解淀粉芽孢杆菌SSY1株的安全性试验

为评估1株产纤维素酶的解淀粉芽孢杆菌SSY1株的安全性,本试验对其进行了急性毒性、慢性毒性、细菌易位、代谢产物及药敏等安全性试验。急性毒性试验分为高剂量组（1.30×10¹⁰ CFU/mL）、中剂量组（0.90×10¹⁰ CFU/mL）、低剂量组（0.65×10¹⁰ CFU/mL）和生理盐水对照组,一次性灌服后观察14 d,处死存活小鼠,剖检。慢性毒性试验分为高剂量组（0.65×10¹⁰ CFU/mL）、中剂量组（0.65×10⁹ CFU/mL）、低剂量组（0.65×10⁸ CFU/mL）和生理盐水对照组,各组灌服1次/d,连续灌服30 d。结果表明,急性毒性试验小鼠的精神、食欲、行为、粪便等均未见异常,试验鼠全部存活,剖检未见病理变化;慢性毒性试验小鼠均无异常临床变化,剖检小鼠也未见病变,高、中、低剂量组及对照组间小鼠增重、饲料利用率、血液学指标、血液生化指标及脏器系数均差异不显著（P>0.05）;解淀粉芽孢杆菌SSY1菌株在小鼠体内未发生易位,氨基脱羧酶、吲哚试验均为阴性,在测定的24种常用药物中,除林可霉素耐药外,菌株对其余23种药物均敏感。试验证实,解淀粉芽孢杆菌SSY1株的安全性良好。     

表达耐热肠毒素的重组大肠杆菌对7日龄仔猪肠道形态结构及抗氧化功能的影响

试验旨在研究表达耐热肠毒素（STa）的重组大肠杆菌对7日龄仔猪肠道形态结构及抗氧化功能的影响。选取24头7日龄仔猪,随机分在4个日粮处理组,分别为对照组（人工乳）,STa组（人工乳+2×10⁹ CFU重组菌LMG194-pBAD-STa）,LMG194组（人工乳+2×10⁹ CFU大肠杆菌LMG194）,K88组（人工乳+2×10⁹ CFU大肠杆菌K88）。试验第5天进行攻毒,第7天屠宰取样,测量小肠黏膜的绒毛高度和隐窝深度,检测空肠、回肠、结肠及血清中的过氧化氢酶（CAT）、总一氧化氮合成酶（TNOS）与诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的活力及血清中丙二醛（MDA）与过氧化氢（H₂O₂）的含量。试验结果表明,与对照组相比,STa组仔猪各肠段绒毛高度均显著降低（P<0.05）,十二指肠隐窝深度及绒毛高度与隐窝深度的比值显著降低（P<0.05）,十二指肠、空肠、回肠绒毛表面积显著降低（P<0.05）;同时,STa组回肠、结肠CAT活力显著降低,血清、空肠、回肠和结肠中的TNOS活力显著降低（P<0.05）,STa组结肠iNOS活力显著降低（P<0.05）,STa组血清中的MDA与H₂O₂含量显著提高（P<0.05）。结果显示,表达STa的重组大肠杆菌可导致7日龄仔猪肠道结构损伤和抗氧化能力下降。     

复合益生菌对肉鸽生长性能和免疫机能的影响

本试验旨在研究复合益生菌对肉鸽生长性能和免疫机能的影响。选取72对种鸽和144只1日龄乳鸽,乳鸽称量初始体重后随机分成4个试验组,每个试验组6个重复,每个重复3对种鸽及6只乳鸽。各组饲喂相同基础日粮,对照组补饲保健砂,Ⅰ组补饲保健砂+复合菌Ⅰ（6×10⁷ CFU/g嗜酸乳杆菌+6×10⁷ CFU/g乳双歧杆菌）,Ⅱ组补饲保健砂+复合菌Ⅱ（6×10⁷ CFU/g乳双歧杆菌+6×10⁷ CFU/g粪肠球菌）,Ⅲ组补饲保健砂+复合菌Ⅲ（6×10⁷ CFU/g嗜酸乳杆菌+6×10⁷ CFU/g粪肠球菌）。试验期56 d。结果显示,与对照组相比,Ⅱ组显著提高了肉鸽的28和56日龄体重和平均日增重（P<0.05）。Ⅱ组显著提高了28日龄肉鸽的胸腺指数（P<0.05）;Ⅲ组显著提高了56日龄肉鸽的脾脏指数（P<0.05）。3个复合菌组提高了28和56日龄肉鸽血清中免疫球蛋白的含量,但均未达到显著水平（P>0.05）。综上所述,保健砂中添加复合益生菌可提高肉鸽的生长性能、免疫器官指数,并一定程度上能提高肉鸽的免疫力,其中乳双歧杆菌和粪肠球菌组效果最好。     

牛至精油及肉桂精油对弗氏柠檬酸杆菌感染小鼠的预防作用研究

试验旨在研究弗氏柠檬酸杆菌对小鼠的致病性及牛至精油和肉桂精油对小鼠抵抗弗氏柠檬酸杆菌感染的预防效果。致病性试验将30只小鼠随机分为5组，对照组小鼠腹腔注射0.2 mL生理盐水，1/2倍剂量组、1倍剂量组、2倍剂量组、4倍剂量组小鼠腹腔注射2.5×10⁹、5.0×10⁹、1.0×10¹⁰、2.0×10¹⁰ CFU/mL的弗氏柠檬酸杆菌菌液(100μL/g体重)，观察感染后小鼠临床症状及死亡情况。预防试验将30只小鼠随机分为对照组、模型组、牛至精油组、肉桂精油组及复合精油组(牛至精油和肉桂精油组合)。小鼠口服精油7 d后腹腔注射弗氏柠檬酸杆菌，观察小鼠脏器载菌量、空肠炎症细胞因子含量及空肠病理变化。结果显示，小鼠感染弗氏柠檬酸杆菌后出现眼球充血等临床症状后抽搐死亡。精油能够提高小鼠存活率，减少脏器载菌量和炎症细胞因子含量，缓解小鼠肠道损伤。研究表明，弗氏柠檬酸杆菌对小鼠具有较强致病性，精油能够提高小鼠的肠道屏障功能，阻止弗氏柠檬酸杆菌在小鼠肝脏及脾脏的定植，降低小鼠空肠促炎细胞因子的含量，提高小鼠的存活...     

一株凝结芽孢杆菌的分离鉴定及益生性研究

试验旨在分离鉴定一株来源于池塘底泥的具有益生功能的凝结芽孢杆菌,并研究其益生性能。从自然池塘底泥分离得到一株产酸能力强的杆状细菌,通过生理生化特征分析和16S rDNA序列比对,鉴定分离菌为凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）。该分离菌株对大肠杆菌K88、大肠杆菌K99、无乳链球菌和嗜水气单胞菌有抑制作用;在pH 2.5的模拟胃液中处理12 h存活率为71.9%;在胆盐浓度为0.3%的模拟肠液中处理12 h,存活率为84.4%。该分离菌株可有效降解亚硝酸盐,48 h降解率达到96.80%。将270只1日龄AA肉鸡分成3个处理组,日粮分别添加0（Ⅰ组）、1.0×10⁶（Ⅱ组）和1.0×10⁷ CFU/g（Ⅲ组）剂量的凝结芽孢杆菌NJ102,试验期42 d。结果显示,Ⅱ、Ⅲ组肉鸡的平均日增重和终末体重显著高于Ⅰ组（P<0.05）,料重比显著低于Ⅰ组（P<0.05）,各组间平均日采食量差异均不显著（P>0.05）。结果表明,来源于池塘底泥的凝结芽孢杆菌NJ102有一定的抗逆性和益生能力,能改善肉鸡的生长性能,具备作为微生物饲料添加剂开发的潜力。     

乳酸菌微生态制剂对冬毛期北极狐生长性能、营养物质消化率及血清生化指标的影响

试验旨在研究乳酸菌微生态制剂对冬毛期北极狐生长性能、营养物质消化率及血清生化指标的影响。选取135日龄、体重相近的健康雌性北极狐40只,随机分为4组,每组10个重复,每个重复1只。Ⅰ组饲喂基础日粮;Ⅱ组饲喂基础日粮+0.02%硫酸黏杆菌素;Ⅲ组饲喂基础日粮+1 mL乳酸菌微生态制剂（乳酸菌活菌数为3×10⁹ CFU/mL）;Ⅳ组饲喂基础日粮+10 mL乳酸菌微生态制剂。结果显示：与对照组相比,添加乳酸菌微生态制剂可显著提高冬毛期北极狐平均日增重（P<0.05）,并显著降低料重比（P<0.05）;可显著提高冬毛期北极狐粗脂肪和总能表观消化率（P<0.05）;添加高水平乳酸菌微生态制剂可显著降低冬毛期北极狐血清总胆固醇水平（P<0.05）。此外,抗生素组北极狐血清谷丙转氨酶水平极显著高于其他各组（P<0.01）,谷草转氨酶水平显著高于对照组（P<0.05）。综上所述,在本试验条件下,当北极狐日采食活乳酸菌数达到3×10⁹ CFU/mL时即可促进其生长,粗脂肪和总能表观消化率显著提高;当北极狐日采食活乳酸菌数达到3×10¹⁰ CFU/mL时,血清总胆固醇水平显著降低;长期添加硫酸黏杆菌素可能造成北极狐肝脏损伤。     

大肠杆菌与金黄色葡萄球菌对奶牛子宫内膜组织细胞因子表达及损伤程度的影响

本试验旨在研究体外感染金黄色葡萄球菌与大肠杆菌对奶牛子宫内膜组织中细胞因子白介素-6（IL-6）、IL-1β和IL-8的表达及损伤程度的影响。以体外培养的奶牛子宫内膜组织作为研究对象,采用1×10⁵~1×10⁹ CFU/mL大肠杆菌与金黄色葡萄球菌对奶牛子宫内膜组织进行体外感染,通过实时荧光定量PCR和ELISA方法检测两种细菌刺激后奶牛子宫内膜组织中IL-6、IL-1β及IL-8 mRNA与蛋白的表达量,并用HE染色法观察两种细菌感染后奶牛子宫内膜组织病理学切片。结果显示,1×10⁵~1×10⁹ CFU/mL大肠杆菌体外感染后,奶牛子宫内膜组织中IL-6、IL-1β和IL-8 mRNA表达量均极显著高于空白对照组（P<0.01）;金黄色葡萄球菌感染浓度为1×10⁵、1×10⁶ CFU/mL时,IL-6、IL-1β mRNA表达量极显著高于空白对照组（P<0.01）,感染浓度为1×10⁷ CFU/mL时,IL-6、IL-1β mRNA表达量显著高于空白对照组（P<0.05）,感染浓度为1×10⁶ CFU/mL时,IL-8 mRNA表达量显著高于空白对照组（P<0.05）,其他感染浓度均与空白对照组无显著差异（P>0.05）。奶牛子宫内膜组织感染1×10⁵~1×10⁹ CFU/mL金黄色葡萄球菌和大肠杆菌时,IL-6、IL-1β及IL-8蛋白表达量均极显著高于空白对照组（P<0.01）。相同浓度的大肠杆菌感染奶牛子宫内膜组织后,IL-6、IL-1β及IL-8 mRNA与蛋白表达量均极显著高于金黄色葡萄球菌感染组（P<0.01）。HE切片染色结果显示,大肠杆菌感染后仍有部分上皮细胞保留,而金黄色葡萄球菌感染后上皮细胞全部脱落。本试验结果表明,大肠杆菌与金黄色葡萄球菌感染奶牛子宫内膜组织后,引起的炎症反应不同。大肠杆菌感染后,促炎性细胞因子被显著上调,而金黄色葡萄球菌感染后破坏子宫内膜上皮细胞程度更加严重。     

1株植物内生菌解淀粉芽孢杆菌的安全性评价

试验旨在评价1株从杜仲中分离的解淀粉芽孢杆菌的安全性。试验从菌株溶血性、氨基酸脱羧和明胶液化试验、抗菌药物敏感性、腹腔注射、经口灌胃、抑菌活性等进行安全性综合评价。腹腔注射试验分为腹腔注射组(1.0×10¹⁰ CFU/0.3 mL)和生理盐水组,一次性注射,连续观察5 d。经口灌胃试验分为高剂量组(1.0×10¹⁰ CFU/0.2 mL)、中剂量组(1.0×10⁹ CFU/0.2 mL)、低剂量组(1.0×10⁸ CFU/0.2 mL)和生理盐水组,每天灌胃1次,连续灌胃28 d。结果显示,腹腔注射和经口灌胃小鼠均健康存活,未见临床变化,试验期间体重正常增加,各组小鼠血常规、血清生化指标和脏器指数差异均不显著(P>0.05),解淀粉芽孢杆菌DZ01未发生易位,氨基酸脱羧和明胶液化试验均为阴性。解淀粉芽孢杆菌DZ01对所测的8种抗菌药物均表现敏感。除粪肠球菌和铜绿假单胞菌外,解淀粉芽孢杆菌DZ01上清液对其余6株指示菌均具有抑菌活性。研究表明,解淀粉芽孢杆菌DZ01具有较好的安全性。     

大肠杆菌对奶牛子宫内膜上皮细胞炎性损伤的研究

试验旨在研究大肠杆菌（E.coli）对奶牛子宫内膜上皮细胞（bovine endometrial epithelial cells,BEECs）的体外炎性损伤,探究大肠杆菌引发炎性反应的最佳浓度、作用时间及机制。首先,用不同浓度的大肠杆菌（5×10⁴、5×10⁵、1×10⁶、2.5×10⁶、5×10⁶ CFU/mL）诱导刺激细胞3、6和9 h,通过倒置显微镜观察细胞形态、CCK-8法测D_{450 nm}值,检测大肠杆菌对细胞活性的影响;其次,用不同浓度的大肠杆菌（5×10⁴、5×10⁵ CFU/mL）处理细胞3、6和9 h,用ELISA方法检测细胞上清液中白介素-1β（IL-1β）、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的分泌量;最后,用不同浓度的大肠杆菌（5×10⁴、5×10⁵ CFU/mL）处理细胞6和9 h,用Western blotting检测核因子κB抑制蛋白α（IκBα）和p65蛋白的磷酸化水平。结果显示,与对照组相比,大肠杆菌感染细胞9 h后,1×10⁶、2.5×10⁶和5×10⁶ CFU/mL大肠杆菌组细胞活性均极显著降低（P<0.01）,5×10⁵ CFU/mL大肠杆菌组显著降低（P<0.05）;大肠杆菌感染细胞9 h后,5×10⁵ CFU/mL大肠杆菌组IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α极显著升高（P<0.01）;大肠杆菌感染细胞6 h后,5×10⁵ CFU/mL大肠杆菌组IκBα、p65蛋白磷酸化水平和IL-6均极显著升高（P<0.01）,5×10⁴ CFU/mL大肠杆菌组IκBα和p65蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.05）。结果表明,大肠杆菌可以刺激奶牛子宫内膜上皮细胞产生炎性反应,且当细胞与5×10⁵ CFU/mL大肠杆菌作用6 h或与5×10⁴ CFU/mL大肠杆菌作用9 h为最佳。     

板蓝根多糖对缺乳仔鼠免疫器官发育及T淋巴细胞亚群的影响

试验应用流式细胞术检测缺乳仔鼠CD3⁺、CD4⁺和CD8⁺ T淋巴细胞含量来研究添加不同剂量的板蓝根多糖(RIP)对缺乳仔鼠免疫器官及T淋巴细胞亚群的影响。结果表明:①RIP可增加缺乳仔鼠胸腺指数和脾脏指数。对胸腺指数和脾脏指数效果最好的RIP剂量随日龄增大而减小。②RIP可以增加缺乳仔鼠外周血CD3⁺、 CD4⁺ 、CD8⁺ T淋巴细胞数量。7~28日龄时初乳组(A组)、缺乳+中RIP组(C组)和缺乳+高RIP组(D组)3组CD3⁺ T淋巴细胞含量与缺乳组(B组)相比差异显著(P<0.05)。7~21日龄时初乳组(A组)、缺乳+中RIP组(C组)和缺乳+高RIP组(D组)3组CD4⁺ T淋巴细胞含量与缺乳组(B组)相比差异显著(P<0.05)。各处理组CD3⁺、 CD4⁺、CD8⁺ T淋巴细胞含量及CD4⁺/CD8⁺比值随着日龄的增加有所下降。适宜剂量的RIP可促进缺乳仔鼠免疫器官发育,提高T淋巴细胞亚群的水平。     

Effects of Lactobacillus reuteri Supplementation on Inhibition of Pathogenic Escherichia coli in Kunming Mice

This study was aimed to explore the effect,dose of Lactobacillus reuteri on inhibition of pathogenic Escherichia coli infection on Kunming mice as well as its potential mechanism. 96 Kunming mice were randomly allocated into four groups with 4 replicates per group and 6 mice per replicate,which were control group,low dose group,middle dose group and high dose group. All of the mice feed commercial basal feedstuff,meanwhile the mice in control group drank tap-water,three treatments were supplemented with 1.0×10⁶,1.0×10⁷ and 1.0×10⁸ CFU/mL Lactobacillus reuteri in water. The feeding period was 28 days. All the mice were weighted, and the ADFI,ADG and F/G were calculated at the end of experiment.At the day of 28,pathogenic Escherichia coli (4.98×10⁹ CFU/mL) were irrigated to study the mortality. The indexes of intestinotoxin and antioxidation in serum and cecal microbacteria were inspected.The results indicated that supplemented with middle dose of Lactobacillus reuteri could significantly improve the final body weight,ADG compared with the control (P<0.05). The mortality, serum intestinotoxin level and MDA concentration,Escherichia coli and Staphylococcus were significantly lower than control group (P<0.05),while the T-SOD,T-AOC,GSH-Px,Lacobacillus and Bifidobacterium were significantly improved (P<0.05).In conclusion,with Lactobacillus reuteri supplementation,the growth performance was improved and antioxidant capacity and cecal microbacteria were enhanced after pathogenic Escherichia coli infected, mouse mortality caused by the pathogenic Escherichia coli was effectively reduced,and the effect of 1.0×10⁷ CFU/mL Lactobacillus reuteri was the best.     

Evaluation of Safety of Bacillus amyloliquefaciens SSY1

In order to determine the safety of Bacillus amyloliquefaciens SSY1, we carried out the acute toxicity, chronic toxicity, bacterial translocation, product of metabolism and drug susceptibility test. Acute toxicity test in high dose groups (1.30×10¹⁰ CFU/mL), middle dose group(0.90×10¹⁰ CFU/mL), low dose group (0.65×10¹⁰ CFU/mL) and normal saline control group. After the acute toxicity test, the mice were sacrificed 14 days after the observation. Chronic toxicity test of each group was administered once a day for 30 d, chronic toxicity test in high dose groups (0.65×10¹⁰ CFU/mL), middle dose group (0.65×10⁹ CFU/mL), low dose group (0.65×10⁸ CFU/mL) and normal saline control group. The results showed that all mice were without exception phenomenon, the spirit, appetite, behavior and feces and so on, no pathological changes were found on the acute toxicity test. Chronic toxicity test of the mice were no abnormal clinical changes, and there were no pathological changes. Body weight and feed utilization rate of mice, hematology, blood biochemistry indexes and viscera coefficient difference were not significant (P>0.05);Bacillus amyloliquefaciens SSY1 strain did not occur translocation in mice, amino acid decarboxylase and indole test were negative, among the 24 kinds of commonly used drugs, the strains were sensitive to 23 kinds of drugs except the cillimycin. This experiment proved that Bacillus amyloliquefaciens SSY1 had good security.     

鹿场环境中细菌的分布及耐药性调查

为探究辽宁省西丰县鹿场环境中细菌的分布及耐药性情况,本试验采集了鹿场粪便、饮水、空气、饲料等样品,进行了细菌的分离培养及鉴定,对分离到的菌株16S rDNA基因进行PCR扩增、测序分析,并对分选出的致病菌和条件致病菌进行药敏试验。结果显示,所测样品共分离纯化出27株菌,公鹿精饲料、母鹿精饲料、粗饲料和水的含菌量分别为1.0×10⁵、8.7×10⁴、2.7×10⁷ CFU/g和2.9×10⁴ CFU/mL,表明水和粗饲料不符合国家规定的养殖场环境卫生要求;16S rDNA基因序列在NCBI比对后,鉴定出有大肠埃希菌、志贺氏菌等15种不同菌株,其中致病菌和条件致病菌共13种,这13种细菌对呋喃唑酮、多黏菌素B和头孢氨苄等耐药,对头孢曲松、环丙沙星和丁胺卡那等药物敏感。本试验结果可为鹿场细菌性疾病的防控及用药提供参考依据。     

陕西青脚麻肉鸡肠道定殖菌的生活状态和分布研究

为了解陕西青脚麻肉鸡肠道定殖菌的生活状态及分布,试验采用梯度稀释和组织培养方法对青脚麻肉鸡肠道定殖菌进行培养并计数。结果表明,芽孢菌在青脚麻肉鸡小肠中后段达到最大值,菌体总数达6.5×10⁵ CFU/mL;酵母菌在盲肠中的菌体总数仅为6.8×10⁴ CFU/mL;乳酸菌在十二指肠后段的菌体总数仅为8.6×10⁴ CFU/mL。综上所述,陕西青脚麻肉鸡肠道中定殖有芽孢菌的分布,酵母菌和乳酸菌定殖甚少。     

Effects of Lactobacillus Probiotics on Growth Performance,Nutrient Digestibility and Serum Biochemical Indexes in Arctic Foxes

This experiment was conducted to study the effects of Lactobacillus probiotics on growth performance,nutrient digestibility and serum biochemical indexes in arctic foxes during the winter fur-growing period. Forty 135-day-old female arctic foxes with a similar body weight were randomly divided into 4 groups with 10 replicates per group and 1 fox per replicate. The foxes in control group were fed basal diets,while that of groups Ⅱ,Ⅲ and Ⅳ were fed basal diet+0.02% colistin sulfate, basal diet+1 mL Lactobacillus probiotics (active Lactobacillus was 3×10⁹ CFU/mL) and basal diet+10 mL Lactobacillus probiotics,respectively. The results showed that:Compared to the control group,the addition of Lactobacillus probiotics significantly increased the average daily gain (P<0.05) and significantly decreased the F/G of arctic foxes during the winter fur-growing period (P<0.05).The apparent digestibility of EE and GE were significantly increased when arctic foxes fed diet supplemented with Lactobacillus probiotics (P<0.05).Supplementation of high level Lactobacillus probiotics could significantly decrease serum total cholesterol (P<0.05). Additionally,serum alanine aminotransferase concentration of group Ⅱ was extremely significantly higher than that of the other three treatments (P<0.01). Moreover,the serum aspartate aminotransferase concentration was significantly higher than the control group (P<0.05). In conclusion,the addition of Lactobacillus probiotics had beneficial effects on growth performance and apparent digestibility of EE and GE when arctic foxes got 3×10⁹ CFU/mL active Lactobacillus from the probiotics per day. The total cholesterol in serum was significantly decreased when arctic foxes get 3×10¹⁰ CFU/mL active Lactobacillus from the probiotics per day. It might cause the liver damage when arctic fox got colistin sulfate for a long time.