响应面法优化玉木耳原生质体制备条件

[目的]优化玉木耳原生质体制备条件,获得高质量、高产量的原生质体,为后续玉木耳遗传育种、优良性状筛选和品种改良提供良好的试验材料.[方法]以玉木耳原生质体产量为考察指标,结合单因素试验和响应面优化法,建立原生质体制备回归方程,探究玉木耳原生质体的最佳制备条件.[结果]单因素试验结果表明,玉木耳原生质体制备的适宜条件为:酶解时间3 h、酶解液浓度2.0%、酶解温度35℃.响应面试验结果表明,各因素对原生质体制备影响程度的排序为:酶解温度>酶解时间>酶解液浓度,酶解温度与酶解时间的交互作用对原生质体产量有极显著影响(P<0.01),酶解时间与酶解液浓度的交互作用影响显著(P<0.05).响应面试验优化后,获得玉木耳原生质体的制备条件为:酶解液浓度2.0%、酶解时间3.4 h、酶解温度35℃,此条件下玉木耳原生质体的平均产量为17.5×106 CFU/mL,与理论产量(17.77×106 CFU/mL)偏差小.[结论]利用响应面法可确立玉木耳原生质体制备的最佳条件,获得较理想的原生质体产量.     

禾本科内生真菌研究15:禾本科内生真菌Epichloё yangzii原生质体的制备与再生

为高效获得内生真菌Epichloё yangzii Rnj5706菌株的原生质体,分别检测酶系组合、稳渗剂、pH值、酶解温度等因子对E.yangzii原生质体制备的影响。结果表明:制备E.yangzii原生质体的优化条件为液体培养48 h的鲜菌丝在pH值6.8含0.7 mol/L NaCl的酶解液(1.5%崩溃酶、1.0%蜗牛酶、1.0%纤维素酶、2.0%溶菌酶)中32℃酶解4 h,这时的原生质体得率为39.2×105个/mL酶解液。并比较不同保存时间下的原生质体的再生比率,表明随保存时间延长,再生比率急剧下降。本研究关于E.yangzii原生质体的制备和再生方法,为内生真菌遗传操作等后续研究提供了基础。     

猪苓原生质体制备及细胞再生研究

就猪苓原生质体制备的技术条件与细胞再生进行研究,结果表明,制备猪苓原生质体的最佳条件是采用12 d菌龄的菌丝体,2.66%蜗牛酶 1.33%纤维素酶为酶解液,酶解温度28℃,酶解时间6 h,稳定剂为0.010 9 g/m l甘露醇,pH值自然。在此条件下猪苓原生质体制备的产量为6.8×106个/m l。分离原生质体细胞再生频率为17.45%。     

洋葱内表皮原生质体分离和纯化研究

通过酶解法降解洋葱细胞壁释放出原生质体,利用离心从粗提取液中纯化出原生质体,并通过血球计数板计数来比较制备洋葱内表皮原生质体的效果.结果表明:酶解时间、pH值、渗透压稳定剂(甘露醇)及酶的种类是影响原生质体制备的重要因素.酶解时间2 h,pH值5.0～6.0之间,甘露醇0.5～0.7 mol/L,纤维素酶含量1.5%、果胶酶含量0.1%和0.1%牛血清蛋白组合时原生质体的分离效果最佳.     

绿色木霉原生质体制备与再生条件的探索

研究菌丝体培养时间、酶组合、酶浓度、酶解时间、酶解温度、稳渗剂类型、再生培养方式等对绿色木霉原生质体制备及再生的影响。结果表明,绿色木霉原生质体制备的优化条件为：菌丝体培养60h,用1.5%溶菌酶＋0.5%蜗牛酶的混合酶液,在pH值6.0～6.5,30～35℃,酶解4h,以0.7mol/L甘露醇为稳渗剂,原生质体的产量可达1.68×107个/ml;原生质体再生的优化条件为：PDA为再生培养基,以0.5mol/L蔗糖为稳渗剂进行双层固体培养,原生质体的再生率为6.05%～6.12%。     

禾本科内生真菌研究15:禾本科内生真菌Epichlo(e) yangzii原生质体的制备与再生

为高效获得内生真菌Epichlo? yangzii Rnj5706菌株的原生质体,分别检测酶系组合、稳渗剂、pH值、酶解温度等因子对E.yangzii原生质体制备的影响.结果表明:制备E.yangzii原生质体的优化条件为液体培养48 h的鲜菌丝在pH值6.8含0.7 mol/L NaCl的酶解液(1.5％崩溃酶、1.0％蜗牛酶、1.0％纤维素酶、2.0％溶菌酶)中32℃酶解4h,这时的原生质体得率为39.2×105个/mL酶解液.并比较不同保存时间下的原生质体的再生比率,表明随保存时间延长,再生比率急剧下降.本研究关于E.yangzii原生质体的制备和再生方法,为内生真菌遗传操作等后续研究提供了基础.     

三生烟叶片与烟花的原生质体制备研究

[目的]探讨三生烟叶片及烟花的高质量原生质体制备方法。[方法]通过优化纤维素酶和离析酶浓度配比、酶解时间、渗透调节剂甘露醇浓度等参数,研究三生烟叶片与烟花原生质体的最优制备方法。[结果]三生烟烟叶材料最佳制备条件为1%纤维素酶和0.5%离析酶、甘露醇浓度0.6 mol/L、酶解时间4 h,完整率达88.22%。烟花材料最佳制备条件为0.8%纤维素酶和0.4%离析酶、甘露醇浓度0.7 mol/L、酶解时间2 h,完整率达83.59%。[结论]三生烟叶片与烟花原生质体由于材料来源不同,酶解条件存在差异,制备时需要针对不同组织材料予以优化。     

金耳原生质体制备与再生研究

[目的]对金耳原生质体制备与再生体系进行研究。[方法]采用正交试验法筛选金耳原生质体制备和再生体系中酶体系、菌龄、温度、时间、渗稳剂的最佳用法。[结果]金耳原生质体的释放方式有3种类型:酶解初期的顶端释放、侧位释放和后期的原位释放。其最佳制备条件为:液体静置培养3 d的菌丝体,在1%纤维素酶+1%蜗牛酶+1%溶壁酶的混合酶液中,以0.6 mol/L蔗糖为渗稳剂,36℃酶解4 h,得到原生质体制备率达1.76×107个/ml;最佳再生条件为:液体静置培养5 d的菌丝体,在1.5%溶壁酶的酶液中,以0.6mol/L蔗糖为渗稳剂,33℃酶解3 h,得到原生质体再生率达0.22%。[结论]为金耳的原生质体融合、紫外线诱变育种、基因工程研究等提供了有益支持。     

产紫杉醇内生真菌XT5原生质体制备与再生

以产紫杉醇内生真菌XT5为供试菌株, 研究了酶系组成、酶解时间、酶解温度、菌体培养方式、菌龄等因素对产紫杉醇内生真菌XT5原生质体制备和再生的影响. 结果表明: 将内生真菌XT5在PDA液体培养基中静止培养12～16 h, 离心收集菌体, 用0.7 mol/L的NaCl配制成的含有2%纤维素酶+1%蜗牛酶的复合酶, 32 ℃恒温酶解2 h, 原生质体制备率最高;以上述条件酶解1.5 h左右, 采用双层平板培养法于32 ℃再生, 获得的原生质体再生率最高为12.4%.     

鸡腿菇原生质体制备与再生研究

以鸡腿菇双核菌丝为材料,利用溶壁酶制备原生质体,采用单因素试验确定最佳条件。结果表明,原生质体产量最高的条件是取菌龄为5 d的液体静置培养的菌丝体,以0.6 mol/L蔗糖为渗稳剂,在酶解温度30℃、酶浓度20 g/L、菌丝量20 g/L的条件下酶解3 h,制备的原生质体量为2.5×107个/m L。将制备的原生质体稀释并涂布于再生培养基,再生率为10.9%,研究为鸡腿菇原生质体融合及优良品种选育提供研究基础。