钝吻黄盖鲽精子冷冻保存及生理特性分析

钝吻黄盖鲽(Pseudopleuronectes yokohamae)是鲆鲽鱼类中重要的天然捕捞和养殖对象,但由于生态环境变化、人工捕捞过度等因素,导致其种质资源数量降低,进行精子冷冻保存技术研究,对其种质资源保存具有重要意义.本研究以性成熟的雄性钝吻黄盖鲽为实验材料,对精子稀释液种类及成分、抗冻剂种类、激活精子海水盐度和冷冻精液授精实验等进行筛选,实验数据利用SPSS 19.0软件进行单因素方差分析和Student-Newman-Keuls分析.结果表明,利用MFs-3(8 g/L NaCl+0.65 g/L KCl+15 g/L Glucose)稀释液分别与20％1,2丙二醇(1,2-propylene glycol,PG)和20％乙二醇(ethylene glycol,EG)抗冻剂作为精子抗冻保存液时,冷冻效果最好,其中PG组对应的精子活力、快速运动时间和寿命分别为(95.26±0.39)％、(46.00±1.00)s和(124.33±4.04)s,EG组则为(95.15±0.41)％、(45.67±0.58)s和(124.00±3.00)s.利用盐度为10～50的人工配制的海水激活解冻后的精子,发现当盐度为30时,精子活力高达(95.07±0.69)％,与对照组相比不存在显著性差异.将PG组和EG组冷冻保存的精子解冻后分别与其卵进行授精实验,PG组受精率和孵化率为(80.08±0.68)％和(77.44±1.76)％,EG组则为(80.17±0.45)％和(77.92±1.33)％,与鲜精相比无显著性差异.利用计算机辅助精子分析系统(computer-aided sperm analysis,CASA)测定MFs-3+20％ PG和MFs-3+20％ EG冷冻保存的钝吻黄盖鲽精子的各项运动参数,结果显示,二者的曲线运动速度(curvilinear velocity,VCL)、直线运动速度(straight line velocity,VSL)、平均鞭打频率(beat cross frequency,BCF)、运动的直线性(linearity,LIN)和运动的前向性(straightness,STR)的数值差异性不显著.本研究利用MFs-3+20％ PG和MFs-3+20％ EG成功冷冻了钝吻黄盖鲽的精子,为钝吻黄盖鲽精子冷冻保存技术、人工杂交育种繁殖及种质资源库的建立奠定了基础.     

额尔齐斯河江鳕精子冷冻保存研究

额尔齐斯河中蕴藏着丰富的冷水鱼类种质资源,江鳕(Lota lota)是其中之一,建立其精子冷冻保存技术和精子冷冻库,对种质资源保存具有重要意义。本研究利用无机盐、葡萄糖、蔗糖、胎牛血清等配制7种精子稀释液,以5∶1的比例稀释精液,激活后观察统计精子活力。结果显示,江鳕精子仅在SS、D15和CM中具有(13.33±2.89)%~(8.33±2.88)%活力。在此基础上配制22种梯度稀释液(SS-00~SS-10和D15-0~D15-7),以同样的方法稀释和观察精子活力。结果显示,SS-0(56.67±5.77)%、SS-2(63.33±5.77)%、SS-5(53.33±5.77)%和D15-7(63.33±5.77)%中精子活力较高,与鲜精活力(76.67±5.77)%接近(P0.05)。将二甲基亚砜(DMSO)和甲醇(MeOH)以3∶2比例配制成混合抗冻剂(DM),分别以5%~12%浓度加入到精子稀释液SS-5和D15-7中,以5∶1比例稀释精液,冷冻保存精子。结果显示,冷冻前,5%DM的SS-5和D15-7中精子活力(73.33±5.77)%与鲜精无显著差异(P0.05),当DM浓度升高到10%~12%时,精子活力接近于0;冷冻后,在DM浓度为6%的SS-5中,精子活力较高为(26.67±5.77)%(P0.05);在DM浓度为7%的D15-7中,精子活力较高为(26.67±5.77)%(P0.05)。本研究结果为额尔齐斯河江鳕精子冷冻保存提供了一定的理论和技术依据。     

哲罗鲑精子冷冻保存

哲罗鲑(Hucho taimen)是分布于额尔齐斯河和黑龙江等水域的冷水性珍稀鱼类,对其精子冷冻保存技术进行研究并建立精子冷冻库,对于哲罗鲑种质保存、人工繁殖发育、苗种培育及种群恢复都具有重要的意义.本研究利用生理盐水、葡萄糖、胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)等配制了9种精子稀释液(MPRS,RS,Hanks,ELS,EG1,EG2,Stein,SS-2和D1S),对哲罗鲑精子在稀释液中活力、加入抗冻剂后活力和液氮中冷冻后活力进行检测,发现精子在以上稀释液中均具较高活力(73.00±2.65)％～(96.67±2.08)％,加入二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)后活力下降,冷冻后仅在ELS和D15中具有极低活力(1.21±0.00)％和(1.1±0.00)％.进而利用ELS对甲醇、二甲基亚砜浓度进行筛选,发现精子在4％～12％甲醇中平衡20 min后活力仍为(79.00±6.52)％～(88.80±7.89)％,冷冻后仅在6％甲醇中具有相对较高活力(18.33± 10.61)％,但与鲜精活力相比显著下降(P＜0.05).精子在4％～12％ DMSO中平衡5 min后精子活力为(43.75± 11.09)％～(81.67±2.89)％,平衡20 min后精子活力极大下降(3.25±0.30)％～(45.00±5.77)％,冷冻后精子活力极低(1.00±0.00)％～(2.75±1.50)％(P＜0.05).以D15为基础液对葡萄糖浓度进行筛选,发现当葡萄糖浓度为30％(D30)时,冷冻后精子活力相对较高(17.80±2.59)％,但与鲜精相比活力显著下降(P＜0.05).另外对精子在D15、D30、Stein和ELs4种稀释液中短期保存的效果进行比较表明,Stein中精子存活在时间最长(45 h),D30次之(15h).综上所述,分别在ELS和D30中加入6％甲醇冷冻保存哲罗鲑精子具有一定活力,本研究结果为哲罗鲑精子大量冷冻保存和精子库建立等方面研究奠定了基础.     

栉江珧和近江牡蛎的精子超低温冷冻保存

栉江珧(Atrina pectinata)和近江牡蛎(Crassostrea rivularis)是我国重要的海产经济贝类,建立其精子冷冻保存技术及精子冷冻库,对种质资源的保护和遗传育种具有重要意义.本研究对其精子冷冻保存过程中冷冻剂种类和浓度的选择、冷冻程序、平衡时间、保存体积、精液稀释方式、保存时间等多个影响因素进行了比较筛选,并利用显微镜直接检测和曙红Y(eosin Y)染色检测结合的方式检验精子存活率.结果表明,二甲亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)作为抗冻剂的保存效果要明显优于甘油(glycerol,Gly),终浓度为8％～10％的二甲亚砜保存效果最好,其栉江珧和近江牡蛎精子活率均可达60％以上,而甘油保护下精子活率小于40％.精液的稀释方式采用将抗冻液等分为3份,依次与精液混合,每次间隔8 min,整个过程约30 min;此种精液稀释方式与一次性混合方式相比,精子活率可提高约30％.稀释后精液需要在4℃下平衡15～25 min,平衡样品与直接冷冻样品相比,精子活率提高约50％.精液降温程序为在样品投入液氮前,于液氮面以上15 cm处停留5 min,5 cm处停留10 min,精子活率可达60％以上;而未经此降温程序直接投入液氮中的样品精子活率接近0.与此降温程序相对应的样品冷冻体积在1.0～1.4 mL范围内为宜.冷冻180 d内复苏的精子活率由90％左右(鲜精)下降至60％左右,180 d后精子活率下降至56％左右.研究结果为栉江珧和近江牡蛎精子超低温冷冻保存、双壳类种质保护和遗传育种提供了理论和技术依据.     

兔精液冷冻保存的初步研究

以家兔为试验动物,从精液解冻后的精子活率和复苏率2个指标,分别对3种稀释液(1:T ris0.25 m o l/L 蔗糖0.1 m o l/L 柠檬酸钠83 mm o l/L 卵黄10% 二甲基亚砜(DM SO)15%;2:配方1 葡萄糖0.47 mm o l/L;3:T ris 0.29 m o l/L 葡萄糖0.71 mm o l/L 柠檬酸钠67 mm o l/L 卵黄20% 甘油4%)、两种抗冻剂(甘油4%、DM SO 15%)、4°C下平衡时间(30、60、120、180 m in)三个方面进行了比较试验。公兔采精用假阴道法,采精后立即检查精子活率,达0.60以上的供试验用。结果表明:(1)3种稀释液中,用稀释液2稀释的精液,精子解冻后活率和复苏率显著高于稀释液1和稀释液3(精子活率:0.153 vs 0.103、0.109;复苏率:0.205 vs 0.137、0.147,P<0.01),而稀释液1和稀释液3之间差异不显著(P>0.05);(2)在稀释液2中,分别用4%甘油和15%DM SO作防冻剂,两者的精子解冻后活率之间(0.193 vs 0.261,P<0.01),复苏率之间(0.250 vs 0.340,P<0.01)差异极显著;(3)在4°C下平衡30、60、120、180 m in,结果发现,在30~60 m in之间,解冻后精子活率之间(0.261 vs 0.249),复苏率之间(0.340 vs 0.325)差异均不显著(P>0.05),但是随着平衡时间(120~180 m in)的增加,精子活率明显降低,精子几乎死亡。结论:采用稀释液2的配方,在4°C下平衡30~60 m in,可获得较好的兔精液冷冻保存效果。     

公兔精液冷冻保存的研究

本研究着重对公兔精液冷冻保存所用的防冻剂的选择及其用量、精液的稀释方法、平衡时间、降温速度及解冻温度等方面进行了一系列试验研究,最后进行输精试验,以验证试验效果。公兔采精用假阴道法,采精后立即检查精液一般性状,精子活率达0.7以上始供试验用。稀释液用 Tris 缓冲液为基础液,其成份为:Tris2.52克,葡萄糖1.05克,柠檬酸1.41克,蒸馏水84毫升,卵黄16毫升。稀释液中的防冻剂以 DMSO 和甘油并用效果较好。当 DMSO 最终浓度从0增至9%时,解冻后精子活率亦随之而提高;当甘油最终浓度为1.25、2.5和3.75%时,解冻后精子活率较好,三者间无明显差异(P>0.05),最终浓度为0和5%时,冻后精子活率则比以上三者有明显的下降(P<0.05)。解冻后精子顶体完好率则随着 DMSO 或甘油浓度的增加而下降。以冻后精子活率和顶体完好率这两个因素综合衡量,DMSO 和甘油的最终浓度分别以4.5%和1.25%效果较好。稀释精液时,采用两次稀释法的冷冻效果比一次稀释法的好。但两者差异不显著(P>0.05)。平衡时间以0.5—1小时效果较好,而2小时和3小时的效果较差。冷冻精液时,在-25—-50℃间的降温速度以每分钟下降3—8℃效果较好,如超过11℃,解冻后精子活率则有下降的趋势。颗粒冻精在40—50℃进行干解冻的效果比30℃和60℃的好。输精时,母兔先静注 HCG50—100单位以诱发排卵,输精量为0.5—0.8毫升。输精母兔230头,情期受胎率73.9%,平均每窝产仔数4.4头。     

兔的人工授精研究总结

本文研究对兔的采精技术、精液性状、精液的冷冻保存和低温保存以及输精方法等问题进行了一系列试验。用自制的假阴道采精,春季西德长毛公兔平均每次滤精量0.89±0.310毫升,射出精子总数5.025±2.09亿,西德杂种公兔分别为0.66±0.322毫升和3.623±1.751亿;本地长毛公兔分别为0.8±0.324毫升和3.190±1.514亿。冬季西德长毛公兔平均每次滤精量0.675±0.175毫升,射出精子总数2.568±0.561亿;西德杂种公兔分别为0.947±0.368毫升和4.272±1.434亿。同品种但个体不同,滤精量和射出精子总数差异很大。精液冷冻保存,可用含有甘油和DMSO的Tris稀释液,在液氮中(-196℃)保存。用冷冻精液输精母兔230只,情期受胎率73.9％,平均每窝产仔数4.4只。精液低温保存试验,以用葡—柠—蛋—奶稀释液与葡—柠—蛋稀释液稀释在2～5℃中保存,效果较好,在农村中进行输精试验的结果,前者情期受胎率68.7±18.739％,后者63.72±12.987％,差异不显著(P>0.05),因后者配制较简便,目前在农村中乃推广此种。精液稀释倍数分三组,即1:10、1:15、1:20,试验结果以1:15为宜。输精时,发情母兔静注HCG50单位诱排,输精量0.5毫升,输入有效精子数1,000～1,400万,实践证明是适宜的。兔的人工授精技术已在广西14个县(市)重点推广,据不完全统计,两年来共输精母免约10万只次,抽查17,184只,平均情期受胎率62.90％,平均每窝仔数4.04只。     

红景天多糖对猪精子冷冻保护效果的研究

研究旨在探索红景天多糖以及三种添加方案对猪精子冷冻保护效果的影响.实验1中,在冷冻保存I液中分别添加红景天多糖分别为0、2 mg/L、4 mg/L、6 mg/L、8 mg/L和10 mg/L;实验2中,在冷冻保存Ⅱ液中添加红景天多糖,浓度同实验1;实验3基于实验1和2,对比了三种红景天添加方案对猪精子冷冻效果的影响.研究结果表明:1、红景天多糖较适宜添加浓度为6 mg/L,能明显提高猪冷冻精子品质,并能为猪精子提供较好的抗氧化作用;2、三种添加方案中,在I液中添加(方案A)对猪冷冻精子保护效果明显优于方案B和C(P<0.05).     

大黄鱼精子的超低温冻存及细胞结构损伤的检测

为了解超低温冻存对大黄鱼精子细胞结构损伤的影响,本研究以Cortland溶液为稀释液,二甲基亚砜(DMSO)及乙二醇(EG)为抗冻剂,0.25 mL的麦细管为冻存管,两步降温法(平放在离液氮面3～4 cm处3～5 min后入液氮中保存)超低温冻存大黄鱼(Pseudosciaena crocea)精子,并用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术检测了冻精的DNA损伤,荧光双染色-流式细胞术(FCM)检测了冻精的细胞膜性结构损伤.结果表明,DMSO及EG浓度在5％～20％时,冻精的活力与鲜精相比无显著差异;其中DMSO及EG浓度在10％时,冻精的激活率、运动时间、寿命分别为(87.00±2.45)％、(8.99±0.24) min和(13.11±0.65) min及(87.50±2.52)％、(8.45±0.48)min和(12.84±0.50) min; DMSO及EG浓度在25％和30％时,冻精的活力显著下降.SCGE检测显示,DMSO及EG浓度在5％～20％时,冻精的DNA损伤与鲜精相比差异不显著;DMSO及EG浓度为25％和30％时,冻精的DNA损伤明显加重;冻精的DNA损伤与抗冻剂DMSO及EG的浓度成正相关.FCM检测显示,DMSO及EG浓度在5％～20％时,冻精中线粒体及细胞膜结构保持完整性的精子比例与鲜精相比无显著差异;DMSO及EG浓度在25％和30％时,冻精中的线粒体及细胞膜结构保持完整性的精子比例明显下降.分析认为,较高浓度的DMSO及EG是引起冻精活力下降,DNA、线粒体及细胞膜结构损伤加重的主要原因;为确保大黄鱼冻精的质量,应以10％DMSO或10％EG为抗冻剂.     

用0.25 mL细管冷冻保存猪精液

研究旨在建立优化的猪精液冷冻保存方法.实验表明,采用ZORLESCO(ZO)液对猪精液进行预稀释,室温平衡1 h.加入冷冻Ⅰ液后于5℃水浴平衡1.5 h,再加入冷冻Ⅱ液平衡2 h后装入0.25 mL细管,液氮面上3cm处平衡10 min投入液氮,采用37℃水浴解冻30 s,可获得最佳冷冻效果.解冻后的精子活力平均为0.58±0.03,质膜完整率为(63.2±1.2)%,顶体完整率为(51.4±2.6)%;精子畸形率最低,仅为(14.0±3.0)%.     

带精浆直接稀释法探讨猪精液低温(4°C)保存的可行性

为研制更为简易、高效的保存稀释液配方及操作程序,探讨4°C条件下稀释保存猪精液的可行性,本实验首次采用带精浆直接稀释法对猪精液的低温保存技术进行了研究。结果表明,在4°C条件下,用Ⅱ液(葡萄糖-卵黄-蔗糖)和Ⅳ液(葡萄糖-卵黄-乳糖)保存猪精液,精子的存活时间和活率分别为144 h、0.517和132 h、0.510,而Ⅰ液(葡萄糖-卵黄-蔗糖-柠檬酸钠)和Ⅲ液(葡萄糖-卵黄-乳糖-柠檬酸钠)精子活率保持0.5以上不到24 h。随着保存时间的延长,四种稀释液中保存的精子活率和顶体完整率均逐步下降,其中Ⅱ液和Ⅳ液均分别在48 h和24 h内下降较快,以后则呈缓慢下降趋势。综上所述,在低温条件下,采用Ⅱ液和Ⅳ液稀释保存猪精液,其精子活率能分别在144 h和132 h内保持0.5以上;所研制配方(Ⅱ液和Ⅳ液)组分简单、配制方便;采用带精浆直接稀释法低温保存猪精液可行,且操作程序简易。     

带精浆直接稀释法探讨猪精液低温(4℃)保存的可行性

为研制更为简易、高效的保存稀释液配方及操作程序,探讨4℃条件下稀释保存猪精液的可行性,本实验首次采用带精浆直接稀释法对猪精液的低温保存技术进行了研究.结果表明,在4℃条件下,用Ⅱ液(葡萄糖-卵黄-蔗糖)和Ⅳ液(葡萄糖-卵黄-乳糖)保存猪精液,精子的存活时间和活率分别为144 h、0.517和132 h、0.510,而Ⅰ液(葡萄糖-卵黄-蔗糖-柠檬酸钠)和Ⅲ液(葡萄糖-卵黄-乳糖-柠檬酸钠)精子活率保持0.5以上不到24 h.随着保存时间的延长,四种稀释液中保存的精子活率和顶体完整率均逐步下降,其中Ⅱ液和Ⅳ液均分别在48 h和24 h内下降较快,以后则呈缓慢下降趋势.综上所述,在低温条件下,采用Ⅱ液和Ⅳ液稀释保存猪精液,其精子活率能分别在144 h和132 h内保持0.5以上;所研制配方(Ⅱ液和Ⅳ液)组分简单、配制方便;采用带精浆直接稀释法低温保存猪精液可行,且操作程序简易.     

奶牛X性控冻精应用研究

利用SX-MOFLO精子分离设备分离奶牛XY精子,将分离后的奶牛X精子冷冻保存。探讨奶牛X性控冻精解冻后存活时间、不同方法进行人工授精的受胎率,为奶牛X性控冻精的大规模推广应用提供依据。方法与结果:(1)取不同种公牛、不同批次的X性控冻精及普通冻精解冻后倒入5 mL试管内摇匀,至37°C水浴锅中,每2 h检测一次精子活力,4 h后每小时检测一次精子活力,直至无运动精子。结果奶牛X性控冻精存活时间为5~12 h,比同种普通精子的存活时间短2~10 h。(2)应用奶牛X性控冻精人工授精的母牛的情期受胎率(59.4%=342/576)与普通冻精的情期受胎率(60.6%=129/213)相比,无显著差异(P>0.05)。奶牛X性控冻精母犊出生准确率93.3%(319/342),极显著地高于普通冻精48.8%(63/129)的母犊率(P<0.001)。且应用奶牛X性控冻精人工授精后的青年牛的情期受胎率(6 5.6%=2 4 0/3 6 6)极显著的高于经产牛的情期受胎率(4 8.6%=1 0 2/2 1 0)(P<0.001)。(3)在母牛发情结束后6~8 h左右进行人工授精,其情期受胎率为67.1%(116/173),显著地高于在母牛发情开始后8~1 2 h进行人工授精5 6.1%(2 2 6/4 0 3)的情期受胎率(P<0.0 1)。(4)在准确判断母牛卵巢上卵泡发育状态的前提下,将精液全部输至发育侧子宫角大弯处,其情期受胎率62.7%(289/461),高于母牛每侧子宫角输1/2支X性控冻精46.1%(53/115)的情期受胎率,但二者之间差异不显著(P<0.05)。研究结果表明应用奶牛X性控冻精进行人工授精,其受胎率与奶牛的经产与否、授精时间和输精部位有关。     

公猪精液冷冻保存的研究

本研究开始于1978年11月,结束于1980年12月。在精液制冻方面着重研究颗粒精液剂量的大小及平衡时间,以求制冻操作简便,使用方便;在解冻方面着重研究解冻液的配方、解冻温度及方法,以求精液解冻后在室温中能保存较久时间,便于在生产中应用。试验取公猪浓份精液用葡萄糖4克、蔗糖1.2克、新鲜牛奶30毫升、新鲜蛋黄10毫升、甘油3毫升、蒸馏水57毫升等配成的稀释液按1:1比例稀释,在8—10℃平衡,采用“浮盆法”制冻,在液氮中保存。试验表明:颗粒精液每颗剂量1.0毫升,质量并不受影响,这在实际应用时,就较小剂量方便得多。平衡时间以2小时的效果最好,解冻后精子活力0.34±0.049,精子复苏率45.2±6.236%。用葡萄糖30克、柠檬酸钠(二水)1.5克、蒸馏水100毫升、安钠加注射液2.0毫升等配成的解冻液解冻效果最好,解冻后精子活力0.37±0.061,精子复苏率47.2±4.578%,精子顶体完好率73.70%,精子顶体评分0.498;解冻后的精液在20—21℃保存4小时精子活力仍达0.34±0.067,精子顶体完好率51.92%,精子顶体评分0.957。解冻温度50℃较37℃好,解冻方法以先干后湿的效果较好。母猪输精试验先后进行8批,共输精母猪132头,情期受胎率71.21%。平均每窝产仔数10.19头。     

不同孵育时间对猪精子转染外源DNA效果的影响

建立稳定的精子载体法技术体系对家畜的转基因育种等研究具有重要意义.为获得公猪精子与DNA最佳共孵育时间,优化建立猪精子载体法技术体系,本研究通过定量PCR、荧光显微镜检测和精液常规分析方法等,研究分析猪精子与DNA不同共孵育时间对猪精子活力、活率、DNA转染率、吸附DNA和内化DNA量的影响.结果表明,多聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)包裹的标记DNA与精子共孵育15、30、60和90 min后,随着孵育时间的延长,精子活力和活率有极显著下降(P＜0.01),而精子转染率呈极显著(P＜0.01)或显著(P＜0.05)上升,吸附外源DNA量和内化外源DNA量也呈上升趋势,但是30 min后不同孵育时间之间差异不显著(P＞0.05).此外,随着共孵育时间的延长,与精子转染率提高幅度相比,精子活力和活率的下降幅度更明显.综合考虑精子活力、活率、转染率、吸附DNA量和内化DNA量等参数,猪精子与外源DNA共孵育时间以30 min为最佳.     

猪精子SPMI和Spermadhesins mRNA表达水平与精子活力的关联

为了解析猪(Sus scrofa)精子中精子黏附蛋白基因家族(Spermadhesins)和精子运动抑制因子SPMI基因的表达与生物功能的关系,本研究采用精子上游法获得高低活力精子,结合体细胞标记基因分析检测所制备的精子RNA纯度,最后应用半定量RT-PCR技术分析高低活力精子mRNA表达差异。RT-PCR电泳显示,高活力精子中所有AQN1、AQN3、AWN(精子黏附蛋白基因家族)、PSPⅠ(猪精液蛋白1)、PSPⅡ(猪精液蛋白2)和SPMI的mRNA表达丰度均低于低活力精子。单因素方差分析显示,低活力精子组中AQN1、AQN3、AWN、PSPⅠ、PSPⅡ和SPMI mRNA相对表达水平均显著高于高活力精子组。研究结果提示Spermadhesins和SPMI基因在精子中的mRNA表达水平有可能作为精子活力的分子标记,从而为猪分子育种提供参考。     

磷脂酶C-zeta基因(PLCz)多态性与中国荷斯坦公牛精液性状相关性研究

睾丸特异性磷脂酶C-zeta(PLCz)在哺乳动物的精卵融合过程及胚胎发育过程中发挥重要作用,主要是激发精卵融合过程中钙波的震荡.本实验选取3个种公牛站的424头中国荷斯坦公牛个体作为实验材料,通过提取种公牛精液中的全基因组DNA,运用DNA测序、PCR-RFLP技术对PLCz基因的全序列进行了单核苷酸多态性分析.实验发现8个新的SNPs位点,其中g.27529 T＞A和g.27597 T＞C位于内含子7,g.47969 G＞A、g.48020 T＞C、g.48079 G＞A、g.48127 G＞T和g.48384 G＞T位于内含子12,而位于外显子8的多态位点g.27768 G＞C发生突变后可以导致第337位的氨基酸丙氨酸改变为脯氨酸,故而此突变为非同义突变.此外,连锁不平衡分析表明g.27529 T＞A、g.27597 T＞C和g.27768 G＞C 3个位点完全连锁,以SNP1 g.27597T＞C代表;g.47969 G＞A、g.48020 T＞C、g.48079 G＞A、g.48127 G＞T和g.48384 G＞T 5个位点完全连锁,以SNP2 g.47969 A＞B代表.通过与公牛精液品质相关性分析表明,SNP2位点与精子畸形率显著相关(P＜0.05),SNP1则与公牛精液品质无显著关联性.然而,突变体SNP1和SNP2所构建的9种单倍型组合与公牛精液品质性状显著相关,单倍型组合TTAB的射精量(P＜0.05)、鲜精密度(P＜0.01)和冻后活力(P＜0.05)显著高于其他单倍型组合,鲜精活力显著高于单倍型组合TTBB(P＜0.05),畸形率则显著低于单倍型组合CTAB(P＜0.05).结果表明,单倍型组合TTAB可以作为中国荷斯坦公牛高精液品质的有效分子标记.     

食蟹猴阴茎电刺激采精及精液特征的初步研究

采用阴茎电刺激采精法对食蟹猴进行采精,电刺激参数设为电压从32～56V,频率25～30Hz范围调整,波宽固定为10ms,电刺激时间1～10s,在非麻醉情况下成功采精,采精量为(0.20±0.16)mL。在采精过程中没有发现阴茎损伤。对食蟹猴精液特征进行研究,结果发现精子的活力为(88.37±9.33)%,精子密度为(2169.79±1922.38)×106个/mL。扫描电子显微镜观察,精子的形态特点是头部的长径比较短而显两端较钝圆的卵圆形,长(6.58±0.28)μm,宽(4.12±0.20)μm;尾部中段长(13.47±0.36)μm,主段和末段长(67.08±1.52)μm。平均死活精子率9.1%,平均精子畸形率为13.1%,平均精子顶体异常率为3.3%。     

γ射线辐照对黄斑星天牛雄虫精子超微结构的影响

应用透射电镜观察黄斑星天牛雄虫精子及其辐照后精子的超微结构。精子分为头尾两部分,头部主要结构为精核,尾部由线粒体衍生物及微管系统(轴丝)组成。轴丝由副微管、双微管和中心微管组成,呈9+9+2构型。经80和120Gy的γ射线辐照后,黄斑星天牛出现了多个精子相粘连现象,粘连状态下有些附体连在一起形如弯曲的线形,一些线粒体衍生物也发生粘连。未发生粘连的精子内细胞器排列分散,线粒体衍生物以及轴丝两侧附体形状也发生改变。80和120Gy辐照虫之间的精子超微结构变化未见明显差异。     

牛分离精子ICSI后卵母细胞激活方法的研究

本研究的目的是比较采用由流式细胞仪分离的牛X和Y精子进行胞质内精子注射(ICS I)后,两种不同激活方法对ICS I卵母细胞的激活效果。ICS I后,卵母细胞用5μm o l/L的Ionom yc in(离子霉素)处理5 m in后,先在化学成分明确培养液(CDM-1)中培养3 h,然后再在含有1.9 mm o l/L 6-DM AP(6二-甲氨基嘌呤)的培养液中培养3 h(Ionom yc in CDM-1 DM AP),或用5μm o l/L的Ionom yc in处理5 m in后,不经过CDM培养直接转入1.9 mm o l/L DM AP的培养液中培养3 h(Ionom yc in DAM P)。结果发现,两种激活处理的效果差异不显著。