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建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒联合免疫胶体金试纸条的研制及应用 总被引:1,自引:0,他引:1
为了实现兰花种植苗圃和口岸一线直接检测样品中建兰花叶病毒Cymbidium mosaic virus(CymMV)和齿兰环斑病毒Odontoglossum ringspot virus(ORSV)的目的,我们研制了上述两种病毒联合免疫胶体金检测试纸条。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记单抗C10并固定于胶金垫上;将抗体5B7和4F3分别固定于硝酸纤维素膜上作为检测线,将羊抗鼠抗体包被固定于硝酸纤维素膜上作为质控线,经优化后组装胶体金试纸条。结果表明研制的联合试纸条特异性强,能够在10min之内同时检出两种病毒,操作简便。对两个种植苗圃的93份兰花样品进行实际检测所得结果与ELISA的检测结果符合性好(Kappa值分别为84.6%和86.7%),能满足兰花样品中建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的初筛要求。 相似文献
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烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)和番茄环斑病毒(Tomato ringspot virus,ToRSV)是我国禁止入境的检疫性有害生物。采用半巢式RT-PCR方法对这两种病毒进行了检测,用Trizol快速提取病毒总RNA,并根据TRSV和ToRSV的外壳蛋白基因设计特异性引物,经过第一轮RT- PCR和第二轮半巢式PCR扩增,TRSV样本分别得到359 bp和206 bp特异性片段,ToRSV样本分别得到340 bp和219 bp特异性片段。半巢式RT-PCR扩增产物的测序表明,TRSV产物序列与GenBank中登录的外壳蛋白基因存在88%~97%的同源性,ToRSV产物序列与GenBank中登录的外壳蛋白基因存在96%~100%的同源性。研究显示,DAS-ELISA与RT-PCR的检测灵敏度相近,而半巢式RT-PCR的检测灵敏度比这两种方法高出10~3倍以上。 相似文献
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将纯化的番茄环斑病毒(Tomato ringspot virus,ToRSV)制剂免疫BALB/c小鼠,末次免疫后第3天取其脾细胞与SP2/0细胞融合,采用选择性培养基、有限稀释法克隆和间接ELISA方法进行筛选,成功获得了2株分泌ToRSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株并分别命名为1H8、1D4.用间接ELISA方法对所获得的2个杂交瘤细胞株进行亚型鉴定均为IgG1亚类.间接ELISA效价测定结果1H8为1:105,1D4为1:106.TAS-ELISA实验结果表明此2株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体均能与本研究室保存的从德国引进的番茄环斑病毒分离物、从美国ATCC引进的番茄环斑病毒分离物PV-100、PV-174、PV-239发生特异性反应,而不与同属其它3种病毒:烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)、南芥菜花叶病毒(Arabis mosaic virus,ArMV)、马铃薯黑环斑病毒(Potato black ringspot virus,PBRSV)发生反应. 相似文献
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斑点免疫金和免疫金/银染色法检测烟草环斑病毒 总被引:11,自引:4,他引:7
在硝酸纤维素膜上进行的斑点免疫胶体金检测烟草环斑病毒技术已经建立.免疫金染色检测提纯病毒的灵敏度为25ng,检测病汁液可稀释10倍.使用免疫金/银染色则灵敏度更进一步提高. 相似文献
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马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒胶体金免疫层析试纸条的研制 总被引:8,自引:1,他引:8
采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒的兔多克隆抗体。用微定量喷头在硝酸纤维素膜上喷好病毒检测线和羊抗兔抗体质控线,制成免疫层析检测试纸条。马铃薯X病毒试纸条检测烟草病汁液可稀释10000倍(重量/体积)马铃薯Y病毒试纸条检测烟草病汁液可稀释1000倍。10min内即可出检测结果。两种试纸条相互测试,未出现交叉反应。用健康和缓冲液对照测试,两种试纸条结果都为阴性。田间采集的马铃薯叶片用试纸条检测的结果和酶联结果相吻合。在密封、干燥、低温的条件下保存,有利于维持试纸条的稳定性。 相似文献
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烟草环斑病毒(Tobacco ringspotvirus,TRSV)是我国公布的二类检疫危险性有害生物,对农业生产危害较大。受该病毒侵染的一些寄主植物出现隐症,并伴随病毒浓度降低,给检测工作造成困难。根据TRSV外壳蛋白基因序列设计合成了一对引物及一条MGB探针,优化了反应条件,建立了TRSV实时荧光RT-PCR检测方法。该方法与常规的DAS-ELISA方法和RT-PCR方法相比,灵敏度分别提高了200倍和4倍,并且对不同寄主上的TRSV均有较好的检测效果。 相似文献
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J. Cohen A. Gera G. Loebenstein 《European journal of plant pathology / European Foundation for Plant Pathology》1995,101(2):217-219
Strawberry latent ringspot virus was detected in the oriental lily hybrid Stargazer grown in Israel from bulbs imported from Europe. Virus infection was associated with asymmetrical opening of flowers. Virus identification was based on electron microscopy, host range and serology. 相似文献
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Transmission of tobacco ringspot virus by thrips 总被引:2,自引:0,他引:2
M Messieha 《Phytopathology》1969,59(7):943-945
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Biological diversity of citrus ringspot isolates in Spain 总被引:1,自引:0,他引:1
Eight isolates of citrus ringspot were selected by symptoms induced in field trees and compared with a citrus psorosis isolate for symptom expression on several citrus species under temperature-controlled glasshouse conditions. Symptom expression in each host-isolate combination was quantified by a pathogenicity index (PI) that considered symptom intensity and the number of plants showing each symptom. A general pathogenicity index (GPI) was defined for each isolate as a weighted mean of the different PI. A wide range of symptoms could be observed depending on host-isolate combination and incubation temperature. On the basis of symptoms induced in the glasshouse, cross protecting reaction against psorosis B challenge inoculation, mechanical transmissibility to Chenopodium quinoa , and presence of a c. 48-kDa protein associated to fractions of a sucrose gradient infective on C. quinoa (Navas-Castillo et al, 1993), six of the ringspot isolates (RS-ALC, RS-SOR, RS-GR, RS-INV, RS-CV and RS-SR) could not be distinguished from the psorosis isolate used as control, whereas the other two isolates (RS-ALM and RS-BUR) were clearly different. Field symptoms induced by these two isolates also differed from those induced by psorosis or by the other ringspot isolates. 相似文献
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香石竹环斑病毒的分子检测 总被引:2,自引:0,他引:2
试验具体研究了两类不同性质的cDNA探针对香石竹环斑病毒的检测效果。毒源由中国农业大学植物病毒室提供,繁殖于苋色藜Chenopodiumamaranticolor上,提纯该病毒,然后抽提其核酸RNA,将RNA多聚腺苷化后,以Oligo(dT)为引物,反转录合成cDNA,补平后与载体连接,转化大肠杆菌,获得阳性克隆,用32P和光敏生物素分别标记cDNA制作探针,与CRSV及其RNA进行点杂交,结果表明,两类不同性质的探针在检测RNA水平上具有相同的灵敏度,其检测极限均达到1ng/ml,并对二类探针进行了比较。 相似文献
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采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP),建立了草莓潜隐环斑病毒(Strawberry latent ringspot virus, SLRSV)检测方法。根据SLRSV外壳蛋白编码基因上的8个位点,共设计了6条引物,通过逆转录环介导等温扩增得到特征性的瀑布状条带。特异性试验表明,引物对SLRSV的检测具有良好的特异性;灵敏度试验显示RT-LAMP的灵敏度比普通RT-PCR高出100倍。该方法无需特殊的试剂和设备,只需在水浴锅中65 ℃等温扩增,整个检测周期约1.5 h,结果采用SYBR green I染色显示,易于观察和判定。 相似文献