细胞和间质细胞,而精子细胞中表达较弱。通过对健康成年白牦牛HSP60在下丘脑-垂体-睾丸轴的表达与定位检测,推断HSP60参与雄性白牦牛生殖轴调控,并参与睾丸发育与精子发生。本研究结果为进一步研究HSP60对雄性生殖调控奠定了基础。     

胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)在不同年龄公猪睾丸中的表达

采用免疫组化（immunohistochemistry）和半定量RT-PCR法研究了胶质细胞源性神经营养因子（Glial cellline-derivedneurotrophic factor,GDNF）在生后仔猪睾丸中的表达,探讨了GDNF在睾丸发育和精子发生中的作用.实验结果发现,在幼龄阶段（2～4周龄）,GDNF蛋白主要表达于间质细胞区,而在曲细精管内未见表达.从第2月龄开始,GDNF蛋白在曲细精管内的支持细胞胞浆出现阳性信号,呈较低水平表达.随着年龄的进一步增长,GDNF在睾丸曲细精管内的表达不断增强,到成年时GDNF蛋白表达水平达最高.RT-PCR结果显示,仔猪出生后2周,睾丸中即存在GDNFmRNA的表达,随着年龄的增加,GDNFmRNA水平持续升高,到2月龄和6、18月龄分别与出生2周时有显著性（P＜0.05）和极显著性（P＜0.01）差异,其中第6月龄达高峰.实验结果表明GDNF可能直接参与了出生后仔猪睾丸的发育,并在调节精子发生中起着重要的作用.     

小鼠生后不同发育阶段睾丸组织中Crumbs-3(Crb3)的表达

为确定极性调控蛋白Crumbs-3(Crb3)在小鼠(Mus musculus)睾丸组织的定位及其在曲精小管精子发生及间质细胞发育过程中的分布规律,本研究运用常规石蜡切片-HE染色方法和免疫荧光组织化学技术,分别对小鼠生后不同发育阶段睾丸组织结构及Crb3在不同发育时期睾丸组织中的分布进行了研究。结果显示,随着个体发育,曲精小管的直径及生精上皮的厚度不断增大,管腔则由小增大、变小再增大;睾丸曲精小管内生精细胞处于动态的发育变化中,2周龄的生精小管内仅有增殖分裂的数层精原细胞和支持细胞,4周龄时出现各级生精细胞、但无精子形成;之后,继续增殖分裂,至8周管腔内有大量精子形成;并随日龄增加生精细胞密度不断加大;支持细胞的形态随着个体发育逐渐变得清晰而易于辨认;间质细胞则随个体发育体积不断增大、核质比例逐渐下降,而胞质嗜酸性逐渐增强。免疫荧光染色结果显示,Crb3蛋白主要分布在各周龄睾丸曲精小管生精细胞胞膜以及睾丸间质细胞胞膜,且间质细胞上的阳性信号明显强于生精细胞。研究结果提示,Crb3不仅与生精上皮细胞的极性建立和维持有关,而且可能参与睾丸类固醇激素的合成和分泌。     

仔猪睾丸支持细胞的增殖与发育

为了阐明支持细胞增殖和分化能力对精子生成的影响,本实验以7、21和35d仔猪为材料,利用细胞直接计数、免疫组织化学、流式细胞术和免疫印迹分析了仔猪睾丸支持细胞、生精细胞数量和增殖能力变化以及支持细胞的成熟分化状况。结果:(1)从7～21d,曲细精管中支持细胞与其它细胞之间的界线更加明显;从7～35d,每克睾丸中间质细胞和支持细胞的数量在21d时达到高峰(P<0.05),而生精细胞的数量则一直增加(P<0.05),但并没有在曲细精管中发现圆形精子;(2)从7～35d,支持细胞和间质细胞都能表达GATA-4,支持细胞中GATA-4的累积光密度(IOD)在21d时最高(P<0.05),而间质细胞中的IOD在21d和35d之间没有明显差异(P>0.05);(3)从7～35d,整个睾丸细胞都有增殖能力,睾丸细胞的细胞增殖指数(PI)和S期细胞指数(SPF)在21d时最高(P<0.05);三种细胞在这一时期都能表达PCNA,三种细胞PCNA的IOD值和睾丸中PCNA的表达水平在21d时最高(P<0.05);(4)从7～35d,Connexin 43(Cx43)主要表达于支持细胞的细胞质,支持细胞和间质细胞中的IODs在2...     

GnRH主动免疫对雌鼠下丘脑-垂体-卵巢轴调控的影响

本研究采用GnRH并列体二聚物(GnRH-Tandem-Dimer,GTD)为免疫原主动免疫SD雌鼠,检测下丘脑-垂体-卵巢轴生殖相关基因表达变化,分析主动免疫GTD对SD雌鼠生殖功能的影响。选取48只性成熟SD雌鼠随机分为GTD免疫去势组和空白组。免疫组雌鼠于12周龄时初免GTD免疫去势疫苗,4周后加免。每两周采集血液检测血清激素含量变化。分别于加免后4、8、12周处死大鼠,每组处死8只,收集血液;并采集下丘脑、垂体、卵巢,分析生殖相关基因mRNA表达变化。结果显示,GTD主动免疫后大鼠卵巢严重萎缩,重量下降到对照组的23.12%(p0.05);血清FSH、LH、P4及E2含量均显著下降(p0.05);除下丘脑GnRH mRNA先上升后下降外,下丘脑ER、垂体GnRH-R、LH-β、FSH-β和卵巢LH-R、FSH-R和ER mRNA表达水平显著下调(p0.05)。结果表明,GTD主动免疫可通过对生殖内分泌激素分泌的调节和对生殖相关基因mRNA表达水平的调控,影响下丘脑-垂体-卵巢轴的功能。     

湖羊生长分化因子9（GDF9）基因组织表达特征、mRNA表达水平与SNPs分析

生长分化因子9(GDF9)是TGF-β超家族的一个成员,在早期卵泡的生长和分化过程中起着重要的调节作用.试验采用RT-PCR和实时荧光定量PCR对湖羊GDF9的组织表达、发情期单羔和三羔湖羊卵巢组织mRNA表达水平进行了研究:用PCR-RFLP法对湖羊群体GDF9外显子1第152位点的多态性进行了分析.组织表达谱分析发现GDF9基因在湖羊的下丘脑、垂体、卵巢、子宫、输卵管、心、肝、脾、肺、肾等组织中均有表达;实时荧光定量PCR结果表明,三羔湖羊卵巢组织中GDF9基因mRNA表达水平显著高于单羔湖羊(P<0.05);PCR-RFLP法没有检测到湖羊GDF9基因cDNA第152处发生的单碱基突变(A→G).研究提示GDF9基因mRNA表达水平与湖羊的繁殖性状有一定的关系,在湖羊群体中的多态性还有待于进一步研究.     

神经生长因子在大鼠睾丸中的表达研究

应用免疫组织化学SP法研究了神经生长因子在大鼠睾丸中的表达。研究发现:神经生长因子主要分布在睾丸的间质细胞和肌样细胞。大鼠睾丸神经生长因子免疫反应产物在4周龄为强阳性,23周龄为中等阳性,50周龄为弱阳性。结果还表明:随大鼠的年龄增大,神经生长因子在睾丸中的表达逐渐减少。     

甘蓝花粉特异表达的多聚半乳糖醛酸酶基因BoMF9的克隆与特征分析

根据白菜花粉特异的多聚半乳糖醛酸酶基因BcMF9的全长序列设计引物，通过PCR直接扩增的方法从结球甘蓝（Brassica. oleracea var. capitata）和芥蓝（B. oleracea var. alboglabra）中克隆得到BcMF9的同源基因BoMF9（BoMF9c和BoMF9l）。生物信息学分析和系统树构建发现BoMF9c和BoMF9l具有花粉特异表达的多聚半乳糖醛酸酶基因的序列特征。不同组织的表达特征分析发现它们分别在结球甘蓝和芥蓝的花蕾中特异表达。推测BoMF9c和BoMF9l可能在花粉萌发和花粉管伸长中起作用。     

Relationship between root-endophytic microbial communities and replant disease in specialized apple growing areas in Europe

Apple replant disorders are one of the causes of the downward trend of land planted with apple orchards in Central Europe. A specific transnational survey was thus conducted on apple root associated microorganisms, aimed at increasing the knowledge regarding crop management to counteract this tendency. Soil health was evaluated using a bioassay test with root cuttings of the clonal M9 rootstock, one of the most commonly used rootstocks in Europe. Plant growth response in replant, fallow and gamma ray-sterilized soil was evaluated using soil samples taken from nine orchards selected (three per country) from specialized apple growing areas of Germany, Austria and Italy. Plant growth significantly differed between treatments but not between countries. Root endophytic fungi were confirmed as one of the main components of growth reduction, while endophytic nematodes (Pratylenchus sp.) were not. The large set of quantitative and qualitative data of root endophytic fungi allowed to clarify that Cylindrocarpon-like fungi (Ilyonectria spp. and Thelonectria sp.) had a major pathogenic role in the three countries, while Pythium spp. prevailed as pathogen only in German orchards. Gamma ray-sterilized soil resulted in a more-than-proportional increase of plant growth (42% and 31% respectively vs. replant and fallow) as compared to that observed between fallow and replant soil (18%). This best performance in gamma ray-sterilized soil, in addition to the lowest root colonization by Cylindrocarpon-like fungi in this treatment, appeared to be due to the different composition of fungal communities as compared to two other treatments (fallow and replant soil), which instead were highly similar to each other. This difference was due to a shift of community composition toward Fusarium and binucleate Rhizoctonia, which prevailed in sterilized soil.     

CRISPR/Cas9靶向敲除番茄SNAC4/9突变体的构建、鉴定及分析

NAC转录因子参与植物生长发育、果实色素积累、细胞壁形态形成和植株衰老等过程。为系统研究SNAC4(SlNAC48,基因ID:101247735)和SNAC9(SlNAC19,基因ID:101248665)在番茄成熟衰老进程中的精准功能,本试验设计SNAC4/9敲除靶点,通过重叠聚合酶链式反应（overlapping PCR）法构建单引导RNA(sgRNA)表达盒,采用金门分子克隆（golden gate）方法将单个或多个sgRNA表达盒组装至pYLCRISPR/Cas9载体。PCR和测序结果表明,SNAC4/9敲除载体构建成功,通过农杆菌转化法将编码Cas9蛋白和sgRNA的基因导入Micro-Tom番茄细胞,对阳性苗进行靶点和脱靶位点检测,结果表明番茄成功突变且未脱靶,通过鉴定T1代突变体进一步证明,CRISPR/Cas9基因编辑番茄的靶点在代际之间可以稳定遗传。与野生型相比,SNAC4/9敲除果实色素积累减少,成熟延迟,表明SNAC4/9在番茄果实成熟中发挥重要作用。本研究为进一步探究SNAC4/9调控番茄果实色素代谢和胞壁代谢机制提供了遗传材料和试验基础。     

陆地棉GhMYB9基因克隆及结合特性分析

MYB转录因子蛋白普遍存在于植物中,广泛参与植物的生长发育和代谢调控。为研究GhMYB9基因对棉纤维的调控机制,使用PCR方法,从棉花中克隆1个R2R3-MYB基因GhMYB9(Gen Bank登录号:AF336286.1);利用生物信息学方法分析其氨基酸序列;构建酵母表达载体。结果表明,该基因c DNA全长1 145 bp,开放阅读框长795 bp,编码264个氨基酸,预测其蛋白分子量约为29.624 k D,等电点为9.13。推测的氨基酸序列中含有2个高度保守的SANT结构域。GhMYB9基因组包含2个外显子和1个内含子。进化树分析表明,GhMYB9和Gh MYB聚在同一分支(HQ234875.1)。酵母单杂交试验结果表明,GhMYB9转录因子能够特异结合AC顺式作用元件。本研究结果为进一步阐明GhMYB9的生物学功能奠定了基础。     

菊分支NCED酶分子特征及进化分析

为探究9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)基因家族进化特性,本文利用生物信息学方法,对菊分支类群已完成测序的植物(包括番茄、马铃薯、烟草、甜菜、猴面花)基于全基因组进行NCED基因家族鉴定,并对其蛋白序列特征,保守基序,次级结构以及系统发育关系进行分析。结果表明,NCED酶是由小基因家族编码的酶,其成员为2~4个。蛋白质氨基酸大小在505~652aa之间,分子质量为56.23~71.42 k Da,除Sl NCED6外,其余各蛋白的等电点均表现为酸性,保守基序分析发现各成员均包含10个保守基序,其长度在29~50之间。此外,NCEDs蛋白结构分析显示,一级结构氨基酸序列N端保守性较低,而次级结构均表现为高度保守。系统发育关系发现,来自番茄的Sl NCED5、Sl NCED6与来自马铃薯的St NCED5、St NCED6分别为直系同源蛋白,这与生物学上的亲缘关系一致。     

Quantitative assessment of the fungal contribution to microbial tissue in soil

The fungi-to-bacteria ratio in soil ecological concepts and its application to explain the effects of land use changes have gained increasing attention over the past decade. Four different main approaches for quantifying the fungal and bacterial contribution to microbial tissue can be distinguished: (1) microscopic methods, (2) selective inhibition, (3) specific cell membrane components and (4) specific cell wall components. In this review, the different methods were compared and we hypothesized that all these approaches result in similar values for the fungal and bacterial contribution to total microbial biomass, activity, and residues (dead microbial tissue) if these methods are evenly reliable for the estimation of fungal biomass. The fungal contribution to the microbial biomass or respiration varied widely between 2 and 95% in different data sets published over the past three decades. However, the majority of the literature data indicated that fungi dominated microbial biomass, respiration or non-biomass microbial residues, with mean percentages obtained by the different methodological approaches varying between 35 and 76% in different soil groups, i.e. arable, grassland, and forest soils and litter layers. Microscopic methods generally gave the lowest average values, especially in arable and grasslands soils. Very low ratios in fungal biomass C-to-ergosterol obtained by microscopic methods suggest a severe underestimation of fungal biomass by certain stains. Relatively consistent ratios of ergosterol to linoleic acid (18:2ω6,9) indicate that both cell membrane components are useful indicators for saprotrophic and ectomycorrhizal fungi. More quantitative information on the PLFA content of soil bacteria and the 16:1ω5 content of arbuscular mycorrhizal fungi is urgently required to fully exploit the great potential of PLFA measurements. The most consistent results have been obtained from the analysis of fungal glucosamine and bacterial muramic acid in microbial residues. Component-specific δ¹³C analyses of PLFA and amino sugars are a promising prospect for the near future.     

Longevity of microbial and enzyme activity and their influence on NPK content in pressmud vermicasts

Total microbial population and their activity (CO₂ evolution), macronutrients (N, P, K) and enzymes (dehydrogenase and phosphatase activities) in the uningested pressmud, fresh casts and 15- and 30-d-old pressmud vermicasts of two composting worms, Lampito mauritii and Eudrilus eugeniae, have been determined. Enhancement of microbial population and activity, NPK content and enzyme activities in the fresh casts are due to enhanced mineralization of nutrients, high substrate concentrations and high moisture level. As the vermicast become aged, there is a reduction in the moisture level leading to reduction in microbial population and activity. Consequently reduced microbial activity leads to reduced enzyme activity and NPK contents. Dryness of aged vermicasts implies the loss of N through volatilization, leaching and denitrification. Reduction in P is due to lesser conversion of organic to inorganic P due to reduced microbial activity. Loss of K input is due to leaching.

Résumé

La population microbienne totale et son activité (dégagement de CO₂), les nutiments (N, P, K) et les activités enzymatiques (déshydrogénase et phosphatase) dans des résidus de canne à sucre (bagasse), ainsi que dans des turricules frais et des turricules âgés de 15 et 30 j, formés à partir de ce matériau organique par deux vers de terre composteurs, Lampito mauritii et Eudrilus eugeniae, ont été étudiés. L'augmentation de la population bactérienne et son activité, des teneurs en N, P, K et des activités enzymatiques dans les turricules frais sont liés à un accroissement de la minéralisation des nutriments, à la forte concentration en substrat organique et à la forte teneur en eau. Lorsque les turricules vieillissent, la réduction de cette teneur en eau conduit à une diminution de la population bactérienne et de son activité. Ceci conduit également, par conséquent, à une diminution des activités enzymatiques et des teneurs en N, P, K. La dessiccation des turricules entraîne une perte d'azote par volatilisation, lessivage et dénitrification. La réduction des teneurs en phosphore est due à une moindre conversion du P organique en P inorganique par les microorganismes. La perte de potassium se fait par lessivage.     

CRISPR/Cas9系统在水稻分子育种中的应用

CRISPR/Cas9是目前广泛应用的基因编辑技术,其操作方便、效率高、成本低。水稻作为全球粮食安全的战略作物,优质高产的水稻培育尤为重要,CRISPR/Cas9技术为水稻分子育种带来了突破。本文回顾了基因编辑技术的发展,详细介绍了CRISPR/Cas9系统的结构、组成及原理,重点阐述了该技术在水稻分子育种中的应用,探讨CRISPR/Cas9系统存在的问题以及其在分子育种的发展前景。     

Field mesocosms for assessing biotic processes in soils: How to avoid side effects

Field mesocosms can overcome the simplicity and deficiencies of laboratory based experimental designs. This study deals with a number of possible side effects of a mesocosm technique that involves deep-freezing of soil monoliths to eliminate soil fauna, wrapping in nets of various mesh-size to control faunal immigration and replanting in the field. We used Berlese-Tullgren sets in the field to directly inoculate mesocosms with microarthropods. After 6 months of exposure, the number of collembolans equalled control level whereas immigration and inoculation of oribatids accounted for only 30% of the control. The number of ciliates, their distribution into feeding groups, and the numbers of nematodes, tardigrades and rotifers were not significantly affected by the elimination of mesofauna. We also did not detect significant treatment specific effects on microclimatic conditions within the litter layer of the mesocosms. Furthermore, we compared the monolith approach with a technique using sieved soil as a time-saving alternative. Water capacity and infiltration rate of mesocosms made of sieved soil did not differ from mesocosms made of monoliths, but NH₄⁺ losses were significantly higher in sieved soil when defaunated by deep-freezing. We conclude that the investigated mesocosm technique has little side effects and recommend the use of monoliths in mesocosm studies.

Résumé

La mise en œuvre de mésocosmes au champ peut être une alternative pour pallier la simplicité et aux imperfections des expérimentations en laboratoire. Cette étude aborde les différents effets secondaires potentiellement générés par une approche en mésocosmes, impliquant successivement i) une défaunation des monolithes de sol par congélation intense, ii) leur enrobage au moyen d'une toile de vide de mailles dans le but de contrôler l'immigration de la faune, iii) leur replacement au champ. À l'aide d'appareils de Berlèse-Tullgren utilisés sur place, les mésocosmes ont été ensuite directement inoculés avec les micro-arthropodes extraits. Après 6 mois d'incubation, l'abondance des collemboles est similaire à celle observée initialement dans le sol témoin alors que l'abondance des oribates, par immigration et inoculation, atteint seulement 30% de l'abondance observée dans le sol témoin. L'élimination de la mésofaune n'a pas affecté le nombre de ciliés et leur distribution dans les différents groupes trophiques, ni le nombre de nématodes, de tardigrades et de rotifères. De même, nous n'avons pas mis en évidence de manière significative d'effets secondaires, spécifiques au prétraitement des monolithes sur les conditions microclimatiques régnant au sein de la couche de litière dans les mésocosmes. L'approche en monolithes de sol est aussi comparée avec une approche par tamisage du sol, en tant que technique alternative permettant un gain de temps. La capacité de rétention en eau et le taux d'infiltration mesurés dans les mésocosmes constitués de sol tamisé et ceux constitués de monolithes de sol ne différent pas, mais les pertes en NH₄⁺ sont significativement plus élevées dans les mésocosmes faits de sol tamisé, après l'étape de défaunation par forte congélation. Nous concluons que la technique mésocosme proposée ici présente peu d'effets secondaires et nous recommandons l'utilisation de monolithes de sol pour des études en mésocosmes.     

人IGF-1基因重组杆状病毒表达载体的构建及在sf9细胞中的表达

以pcDNA3．1／IGF-1为模板，采用PCR方法对IGF-1基因进行扩增，EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ酶切回收含IGF-1基因的DNA片段，与pFastHTA连接，获得重组载体pFast／IGF-1；将其转化大肠杆菌（Escherichia coli）DH10Bac感受态细胞，经卡那霉素、四环素、庆大霉素及蓝白斑筛选得到重组杆状病毒载体pBacmid-Fa-IGF-1，PCR鉴定得到单-／GF-1条带。将该病毒载体转染sf9细胞，进行病毒重组，Western-blot检测／GF-1表达，并用MTT法检测促内皮细胞生长活性。结果成功获得了重组病毒，Western-blot检测出现1条约13．0kD的带，MTT法检测IGF-1促细胞生长率为24．4％。