鹅细小病毒感染雏鹅的免疫球蛋白IgG/IgM变异性研究

为探究Ig G/Ig M蛋白的分子特征、理化特性及病理学相关致病机理,对鹅细小病毒感染雏鹅的免疫球蛋白Ig进行了分级分离、纯化及Ig G/Ig M蛋白质结构和功能等生化-分子生物学分析。以GPVYZ感染雏鹅,采用(NH4)2SO4分级分离鹅血清Ig,将Sephadex G-100凝胶柱在Utro-gel ACA22凝胶柱色谱工作站上串联,分步聚集纯化出鹅血清Ig M/G进行SDS-PAGE和生化分析。结果显示,初级沉淀鹅血清Ig,在非还原条件下,感染组(RD)缺失6个蛋白主带(128,114,69,59,55,48 k Da);而在还原条件下,RD组缺失7个蛋白主带(139,128,119,113,97,94,61k Da),新增加3个蛋白主带(64,65,36 k Da),RD组和对照组(CK)的Ig M和Ig G带分别增加10,7倍和1.5,2倍。表明鹅血清Ig M、Ig G单体的高度可变性造成了在形状构型上的多态性,其亚基条带的变化是机体抗病潜能的重要标志;纯化鹅血清Ig M/G,在非还原条件下,RD组的Ig G缺失150 k Da分子和重链(64 k Da),而在还原条件下,鹅血清Ig G显示重链(60~70 k Da)特征蛋白带,重链62 k Da特异蛋白带仅出现在CK组的Ig M/G中,同时RD的Ig G还缺失91 k Da分子、Ig G(ΔFc)(43 k Da)、轻链(25 k Da)蛋白带。提示GPV感染与鹅血清Ig发生相互作用,Ig G与GPV感染密切相关,62 k Da重链基因可能是GPV的易感基因。试验还表明,RD组的鹅血清Ig含量仅为CK组的37%,Ig G含量较Ig M高2.56倍,RD组Ig M、Ig G比活力显著高于CK组,提示GPV拟制鹅血清Ig M、Ig G基因的表达,促使病毒感染雏鹅。稳定性试验显示,酸碱稳定性:鹅血清Ig GIg M;热稳定性Ig MIg G,RD组的Ig M、Ig G对碱和温度较为敏感。提示随p H值、温度的不同,Ig同时发生许多反应,GPV感染增加了鹅血清Ig的碱和温度敏感性。     

红芽芋低温疗法脱毒苗遗传稳定性同工酶检测

本研究对江西铅山红芽芋低温疗法脱毒苗的遗传稳定性进行同工酶检测。结果表明,SOD同工酶酶谱共有4条酶带,Rf分别为0.196、0.534、0.589和0.625,Af均为100%;POD同工酶酶谱共有7条酶带,Rf分别为0.018、0.053、0.228、0.263、0.316、0.351和0.632,Af均为100%;CAT同工酶酶谱只有1条酶带,Rf为0.145,Af为100%;SOD、POD和CAT同工酶的多态性百分率(P)均为0,有效等位基因数(Ne)均为1.000;SOD、POD和CAT同工酶酶谱带的遗传相似系数均为1.000,聚类分析显示低温疗法脱毒苗与大田苗均在同一组,表明低温疗法脱毒苗的遗传稳定性高,无遗传变异。本试验结果可为江西铅山红芽芋低温疗法脱毒苗的遗传稳定性提供一些同工酶方面的依据。     

琯溪蜜柚果实汁胞粒化过程中同工酶变化的研究

研究琯溪蜜柚果实粒化过程中过氧化物酶(POD)、超氧物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)同工酶的变化;通过授粉处理,以未授粉的自交果和授粉的杂交果的琯溪蜜柚果实汁胞为材料,采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳方法进行同工酶测定;琯溪蜜柚果实粒化过程中汁胞粒化指数随着果实成熟而上升,自交果汁胞粒化指数大于杂交果;自交果汁胞中出现的POD同工酶酶谱共分离出4条,SOD同工酶酶谱分离了6条,CAT同工酶酶谱有3条,相应的杂交果汁胞POD同工酶出现2条谱带、SOD同工酶显示4条谱带,过氧化氢酶同工酶没有观察到谱带;与琯溪蜜柚汁胞粒化关系密切的同工酶为POD、SOD同工酶。     

抗鹅细小病毒NS1蛋白单克隆抗体可变区的原核表达

为了在大肠杆菌中表达抗鹅细小病毒(GPV) NS1蛋白单克隆抗体轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)基因,并测定其与NS1蛋白结合活性。对抗GPV NS1蛋白单克隆抗体VL、VH基因核苷酸序列依据大肠杆菌偏爱密码子进行优化,人工合成获得了含有可变区基因的重组质粒pUC57-VL和pUC57-VH。然后用Bam HⅠ/XhoⅠ双酶切pUC57-VL、pUC57-VH,回收340 bp的VL基因和370 bp的VH基因。目的基因通过Bam HⅠ/XhoⅠ多克隆位点分别插入至原核表达载体pET-32a,获得重组质粒pET-VL和pET-VH。重组质粒经Bam HⅠ单酶切和Bam HⅠ/XhoⅠ双酶切及测序鉴定。重组质粒分别转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导,获得了重组蛋白TRX-VL和TRX-VH的表达,分子量分别为30.3,31.4 ku。纯化后的重组蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性结合,鉴定结果表明,获得的纯化蛋白为目的蛋白。间接ELISA分析表明,0.4μg的TRX-VH可与25 ng的GST-NS1蛋白特异性结合而0.4μg的TRX-VL不能与各包被量的GST-NS1蛋白特异性结合,TRX-VH与GST-NS1蛋白的特异性结合可被1∶200稀释的GPV感染鹅血清完全阻断。     

外源NO对PEG胁迫下苜蓿幼苗抗氧化酶及同工酶的影响

为研究外源NO对聚乙二醇-6000(PEG)拟干旱胁迫下紫花苜蓿抗氧化酶活性及其同工酶的影响。本试验用一氧化氮供体硝普钠(SNP)或一氧化氮清除剂c-PTIO对干旱胁迫下紫花苜蓿幼苗进行处理,并采用分光光度法和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对抗氧化酶及其同工酶研究。结果表明:SNP+PEG处理能显著提高紫花苜蓿幼苗的地上部干重和根干重,分别增加了100.00%、61.54%;而不同处理的SOD、POD、CAT活性都随着处理时间的延长呈现先升高后降低的趋势,在处理的第4天,SOD、CAT活性达到最大值,在处理的第6天,SOD活性达到最高。在处理的第4天,SNP+NO处理POD活性降低了32.18%,而POD、CAT活性升高了9.81%、43.37%,说明SNP能够通过不同程度影响抗氧化酶活性而缓解PEG对紫花苜蓿的氧化损伤。PEG+c-PTIO则抑制了紫花苜蓿幼苗的抗氧化酶活性。不同时间各处理紫花苜蓿幼苗POD同工酶都呈现9条酶带,其中P1、P5、P6酶带不同处理之间酶活性明显不同;SOD同工酶在处理过程中产生相对迁移率分别为0.610、0.470和0.345的3条酶带。PEG+SNP处理酶带颜色较深。而CAT同工酶形成了两条相对迁移率分别为0.322、0.259的酶带,各处理之间无明显的变化。说明外源SNP能有效的缓解PEG对紫花苜蓿幼苗造成的氧化损伤,促进植物的生长。本研究结果为紫花苜蓿的耐旱生理机制研究提供了一定的科学依据。     

卫星搭载牛膝种子SP1植株的生物学特性

利用返回式卫星搭载牛膝种子为材料,研究卫星搭载对其SP1植株生物学特性的影响。种子发芽出苗后调查植株的部分农艺学性状、测定某些生理生化指标并分析几种同工酶谱的变化。搭载种子获得的牛膝植株生长旺盛,植株株高比对照高;叶绿素a、叶绿素b、可溶性糖、脯氨酸、可溶性蛋白质以及赤霉素含量与对照相比均有不同程度的差异;卫星搭载的牛膝中有1株的SOD同工酶谱缺失一条谱带;有3株的CAT同工酶谱带比对照牛膝明显减少;Amy的同工酶谱带与对照牛膝基本一致,但有3株的Amy活性高于对照。由卫星搭载牛膝种子获得的SP1植株与对照植株有明显差异     

感染立枯病对水稻旱育秧苗保护酶系的影响

水稻幼苗感染立枯病后,体内保护酶系活力发生显著变化.根部SOD、POD活性显著降低,地上部SOD、POD活性升高;CAT则呈现相反的变化趋势.病苗地上部PAL和PPO及根部PPO活性均高于健苗,根部MDA含量升高,地上部MDA含量下降.病苗POD同工酶谱带比正常苗增加一条.     

营养对五龙鹅基因表达影响的研究

对著名的地方特色品种五龙鹅进行不同营养水平试验,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)PAGE技术,分析血液中脂酶(EST)、乳酸脱氢酶(LDH)及蛋白质的多态.结果表明 试验组蛋白质结构新出现S1,S3,S4亚基组分、存在丰富的多态变化.EST同工酶快区Es-1位点,由于等位基因控制,消减Es-1D、Es-1F同工酶谱带,其活性下降20.7%.LDH同工酶基因表达调控A和B亚基的构成,出现LDH1亚基,其活性上升99.6%.提示营养环境直接或间接调控基因表达水平,与生长性能呈正相关.     

土荆芥挥发油化感胁迫对蚕豆根尖SOD和POD同工酶的影响

旨在了解土荆芥挥发油对受体植物抗氧化酶系统的影响,为阐明土荆芥的化感作用机制提供理论依据。通过模拟淋溶和挥发2条途径,分别以不同剂量挥发油处理受体植物蚕豆幼根,电泳后比较根尖超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)同工酶谱的变化。结果表明：在淋溶途径中,细胞内SOD活性明显受该挥发油抑制,处理48 h后POD同工酶谱有POD7特征性强带出现;在挥发途径中,该挥发油对SOD同工酶的活性则表现为促进效应,处理浓度较高或时间较长(24 h,20 μL;48 h,15~20 μL;72 h,10~20 μL)时,POD同工酶谱有POD6特征性强带的表达。此外,SOD同工酶谱带变化主要为酶带的强度改变,POD同工酶谱带变化主要为酶带的数量增减。由此推测土荆芥挥发油可影响蚕豆根尖细胞SOD和POD同工酶基因的表达,其中POD同工酶基因的响应可能比SOD更为敏感。     

冬小麦不同发育时期过氧化物酶同工酶研究

利用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳技术对 18个冬小麦品种 4个发育期的POD同工酶进行了研究 ,发现在不同发育时期冬小麦根和叶POD同工酶酶谱均有不同程度的变化。返青期根POD同工酶谱变化较明显 ,在A区增加 1条RA1酶带 ,在C区增加 1条RC1酶带 ,而其他发育期无这 2条酶带或只有痕迹带 ;拔节期叶POD同工酶谱C区酶带比其他发育期多 1条LC1酶带 ;同时发现根RC4 酶带、叶LC5酶带在 4个发育期均较为稳定 ,表现为一级带 ;A区的RA2 酶带也较为稳定 ,在不同发育期均表现为二级带 ;冬小麦 18个品种间POD同工酶谱无明显差异     

三种鸭源细小病毒的抗原相关性研究

为了明确番鸭细小病毒(MPV F株)、番鸭源鹅细小病毒(MD-GPV PT株)和鸭短喙型鹅细小病毒(SBDS-GPV M15株)的抗原相关性,本研究应用微量中和试验(NT)和胶乳凝集抑制试验(LPAI)测定了三种病毒分别与同源和异源血清的中和抗体和LPAI抗体效价,分析三者之间的抗原相关性。结果显示：3种病毒与同源抗血清的中和效价和LPAI效价均明显高于异源血清;MPV与MD-GPV和SBDS-GPV之间的中和抗体效价R值分别为0.01和0.02,LPAI抗体效价R值分别为0.03和0.04;MD-GPV和SBDS-GPV的中和抗体和LPAI抗体效价R值均为0.35。表明MPV与GPV（包括MD-GPV和SBDS-GPV）之间的抗原相关性较低;MD-GPV与SBDS-GPV抗原相关性较高,为同一血清型的不同亚型。研究结果为有效防控不同鸭源细小病毒感染提供了理论依据。     

狮头鹅不同繁殖阶段血清生化指标的测定研究

为了完善狮头鹅的品种特征数据,探讨就巢性极强的狮头鹅繁殖周期的血清生化指标变化规律。选取健康成年狮头母鹅45只,对其产蛋期、就巢期和休产期的血清钙、磷、总蛋白、葡萄糖等11项生化指标进行测定。结果表明：产蛋期血钙、血磷水平较高,而就巢期和休产期差异不显著;血清ALP水平在产蛋期较高,分别比就巢期和休产期提高39.49% (P<0.05)和12.70%;3个时期血清TP、CREA、UA和CHO含量差异均不显著,BUN含量在就巢期较低,分别比产蛋期和休产期低24.49%(P<0.05)和34.69%(P<0.05)。试验建立了狮头鹅不同繁殖阶段血清生化指标参考值,为其饲养管理、保种选育、疾病防治等方面提供依据。     

水貂阿留申病毒VP2基因的原核表达及初步应用

将水貂阿留申病毒ADV-G株VP2基因中主要抗原表位区的两个片段,分别克隆至原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点中,鉴定后得到重组质粒pET-VP2a和pET-VP2b,将重组质粒转化到宿主菌BL21中,用IPTG分别以不同浓度,不同诱导时间进行诱导表达,采集样品做SDS-PAGE、Western-blot分析,并以此蛋白作为包被抗原进行ELISA检测。结果发现以终浓度为1mmol/L的IPTG进行诱导,4小时后表达可达到高峰,其大小分别约为23kD和28kD, 该蛋白与ADV阳性血清能发生特异性反应。将此表达产物应用Ni-NTA His-Bind纯化系统进行纯化,其纯度可达到91%,纯化后的蛋白以60μg/孔包被96孔板,检测不同地区水貂血清,同时以对流免疫电泳法（CIEP）为对照,结果发现二者的符合率高达93 %,而应用该蛋白进行检测其反应更为安全,背景低,制备简单,这为今后应用该蛋白作诊断抗原检测水貂阿留申病奠定了基础。     

CPPU对干旱胁迫下小麦幼苗叶片的蛋白响应及生育期差异的影响

采用叶面喷施调吡脲(N-(2-chloro-4-pyridyl)-N’-phenylurea,CPPU)处理,分析干旱胁迫下CPPU对小麦幼苗叶片蛋白质及各种生理生化指标的影响,以探讨CPPU提高小麦抗旱性的分子机制。以小麦品种河农822为材料,用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)研究喷施CPPU后幼苗叶片中蛋白质组变化情况;用常规方法检测过氧化物酶(POD)活性、可溶性蛋白、可溶性糖、脯氨酸和丙二醛(MDA)含量的变化。结果表明,经SDS-PAGE电泳技术发现,与对照相比,干旱胁迫下喷施CPPU后出现分子量为125,80,55,40,35,33,25 kDa等7条特异性条带,消失了30 kDa的电泳条带。与干旱对照相比,喷施CPPU后叶片中蛋白条带中多了40 kDa特异性条带,消失了30 kDa的电泳条带;并且在干旱胁迫下,喷施100 mg CPPU后使幼苗体内的POD活性提高37.06%,可溶性蛋白含量增加63.50%,可溶性糖含量增加87.51%,脯氨酸含量增加109.57%,MDA含量降低46.06%。与干旱对照相比,喷施CPPU的幼苗叶片中出现了一条特异性条带,消失了一条特异性条带,且在70 kDa和大约20 kDa处的蛋白含量明显高于2个对照,在32kDa和大约25 kDa处的蛋白含量下降。100 mg CPPU可促进干旱胁迫下幼苗体内的可溶性糖、可溶性蛋白和脯氨酸含量显著增加,POD活性显著提高,MDA含量降低。说明叶面喷施CPPU能够增强幼苗对干旱胁迫的适应性。     

Genetic control of alcohol dehydrogenase, malate dehydrogenase, and phosphoglucomutase isozymes in lima bean (Phaseolus lunatus L.)

A suitable electrophoretic separation method for alcohol dehydrogenase (ADH). malate dehydrogenase (MDH). and phosphoglucomutase (PGM) from P. lunatus has been developed. Two loci (Adh-2 and Pgm-2) showed codominant inheritance and fitted Mendelian ratio. ADH isozyme banding patterns indicate a dimeric quaternary structure. while those of PGM were in agreement with a monomeric nature. The cytoplasmic location of two MDH isozymes (Mdh-1 and Mdh-2) selectively inactivated by homogenization in an ascorbic acid solution was demonstrated. However. distorted ratios were observed for Mdh-2 segregation. On the basis of MDH isozyme banding patterns observed in five progeny families, il is suggested that this enzyme system is a dimeric protein encoded by at least three codominant genes (Mdh-1 .Mdh-2 and Mdh-3). Joint segregation tests between pairs of segregating loci (Adh-2, Mdh-2, and Pgm-2) indicated that each of them is inherited independently.     

作物种子纯度检验的电泳方法

分析比较了应用于作物种子纯度检验的几种电泳方法的特点，过程及限制因素。结果表明：同工酶电泳法速度快、成本低，而提供的多态性有限；胚乳或种胚蛋白质电泳法简单易行、在一些作物上具丰富的多态性；DNA电泳法（分子标记）能提供最丰富的多态性，但目前分析过程还较复杂．费用也较昂贵。     

Use of isozyme patterns in characterization of potato mutant lines selected for agronomic quantitative traits

Summary Seven varieties and 57 spontaneous or induced in vitro mutant lines (20 macromutant and 37 micromutant events) of potato were tested by starch gel electrophoresis for ADH, GOT, PGI, PGM, ACO, IDH, MDH and 6PGDH isozymes in tuber extracts. The data showed that in contrast to variety comparisons, the isozyme patterns rarely differentiate mutant lines which have altered morphological traits. But trying to identify isozyme differences in mutants can still be useful for a chimeric structure for GOT-2 alleles in a mutant from Atlantic and a new tuber specific locus for 6PGDH in mutants from Russet Burbank were found.Abbreviations ACO aconitase - ADH alcohol dehydrogenase - GOT glutamate oxaloacetate transaminase - IDH isocitric acid dehydrogenase - MDH malate dehydrogenase - 6PGDH 6-phosphogluconate dehydrogenase - PGI phosphoglucoisomerase - PGM phosphoglucomutase - SGE starch gel electrophoresis - EMS ethyl metanesulfonate     

低能Ar+注入樱桃萝卜点点红种子后的生物学效应

选取樱桃萝卜点点红为材料,对低能Ar+离子注入其干种子后的生物学效应进行了研究。考察了其发芽率、成活率与低能Ar+注入剂量的关系,对低能Ar+注入点点红种子后其过氧化物酶(POD)的活性进行了测定,并对POD酶谱及酯酶(Est)同工酶酶谱进行分析。研究结果表明,不同剂量的低能Ar+注入都会引起种子发芽率、成活率及不同阶段的生长和发育产生变异;在1×1017Ar+/cm2与3×1017Ar+/cm2剂量之间点点红种子的发芽率随注入剂量的增加呈现出“马鞍型”曲线的变化趋势;成活率的变化规律与发芽率的变化规律基本一致;低剂量注入时,其POD活性随剂量的增加而升高;高剂量注入时,其POD活性随剂量的增加而降低。同工酶图谱中,POD在2.5×1017Ar+/cm2和3.0×1017Ar+/cm2增加一条酶带,且1.5×1017Ar+/cm2和3.0×1017Ar+/cm2高剂量注入时有缺失现象;酯酶(Est)在1.5×1017Ar+/cm2和3.0×1017Ar+/cm2剂量注入时酶带数增加,且变深。     

两种用于鉴别山羊痘病毒和绵羊痘病毒方法的应用与比较研究

为探讨鉴别山羊痘病毒和绵羊痘病毒的分子生物学方法,对实验室分离保存的3株山羊痘病毒和2株绵羊痘病毒进行p32基因和GpCR基因扩增、克隆及序列分析.将获得的p32基因序列与GenBank上登陆的羊痘病毒p32基因进行HinfⅠ酶切位点分析表明,所有绵羊痘病毒p32基因在391 bp和691 bp处存在2处酶切位点,而山羊痘病毒仅在688 bp处存在1个酶切位点.将获得的GpCR基因序列与GenBank上登录的31条相应序列进行系统进化树分析发现,根据GpCR基因序列信息可将绵羊痘病毒和山羊痘病毒分成两个独立的进化分枝.这些结果表明,利用p32基因的HinfⅠ酶切位点信息和对GpCR基因进行分子进化分析可鉴别山羊痘病毒和绵羊痘病毒,p32基因和GpCR基因可作为鉴别绵羊痘病毒和山羊痘病毒的特异性标记基因.     

Potential and limitations of isozymes for chromosomal localization of resistance genes against barley mild mosaic virus (BaMMV)

Summary To assess the possibilities offered by isozymes to locate resistance genes against barley mild mosaic virus (BaMMV), the isozyme patterns of 19 barley (Hordeum vulgare L.) genotypes carrying genes different from ym4 were determined. Of the 15 isozyme systems tested, only three were polymorphic, namely aconitate hydratase, esterase, phosphogluconate dehydrogenase, providing markers on four of the seven barley chromosomes. Studies of F₂ progenies derived from three crosses between resistant genotypes and susceptible varieties failed to reveal linkage between resistance genes and isozymes. Another goal of the experiment was to study the linkage relationships between ym4 and the esterase locus (Est1-Est2-Est4). Our estimates of the recombination rate between these two loci (3.41 and 8.32%) were in the range of those reported between these esterases and one of the resistance genes of the Chinese variety Mokusekko 3.