钩状木霉和哈茨木霉菌对人参土壤理化性质及真菌群落结构的影响

为研究不同木霉菌对栽培人参土壤的改良作用,分析木霉菌对土壤养分和土壤真菌群落结构与功能特征的影响。采用人参盆栽试验,添加外源木霉菌(钩状木霉DH3、MM3、MM4、Q7 4种菌株和哈茨木霉MM6菌种)后,分析土壤理化性质以及土壤微生物群落多样性变化。添加不同外源木霉菌处理后人参土壤理化性质发生变化,土壤pH值无显著变化,土壤全氮、有机质、铵态氮、硝态氮、有效磷、速效钾含量显著增加(P<0.05),而碳氮比(C/N)在添加木霉菌处理中降低,其中钩状木霉MM3和哈茨木霉MM6两株菌的理化性质表现最好。ITS测序分析获得703个OTUs,涵盖了8门、26纲、46目、86科、141属。木霉菌处理后土壤真菌微生物α多样性指数(ACE、Chao1)增加,尤其是钩状木霉MM3;钩状木霉MM3中的主要特征种群是肉座菌科(Hypocreaceae)和木霉菌属(Trichoderma),哈茨木霉MM6的主要特征种群是毛壳菌科(Chaetomiaceae)。冗余分析(RDA)发现,土壤 C/N 和硝态氮是影响土壤环境中微生物多样性的主要因素;相关分析表明,刺球菌属(Chaetosphaeria)与土壤全氮含量呈显著正相关,与C/N呈显著负相关。本结果为栽培人参土壤微生物改良和生物防治提供理论依据。     

木霉菌M2的鉴定及其对小白菜促生效果研究

以一株分离自健康、高产辣椒根际土壤的木霉菌(Trichoderma spp.)M2为供试菌株,研究其对小白菜生长发育的影响并在形态学分类的基础上结合r DNA-ITS序列分析的手段,对木霉菌M2进行分类鉴定,以期为微生物肥料的开发提供优良菌种。将木霉菌M2进行固体发酵制得孢子粉,研究其在温室条件下是否对小白菜的生长具有促生能力。结果表明:菌株M2属于哈茨木霉(Trichoderma harzianum);在温室盆栽试验中,土壤接种M2孢子粉对小白菜具有不同程度的增产作用,且能够提高叶绿素含量、可食用叶片数,其中接种5.0×10~9cfu的M2孢子粉处理的鲜重、干重最高,比对照组分别增加30.26%、20.08%;接种5.0×10~8cfu的M2孢子粉处理鲜重、干重较对照组分别增加18.33%、12.46%。这说明哈茨木霉M2菌株对小白菜的增产效果明显,具有潜在的农业应用价值。     

木霉对阿特拉津的耐受性及酶活响应

本文研究了绿木霉(Trichoderma virens)和哈茨木霉(T. harzianum)在不同浓度阿特拉津处理下的生长速率、生物量和酶活特性。结果表明:阿特拉津对2种木霉菌的生长模式影响较小。在0.25 g L~(-1)浓度处理下,对绿木霉和哈茨木霉的生长速率影响不显著,木霉表现出较好的耐受性。绿木霉在0.65 g L~(-1)和0.75 g L~(-1)浓度时生长受到明显抑制。哈茨木霉在0.35 g L~(-1)浓度即受到显著抑制。绿木霉在0.25 g L~(-1)、0.35 g L~(-1)浓度处理下菌丝生物量与对照无显著差异,0.5 g L~(-1)、0.65 g L~(-1)、0.75 g L~(-1)浓度处理下菌丝生物量与对照差异显著;哈茨木霉在不同浓度处理下菌丝生物量与对照均具有显著差异,并且相同浓度处理绿木霉菌丝生物量大于哈茨木霉。绿木霉在不同浓度阿特拉津处理下均显示出很强的多酚氧化酶和过氧化物酶活性,在高浓度阿特拉津下显示出很强的漆酶活性;哈茨木霉在不同浓度阿特拉津处理下也显示出比较强的多酚氧化酶和过氧化物酶活性,但漆酶活性较低。可见在纯培养条件下,绿木霉和哈茨木霉对阿特拉津均具有一定的耐受性,其中绿木霉耐受能力稍强。     

木霉T34对根结线虫的研究

为了明确木霉T34种类及其对根结线虫二龄幼虫的致死活性,研究采用形态学和ITS分子方法对T34进行物种鉴定,并测定T34发酵液对根结线虫的致死活性。结果表明:木霉T34为哈慈木霉,其发酵液浓度为99.63%时,在防治植物线虫上具有广阔的应用前景。     

土壤接种棘孢木霉菌降低小油菜砷胁迫及其可能机理

农田土壤中砷的过量累积会影响作物生长,砷可通过食物链影响人体健康。缓解土壤砷对作物生长的胁迫和累积是亟待解决的科学问题之一。本文以具有高耐砷和砷形态转化能力的棘孢木霉菌为研究材料,通过盆栽试验研究了棘孢木霉菌对外源砷胁迫下小油菜生长的影响及其可能机理。结果表明:120 mg·kg-1外源砷污染土壤上小油菜生长受到显著抑制,接种棘孢木霉菌可显著促进小油菜生长;接种棘孢木霉菌降低了小油菜对砷的吸收及富集系数,与未接菌污染土相比,小油菜地上部和地下部砷含量分别降低了12.4%和20.2%,砷富集系数降低了7.8%。接种棘孢木霉菌使土壤有效态砷含量降低了15.7%,土壤和小油菜地上部均检测到一甲基砷和二甲基砷,表明接种棘孢木霉菌促进了土壤中砷的甲基化,降低了土壤中砷有效性和小油菜体内砷的毒性。此外,外源砷胁迫下小油菜超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性,以及谷胱甘肽、抗坏血酸及丙二醛含量显著升高,而接种棘孢木霉菌可降低小油菜部分抗氧化胁迫相关酶活性,表明接种棘孢木霉菌有效缓解了砷对小油菜生长的胁迫。研究结果可为今后砷高风险农田的安全利用与风险调控提供材料与技术参考。     

蓝莓根部内生木霉分离鉴定及其拮抗作用

为探究贵州省蓝莓根部内生木霉多样性,筛选具有拮抗作用的内生木霉,采用组织分离法、对峙培养法及无菌发酵液法,分析蓝莓根部内生木霉多样性及内生檑对7种植物病原真菌的拮抗作用。结果表明,通过组织分离、形态观察、rDNA-ITS和EF-1α基因序列鉴定得到16株内生木霉,属于Trichoderma virens、T. koningiopsis、T. harzianum和T. pubescens 4种,相似度为98%~100%。蓝莓根部内生木霉分离率(IR)为8%,分离频率(IF)为15.53%,Shannon-Weiner多样性指数为0.450 8,Simpson多样性指数为0.988 7、Margalef丰富度指数为2.408 2,Pielou均匀度指数为0.345 0。16株蓝莓根部内生木霉对交链格孢菌、禾谷镰孢菌、Diaporthe longicolla、小新壳梭孢、尖镰孢菌、胶孢炭疽菌、尖孢炭疽菌7种植物病原真菌的抑制率分别为35.01%~76.38%、58%~67.68%、55.10%~73.53%、52.24%~70.00%、25.80%~52.99%、37.18%~66.76%、37.37%~70.53%。选取T. harzianum GL11、T. harzianum GL15、T. harzianum GL19、T. harzianum GL39、T. virens GL42共5株木霉菌进行无菌发酵液试验,结果显示5株木霉菌发酵液对除小新壳梭孢外的其他6种植物病原菌具有一定的抑制作用,对Diaporthe longicolla的抑制效果最好,抑制率为46.71%。本研究结果可为蓝莓病害生物防治提供理论依据。     

多功能木霉的筛选及鉴定

测定了60株分离自土壤的木霉菌株的解磷解钾、拮抗和对有机磷农药毒死蜱的耐受、降解等功能。结果表明,5株木霉具有很好的解磷能力,其中木霉T-404的解磷效果最好,为109.22 mg·L-1。6株木霉具有明显的解钾透明圈,但是液体培养后测定发现木霉的解钾能力不强。木霉具有不同程度的拮抗作用,其中6株木霉的拮抗能力很好。大部分木霉可以耐受高浓度的毒死蜱,但是不能降解该农药。对5株具多功能潜力的优势木霉菌株进行形态学和分子生物学鉴定表明：T-403、T-404、T-440为Trichoderma koningiopsis,T-400、T-450为Trichoderma koningii。     

枸杞鲜果霉变菌种分离鉴定及其生物学特性

为确定引起枸杞霉变的菌种类型,该文以采后鲜枸杞果实为材料,分离导致其霉变的菌种,经形态学特征及分子生物学特征鉴定确定类型,并对与其霉变速率相关的部分生物学特性进行研究。结果表明:从霉变的鲜枸杞中共分离出6株致霉菌,分别鉴定为:菌种1为镰刀菌、菌种2为交链孢霉、菌种6为尖孢镰刀菌、菌种7为青霉菌、菌种11为串珠状赤霉菌及菌种21为草酸青霉。经过回接试验发现6种霉菌均能使健康枸杞鲜果霉变,从这些病斑中再次分离得到相同霉菌。6种菌的致死温度不同,最高致死温度为54℃。菌种1的最适生长温度为40℃,菌种6的最适生长温度为35℃,其余4株菌的最适生长温度均为25℃。6种菌在相对湿度为30%~90%范围内均能生长,最适生长相对湿度为75%~85%。最适p H值范围为4~8,p H值为6时霉菌孢子萌发率最高。通过对6种霉菌与温度、相对湿度、p H值3个与干燥参数相关的生物学特性研究,为今后鲜枸杞干燥过程条件的控制提供理论依据。     

利用小麦秸秆生产木霉分生孢子及其生物有机肥对黄瓜的促生效果

【目的】木霉是重要的植物根际促生功能菌,然而木霉类生物肥料生产的应用基础研究很薄弱。本研究以小麦秸秆为发酵基质,探究哈茨木霉T-E5产分生孢子的固体发酵工艺条件,并验证发酵物作为生物有机肥的促生效果。【方法】在实验室条件下,以小麦秸秆为固体发酵基质,研究固体发酵的不同发酵方式,温度、酸浓度、酸种类、接种量、含水量、外加碳源和氮源等单因子条件下的产孢量;再利用正交试验设计,研究温度、酸浓度、含水量、接种量、外加氮源和碳源的发酵条件优化。利用两季温室盆栽试验测定包括施用化肥、有机肥、发酵物和不同肥料组合的5个不同施肥处理的黄瓜地上部生物量、株高和叶面积。采用稀释涂布法测定黄瓜盆栽根际土中总真菌数量和木霉菌数量。【结果】单因素条件优化:基质用稀硝酸 (0.1 mol/L) 调节酸度值后接种3%(v/w) 的1 × 107个/mL的T-E5孢子液,调节水分使初始含水量达到75%;在此条件下,添加尿素和玉米粉,在28℃下发酵培养8天,最大产孢量可达到8.87 × 109个/g。通过正交优化,每10 g小麦秸秆,加入调节酸度值的0.05 mol/L硝酸18.3 mL,含水量70%(湿基),接种量9%,添加尿素的量为1%,30℃浅盘培养8天,产孢量达到1.1 × 1010个/g。第1季盆栽试验结果表明,与单施化肥处理 (CCK) 相比,发酵产物与化肥配施 (CT) 使黄瓜的地上部分生物量、株高和叶面积分别提高14.97%、16.75%和14.64%;与单施有机肥处理 (OCK) 相比,发酵产物与有机肥配施 (OT) 使黄瓜的地上部分生物量、株高和叶面积分别提高10.62%、26.06%和9.53%。第2季盆栽也有类似的促生效果,与CCK相比,CT使上述指标分别提高12.83%、11.49%和26.93%;与OCK相比,OT使上述指标分别提高5.96%、34.29%和18.01%。两季盆栽添加木霉发酵物的处理中根际土总真菌数和木霉菌数量相比CCK、OCK和不施肥照 (CK) 均增加1个数量级以上。【结论】以小麦秸秆为主要原料,采用固体发酵工艺可生产高分生孢子含量的哈茨木霉菌剂及其生物有机肥,表明利用农业废弃物生产高附加值的木霉菌剂及其生物有机肥具有可行性。但木霉孢子数量主要受发酵条件影响,今后应在中试和工厂化生产水平进一步研究木霉孢子固体发酵的工艺参数。     

不同施肥处理对西藏山南地区麦田土壤微生物变化的影响

本文对不同施肥措施下麦田土壤微生物数量及种类的变化进行了测定和分析。结果表明 :有机肥与N、P、K肥的合理配施 ,肥效持久 ,能促进微生物生长繁殖 ,细菌、放线菌、真菌、固氮菌、纤维素分解菌数量均能相对长期保持较高水平 ;可显著增强纤维素分解强度 ,促进土壤有机质的分解 ,有利于培肥土壤。微生物种类鉴定表明 :细菌的数量以芽孢杆菌为主 ,球菌较少 ;放线菌主要为链霉菌属的灰褐色类群 ;真菌主要为腐霉属、木霉属、葡萄孢属 ;固氮菌为圆褐固氮菌 ;纤维素分解菌以食纤维细菌、链霉菌属的白孢类群和葡萄穗霉属、腐霉属等真菌最常见     

Trichothecene production by Trichoderma brevicompactum

Trichoderma brevicompactum, T. viride, T. harzianum, T. atroviride, T. longibrachiatum, T. erinaceum, T. citrinoviride, and Hypocrea lutea were screened for production of trichothecenes after growth on one or several solid and liquid media. Trichothecenes were detected by liquid chromatography combined with online UV/vis spectroscopy and electrospray high-resolution mass spectrometry. T. brevicompactum produced trichodermin and/or harzianum A on all media investigated, with liquid media yielding the largest amounts. Detection of octa-2Z,4E,6E-trienedioic acid in the harzianum-A-producing strains indicated that harzianum A was synthesized directly by esterification of trichodermol with octa-2Z,4E,6E-trienedioic acid. Both the T. viride strain from which trichodermin was originally isolated and the T. harzianum strain from which harzianum A was originally isolated were shown to belong to T. brevicompactum based on four independent criteria: metabolite profiles, micromorphology, macromorphology on yeast extract sucrose agar and potato dextrose agar, and DNA sequences of the ITS1/ITS2 regions of the nuclear ribosomal DNA.     

降解玉米秸秆真菌复合菌系的构建及其降解效果评价

  【目的】  秸秆的木质纤维素含量丰富、结构复杂，在自然界中降解较慢，增加秸秆降解菌剂中菌株的多样性有利于提升还田秸秆的降解效果。探究菌株多样性水平和组成影响复合菌系秸秆降解的效果及原因，为复合菌系在秸秆降解中的应用提供理论支撑。  【方法】  通过富集驯化培养，从玉米秸秆还田土壤中筛选具有秸秆降解能力的真菌，从中挑选5株高效秸秆降解真菌进行基因间隔区序列 (ITS) 测定和物种鉴定，明确其分类地位。通过全组合构建菌株多样性为1～5的复合菌系，分别检测复合菌系的秸秆相对降解率及其滤纸酶、纤维素内切酶和木聚糖酶活性，利用方差分析和相关性分析等方法研究菌株多样性和组成对复合菌系玉米秸秆降解效果及其纤维素酶活性的影响。  【结果】  共筛选获得了15株具有秸秆降解能力的真菌，其中5株真菌的秸秆降解效果好、纤维素水解能力强。经ITS序列鉴定和系统发育分析，发现5株降解真菌的遗传差异较大，Z7-6、F7-5、F4-3、L1-1和J2-5分别与草酸青霉 (Z7-6: Penicillium oxalicum)、烟曲霉 (F7-5: Aspergillus fumigatus)、哈茨木霉 (F4-3: Trichoderma harzianum)、白囊耙齿菌 (L1-1: Irpex lacteus) 和木贼镰刀菌 (J2-5: Fusarium equiseti) 的ITS序列相似度均超过99.95%。全组合复配结果表明，复合菌系的秸秆降解能力和纤维素酶活力均高于各单一菌株，且随着菌株多样性水平的增加而提高。滤纸酶、纤维素内切酶和木聚糖酶的活力越强，复合菌系对玉米秸秆的降解效果越好，而其秸秆相对降解率主要取决于滤纸酶和纤维素内切酶的活性。抽样效应分析发现，不同菌株对复合菌系的秸秆降解效果、滤纸酶和纤维素内切酶活性的影响不同。不含菌株F7-5的复合菌系降解效果显著优于含有该菌株的组合，以Z7-6 (P. oxalicum)、F4-3 (T. harzianum)、L1-1 (I. lacteus) 和J2-5 (F. equiseti) 组合F1的玉米秸秆降解效果最佳、酶活性最高。  【结论】  秸秆降解复合菌系的构建过程需要同时考虑多样性效应和抽样效应，增加降解菌的多样性有助于增强秸秆的降解效果。本研究筛选获得的复合菌系F1在玉米秸秆降解中具有潜在的应用前景。     

添加外源耐砷菌与零价铁对土壤砷有效性和形态的影响

采用室内土壤培养试验,探讨了外源添加耐砷真菌棘孢木霉（TrichodermaasperellumL．）和零价铁对土壤砷的有效性和形态转化的影响。结果表明：向污染土壤中添加耐砷真菌棘孢木霉后,随着培养时间的延长,土壤中水溶态砷和NaHCO,提取态砷含量均呈稳定增加趋势,耐砷真菌促进了土壤中砷的溶出和释放;培养30d时,耐砷菌处理土壤有效砷含量比同期对照增幅达3．9％-10．7％,水溶态砷以As（V）为主,未检测到As（Ⅲ）、一甲基胂（MMA）、二甲基胂（DMA）等其他形态的砷;随着外源零价铁的加入,土壤中砷的活性大大降低,其有效砷含量降幅为76．5％-90．4％;在耐砷菌与零价铁联合作用下,相比于单纯的零价铁处理,土壤有效砷含量显著增加（p〈0．05）,因耐砷真菌棘孢木霉的加入导致零价铁对土壤砷的固定效率下降7．0％-11．1％。耐砷菌导致土壤砷活化可能主要与残渣态向非专性吸附态砷的转化等过程有关,外源零价铁对土壤砷的固定作用可能与非专性吸附态向无定形及弱晶质氧化物结合态、残渣态砷等转化过程相关;耐砷菌的加入抵消了零价铁对土壤砷的部分固定效果,但短期内（〈30d）不会构成大的影响。     

Microbiological destruction of composite polymeric materials in soils

Representatives of the same species of microscopic fungi developed on composite materials with similar polymeric matrices independently from the type of soils, in which the incubation was performed. Trichoderma harzianum, Penicillium auranthiogriseum, and Clonostachys solani were isolated from the samples of polyurethane. Fusarium solani, Clonostachys rosea, and Trichoderma harzianum predominated on the surface of ultrathene samples. Ulocladium botrytis, Penicillium auranthiogriseum, and Fusarium solani predominated in the variants with polyamide. Trichoderma harzianum, Penicillium chrysogenum, Aspergillus ochraceus, and Acremonium strictum were isolated from Lentex-based composite materials. Mucor circinelloides, Trichoderma harzianum, and Penicillium auranthiogriseum were isolated from composite materials based on polyvinyl alcohol. Electron microscopy demonstrated changes in the structure of polymer surface (loosening and an increase in porosity) under the impact of fungi. The physicochemical properties of polymers, including their strength, also changed. The following substances were identified as primary products of the destruction of composite materials: stearic acid for polyurethane-based materials; imide of dithiocarbonic acid and 1-nonadecen in variants with ultrathene; and tetraaminopyrimidine and isocyanatodecan in variants with polyamide. N,N-dimethyldodecan amide, 2-methyloximundecanon and 2-nonacosane were identified for composites on the base of Lentex A4-1. Allyl methyl sulfide and imide of dithiocarbonic acid were found in variants with the samples of composites based on polyvinyl alcohol. The identified primary products of the destruction of composite materials belong to nontoxic compounds.     

定殖烟草根结线虫卵和雌虫机会真菌的多样性

机会真菌对根结线虫的生物防治具有巨大潜力。本研究于2010—2011年针对来源于中国7个省份的156份烟草根结线虫样本,分别分离根结线虫游离卵、卵块和雌虫上定殖的机会真菌。应用18S rDNA-ITS片段测序结果结合菌株的形态学观察和培养性状鉴定定殖游离卵、卵块和雌虫上的真菌。根据分离到菌株的培养性状、形态学和rDNA-ITS序列分析,对定殖于南方根结线虫或北方根结线虫的9 839个游离卵、408个卵块和284个雌虫的真菌菌株,明确鉴定出9属13个种,其中定殖根结线虫新记录种5个,即长梗木霉、芬芳镰刀菌、渐狭蜡蚧菌、虫草棒束孢和交枝顶孢。淡紫紫孢菌Purpureocillium lilacinum(原名:淡紫拟青霉)为优势种,分布广泛,在云南、安徽、湖北、贵州和山东省均被分离到。该菌在南方根结线虫和北方根结线虫的游离卵、卵块和雌虫平均分离率分别为0.49%、24.00%和16.90%,说明其地理和生态适应性广泛。不同地区来源的烟草根结线虫卵和雌虫上定殖的机会真菌种类存在明显差异。目前尚无渐狭蜡蚧菌和虫草棒束孢作为线虫病原物的报道,有待于进一步深入研究其对根结线虫的致病性。     

河北安国7种中药材AM真菌遗传多样性研究

为探明药用植物根围AM真菌遗传多样性,于2010年8月在河北省安国市3个样地(中药材种植基地、霍庄、大户村)用随机抽样法采集7种中药材根围土壤样品,分离筛选双网无梗囊霉(Acaulospora bi-reticulata)为试验菌种,进行孢子DNA提取、PCR扩增、序列测定及聚类分析,研究了双网无梗囊霉遗传多样性与土壤因子的关系,并选取两条代表菌株所测序列,连同从NCBI数据库中下载的4属28种AM真菌相应序列构建系统发育树。结果表明,双网无梗囊霉可侵染不同样地不同宿主植物,3个样地7种中药材双网无梗囊霉DNA相似性达99.2%以上,其遗传特征保持了高度稳定性,双网无梗囊霉在样地和植物间具有广谱性。同一样地不同中药材根围土壤因子相似性很高,AM真菌DNA碱基序列相似系数也很高,而不同样地同一中药材根围AM真菌DNA碱基序列相似系数低于前者,可见遗传多样性与土壤因子密切相关。土壤因子对双网无梗囊霉基因序列的影响大于宿主植物的影响。     

Involvement of pachybasin and emodin in self-regulation of Trichoderma harzianum mycoparasitic coiling

Our aim was to determine the effects of two secondary metabolites secreted by Trichoderma harzianum, pachybasin and emodin, on the mycoparasitic coiling behavior and cAMP content of T. harzianum. The number of T. harzianum coils around Nylon 66 fiber was increased in the presence of R. solani. The number of T. harzianum coils around R. solani hyphae and Nylon 66 fiber were significantly increased in the presence of pachybasin and emodin. The cAMP level in T. harzianum was significantly increased by close contact with R. solani and much higer cAMP level in the presence of exogenous pachybasin and emodin. A cAMP inhibitor diminished the effect of pachybasin and emodin on T. harzianum coiling around Nylon 66 fiber. The results suggest that pachybasin and emodin mediate the increase in the number of Trichoderma mycoparasitic coils via cAMP signaling. This is the first report to suggest that pachybasin and emodin play roles in the biocontrol mechanism of Trichoderma.     

Stimulation of nitrogen fixation in soddy-podzolic soils with fungi

Stimulation of nitrogen fixation in soddy-podzolic soils is related to the hydrolytic activity of fungi decomposing plant polymers. It was found that the rate of nitrogen fixation upon the simultaneous inoculation of the strains of nitrogen-fixing bacteria Bacillus cereus var. mycoides and the cellulolytic fungus Trichoderma asperellum into a sterile soil enriched with cellulose or Jerusalem artichoke residues is two to four times higher than upon the inoculation of the strains of Bacillus cereus var. mycoides L1 only. The increase in the nitrogen fixation depended on the resistance of the substrates added into the soil to fungal hydrolysis. The biomass of the fungi decomposing plant polymers increased by two–four times. The nitrogen-fixing activity of the soil decreased when the growth of the fungi was inhibited with cycloheximide, which attested to a close correlation between the intensity of the nitrogen fixation and the decomposition of the plant polymers by fungi. The introduction of an antifungal antibiotic, together with starch or with plant residues, significantly (by 60–90%) decreased the rate of nitrogen fixation in the soll.     

三种菌肥对连作平邑甜茶根系生长和土壤真菌群落多样性的促进效应

  【目的】  以苹果常用砧木平邑甜茶 (Malus hupehensis Rehd.) 幼苗为试材，盆栽条件下研究圆弧青霉D12、哈茨木霉、草酸青霉A1等对根系形态及土壤真菌的影响，为生物防控苹果连作障碍提供理论依据。  【方法】  试验材料为平邑甜茶实生苗，连作土壤采自山东省泰安市满庄滩清湾31年生老苹果园，设置5个处理:连作土 (CK1)、载体基质 (CK2)、施用圆弧青霉D12菌肥处理 (T1)、施用哈茨木霉菌肥处理 (T2)、施用草酸青霉A1菌肥处理 (T3)，菌肥加入量为连作土壤质量的1.00%，移栽4个月后测定根系呼吸速率、根系保护酶、土壤真菌多样性等指标。  【结果】  与CK1相比，T1、T2、T3均能够促进植株根系鲜重增加和根系呼吸速率提高，显著提高根系保护酶活性，降低MDA含量；T2、T3效果较好，其SOD活性分别增加了45.46%、46.82%、POD活性分别增加了120.06%、108.73%，CAT活性分别增加了84.15%、87.82%。与CK1 相比，T1、T2、T3土壤中镰孢菌属的相对丰度分别降低了41.14%、49.34%、79.10%，而青霉属和木霉属分别增加了227.18%、222.91%、890.94%和76.55%、462.71%、213.56%，真菌多样性指数 (Ace指数、Chao指数、Shan指数) 均明显提高，Simpson指数则有所下降。  【结论】  连作土壤中施用圆弧青霉D12、哈茨木霉、草酸青霉A1均可提高根系保护酶活性和根系活力，降低土壤中镰孢菌丰度，其中哈茨木霉和草酸青霉A1效果较好，可用于苹果连作障碍的防控。     

Potential fungal inhibition by immobilized hydrolytic enzymes from Trichoderma asperellum

The use of cell wall degrading enzymes from Trichoderma asperellum immobilized on biodegradable support is an alternative for food packaging. In this study, hydrolytic enzymes produced by T. asperellum were tested as a fungal growth inhibitor, in free form or immobilized on a biodegradable film composed of cassava starch and poly(butylene adipate-co-terephtalate) (PBAT). The inhibitory activity was tested against Aspergillus niger , Penicillium sp., and Sclerotinia sclerotiorum , microorganisms that frequently degrade food packaging. The use of chitin as carbon source in liquid medium induced T. asperellun to produce N-acetylglucosaminidase, β-1,3-glucanase, chitinase, and protease. The presence of T. asperellun cell wall degradating enzymes (T-CWD) immobilized by adsorption or covalent attachment resulted in effective inhibition of fungal growth. The enzymatic activity of T-CWD was stronger on S. sclerotiorum than on the Aspergillus or Penicillum isolates tested. These results suggest that T-CWD can be used in a free or immobilized form to suppress fungi that degrade food packaging.