分子伴侣及在病毒增殖中的作用

随着蛋白质研究技术的不断发展，数以百种的蛋白质三维结构已研究的较为清楚，但对于这些蛋白质折叠成天然构象的途径和机制尚知之甚少。通常认为蛋白质的1级结构决定了蛋白质的3级和4级结构，但近年来研究表明，在很多蛋白质的折叠与装配过程中，有其他蛋白质或酶的参与，其中分子伴侣就是目前研究得最多也是研究最热的一种。病毒是细胞内寄生物，分子伴侣与病毒的增殖过程密切相关，从病毒复制的起始、转录的进行、翻译的完成到病毒粒子的装配成熟，甚至病毒在宿主体内的转运都有分子伴侣的参与。随着病毒与分子伴侣相互关系研究的深入，产生了抗病毒的又一可能新途径。     

表达H3N2亚型猪流感病毒HA基因重组伪狂犬病病毒的构建

将SV40启动子控制下的LacZ基因表达盒和CMV启动子控制下的H3N2亚型猪流感病毒（SIV H3N2）的HA基因插入到伪狂犬病病毒（PRV）通用转移载体pBdTK-Uni中，获得转移载体pLTK-HA。将该载体与PRV Bartha-K61株基因组DNA通过脂质体法共转染Vero细胞，经过10代蓝斑筛选、纯化和PCR鉴定获得了一株插入SIV HA基因的重组伪狂犬病病毒，命名为rPRV-HA。Western blotting和间接免疫荧光试验证实HA基因在重组病毒感染的细胞中获得了表达。用不同的细胞（PK-15、IBRS-2、Vero和鸡胚成纤维细胞）对该重组病毒与亲本病毒的增殖滴度和致细胞病变进行比较，未见显著差异，对第30代重组病毒的HA基因进行序列分析，表明该重组病毒遗传性状稳定。     

一例猪繁殖与呼吸综合征的防制

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS，蓝耳病），其病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV，蓝耳病病毒），分为欧洲型（LV）和美洲型（VR）两种基本的基因型，我国为美洲型的猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株，本病给养猪业造成了较大的经济损失．现将一起典型病例报告如下。     

三种猪繁殖障碍性病毒混合感染的分子生物学调查

根据GenBank登录的PRRSV ORF7、PCV-2 ORFl基因及PRV TK基因的核苷酸序列设计合成引物，建立了分别用于检测PRRSV、PRV及PCV-2的RT-PCR及PCR方法。应用该方法对77份可疑病料进行了检测，以调查猪群中PCV-2与PRRSV和(或)PRV混合感染情况。结果表明，24份样品表现为PRRSV与PCV-2混合感染，占样品总数的31．2％；17份样品检测为PRRSV与PRV混合感染；9份样品表现为PCV-2与PRV混合感染，占11．7％；另外，还有一定比例的三重感染，共8个样品，占10．4％。结果显示，猪群中PRRSV、PRV与PCV-2的混合感染现象比较普遍。     

羊痘病毒和羊口疮病毒二重PCR鉴别检测方法的建立

针对羊痘病毒（capripoxvirus，CaPV）的A29L基因和羊口疮病毒（orf virus，ORFV）的H3L基因，设计、合成了2对特异性引物以进行二重PCR。结果表明，该方法可以在数小时、在同一反应体系中清晰地区分CaPV和）ORFV，其PCR产物大小分别为413bp和708bp，与预期的片段大小相符，序列分析证实目的基因序列与已发表的序列一致；该检测方法的灵敏度可达1个病毒蚀斑形成单位（PFU）。采用二重PCR对12株CaPV、ORFV和相关病毒、细菌培养物，以及22份田间样品进行检测，与预期结果完全一致，且与相关病毒或健康羊组织样品无交叉反应。结果表明，该方法具有快速、敏感、特异等优点，可作为临床样品中CaPV和ORFV的鉴定和诊断的有效方法。     

口蹄疫嵌合病毒疫苗的研究

口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）ＶＰ１（１３２－１５９位残基）的Ｇ－Ｈ环是病毒粒子表面的主要特征，它在疫苗效力，抗原变异和细胞结合中起着主要作用。我们用ＦＭＤＶ的感染性ｃＤＮＡ构建一种Ａ血清型病毒，在该病毒中，其Ｇ－Ｈ环被Ｏ或Ｃ血清型病毒的同源序列取代。这种嵌合病毒的复制滴度高，并表现与野毒相似的噬斑形态。由此证明，Ｇ－Ｈ环可在血清型之间交换。单克隆抗体分析表明，环内所含抗原表位可被转移至嵌合体，并保持由Ａ     

表达多个外源基因的重组伪狂犬病病毒的构建及其细胞培养特性研究

将SV40启动子控制下的LacZ报告基因表达盒与分别在CMV启动子控制下的含有猪瘟病毒（CS-FV）E2基因及猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）GP5基因的表达盒插入到伪狂犬病病毒（PRV）Bartha-K61株TK基因中，通过蓝斑筛选获得了一株插入CSFVE2、PRRSVGP5与LacZ基因的重组伪狂犬病病毒，命名为rPRV-E2-GP5。经Western blot、间接免疫荧光试验证实E2、GP5基因在重组病毒感染细胞中获得了表达。重组病毒感染Vero、PK-15、IBRS2和CEF细胞后的增殖滴度和致细胞病变特征与亲本病毒比较，无显著差异。本试验结果表明在PRV基因组中可以插入多个外源基因，为进一步研究多价基因工程载体疫苗奠定了基础。     

犬瘟热病毒及新近发现的相关病毒

犬瘟热病毒（CDV）与新近发现的海豹瘟病毒1型（PDV－1）和海豹瘟病毒2型（PDV一2）这三种病毒均属于副粘病毒科麻疹病毒属的成员．病原特性极为相似。人们发现犬瘟热病毒至少已有两个世纪（Jenner，1809），而PDV－1，PDV－2则是近些年才报道的。1988年丹麦和西北欧的海豹群暴发了传染病，引起港湾海豹（PhocaVitulina）及发海豹的大批死亡”’，据研究确是其病原为PDV－1。次年，海豹瘟又在前苏联的贝加尔湖流行起来，病原为PDV一2。这两种类型的海豹瘟临床症状及病理变化极象犬瘟热，海豹感染后体内也出现CDV中和抗体。这三种…     

用核酸探针检测新城疫病毒的研究

用光敏生物素标记鸡新城疫ｃＤＮＡ制备核酸探针，经斑点杂交和碱性磷酸酶显色后，探针同该ｃＤＮＡ的ＰＣＲ产物，ＰＣＲ产物重组子和新城疫强，弱毒株呈现阳性反应，与ＩＢＶ，ＩＬＴ，ＭＧ和正常尿囊液等均呈阴性杂交反应，田间病料的杂交试验也表明该ｃＤＮＡ探针是且特异的检测方法。     

多重PCR同时检测口蹄疫病毒、猪水疱病病毒和水疱性口炎病毒

根据基因库中的口蹄疫病毒（FM—DV），猪水疱病病毒（SVDV）和水疱性口炎病毒（VSV）各基因序列，设计了与FMDV，SVDV和VSV互补的3对特异性引物，对样品中的cDNA模板进行了多重PCR扩增及反应条件的优化，结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带，分别为189bp，125bp和300bp。用这3对引物对病毒样品cDNA模板进行多次扩增，均能稳定得到与设计相符合的3条特异性条带。本试验能特异、敏感、快速地鉴定FMDV，SVDV和VSV。