改良CTAB法对山茶属植物基因组DNA提取的比较研究

山茶属植物体内酚类、多糖等次生代谢物质含量较高,获得高纯度的总DNA比较困难。为筛选出适宜山茶属植物基因组DNA的较优提取方法,并研究不同材料处理方法的差异,采用四因素三水平的正交设计,对山茶属植物基因组DNA的提取方法 CTAB法进行优化。最后确定较优提取方法为:老叶用CTAB-free去除多糖并防止酚氧化,用2%CTAB、2%PVP、24∶1抽提2次;嫩叶用2×CTAB去除多糖并防止酚氧化,用1%CTAB、2%PVP、24∶1抽提1次,并用ISSR-PCR检测。结果显示采用优化方案提取的DNA质量更好,能较好地溶于TE,可用于ISSR-PCR扩增,且扩增出清晰的条带。     

石斛属植物基因组DNA提取方法的对比

笔者使用6种DNA提取方法提取7种含糖量较高的石斛属植物的DNA,比较不同方法提取DNA的效果,结果表明:改良PEX法和改良CTAB法对含有丰富多糖和多酚类的石斛属植物的DNA提取效果较好。改良PEX法与其他5种方法对比,可以更好地去除多糖类和多酚物质的干扰,能够满足后续的分子生物学实验的要求。改良CTAB法和改良SDS法与CTAB法和SDS法相比,可获得较高的DNA产率,并且可以较好地去除多糖类杂质的干扰。     

景天科植物基因组DNA的高效提取方法

采用CTAB法,低浓度的乙醇与NaCl沉淀DNA,再用正丁醇进一步萃取多糖,建立了景天科特种植物的DNA提取方法,获得的DNA经琼脂糖电泳和紫外分析仪检测,浓度和质量均较高。用线粒体nad7基因的特异引物对该法提取的大花红景天DNA进行扩增,获得了长为791bp片段的目标序列。结果表明:该法有利于去除景天科植物材料中多糖、多酚类和RNA等物质,获得的高质量基因组DNA完全可以满足各种分子生物学研究的要求。     

濒危兰科植物DNA的提取方法

濒危兰科植物组织富含多糖和多酚类物质,提取高质量的DNA较困难。为优化濒危兰科植物基因组DNA提取方法,采用改良CTAB法、改良SDS法和试剂盒法对多种濒危兰科植物基因组DNA进行提取,对获得的DNA质量、浓度和纯度进行比较。结果表明,用改良CTAB法和试剂盒法可有效去除多糖类和多酚类物质的干扰,DNA提取效果较理想,改良SDS法较差;CTAB法获得的DNA浓度高于试剂盒法,且后续PCR扩增效果也优于试剂盒法。     

一种高效提取虎耳草科植物基因组DNA的方法

[目的]探索从虎耳草科植物中提取DNA的有效方法。[方法]采用改进的CTAB法,从11种虎耳草科植物中提取DNA。以提取的DNA为模板,利用通用引物"psbAF"和"trnHR"对虎耳草科植物叶绿体DNApsbA-trnH片段进行PCR扩增。[结果]通过该方法提取的DNA纯度较高,质量较好。用所得DNA进行psbA-trnH扩增的产量高,可用于后续的测序等分析。对山地虎耳草的PCR产物纯化后进行测序,得到262 bp的序列。将其与GenBank中的虎耳草属其他植物的psbA-trnH序列进行比对分析,证实该序列为目标psbA-trnH片段的区域。[结论]该方法可有效去除次生物质对DNA的干扰,提取的基因组DNA可用于叶绿体psbA-trnH测序分析和其他遗传学分析。     

药用绞股蓝属植物基因组DNA提取方法比较

从叶片中提取高质量的DNA是进行绞股蓝分子生物学研究的前提。植物基因组DNA的提取方法较多,笔者以安康平利县产绞股蓝属植物幼嫩叶片为材料,通过采用改良的CTAB法、改良SDS法和高盐低pH值法三种方法提取绞股蓝基因组DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳对所提取DNA样品进行质量检测。结果显示高盐低pH值法提取的DNA电泳主带较亮且点样孔基本无异物,为绞股蓝叶片DNA提取比较适宜的方法。     

富含多糖的强旱生植物半日花基因组DNA提取方法

半日花(Helianthemum soongoricum)属强旱生植物,其组织富含多糖和多酚等次生代谢物质,采用常规CTAB和SDS等方法提取的半日花基因组DNA由于含有多糖等杂质,无法进行PCR扩增和限制性酶切等试验,为此,在CTAB法的基础上进行了改进。第1步通过向植物组织CTAB提取液中添加高盐和乙醇来沉淀部分多糖,第2步将获得的DNA粗提液,经过CTAB分离溶液沉淀、NaCl溶解、乙醇沉淀等方法,可有效去除半日花组织中的残余多糖等杂质,提取DNA的质量和纯度经凝胶电泳条带清晰、无降解、无多糖等杂质。PCR扩增和限制性内切酶的结果表明,通过改进的方法所获得的DNA,可以进行PCR扩增试验,扩增条带清晰,基因组DNA能被限制性内切酶完全酶切,该方法为后续半日花分子生物学研究奠定了重要基础。     

紫丁香与羽叶丁香叶绿体DNA提取方法研究

为了探究适合丁香属植物的叶绿体DNA(cpDNA)的提取方法,采取高盐-低pH法和改良高盐-低pH法分别分离提取了紫丁香与羽叶丁香的叶绿体及cpDNA。结果表明,采取高盐-低pH法提取出的cpDNA,其OD260/OD280值均1.7,且琼脂糖凝胶电泳检测无条带,表明cpDNA质量低,不能满足后续叶绿体基因组测序要求,改良高盐-低pH法提取出的cpDNA,其OD260/OD280值在1.8~1.9,琼脂糖凝胶电泳检测显示条带清晰,无降解现象,表明cpDNA质量高,能够满足后续叶绿体基因组测序要求。研究表明,改良高盐-低pH法可简便快速的提取紫丁香与羽叶丁香的cpDNA,为进一步研究丁香属植物的叶绿体基因组奠定了基础。     

不同处理对柿属植物DNA提取产率和品质的影响

基于CTAB法对鄂柿一号、前川次郎、君迁子3份材料进行DNA提取纯化,探讨不同采样时期、不同的纯化及沉淀方法对柿属植物DNA产率和品质的影响.结果表明,不同时期采样对DNA产率影响很大,随叶片生长,DNA产率不断下降,成熟叶片DNA产率仅为幼嫩叶片的16.7％～19.4％;在苯酚氯仿法、高盐乙醚法、CTAB沉淀法中以高盐乙醚法效果最好,可酶切,能有效去除多糖污染,产率较高;4种沉淀方法中,高浓度的盐溶液有助于去除多糖、多酚等杂质,相比单纯的乙醇或异丙醇沉淀可获得更高品质的DNA.另外,不同材料间提取DNA难度存在较大差异.     

一种适用于木犀科苦丁茶的高效DNA提取法

【研究目的】报道了一种快速简便地提取高质量植物总DNA的改良CTAB法。【结果】应用该法能简便快速地去除多糖等干扰物质,从而获得高质量的木犀科苦丁茶总DNA。所得DNA长度接近21kb,OD260/OD280在1.8左右。【结论】以此DNA为模板获得带条清晰、重复性高的ISSR-PCR扩增结果,且在一定范围内模板用量对ISSR-PCR扩增结果基本无影响。     

石斛粗多糖脱蛋白方法的研究

[目的]研究石斛多糖中蛋白质的有效去除方法。[方法]以蛋白脱除率和多糖损失率作为检测指标,考察3种不同方法对石斛粗多糖液去除蛋白质的效果。[结果]三氯乙酸法脱蛋白效果最好,且其多糖损失率最低。[结论]该方法简单、易行,适合于石斛粗多糖中蛋白质的去除。     

板栗基因组DNA不同提取方法的比较

板栗组织中富含多酚类、糖类以及单宁类等次生代谢物质,因而难以提取比较高质量的DNA分子。本实验利用三种不同提取方法,分别是改良CTAB法、CTAB-乙醚萃取法、简易法提取板栗不同部位的基因组DNA。纯化的DNA分别经过核酸蛋白分析仪、电泳以及PCR技术检测,表明改良CTAB法和CTAB-乙醚萃取法都适用于板栗嫩叶、成熟叶片及韧皮部组织DNA的提取,提取的DNA纯度较为理想,能够满足后续分子生物学的要求。     

3种脱除南瓜水溶性多糖蛋白方法的比较

探讨了三氯乙酸法、重金属离子沉淀法和Sevag法3种方法对南瓜多糖提取物进行脱除蛋白处理的效果.结果表明,综合考虑多糖损失率、脱除蛋白率和活性等因素,Sevag法优于三氯乙酸法和重金属离子沉淀法,是适用于南瓜水溶性多糖脱除蛋白的有效方法.     

沙棘多糖脱蛋白工艺的优化研究

植物多糖纯化过程中脱蛋白是较为重要的环节之一,为了提高多糖纯化效率,对沙棘多糖脱蛋白的工艺进行了优化研究。先选取了3种不同方法脱蛋白,即三氯乙酸法(TCA法)、沙维积法(Sevag法)、酶法与Sevag法联用,通过比较不同方法处理后的蛋白含量及多糖含量来确定最佳的脱蛋白方法。结果表明,对于三氯乙酸法而言,5%的三氯乙酸脱蛋白效率最高且多糖损失最小;对于Sevag法,反复处理5次脱蛋白效率相对较高且多糖损失率较小;对于酶法与Sevag法联用,酶法+Sevag法2次进行脱蛋白效果最好。并且3种方法相比,酶法与Sevag法联用脱蛋白效率相对最高,且多糖损失率最小。因此进一步设计正交试验来确定木瓜蛋白酶法脱蛋白的最佳条件,结果表明,木瓜蛋白酶法脱蛋白的最佳条件是酶加量5 mg/mL,酶解温度60℃,pH6,且此条件下的蛋白清除率为73.58%。     

桑黄多糖脱蛋白方法与条件的优化

[目的]对桑黄多糖提取液中的蛋白质去除方法和条件进行了优化,并比较了2种方法对蛋白质去除的影响。[方法]采用Sevag法与三氯乙酸（TCA）法去除桑黄多糖中的游离蛋白质。[结果]三氯乙酸法去除蛋白质的效果优于Sevag法,其最佳脱蛋白条件为：5%三氯乙酸用量,处理3次,反应时间30min,。在此条件下,蛋白质去除率为82%,多糖损失率为10.8%。[结论]TCA法为最佳的桑黄多糖脱蛋白方法。     

棉纤维糖分不同提取方法的比较

[目的]评价棉花纤维含糖检测中常用的糖分提取方法.水煮提取法、80;酒精提取法、0.05; Triton X-100溶液提取法.[方法]分别用这三种方法提取棉纤维中的糖分,并用蒽酮硫酸法测定可溶性总糖、用二硝基水杨酸法(DNS)测定还原糖来评价这三种提取方法.[结果]三种提取方法间所提取的含糖量结果差异不显著,但用水煮法制备的提取液测定出的可溶性糖和还原糖均稍高于其他两种提取方法.[结论]该方法耗时较短,成本低,因此建议选用水煮提取法,提取液可同时用于棉纤维的可溶性糖和还原性糖的分析.     

脱硫菌胞外聚合物提取及分泌量影响因素研究

[目的]选择一种较优的黄单胞杆菌EPS提取方法,并分析环境因素对EPS分泌量的影响。[方法]分别采用离心、加热、超声、硫酸、EDTA和甲醛加碱法提取EPS,测定提取物中多糖、蛋白质及DNA含量,以评价提取效率及对细胞的破坏程度。利用正交试验设计考察温度、培养基pH值等因素对EPS分泌量的影响。[结果]甲醛加碱法和超声法的提取效率较高。通过对不同超声功率的比较,选择在50W下超声4min提取EPS。正交试验结果表明,黄单胞杆菌EPS最大分泌量的环境条件为pH值6.0,温度32℃,菌液比7∶100,金属盐溶液投加量3ml。[结论]黄单胞杆菌EPS提取采用超声法;环境因素中温度对分泌量的影响最大。     

大豆多糖提取分离工艺的优化研究

采用热水浸提法设计单因素试验及三因素三水平正交试验,对大豆多糖最佳提取工艺进行了优化,结果表明：三因素对大豆多糖提取量影响温度的顺序为提取温度〉提取时间〉液料比,提取最佳工艺为：液料比80∶1,提取时间2 h,提取温度90℃时提取2次;采用乙醇沉淀法设计三因素三水平正交实验对其最佳分离工艺进行研究,发现：三因素三水平对大豆多糖分离度影响力的顺序为乙醇浓度〉乙醇加入量〉沉淀时间,分离的最佳乙醇浓度为80%,加入量4倍体积,沉淀时间3h。     

大豆多糖提取分离工艺的优化研究

采用热水浸提法设计单因素试验及三因素三水平正交试验,对大豆多糖最佳提取工艺进行了优化,结果表明：三因素对大豆多糖提取量影响温度的顺序为提取温度〉提取时间〉液料比,提取最佳工艺为：液料比80：1,提取时间2h,提取温度90℃时提取2次;采用乙醇沉淀法设计三因素三水平正交实验对其最佳分离工艺进行研究,发现：三因素三水平对大豆多糖分离度影响力的顺序为乙醇浓度〉乙醇加入量〉沉淀时间,分离的最佳乙醇浓度为80％,加入量4倍体积,沉淀时间3h。     

魔芋中多糖提取技术及含硒形态研究

研究了魔芋中硒的赋存形态、分布及含硒多糖的提取分离技术.用不同的浸提液和浸提方法(热水、稀酸、稀碱、超声波)提取魔芋中的多糖,用水作为提取剂提取魔芋中的蛋白质,并用原子吸收法测定它们各组分中含硒量.魔芋中的总硒含量为2.540μg/g,而多糖硒的舍量为2.241μg/g,占了总硒的88.23%,说明魔芋中的多糖硒为硒的主要赋存形态.同时通过实验可知,魔芋多糖的最佳提取剂为稀碱.