不同促性腺激素添加方式对猪卵母细胞生发泡染色质构型和卵母细胞成熟能力的影响

在卵母细胞体外成熟培养过程中,培养基中添加激素与否及其激素添加的先后顺序是影响猪卵母细胞核成熟和质成熟的一个重要因素.本试验将猪卵母细胞分别在FSH→不含激素、FSH→LH、FSH LH不含激素中培养48 h(培养第20～22 h后换液),并于成熟培养的第24 h(未换液)、48 h将卵母细胞进行荧光染色,观察其生发泡内染色质构型及卵母细胞核成熟情况.实验表明:(1)在IVM的前24 h,添加FSH LH组的GVIV期卵母细胞比例低于只添加FSH组,但差异不显著(8.99%比17.19%,P＞0.05);(2)在FSH存在的情况下,IVM的前期和后期添加LH能促进卵母细胞发生GVBD;(3)FSH LH培养24 h后转入不含激素培养基组,卵母细胞的核成熟比率显著高于添加FSH组和先添加FSH培养24 h后转入添加LH组(P＜0.05).     

激素对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响

为研究不同激素及其组合在猪卵母细胞体外成熟及对其后孤雌胚胎发育的影响,我们对比了孕马血清促性腺激素(PMSG)与人绒毛膜促性腺激素(hCG)组合、卵泡刺激素(FSH)与促黄体素(LH)组合、雌二醇(E2)及这些卵母细胞经孤雌激活后囊胚率的影响;以及不同FSH和LH浓度组合对猪卵母细胞体外成熟率。结果表明,在卵母细胞体外成熟液中添加10 U/mL PMSG和10 U/mL hCG的成熟率和孤雌囊胚率都达到最高(85.9%和55.3%);FSH与LH的组合次之,分别为77.1%和53.5%;E2最差,成熟率仅为54.0%囊胚率为19.5%。而在FSH与LH不同浓度配比中以10 U/mL FSH和20 U/mL LH时,猪卵母细胞成熟率最高达到80.9%。     

不同促性腺激素添加方式对猪卵母细胞的影响

在卵母细胞体外成熟培养过程中,培养基中添加激素与否及其激素添加的先后顺序是影响猪卵母细胞核成熟和质成熟的一个重要因素。本试验将猪卵母细胞分别在FSH→不含激素、FSH→LH、FSH＋LH→不含激素中培养48h（培养第20～22h后换液）,并于成熟培养的第24h（未换液）、48h将卵母细胞进行荧光染色,观察其生发泡内染色质构型及卵母细胞核成熟情况。实验表明：1）在IVM的前24h,添加FSH＋LH组的GV Ⅳ期卵母细胞比例低于只添加FSH组,但差异不显著（8．99％vs17．19％,P〉0．05）;2）在FSH存在的情况下,IVM的前期和后期添加LH能促进卵母细胞发生GVBD;3）FSH＋LH培养24h后转入不含激素培养基组,卵母细胞的核成熟比率显著高于添加FSH组和先添加FSH培养24h后转入添加LH组（64．36％vs20．45％、36．62％、41．98％,P〈0.05）。     

不同激素对牛卵母细胞体外成熟的影响

对比了促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)和17β雌二醇(17β-E2)在相同浓度条件下,分别使用时对牛卵母细胞体外成熟的促进能力。结果表明:这3种激素单独使用时,都具有促进牛卵母细胞体外成熟的能力,但在实验设定的同一浓度下,FSH组牛卵母细胞体外成熟率最高,LH次之,17β-E2最差。     

猪卵母细胞体外成熟的研究

本试验主要探讨了促性腺激素(FSH LH)和17-β-雌二醇(E_2)对猪卵母细胞体外成熟的作用以及卵丘细胞群状态与卵核成熟之间的关系.结果表明:FSH LH对猪卵母细胞的卵丘扩展和核成熟有明显的促进作用,17-β-雌二醇不影响卵丘细胞群的扩展,但能促进卵母细胞的核成熟.卵丘扩展的A、B、C级卵母细胞,其核发育到中期Ⅱ的比例分别为93.75%、83.58%、63.64%,卵丘未扩展的卵母细胞,其核发育到中期Ⅱ阶段的比例极低.     

促卵泡素和促黄体素对猪卵母细胞体外成熟的影响

本实验探讨了促性腺激素(FSH、LH)对猪卵母细胞体外成熟的影响,并最终找到了其合理的使用剂量.实验选取具有3层致密卵丘细胞层及均匀细胞质的猪卵丘-卵母细胞复合物(COCs)在体外进行成熟培养.体外成熟培养液为改良的TCM-199液,根据实验设计再添加不同浓度的FSH和LH.卵母细胞体外成熟培养条件为39 ℃、5%CO2与饱和湿度下,成熟培养48 h.培养结束后,以第1极体排出作为卵母细胞成熟的标准.在成熟液中添加LH浓度分别为1、5、10 IU/mL时,与没有添加FSH与LH的对照组(成熟率为15.9%)相比,成熟率有显著提高,前者成熟率分别为49.1%、30.0%、36.3%.LH浓度为1 IU/mL的实验组成熟率最高,显著高于对照组(P＜0.05);然后以成熟液中只添加浓度为1 IU/mL LH为对照组,实验组添加FSH浓度分别为1、5、10 IU/mL.结果表明,添加FSH浓度为5 IU/mL和10 IU/mL时其成熟率分别为40.1%、27.6%,低于对照组(49.0%).添加FSH浓度为1 IU/mL时其成熟率(49.1%)高于对照组(49.0%),但差异不显著(P＞0.05).试验表明,随着FSH与LH添加浓度逐渐增加,成熟率呈下降趋势.添加FSH与LH浓度均为1 IU/mL可得到最佳的成熟效果.     

促性腺激素对山羊卵母细胞体外成熟的影响

为了建立针对山羊卵母细胞的理想体外成熟培养体系,本试验研究了在成熟培养液中添加不同浓度的促卵泡素(follicle stimulating hormone,FSH)、促黄体素(luteinizing hormone,LH),不同来源的FSH+LH对山羊卵母细胞体外培养成熟效果的影响。结果表明,采用TCM199添加10%FCS,1～2mg/L17β-E2,10mmol/LHepes,0.055mg/mL丙酮酸钠,2.2mg/mL NaHCO3,500μg/mL链霉素,500μg/mL青霉素,10mg/L FSH及20mg/LLH的培养体系,有利于山羊卵母细胞的体外成熟;进口的和国产FSH和LH对山羊卵母细胞成熟有相同促进效果。     

促卵泡素与促黄体素对猪卵母细胞体外成熟的影响

本试验探讨了促性腺激素(FSH、LH)对猪卵母细胞体外成熟的影响,最终找到了其合理的使用剂量。在成熟液中添加LH浓度分别为1、5、10 IU/mL时,与没有添加FSH与LH的对照组(15.9%)相比,成熟率有显著提高,成熟率分别为49.1%、30.0%、36.3%。LH浓度为1 IU/mL的实验组成熟率最高,显著高于对照组(p<0.05);然后以成熟液中只添加1 IU/mLLH为对照组,试验组分别添加1、5、10 IU/mLFSH。试验结果表明:添加FSH浓度为5和10 IU/ml时其成熟率分别为40.1%、27.6%,低于对照组(49.0%)。添加FSH浓度为1 IU/mL时其成熟率(49.1%)高于对照组(49.0%),但差异不显著(p>0.05)。两组试验同时得出,随着LH与FSH添加浓度的增加,成熟率呈下降趋势。通过本试验结果得出,在体外成熟培养猪卵母细胞时,各添加1 IU/mL LH与FSH时,得到最佳的成熟效果。     

FSH和LH对延边黄牛卵母细胞体外成熟及重组胚发育的影响

实验主要研究促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)对延边黄牛卵母细胞体外成熟及重组胚发育的影响,从而提高延边黄牛体细胞克隆的效率。采集屠宰后延边黄牛卵巢,用抽吸法回收卵母细胞,然后在不同种类、浓度激素条件下进行卵母细胞的体外成熟培养,最后将成熟的卵母细胞进行核移植及重组胚的体外培养。实验分别比较了在0、5、10、15、20μg/mL条件下,单独使用FSH与LH和在15μg/mL的FSH与10μg/mL的LH共同作用下对延边黄牛卵母细胞体外成熟率、卵裂率和囊胚发育率的影响。结果表明:将卵母细胞单独置于加有浓度为15μg/mL的FSH和10μg/mL的LH的成熟液中培养,其成熟率及后期发育率优于其他浓度组(P<0.05);而2种最优浓度同时添加共同作用时要好于单独使用(P<0.05)。由试验可得出,成熟培养液中单独添加15μg/mL的FSH和单独添加10μg/mL的LH浓度对延边黄牛卵母细胞体外成熟及重组胚后期发育效果最好;使用最佳浓度进行协同作用时,其共同作用要好于单独使用的效果。     

不同因素对猪卵母细胞体外成熟培养的影响

本试验旨在探讨不同外源激素组合的添加、胰岛素—转铁蛋白—亚硒酸钠(ITS)的添加、不同培养皿、石蜡油的添加对卵母细胞体外成熟培养(IVM)的影响。结果显示:①孕马血清促性腺激素+人绒毛膜促性腺激素+促卵泡素(PMSG+HCG+FSH)组高于促卵泡素+促黄体素(FSH+LH)组和尿促性腺激素(hMG)组,相互之间差异显著(80.1%、68.3%、53.3%,P<0.05);②添加1% ITS到猪卵母细胞培养液中对卵母细胞成熟率无显著提高(P>0.05),但显著提高了孤雌激活后孤雌胚胎的卵裂率和囊胚率(63.3%、55.1%,18.7%、12.1%,P<0.05);③凹槽皿组猪卵母细胞成熟率显著高于四孔板和30 mm塑料皿组(73.3%、68.0%、68.3%,P<0.05);④石蜡油的添加对卵丘细胞扩展和卵母细胞体外成熟率均有显著提高(84.8%、69.9%,P<0.05)。结果表明培养液中添加PMSG+HCG+FSH和ITS及选用凹槽皿、成熟培养液上覆石蜡油可提高猪卵母细胞IVM效果。     

Study on Developmental Changes of Growth Hormone (GH) and Growth Hormone Releasing Hormone (GHRH) in Serum of Pigs

The growth hormone (GH) and growth hormone releasing hormone (GHRH) contents in serum of 3 weights (90,110 and 130 kg) of Chuanzang Black swine hybrid and DLY pigs were detected by enzyme-linked immune sorbent assay (ELISA),their relationship with cross sectional area of muscle fiber (CSA) and intramuscular fat (IMF) content were also analyzed.The results showed that the GH contents of Chuanzang Black swine hybrid and DLY pigs of 3 weights were 14.25,14.61,14.11 and 17.86,16.98,16.77 μg/L,respectively,while the GHRH contents of which were 22.88,23.98,24.33 and 27.72,27.47,28.39 μg/L,respectively.There was no significant difference in different weight of the same breeds (P >0.05) except the significant difference between 90 and 130 kg of DLY pigs (P<0.05).The GH and GHRH contents of Chuanzang Black swine hybrid were both significant lower than DLY pigs of the same bodyweight (P< 0.05) except GHRH content of 110 kg weight (P >0.05).Relevance analysis showed that GH and GHRH contents had a significant positive correlation with CSA (P< 0.05),and an extremely significant negative correlation with IMF content (P< 0.01),which prompted that GH and GHRH might regulate the growth of muscle fiber and IMF deposition through blood.     

Neuroendocrine Regulation of Growth Hormone and Luteinizing Hormone in Fetal and Neonatal Pig

Ontogeny of the production and the regulation of growth hormone and Luteinizing hormone is studied in a series of experiments utilizing male and female pigs at different fetal and neonatal stages. Growth hormone mRNA is detectable in both sexes as early as d. 50 p.c. The mRNA levels increase to reach the maximum levels at d. 95–110 p.c. Plasma levels of GH follow the developmental patterns of GH mRNA. A sex difference is evident around d. 80–90 p.c. with males having higher GH levels than females. The stimulatory but not the inhibitory mechanisms of GH secretion are fully functioning in the pig fetus. LHβ mRNA is detectable earlier in females (d. 50 p.c.) than in males (d. 65 p.c.). Plasma concentrations of LH increase with fetal age in female fetuses, but in male fetuses there is no distinct developmental pattern evident. Basal LH secretion achieves maximum levels in both sexes after birth. Opioids do modulate fetal LH secretion, however, the mode of their action is age-dependent.     

猪血清中生长激素(GH)和生长激素释放激素(GHRH)的发育性变化研究

采用ELISA方法检测了3个不同体重梯度(90、110和130 kg)的川藏黑猪配套系和DLY猪血清中生长激素(GH)和生长激素释放激素(GHRH)的含量变化,并分析了其与肌纤维面积(CSA)和肌内脂肪(IMF)含量的关系。结果显示,90、110和130 kg体重梯度川藏黑猪配套系和DLY猪血清中GH含量分别为14.25、14.61、14.11及17.86、16.98、16.77 μg/L,GHRH含量分别为22.88、23.98、24.33及27.72、27.47、28.39 μg /L,除DLY猪90和130 kg血清中GH含量差异显著(P<0.05)外,品种内不同体重梯度间差异均不显著(P >0.05);不同猪种间,除110 kg梯度GHRH水平差异不显著(P >0.05)外,其余川藏黑猪配套系均显著低于DLY猪(P< 0.05)。相关性分析结果显示,GH、GHRH水平与CSA呈显著正相关(P< 0.05),与IMF含量呈极显著负相关(P< 0.01)。结果表明GH和GHRH可能通过血液对猪肌纤维的生长和肌内脂肪的沉积进行调控。     

促卵泡素与促黄体素对猪卵母细胞体外成熟的影响

本试验探讨了促性腺激素（FSH、LH）对猪卵母细胞体外成熟的影响,最终找到了其合理的使用剂量。在成熟液中添加LH浓度分别为1、5、10IU／mL时,与没有添加FSH与LH的对照组（15．9％）相比,成熟率有显著提高,成熟率分别为49．1％、30．0％、36．3％。LH浓度为1IU,mL的实验组成熟率最高,显著高于对照组（P〈0．05）;然后以成熟液中只添加1IU/mLLH为对照组,试验组分别添加1、5、10IU/mLPSH。试验结果表明：添加FSH浓度为5和10IU/ml时其成熟率分别为40．1％、27．6％,低于对照组（49．0％）。添加FSH浓度为1IU／mL时其成熟率（49．1％）高于对照组（49．0％）,但差异不显著（P〉0．05）。两组试验同时得出,随着LH与FSH添加浓度的增加,成熟率呈下降趋势。通过本试验结果得出,在体外成熟培养猪卵母细胞时,各添加1IU／mL LH与FSH时,得到最佳的成熟效果。     

促性腺激素释放激素的研究进展

促性腺激素释放激素（GnRH）的结构及其生物学功能已成为神经内分泌和生殖生物学研究的热点之一，作者主要从GnRH 的结构、类型、分布、信号传导、生理功能等方面进行综述。     

奶牛血清中Zn、Fe与LH、FSH浓度的相关性分析

本试验用原子吸收光谱法(AAS)和ELISA法分别测定了48头奶牛血清中Zn、Fe含量和促黄体激素(LH)、促卵泡激素(FSH)的浓度。结果表明,不同年龄奶牛血清Zn和Fe含量以7岁和5岁为最高;LH以4岁为最高(P0.01),FSH至4岁是最低(P0.01),然后升高;Zn与FSH、Fe与LH和FSH均呈负相关(P0.05);这些都和回归方程中截距A的正负号是完全一致的,同一种激素与不同元素回归方程的截距和回归系数均明显不同。可以得出不同年龄奶牛血清激素和微量元素含量变化较大,微量元素和激素间存在明显的相关性。     

Effect of Kisspeptin on Regulation of Growth Hormone and Luteinizing Hormone in Lactating Dairy Cows

Kisspeptin (KP),a neuroendocrine regulator of reproduction,is hypothesized to be an integrator of metabolism and hormones critical to the regulation of reproduction.Lactation is associated with enhanced growth hormone (GH) responsiveness and reduced fertility.Our study was designed to determine the effects of lactation on KP-stimulated GH and luteinizing hormone (LH) secretion.Five nonlactating and five lactating dairy cows were used in the study.Experiments were conducted with lactating cows at weeks 1,5 and 11 after parturition.The experimental treatments (saline and KP [ 100 and 400 pmol/kg body weight] ) were given intravenously and blood was collected and plasma was stored until later assay to determine concentrations of GH,LH,progesterone and non-esterified fatty acids.We found that neither dose of KP stimulated an increase in GH secretion.The low dose of KP increased (P ＜0.05)LH concentrations only in lactating cows.The higher dose of KP elicited an increase in circulating LH concentrations in both lactating and non-lactating cows.The lower dose of KP increased ( P ＜ 0.05 ) the area under the curve for LH only in cows during week 5 of lactation,and the area under the curve of LH following the highest dose of KP was greater ( P ＜ 0.05 ) in cows during week 5 of lactation than that for the other groups of cows.In summary,lactation status and stage of lactation did not change the sensitivity of the GH system to KP.However,an effect of stage of lactation on KP-stimulated LH secretion was detected in the dairy cows.Study of the KP system during lactation in dairy cows may provide critical insights into the mechanisms for lactation-associated changes in the reproductive axis.