苏云金杆菌8010cryIA基因的克隆和表达

苏云金杆菌８０１０ｃｒｙＩＡ基因的克隆和表达ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｒｙＩＡＧｅｎｅｏｆＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ８０１０苏云金杆菌是目前世界上产量最大的微生物杀虫剂。应用生物工程技术进行遗传操纵，可以提高野生型...     

苏云金杆菌cry Ⅰ A(a)、cry Ⅰ A(b)和cry Ⅰ A(c)基因型的PCR分析鉴定

根据苏云金杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）杀虫晶体蛋白基因的结构特点,合成了ｃｒｙⅠ基因５′端特异引物和３′端共同引物,利用ＰＣＲ扩增,使不同基因引物产生不同长度的扩增产物,通过扩增产物片段的分子量大小来确定菌株所含杀虫基因类型．本研究对福建农业大学生物技术中心分离和保存的２０个菌株进行了ｃｒｙⅠＡ（ａ～ｃ）基因类型的ＰＣＲ鉴定．结果表明：４个菌株含有ｃｒｙⅠＡ（ａ）、ｃｒｙⅠＡ（ｂ）和ｃｒｙⅠＡ（ｃ）基因,２个菌株含有ｃｒｙⅠＡ（ａ）和ｃｒｙⅠＡ（ｃ）基因,其余菌株不含所鉴定的基因类型．     

苏云金杆菌cryⅠA（a）,cryⅠA（b）和cryⅠA（c）基因型的PCR？…

根据苏云金杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）杀虫晶体蛋白基因的结构特点,合成了ｃｒｙⅠ基因５‘端特异引物和３’端共同引物,利用ＰＣＲ扩增,使不同基因引物产生不同长度的扩增产物。通过扩增产物片段的分子量大小来确定菌株所含杀虫基因类型。本研究对福建农业大学生物技术中心分离和保存的２０个菌株进行了ｃｒｙⅠＡ（ａ－ｃ）基因类型的ＰＣＲ鉴定。     

苏云金芽胞杆菌cryI基因探针的制备及质粒基因定位

将ｐＥＳＩ经ＥｃｏＲＩ酶解后回收纯化的含有苏云金芽胞杆菌ｃｒｙＩ基因高保守区的ＥｃｏＲＩ－Ｆ片段重组到ｐＳＥＬＥＣＴ－１的ＥｃｏＲＩ位点，通过ＤＩＧ体外标记转录制备高灵敏度、背景清楚的ＲＮＡ探针，并利用该探针进行苏云金芽胞杆菌８０１０杀虫基因定位．结果表明，该菌株编码杀虫晶体蛋白的基因位于相对分子质量３７×１０６的质粒上     

益生地衣芽孢杆菌天门冬氨酸激酶Ⅱ基因的PCR扩增及序列分析

通过聚合酶链反应（ＰＣＲ） 扩增得到了益生地衣芽孢杆菌Ｈ８８ － ３ 株天门冬氨酸激酶（Ａｓｐａｒ ｔｏｋｉｎａｓｅ,ＡＫ） Ⅱ基因,并用ＡＢＩＰＲＩＳＭＴＭ ３７７ ＤＮＡＳｅｑｕｅｎｃｅｒ 进行序列测定,所得核苷酸序列及推导的氨基酸序列与枯草芽孢杆菌ＶＢ２１７ 株进行了比较,结果它们的同源性非常高。     

杨树冰核细菌溃疡病寄主树栖伴生细菌的研究

对感病寄生Ａ１００、Ａ１５和美×青杨树枝、干、根、叶上的细菌进行了分离、纯化和鉴定、结果表明伴生细菌有１０种。它们是：嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ　ｈｙｄｒｉｏｇｕｋａ）、恶臭假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｕｔｉｄａ）、荧光假单胞菌（Ｐ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、丁香假单胞菌（Ｐ． ｓｙｒｉｎｇａｅ）、成团肠杆菌（Ｅｎｔｅｒｂａｃｔｅｒ ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）、短小芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ）、栗褐芽孢杆菌（Ｂ． ｂａｄｉｕｓ）、巨大芽孢杆菌（Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、腊状芽孢杆菌（Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ）地衣芽孢杆菌（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）。这些细菌在感病杨树不同部位出现的频率各异,在韧皮部细菌种群较多．在心材则较少。     

苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因cry1E的改造

利用ＰＣＲ片段延伸连接技术将ｃｒｙ１Ｅ的原启动子准确地更换与ｃｒｙ３Ａ启动子,重组ｃｒｙ１Ｅ经载体ＰＨＴ３１５克隆至枯草芽胞杆菌无芽胞突变株ＩＳ８和苏云金杆菌以色列亚种无晶体突变株４Ｑ７,获得重组菌３Ａ１ＥＢｓ和３Ａ１ＥＢｔ。聚丙烯酰胺凝胶电泳和生物测定表明,克隆改造后的ｃｒｙ１Ｅ可表达,表达的Ｃｒｙ１Ｅ对海灰翅夜蛾有毒。     

苏云金芽孢杆菌达姆斯塔特亚种新菌株Btd61的鉴定及其晶体蛋白基因型的初步分析

用选择性培养基从舞毒蛾（Ｌｙｍａｎｔｒｉａｄｉｓｐａｒ）死虫体中分离到苏云金芽孢杆菌新菌株Ｂ－６１，经分类鉴定属苏云金芽孢杆菌达姆斯塔特亚种（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｓｕｂｓｐ．ｄａｒｍｓｔａｄｉｅｎｓｉｓ），简称Ｂｔｄ６１．该菌株有８种质粒，４种晶体蛋白，合成二锥体小晶体和不规则大晶体２种伴孢晶体颗粒，对大蜡螟（Ｇａｌｅｒｉａｍｅｌｏｎｅｌａ）和舞毒蛾皆具强毒性．Ｂｔｄ６１携带Ｂ１型的溶原性噬菌体，但又对Ｂ１型的Ｔｂ１０噬菌体有抗性．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交实验结果表明Ｂｔｄ６１所含的晶体蛋白基因属ｃｒｙⅠ基因型     

牛生长激素cDNA的克隆与序列分析

从平脑垂体中分离总ＲＮＡ，经ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）一纤维素柱纯化ｍＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ，经ＰＣＲ技术扩增牛生长激素（ｂＧＨ）ｃＤＮＡ序列，长度为６２０ｈｐ，将ＰＣＲ产物克隆于ｐＵＣ１９Ｓｍａｌ位Ⅰ点转化大肠杆菌ＤＨ５α，经蓝白斑筛选，获得重组克隆，分离重组质粒，经限制性内切酶酶切分析后，进行序列分析。结果表明，一质粒中所含克隆片段为ｂＧＨｃＤＮＡ全序列，与国外所发表的ｂＧＨ核旮酸序列基本相同     

乙肝表面抗原与促黄体激素释放激素的融合基因5‘端改造及其在大 …

应用聚全酶链反应（ＰＣＲ）对畜型和禽型两个融合基因ＨＢｓＡｇ／ＬＨＲＨ的５’端分别作了改造,切去了融合基因起始密码ＡＴＧ前一段非编码序列６１个碱基,将改造后的融合基因插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｅ １１ ＫＳ＾＋质粒中。琼脂糖凝胶电泳以及序列分析均表明改造和克隆成功。将改造后的融合基因克隆到含Ｔ７Ｐｒｏｍｏｔｅｒ强启动子的表达载体ｐＥＴ１５ｂ中,经异丙基硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导,在Ｅ．ｃｏｌｉＤＥ     

单抗─胶体金法及PCR技术诊断柑桔黄龙病

单抗┐胶体金法及ＰＣＲ技术诊断柑桔黄龙病ＴｈｅＤｉａｇｎｏｓｉｓｏｎＨｕａｎｇｌｏｎｇＤｉｓｅａｓｅｏｆＣｉｔｒｕｓｗｉｔｈＣｏｌｏｉｄａｌＧｏｌｄＬａｂｅｌｅｄＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｙＴｅｃｈｎｉｑｕｅａｎｄＰＣＲＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉ...     

以PCR鉴定转基因植株的微量DNA提取方法

报道了将ＤｒＭａｒｃＺａｂｅａｕ的ＡＦＬＰ（ＡｍｐｌｉｆｉｅｄＦｒａｇｍｅｎｔＬｅｎｇｔｈＰｏｌｙｍｏｒ－ｐｈｉｓｍ）技术中的ＤＮＡ提取方法用于以ＰＣＲ（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ）技术鉴定转基因植物——拟南芥、烟草和芜菁中。该方法需约１ｈ可完成植物ＤＮＡ的提取，样品用量仅为３０～１００ｍｇ，产量可达３０～８０μｇ／ｇ．粗提ＤＮＡ（溶于１０μＬＴＥ缓冲液）不必经过纯化，用ＴＥ缓冲液稀释５～１０倍即可直接用于ＰＣＲ分析。在拟南芥、烟草和芜菁转基因植物鉴定中应用表明这一方法是目前以ＰＣＲ法鉴定转基因植株Ｔ１代单株幼苗的一种简便、快速、有效的方法。     

松材线虫的PCR快速诊断研究

松材线虫的ＰＣＲ快速诊断研究①许建平１郑经武１王建伟２龚鸿飞１李德葆１（１浙江农业大学生物技术研究所，杭州３１００２９；２杭州动植物检疫局，杭州３１００２１ＰＣＲＡｓａｙｔｏＤｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＢｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓ...     

苏云金杆菌和培养基氨基酸的比较分析

通过分析伴孢晶体、芽孢、培养基及发酵液等的氨基酸比例，初步得到一些有关氨基酸参与代谢的资料．在发酵过程中，氨基酸既有累积又有消耗，特别是谷氨酸明显地被消耗；不同原料的氨基酸比例相差很大．这很可能是培养基影响杀虫毒力的主要原因之一．同一出发菌株８０１０（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｖａｒｋｕｒｓｔａｋｉ８０１０，简称８０１０）分离得到的３号、５号和７２号菌株氨基酸比例稍有不同，它们与有关资料报道的其它菌株的氨基酸比例有较大不同．伴抱晶体和芽孢之间的氨基酸比例明显不同．Ｂｔ８０１０菌种发酵需要供给较多的谷氨酸．     

醋菌纤维素高产菌株筛选和菌物鉴定

从１５０份自然材料中分离得到了２６个产纤维素菌株。其中,Ａｘ－１、Ａｃ－Ⅱ两高产菌株初步鉴定为巴氏醋杆菌木醋亚种（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｐａｓｔｅｕｔｉｎｕｓ Ｓｕｂｓｐ．Ｘｙｌｉｎｕｍ）和汉森醋杆菌（Ａ．Ｈａｎｓｅｎｉｉ）。该二菌株在２８℃～５ｄ静态培养中,从５０ｇ／Ｌ蔗糖（或葡萄糖）培养液中产出１４ｇ／Ｌ或１６ｇ／Ｌ纤维素,并初步测试了该纤维素的基本特性。     

枯草芽孢杆菌菌种退化及其控制

以杜草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｏｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）的生物量、拮抗效应下降为菌种退化的标志,研究了２个菌株（ＢＳ－３,ＰＲＳ５）在不同培养基上及继代培养过程中的退化现象,同时探讨了５种载体、不同复壮时间对恢复Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ生物量及拮抗效应的影响。结果显示：枯草芽孢杆菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）在常见的７种培养基中以营养贫乏的ＰＤＡ,ＷＰＡ,ＣＭＡ最易发生退化,ＳＤＡＹ较为稳定,两菌株中,ＢＳ     

黄皮种子的保湿贮藏及胚轴的超低温保存

以典型的顽拗性黄皮（Ｃｌａｕｓｅｎａｌａｎｓｉｕｍ）为材料,研究了其种子保湿贮藏及胚轴的超低温保存,结果表明：部分脱水的生理成熟期种子,每１００ｇ种子混入４～６ｇ百菌清贮于１５℃,超过８００ｄ后仍保持较高的发芽率及种子活力,经梯度蔗糖,梯度蔗糖加脱落酸（Ａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄ,ＡＢＡ）及１１０ｇ／Ｌ蔗糖（ＳｕｃｃｒｏｓｅＳｕｃ蔗糖）＋２０μｍｏｌ／ＬＡＢＡ预培养的生理成熟期胚轴,脱水８～１０ｈ后     

分子标记的类型、特点及在育种中的应用

介绍了分子标记的４ 个系统：①非ＰＣＲ 标记系统;②以ＲＡＰＤ 为代表的单引物ＰＣＲ 系统;③由两个引物引起的选择性扩增片段多态性（ＡＦＬＰ） ;④以ＳＳＲ（ 或ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ） 为代表的两个引物的ＰＣＲ 系统,以及它们各自的特点。同时还提出了在具体应用时应从５ 个方面考虑、选择合适的标记系统。     

Principle of Variation of Active Oxygen Radical Metabolism of Chicks Artificial-Infected with vMDV

１ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＴｈｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｒａｄｉｃａｌ（ＡＯＲ）ｉｎａｂｒｏａｄｓｅｎｓｅｉｎｃｌｕｄｅＯ２－,·ＯＨ,Ｏ１／２ａｎｄＨ２Ｏ２．ＡＯＲｍａｙｄａｍａｇｅｔｈｅｏｒｇａｎｉｓｍｅｘｔｅｎｓｉｖｅｌｙ,ａｎｄｔｈｅＤＮＡｄ...     

芦荟的组织培养和快速繁殖

以美国库拉索芦荟（ＣＵＲＡＣＡＯ Ａｌｏｅ）、日本木剑芦荟（Ａｌｏｅ ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓｅ Ｍｉｌｌ）、龙山芦荟（Ａｌｏｅ ｂｅｒｅｂｉｈｏｒｉａ）、化芦荟（Ａｌｏｅ ＶＥＲＡ Ｌ．Ｖａｒ．Ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ ＣＨａｗ）和斑文芦荟（Ａｌｏｅ Ｖａｒｉｏｇａｔａ）茎尖为材料进行离体培养,外植体接种于含ＢＡ４．０毫克／升、ＮＡＡ０．１毫克／升、蔗糖３０克／升、琼脂５．０克／升的ＭＳ培养基上,４０天