转Vip3Aa基因的球孢白僵菌工程菌的构建及其对马尾松毛虫毒力的增效作用

根据苏云金杆菌营养期杀虫蛋白基因Vip3Aa序列设计全基因扩增引物,并在引物两端添加合适的酶切位点进行PCR扩增,纯化的PCR产物和载体pbarGPE1分别经Xho I和EcoR I双酶切、连接,构建真菌表达载体pbarGPE1-vip3Aa。将构建好的质粒经Sca I酶切线性化后,利用芽生孢子转化法转入昆虫病原真菌球孢白僵菌Bb13菌株内,得到白僵菌工程菌株Bb13V。RT-PCR结果证明Vip3Aa在工程菌株中已得到成功转录。在室内恒温25℃条件下,用喂食、喷雾以及两者相结合的方法,分别测定1×105、1×106、1×107、1×108和2×108孢子.mL-1 5个不同孢子浓度下原始菌株和工程菌株对二龄马尾松毛虫的毒力。结果表明,在前4种不同浓度的处理条件下,采取3种不同的处理方式,工程菌株均比喷雾处理的原始菌株致死率提高30%以上;喷雾处理的毒力提高33.6~62.1倍;喂食处理的致死率均高于喷雾处理。在1×108孢子.mL-1浓度下,喂食处理的致死率显著高于喷雾处理,致死中时缩短6.89 d。因此,Vip3Aa基因在转入白僵菌后得到了表达,从而赋予白僵菌可观的胃毒作用,使得工程菌对松毛虫的毒力明显增强。     

球孢白僵菌MZ060812菌株对西花蓟马的致病性研究

【目的】明确球孢白僵菌MZ060812菌株对西花蓟马的致病性,为该菌株在农业害虫防治中的开发应用及后续研究奠定基础。【方法】采用浸渍法,测定球孢白僵菌MZ060812菌株不同孢子浓度对西花蓟马成虫和若虫的致病性。【结果】在3.0×105～3.0×108mL-1浓度下,球孢白僵菌MZ060812菌株对西花蓟马成虫的致死中时间(LT50)值分别为9.61,6.63,5.57和4.49d;致死中浓度(LC50)分别为3.307×108、1.528×107、4.030×106和5.839×105mL-1。对若虫的LT50值分别为8.51,6.81,5.00和4.02d;LC50分别为2.352×107、4.933×106、2.151×106和5.068×106mL-1。【结论】球孢白僵菌MZ060812菌株对西花蓟马有较好的防治效果。     

玫烟色拟青霉菌株的毒力测定

采用喷雾法和浸蘸法,进行了玫烟色拟青霉PF9606菌株对桃蚜和菜青虫的毒力测定。结果表明:玫烟色拟青霉PF9606菌株对桃蚜和菜青虫2、3龄幼虫有较强的致病力,在2×105~2×108孢子.mL-1浓度范围内,随着浓度的提高,毒力明显增强,但对枣尺蠖、棉铃虫和甘蓝夜蛾等则没有致病力。菜青虫在接菌2~3 d表现出明显的感病的症状,但桃蚜感病后体表无明显的感病症状。经测定玫烟色拟青霉PF9606菌株对桃蚜和菜青虫2、3龄幼虫的致死中浓度分别为8.71×106孢子.mL-1、9.6×106孢子.mL-1和1.81×107孢子.mL-1。     

金龟子绿僵菌对浙江双栉蝠蛾幼虫的感染试验

应用5种不同金龟子绿僵菌菌株对浙江双栉蝠蛾幼虫进行室内感染试验。结果表明,在5种金龟子绿僵菌菌株中,Ma1291-2菌株对浙江双栉蝠蛾幼虫的感染效果最佳,校正死亡率达76.67%,其LT50值为5.4 d。不同浓度M a1291-2菌株悬浮液对浙江双栉蝠蛾幼虫的感染试验表明,随着浓度的增加,致病力加强,10 d内的LC50为1.98×105孢子.mL-1。该菌株的致死中时间随着浓度的增加而缩短,5.05×108孢子.mL-1浓度处理下的LT50最短,为1.8 d;而1.05×105孢子.mL-1浓度处理下的LT50最长,为8.7 d。该菌株有较好的应用价值。     

溶藻弧菌对华贵栉孔扇贝体内几种酶活性的影响

对华贵栉孔扇贝（Chlamys nobilis）注射不同密度的溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）,于注射后6,12,18,48,72h测定体内过氧化氢酶（CAT）、超氧化物岐化酶（SOD）、碱性磷酸酶（ALP）和酸性磷酸酶（ACP）的活力。结果表明：5×107cell.mL-1,5×108cell.mL-1组血淋巴中CAT活性均有升高趋势,其中5×108cell.mL-1组在18h极显著增加（P≤0.01）,24h显著增加（P≤0.05）。5×108cell.mL-1组SOD活性最初表现为抑制,在12h和18h显著低于对照组（P≤0.05）,24h后明显升高,5×107cell.mL-1组与对照组相比差异不明显。肝脏中ALP活性在18h与对照组相比,5×108cell.mL-1组极显著升高（P≤0.01）,5×107cell.mL-1组显著升高（P≤0.05）。注射后ACP活性有明显升高的趋势,5×108cell.mL-1组在12h和18h显著高于对照组（P≤0.05）,且在注射后24h5×107cell.mL-1,5×108cell.mL-1组活性均达到最高。     

紫外线诱变玫烟色棒束孢IF-1106菌株最佳条件的筛选

为探究紫外线诱变玫烟色棒束孢IF-1106菌株的最佳条件,本研究以玫烟色棒束孢IF-1106菌株为对象、紫外线为诱变条件,通过单因素试验,分别选取3个较合适的孢子悬浮液浓度、紫外线诱变时间、紫外线诱变距离进行正交试验,并以菌落直径和产孢量为指标进行条件筛选。结果表明,不同的孢子悬浮液浓度、紫外线诱变时间、紫外线诱变距离均可对菌落直径及产孢量产生影响。其中在菌株的孢子悬浮液浓度为1.0×106 cfu·mL-1、处理时间为10 min、距离为30 cm的条件下试验结果最佳,在此诱变条件下,玫烟色棒束孢IF-1106菌株菌落直径为38.08 mm,产孢量1.26×107 cfu·mL-1。综合而言,最适紫外线诱变玫烟色棒束孢IF-1106菌株的孢子悬浮液浓度为1.0×106 cfu·mL-1、处理时间为10 min、距离为30 cm。     

1株海洋芽孢杆菌抑制黄曲霉生长和毒素合成的研究

采用滤纸片扩散法从海洋中分离筛选出1株抑制黄曲霉活性高的微生物,利用16S rDNA特异性扩增技术对其菌种进行鉴定,并研究其对黄曲霉菌丝延长、孢子萌发和毒素合成的影响,用Beacon黄曲霉毒素检测试剂盒测定黄曲霉毒素含量.结果表明:该菌株为一株海洋巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium),其菌体对黄曲霉菌丝延长、孢子萌发和黄曲霉毒素生物合成都有明显地抑制作用,1×109CFU·mL-1菌体对黄曲霉孢子萌发的抑制率达87%,1×108CFU·mL-1菌体对黄曲霉毒素合成的抑制率可达50.75%.初步认为其抑制机制是该海洋巨大芽孢杆菌可产生某种次级代谢产物来抑制黄曲霉孢子萌发和菌丝延长.     

茶卷叶蛾寄生真菌的分离、鉴定及毒力测定

从茶园中自然羅病而死的茶卷叶蛾(Homona coffearia)幼虫僵虫上分离纯化出1株病原真菌,经核糖体DNA(rDNA)转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)鉴定为球孢白僵菌(Beauveria bassiana),并命名为JYBb201菌株。对该菌株在PDA、PPDA和SDAY3种培养基上的生长速度和产孢能力进行测定,发现其在PDA上平均生长速度最快,菌丝的日均增长量达4.30 mm。但在SDAY培养基上培养16 d的产孢量比其他两种培养基大,达4.30×107孢子.mL-1。对茶卷叶蛾幼虫的毒力测定结果显示,该菌具有较高的杀虫活性,以2.16×108孢子.mL-1和4.32×107孢子.mL-1的菌液处理,9 d后其校正死亡率均达到94.74%,表明JYBb201菌株是1株对茶卷叶蛾幼虫具有潜在防治作用的病原真菌菌株。     

球孢白僵菌MZ041016菌株对桔小实蝇的毒力测定

以桔小实蝇成虫、幼虫和蛹为目标昆虫,利用不同分生孢子浓度的球孢白僵菌MZ041016菌株对其进行室内毒力测定。结果表明,供试菌株在室内对桔小实蝇成虫、幼虫和蛹具有较强的毒力。菌株分生孢子浓度为3.6×105个/mL时,可造成桔小实蝇各虫态大量死亡,在3.6×108个/mL孢子浓度下成虫死亡率达95.45%,致死中时间(LT50)为3.562d,第8天的致死中浓度(LC50)为2.14×105个/mL;在3.6×108个/mL孢子浓度下幼虫死亡率达95.94%,LT50为4.926d,第8天的LC50为3.03×105个/mL;3.6×108个/mL孢子浓度下蛹死亡率达78.15%,LT50为5.358d,第8天的LC50为3.31×105个/mL。     

苏云金芽孢杆菌对黏虫致病力及生长发育的影响

黏虫[Mythimna separata(Walker)]作为一种易爆发成灾的迁飞性害虫,是我国危害最重的粮食害虫之一.采用生物测定方法,测定9株苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)菌株对黏虫致病力,筛选出一株对黏虫具有较高致病力菌株Bt46.该菌株对1龄幼虫致病力最弱,对2龄幼虫致病力最强,致死中浓度LC50为5.25×106芽孢·mL-1,在1×108芽孢·mL-1浓度2龄幼虫24 h校正死亡率达81.08％,96 h达100％.菌株Bt46对黏虫成虫具有致病性,其致死中浓度LC50为4.66×108芽孢·mL-1,1×1010芽孢·mL-1处理成虫168 h校正死亡率达80.77％.该菌株半致死浓度处理黏虫对黏虫生长发育产生不利影响,处理幼虫虽对当代存活群体生长发育影响较小,但后代卵孵化率显著降低;处理成虫,其寿命显著缩短、产卵量减少约2/3,后代1龄幼虫死亡率达24.29％.研究结果为Bt在黏虫生物防治中应用提供理论和试验证据,有助于推动黏虫绿色防控技术发展.     

白僵菌和绿僵菌蛋白对松墨天牛致病性的研究

从4株白僵菌和1株绿僵菌中提取了10种全蛋白提取液,以林业害虫松墨天牛幼虫为试虫,筛选出菌株Bb36的全蛋白提取液Bb36W-Z和Bb36N-Z,再从中分离出12种单一蛋白提取液,生测发现虫生真菌蛋白Bb36W-D对松墨天牛幼虫具有较强的注射毒性,经其处理后的试虫酯酶谱发生明显变化,致使松墨天牛幼虫内部组织发生病变.     

不同寄主多主棒孢对橡胶树叶片组织防御酶活性的影响

以分离自4种寄主的5株多主棒孢菌株接种橡胶树叶片,均得到成功侵染。并按时间顺序测定了来自不同寄主的多主棒孢侵染橡胶树叶片后,细胞防御系统相关的4种酶活性的变化。结果表明,接种来自不同寄主的多主棒孢后,对橡胶树叶片4种防御酶活性的影响不同。其中分离自橡胶树的HCCGD01和HCCHN42两个菌株侵染后,橡胶树叶片组织4种防御酶活性变化最大,均有明显增强;来自木薯的MaCCGD02侵染橡胶树叶片后,酶活性变化次之;分离自番木瓜的CpCCYN01和黄瓜的PaCCSD04多主棒孢菌株侵染后,除PAL外,β-1,3-葡聚糖酶、POD、PPO活性变化很小。     

黄颡鱼体表溃疡病病原菌分离鉴定及药敏试验

[目的]对广西永福县某养殖场患溃疡病的黄颡鱼进行病原菌分离鉴定和药敏试验,为有效防治该病提供科学依据.[方法]用常规方法从患典型溃疡病的濒死黄颡鱼的心脏、肝脏及病灶等处取样分离病原菌,通过人工感染试验确定分离菌株的致病性,用API 20NE生化鉴定系统对其进行鉴定,药敏试验采用纸片扩散法.[结果]分离获得的4株细菌(YFHS01、YFHS02、YFHS03和YFHS04)对健康黄颡鱼均有很强的致病性,都是黄颡鱼体表溃疡病病原菌,其中YFHS01为温和气单胞菌(Aeromonas sobria),YFHS02、YFHS03和YFHS04为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila).4株病原菌对青霉素和氨苄青霉素均不敏感;对复达欣、先锋霉素Ⅵ、菌必治、庆大霉素、新霉素、氟哌酸、恩诺沙星、环丙沙星、多粘菌素B、左氟沙星、先锋必、特治星、氟苯尼考、盐酸沙拉沙星、复方磺胺嘧啶等15种药物高度敏感.[结论]广西永福县某养殖场黄颡鱼体表溃疡病是由嗜水气单胞菌与温和气单胞菌混合感染引起,可选用复达欣、先锋霉素Ⅵ、菌必治、庆大霉素、新霉素、氟哌酸、恩诺沙星、环丙沙星、多粘菌素B、左氟沙星、先锋必、特治星、氟苯尼考、盐酸沙拉沙星、复方磺胺嘧啶等15种药物进行防治.     

入侵红火蚁防治方法的研究进展

介绍了世界各国对入侵红火蚁加强植物检疫的概况,详述了入侵红火蚁的化学防治、物理防治和生物防治方法,并对各种方法进行了客观评价。     

单个蚁巢红火蚁对不同距离蚂蚁类群的影响

 【目的】研究新定殖单个蚁巢红火蚁入侵荒草地后对距蚁巢不同距离蚂蚁类群的影响。【方法】采用陷阱法和诱饵诱集法调查距红火蚁蚁巢不同距离的蚂蚁类群种类及其数量变化,并应用主成分分析法和群落多样性指数探讨新定殖红火蚁对距蚁巢不同距离蚂蚁类群数量动态变化及其多样性的影响。【结果】红火蚁入侵后与本地蚂蚁竞争激烈,红火蚁对距小蚁巢1 m、大蚁巢1和3 m处蚂蚁类群多样性的影响较大。在距红火蚁小蚁 巢1m处,红火蚁工蚁数量随时间推移逐渐减少,在红火蚁占较大比例的6月（45.02%）及占较小比例的8月（16.01%）,蚂蚁个体数和优势度指数增加,物种数、多样性指数和均匀度指数下降。在距红火蚁大蚁巢1、3 m处,红火蚁工蚁数量随时间推移呈现先降而后逐渐上升趋势,在红火蚁占较小比例的6月（48.36%,1 m）、7月（34.06%,3 m）和红火蚁占较大比例的9月（89.94%,1 m;59.52%,3 m）,蚂蚁优势度指数增加,多样性指数和均匀度指数下降。主成分分析结果还揭示了引起荒草地单个蚁巢不同距离蚂蚁类群数量变动的主要蚂蚁种类及其变化情况。【结论】两种入侵荒草地的红火蚁种群对距其蚁巢较近距离蚂蚁类群多样性的影响较大。在小蚁巢和大蚁巢近距离处,红火蚁工蚁占比例较大,本地蚂蚁物种数、个体数、蚂蚁类群优势度指数增加,多样性指数和均匀度指数下降。     

The Prokaryotic Expression and Bioactivity of the Recombinant Red Fire Ant Venom Allergen Sol i 4

The sting of red imported fire ant （RIFA） could cause serious allergic response in fraction of people. These allergic reactions are mainly caused by its venom, especially venom allergen Sol i 1-4. To produce large amount of RIFA venom allergen Sol i 4 for diagnosis of RIFA allergy and allergen-specific immunotherapy, the gene encoding this protein was amplified and cloned into the prokaryotic expression vector pET43, la. The recombinant plasmid was used to transform competent cells and the recombinant proteins were expressed in E. coll. SDS-PAGE and Western blotting analysis indicated that high-level expression of Sol i 4 protein was successfully achieved. Allergenic activity analysis of the recombinant allergen Sol i 4 was then performed on rabbit. The result showed that the recombinant protein obtained had significant allergenic activity. It indicated that the recombinant allergen Sol i 4 of RIFA venom was successfully expressed in E. coli, which provided foundation for further developing therapeutic and diagnosis reagents of RIFA allergy.     

广西猪支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

为掌握广西猪传染性萎缩性鼻炎（AR）发病情况、猪支气管败血波氏杆菌（Bb）流行血清型及耐药情况,分别从广西南宁、上林、贵港、武鸣等地4个规模化猪场和1个屠宰场采集到247份猪鼻腔分泌物样品,径常规细菌分离获得57株Bb可疑菌株,以生理生化试验和PCR鉴定等方法对可疑菌株进行鉴定,并根据O、K抗血清凝集试验进行分型.结果表明,57株可疑菌株均确定为Bb,其中6株为Ⅰ相Bb、14株为Ⅱ相Bb、37株为m相Bb,且Ⅰ相Bb毒力较Ⅱ相、Ⅲ相Bb毒力强;药敏试验结果表明,大多数Bb对复方新诺明、阿米卡星、新霉素、庆大霉素和环丙沙星等高度敏感,对阿莫西林、青霉素、痢特灵、氨苄青霉素、呋喃妥因、头孢氨苄、林可霉素、头孢噻吩、恩诺沙星、万古霉素和利福平等不敏感.     

云南昭通天麻共生蜜环菌优良菌株筛选

研究了自云南昭通本地分离获得的4株天麻共生蜜环菌的生长特性,并与1株外地优良天麻共生蜜环菌京-234进行对比。结果显示：各菌株间存在明显差异,菌索平均生长速度依次为京-234〉SNA04〉SNA02〉SNA03〉SNA01 菌丝萌发速度、菌索分枝状况、荧光强度及暗培养18 d后菌索生物量等生长特性表现最好的为SNA04,其次为京-234,SNA01和SNA02较差。4株昭通天麻共生蜜环菌中,菌株SNA04性状最优,SNA03菌株次之。     

5株溶藻抑藻细菌的筛选及果胶酶活性的初步研究

为了解决溶藻细菌分离筛选难的问题,试验以果胶为唯一碳源来分离溶藻菌,然后将分离到的菌株和试验室纯培养的铜绿微囊藻进行溶藻试验,并将溶藻效果与果胶酶活性进行比较分析,探讨细菌溶藻与细菌的果胶酶活性之间的关系。结果发现,分离到的5株细菌均具有较好的溶藻特性,试验第1天就出现菌胶膜包裹微囊藻下沉黄化的想象,5株菌具最佳溶藻效果时的菌液藻液体积比w01>w03=w05>w04>w02;达最佳降解效果的时间w05>w04>w01=w02>w03;持续抑藻时间w04>w05>w01>w02>w03;果胶酶活性w04>w01>w03>w02=w05。以果胶为唯一碳源的培养基可以有效分离到溶藻细菌,但细菌的溶藻效果与果胶酶活性之间无线性关系。     

安徽望江棉区棉枯萎病生理型测定

从望江棉区分得5个菌株（系）,经寄主致病性测定,结果表明：菌株WJF03、WJF04属生理型Ⅰ,致病力强,与对照菌株陕F13－1相似;菌株WJF01、WJF02和WJF05属生理型Ⅱ,致病力中度,与另一对照菌株苏宁相似。